Name: modeling breast cancer via an intraductal injection of cre-expressing adenovirus into the mouse mammary gland
Uploaded: 2019-06-07T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland at JoVE.com

עבודה זו נתמכת על ידי המכון הלאומי לבריאות (NIH) גרנט R01 CA222560 ועל ידי המחלקה להגנה פריצת דרך פרס W81XWH-18-1-0037.

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים מוסדיים (IACUC) של בריגהם וביה לנשים.
1. הדור והאחזקה של עכברים מעורבבים
<ol><li>להשיג סרטן השד רלוונטי מותנה מותנית הסתרה (g., Trp53tm1Brn [המכונה Trp53L/l], Brca1tm1Aash [Brca1l/l]) או שורות מותנה ...

<ol>
	<li>Wagner, K. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cre-mediated+gene+deletion+in+the+mammary+gland.">Cre-mediated gene deletion in the mammary gland.</a> Nucleic Acids Research. 25 (21), 4323-4330 (1997).</li><li>Selbert, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+BLG-Cre+mediated+gene+deletion+in+the+mammary+gland.">Efficient BLG-Cre mediated gene deletion in the mammary gland.</a> Transgenic Research. 7 (5), 387-396 (1998).</li><li>Jonkers, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+tumor+suppressor+activity+of+BRCA2+and+p53+in+a+conditional+mouse+model+for+breast+cancer.">Synergistic tumor suppressor activity of BRCA2 and p53 in a conditional mouse model for breast cancer.</a> Nature Genetics. 29 (4), 418-425 (2001).</li><li>van Bragt, M. P., Hu, X., Xie, Y., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RUNX1,+a+transcription+factor+mutated+in+breast+cancer,+controls+the+fate+of+ER-positive+mammary+luminal+cells.">RUNX1, a transcription factor mutated in breast cancer, controls the fate of ER-positive mammary luminal cells.</a> eLife. 3, e03881 (2014).</li><li>Tao, L., van Bragt, M. P., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Long-Lived+Luminal+Subpopulation+Enriched+with+Alveolar+Progenitors+Serves+as+Cellular+Origin+of+Heterogeneous+Mammary+Tumors.">A Long-Lived Luminal Subpopulation Enriched with Alveolar Progenitors Serves as Cellular Origin of Heterogeneous Mammary Tumors.</a> Stem Cell Reports. 5 (1), 60-74 (2015).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+mutation+of+Brca1+in+mammary+epithelial+cells+results+in+blunted+ductal+morphogenesis+and+tumour+formation.">Conditional mutation of Brca1 in mammary epithelial cells results in blunted ductal morphogenesis and tumour formation.</a> Nature Genetics. 22 (1), 37-43 (1999).</li><li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ETV6-NTRK3+fusion+oncogene+initiates+breast+cancer+from+committed+mammary+progenitors+via+activation+of+AP1+complex.">ETV6-NTRK3 fusion oncogene initiates breast cancer from committed mammary progenitors via activation of AP1 complex.</a> Cancer Cell. 12 (6), 542-558 (2007).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatic+loss+of+BRCA1+and+p53+in+mice+induces+mammary+tumors+with+features+of+human+BRCA1-mutated+basal-like+breast+cancer.">Somatic loss of BRCA1 and p53 in mice induces mammary tumors with features of human BRCA1-mutated basal-like breast cancer.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (29), 12111-12116 (2007).</li><li>Molyneux, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BRCA1+basal-like+breast+cancers+originate+from+luminal+epithelial+progenitors+and+not+from+basal+stem+cells.">BRCA1 basal-like breast cancers originate from luminal epithelial progenitors and not from basal stem cells.</a> Cell Stem Cell. 7 (3), 403-417 (2010).</li><li>Koren, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PIK3CA+induces+multipotency+and+multi-lineage+mammary+tumours.">PIK3CA induces multipotency and multi-lineage mammary tumours.</a> Nature. 525 (7567), 114-118 (2015).</li><li>Van Keymeulen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactivation+of+multipotency+by+oncogenic+PIK3CA+induces+breast+tumour+heterogeneity.">Reactivation of multipotency by oncogenic PIK3CA induces breast tumour heterogeneity.</a> Nature. 525 (7567), 119-123 (2015).</li><li>Tao, L., Xiang, D., Xie, Y., Bronson, R. T., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+p53+loss+in+mouse+luminal+cells+causes+clonal+expansion+and+development+of+mammary+tumours.">Induced p53 loss in mouse luminal cells causes clonal expansion and development of mammary tumours.</a> Nature Communications. 8, 14431 (2017).</li><li>Tao, L., van Bragt, M. P. A., Laudadio, E., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+Tracing+of+Mammary+Epithelial+Cells+Using+Cell-Type-Specific+Cre-Expressing+Adenoviruses.">Lineage Tracing of Mammary Epithelial Cells Using Cell-Type-Specific Cre-Expressing Adenoviruses.</a> Stem Cell Reports. 2 (6), 770-779 (2014).</li><li>Sutherland, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+of+origin+of+small+cell+lung+cancer:+inactivation+of+Trp53+and+Rb1+in+distinct+cell+types+of+adult+mouse+lung.">Cell of origin of small cell lung cancer: inactivation of Trp53 and Rb1 in distinct cell types of adult mouse lung.</a> Cancer Cell. 19 (6), 754-764 (2011).</li><li>Shackleton, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+functional+mammary+gland+from+a+single+stem+cell.">Generation of a functional mammary gland from a single stem cell.</a> Nature. 439 (7072), 84-88 (2006).</li><li>The Cancer Genome Atlas Network. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+molecular+portraits+of+human+breast+tumours.">Comprehensive molecular portraits of human breast tumours.</a> Nature. 490 (7418), 61-70 (2012).</li><li>Nik-Zainal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+life+history+of+21+breast+cancers.">The life history of 21 breast cancers.</a> Cell. 149 (5), 994-1007 (2012).</li><li>Abba, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Molecular+Portrait+of+High-Grade+Ductal+Carcinoma+In+Situ.">A Molecular Portrait of High-Grade Ductal Carcinoma In Situ.</a> Cancer Research. 75 (18), 3980-3990 (2015).</li></ol>

ההצלחה של גישה זו לגרימת גידולים בפטמות מקבוצות משנה שונות של MECs מסתמך לא רק על בחירת מתאים מסוג התא המתאים היזמים (כדי לנהוג ביטוי היצור) אבל גם על הליך הזרקת הפנים עצמו. הרעיון מאחורי הגישה הזאת הוא כי וירוסים מוזרק לאחר הספירה נשמרים עץ ductal, שהוא מבנה מוסתר עם לומן, ולכן, רק MECs חשופים לווי?...

המטרה הכללית של שיטה זו היא לפתח גישה חדשה מידול סרטן השד מבוסס על הזרקה הפנים של לספירה לתוך העכבר MG. הגישה הגנטית של שילוב מבוסס-loxP שימש באופן נרחב כדי לדגמן סרטן השד האנושי בעכברים. הדור הראשון של מודלים מבוססי סרטן השד המבוססת על העכבר מופקים על ידי שימוש בעכברים המבטא המגניים תחת השליטה של MEC ספציפיים היזמים (למשל, Mmtv-היצורים עבור הלומיאל mecs וחלק של הבסיס mecs, Wap- היצור ו בעלי הושלתי ומכתשיים לומיאל מכתשי, K14- היצור עבור בסיס וחלק של הלומיאל mecs1,2,3,4,5)6, מיכל סבן , בן שמונה , 9. עם זאת, בעוד שורות אלה היצורים הטרנסגניים לאפשר שליטה מרחבית של ביטוי היצור (כלומר, בקבוצות משנה שונות של mecs), הם אינם מאפשרים שליטה טמפורלית של ביטוי המין ו-מניפולציה גנטי loxp-תיווך. הדור השני של מודלים מבוססי סרטן השד המבוססת על העכבר לנצל inducible היצירה/ביטוי גישות (g., השימוש של היצור-היתוך קולטן אסטרוגן [CreER], אשר יכול רק לגרום ליצור/loxP שילוב מחדש על הממשל של טמוקסיפן), ו כתוצאה מכך, אלה כלים גנטיים היתר בקרות מרחבית ושליטה טמפורלית של הפעלת אירועים אונגניים ב mecs (למשל, K8-creer-ו K5-creerמודלים מבוססי)10,11,12 . בשני הדורות של מודלים העכבר סרטן השד, כמו היזמים משמש לנהוג ביטוי של היצור או CreER (למשל, Krt8, Krt5) עשוי להיות פעיל בתאי האפיתל של איברים אחרים (כלומר, הם תא סוג ספציפי אבל לא האיבר ספציפי) או יש ביטוי דולף סוגי תאים אחרים מאשר תאים אפיתל (למשל, Mmtv, אשר יש דליפה פעילות במח העצם המטבית), גישות אלה עלולה להוביל לפיתוח של סרטן לא רצויות (s) באיברים אחרים (s). אם אלה סרטן בלתי צפוי לגרום שטחיות בעכברים מושפעים, המטרה המקורית של סרטן השד מידול בעכברים האלה עשויים להיות אסורים (למשל, Mmtv-מונחה יצורים האירועים אונגניים עלול להוביל ממאירות המטתית ומוות מוקדם של העכברים , בשל הדביקות של היזם Mmtv בתאי המטפאות)4.
כאן אנו מדווחים על גישת מידול סרטן השד בעכברים המאפשר גם מניפולציה מסוג תא-ו-איבר ספציפי של אירועים אונגניים באופן זמני מבוקרת. גישה זו מבוססת על הזרקה הפנים של לספירה לתוך העכבר MGs (והוא, ובכך, האיבר ספציפי). ביטוי היצור יכול להיות נשלט באמצעות היזמים שונים מסוג MEC משנה ספציפיים מוטבע וקטור אדנונגיפי (למשל, Krt8 עבור לומיאל Mecs, Krt5 עבור בסיס הבסיס, ובכך להשיג ספציפיים להתאים את התאים). האינדוקציה סרטן ב MGs יכול להיות נשלט באופן זמני על ידי הזרקה של לספירה לתוך עכברים בגילאים שונים, החל מ 3-4 שבועות של גיל (pubertal) לשלב המבוגר.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>33-gauge needle</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7803-05</td>
			<td>point style 3 blunt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7mm Reflex Clip</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>RF7 CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenovirus, Ad-K5-Cre</td>
			<td>University of Iowa Viral Vector Core</td>
			<td>Ad5-bk5-Cre (VVC-Berns-1547)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenovirus, Ad-K8-Cre</td>
			<td>University of Iowa Viral Vector Core</td>
			<td>Ad5mK8-nlsCre</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>HC800-1GAL</td>
			<td>Prepare to 70% in use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated CD31</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-0311-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated CD45</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-0451-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated TER119</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-5921-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bromophenol Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B0126-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD24-AF-700</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>564237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD24-PE</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>12-0242-83</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD29-APC</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>17-0291-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD29-PE</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>12-0291-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair Remover Lotion</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td>9 Oz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7636-01</td>
			<td>0.025 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodophors</td>
			<td>Betadine</td>
			<td></td>
			<td>10% Povidone-iodine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>NDC 10019-360-40</td>
			<td>1-2.5%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Loxicam</td>
			<td>Norbrook</td>
			<td>NDC 55529-040-10</td>
			<td>5 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lubricant Eye Ointment</td>
			<td>Akorn</td>
			<td colspan="2">NDC 17478-062-35</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting scissors</td>
			<td>Pentair</td>
			<td>9M</td>
			<td>Watchmaker&#39;s Forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting tweezers</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>M5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq 5X Master Mix</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0285L</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling breast cancer via an intraductal injection of cre-expressing adenovirus into the mouse mammary gland

סרטן השד הוא מחלה הטרוגנית, אולי בשל אינטראקציות מורכבות בין תאים שונים של מקורות ואירועים אונגניים. מודלים של עכברים הם אינסטרומנטלי בהשגת תובנות לתהליכים מורכבים אלה. למרות שדגמים רבים של העכבר פותחו כדי ללמוד תרומות של אירועים אונגניים שונים ותאים של המקור חזה tuמוריגנזה, מודלים אלה הם לעתים קרובות לא תא סוג או איבר ספציפי או לא יכול לגרום לחניכה של הפטמות tuמוריגנזה ב אופן זמני מבוקר. כאן אנו מתארים פרוטוקול כדי ליצור סוג חדש של מודלים העכבר של סרטן השד מבוסס על הזרקת הפנים של המין-הביע אדנווירוס (לספירה) לתוך בלוטות החלב של העכבר (MGs). בשל הזרקה ישירה של לספירה לתוך צינורות החלב, גישה זו היא מיוחדת MG, ללא כל האינדוקציה סרטן בלתי רצויות באיברים אחרים. ההליך הזרקת הפנים ניתן לבצע בעכברים בשלבים שונים של פיתוח MG שלהם (ובכך, זה מאפשר שליטה הטמפורלית של האינדוקציה לסרטן, החל מ ~ 3-4 שבועות של גיל). ניתן להשיג את הספציפיות לסוג התא באמצעות היזמים שונים ספציפיים לסוג תא לכונן ביטוי היצור בווקטור אדנונגיפי. אנו מראים כי הלומיאל ותאי האפיתל של הפטמות הבזליים (MECs) יכול להיות ממוקד הדוק עבור מניפולציה הגנטית מבוססי לוטל/loxP באמצעות הזרקה הפנים של Ad-אני מתחת לשליטה של קרטין 8 או קרטין 5 מקדם, בהתאמה. על-ידי שילוב של כתב מותנה כתבת (למשל, בעלי מטרה/inducible Rosa26-YFP ), אנו מראים כי mecs ממוקד על ידי לספירה, ואת התאים הסרטניים נגזר מהם, ניתן לעקוב על ידי ביצוע העיתונאי-חיובי תאים לאחר הזרקה הפנימי.

מייצג את תוצאות ה-PCR R26Y ו- Trp53L מוצגים באיור 1.
למרות, בעיקרון, כל 10 MGs יכול להיות נתון הליך הזרקת הפנים, כמעט, שני המקלעים הרביעית הרביעי מסומנים בדרך כלל עבור הזרקה, בשל הנגישות הקלה שלהם בגדלים גדולים יותר MG (<...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland at JoVE.com

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland (Video) | JoVE

המטרה של הפרוטוקול הזה היא לתאר את הגישה החדשה מידול סרטן השד מבוסס על הזרקת הפנים של יצור-הבעת אדנווירוס לתוך בלוטות החלב של העכבר. גישה זו מאפשרת גם מניפולציה ייחודית לסוג תא ולעוגב של אירועים אונגניים באופן זמני מבוקר.

דוגמנות סרטן השד באמצעות הזרקת הפנים של המין-אדנווירוס המבטא לתוך בלוטת החלב של העכבר

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are ...

פרוטוקול זה יעזור לחוקרים ליצור סוג חדש של מודל העכבר כדי לסכם מחדש את התפתחות סרטן השד האנושי מתת-קבוצות שונות של תאי אפיתל חלביים. טכניקה זו מאפשרת לחוקרים ליצור מודלים של עכבר סרטן השד ברקמת שלב התפתחותית על סוג התא באופן ספציפי וללא צורך ברביית עכברים נרחבת. כדי להתחיל בהליך זה, צור, תחזק והרשיע עכברים מנופפים כמתואר בפרוטוקול הטקסט.הביאו את העכבר לאזור נפרד מהמקום שבו יש לבצע את הניתוח. לאחר אישור הרדמה על ידי ביצוע קמצוץ הבוהן, להזריק Meloxicam כמו משכך כאבים תת עורית במינון של חמישה מיליגרם לקילוגרם כדי להתכונן להליך הכירורגי. לחשוף את האתר הכירורגי פטמה על ידי החלת מספר טיפות של קרם להסרת שיער.הסר שמנת מוגזמת ושיער רופף באמצעות מגבות נייר רכות. גילוח אינו מומלץ למנוע נזק לפטמות. לחטא את האתר הכירורגי עם יודופרים הראשון ואחריו 70% אלכוהול ולסיים עם יישום סופי של יודופרים לשפשף.לעשות זאת בתנועה מעגלית ממרכז אזור העבודה לכיוון הפריפריה באמצעות ספוג גזה או אפליקטור כותנה. חזור על המחזור שלוש עד ארבע פעמים. השתמש בטכניקות אספטיות לאורך כל ההליך הכירורגי.הפוך אתר חתך על העור באורך של כ סנטימטר אחד בין שתי בלוטות החלב inguinal הרביעי. בזהירות להפריד את דש העור מן צפקקודים כדי לראות את עץ צינורי חלבי. בזהירות להחזיק את הפטמה עם מאלץ של שענים כדי להסיר את הפטמה החיצונית מבלי לחתוך את כל העור הסמוך באמצעות מספריים microdissection.לטעון כשלושה עד חמישה microliters של תערובת הזרקת Cre-אדנווירוס לתוך מזרק המילטון 25 microliter עם מחט רכזת מתכת 33 מד מודבק. להעריך את נפח תערובת ההזרקה במזרק בהתבסס על הצבע הכחול הכלול בתערובת. בעדינות להחזיק את קצה דש העור עם פינצטה מעוגלת עדין ולהזריק את תערובת הזרקת Cre-adenovirus לאט לתוך הפטמה תוך ניטור התפשטות של צבע כחול לתוך עץ צינור החלב.לשמור על קצב ההזרקה איטי ככל האפשר, כדי למנוע נזק לומן צינורית. זריקה תוך-צינורית מוצלחת מסומנת על ידי נוזלים מוזרקים המתפשטים בכל עץ הצינורית מבלי לדלוף לתוך תא הסטרומה. בעדינות למשוך את המחט מן הפטמה, כדי למנוע כל דליפה של הנוזל מוזרק.בדוק את הצד הדיסטלי של בלוטת החלב או את האזור שמסביב של הפטמה מוזרק. פיזור צבע לתוך סטרומה הסמוכה כפי שמוצג כאן מצביע על הזרקת כרית שומן חלבית ולא זריקה תוך-צינורית מוצלחת. סגור את הפצעים הכירורגיים בעור עם פצעים.מוציאים את העכבר מההרדמה ומ מניחים אותו על משטח חימום בתוך כלוב נקי להתאוששות. לפקח על התפתחות הגידול חלבי כמתואר בפרוטוקול הטקסט. העכברים הנשיים הצעירים ביותר שעבורם ניתן לבצע זריקה תוך-צינורית בהצלחה הם אלה בגיל כשלושה שבועות.אמנם עבור רוב הניסויים אינדוקציה גידול חלבי, עכברים נקבה בוגרת צעירים משמשים. הזרקה תוך-צינורית עם נפח גדול יותר של תערובת ההזרקה יכולה להתבצע בעכברים נקבה במהלך ההריון המוקדם עד הבינוני כדי למקד תאים מכתביים. כדי למקד תת-כפילויות שונות של תאי אפיתל תות-חיים עבור אינדוקציה של גידולי חום, Cre-adenoviruses תחת שליטתם של מקדמי תת-קבוצה ספציפיים שונים של תאי אפיתל ממים שימשו להזרקה.לדוגמה Cre-adenovirus תחת שליטתו של קרטין 8 מקדם שימש כדי למקד תאים אפיתל ממים זוהר. Cre-adenovirus תחת שליטתו של קרטין 5 מקדם ממוקד שושלת בסיסית המוביל סימון גנטי של תאים אפיתל חלבי בסיסי בלבד. עבור נקבה P53 floxed עכברים הומוזיגוס עם כתב ROSA26-YFP, הזריקה האינטראדוקטאלית של קרטין 8 Cre-adenovirus הוביל להתפתחות של גידולים חלביים מספר חודשים לאחר ההזרקה.בשל הכללתו של כתב R26-Y מותנה, תאים אפיתל הגידול סומנו בדרך כלל על ידי YFP והוא יכול להיות מזוהה על ידי ציטומטריה זרימה. התאים יכולים להיות מועשרים על ידי מיון זרימה של תאים חיוביים YFP לניתוח נוסף. הדברים החשובים ביותר שיש לזכור בעת ניסיון הליך זה הם להשתמש בנפח הזרקה קטן, להזריק לאט, וגם למשוך את המחט לאט.בעקבות הליך זה, ניתן לפקח על התקדמות תאי האפיתל החלביים החיוביים של YFP לשלבים טרום ממאירים וסרטניים על ידי ציטומטריית זרימה או הכתמת שפעת חיסונית של הבלוטה המוזרקת. טכניקה זו תסלול את הדרך לחוקרים לחקור תאים ממוצא של סרטן השד, כיצד הם מגיבים לאירועים אוטוגניים שונים וכיצד הם מתקדמים לתאים סרטניים. הן אדנווירוס והן המחט להזרקה עלולים להיות מסוכנים.לכן, יש תמיד ללבוש כפפות ולהשתמש מחטי בטיחות ומזרקים בעת ביצוע הזרקה תוך-צינורית.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis (Video) | JoVE

הזרקת עורק Intra-כסל עבור דוגמנות יעילה וסלקטיבי של מיקרוסקופיים עצם גרור

Intra-iliac artery (IIA) injection is an efficient approach to introduce metastatic lesions of various cancer cells in animals. Compared to the widely ...

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures (Video) | JoVE

ניצול הקרנת Genomics פונקציונלית כדי לזהות מטרות תרופה חדשנית פוטנציאלי תרבויות אליפטית תא סרטני

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis (Video) | JoVE

Cell הזרקת הסרטן Intracarotid לייצר מודלי עכבר של המוח גרור

Metastasis, the spread and growth of malignant cells at secondary sites within a patient&#39;s body, accounts for &#62; 90% of cancer-related mortality. ...

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification (Video) | JoVE

חתך בלוטות החלב שלמות מלא עבור זיהוי הנגע

Normal mammary gland development may be altered by exposure to environmental toxicants and pharmaceutical products, excessive exposure to hormones, and ...

Modeling Osteosarcoma Using Li-Fraumeni Syndrome Patient-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Modeling Osteosarcoma Using Li-Fraumeni Syndrome Patient-derived Induced Pluripotent Stem Cells (Video) | JoVE

מידול אוסטאוסרקומה באמצעות תאי גזע Pluripotent נגזר החולה המושרה תסמונת לי-פראומני, היא תורשתית

Li-Fraumeni syndrome (LFS) is an autosomal dominant hereditary cancer disorder. Patients with LFS are predisposed to a various type of tumors, including ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad (Video) | JoVE

הזרקת Orthotopic של תאים סרטניים בשד אל תוך כרית שומן החלב עכברים

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad (Video) | JoVE

חולדה השתלת תא האפיתל לתוך משטח שומן לבן הגלימה

As early as the 1970s, researchers have successfully transplanted mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of rats. Grafting mammary ...

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging (Video) | JoVE

מידול גרורות מוח באמצעות הזרקה תוך גולגולתית והדמיית תהודה מגנטית

Metastatic spread of cancer is an unfortunate consequence of disease progression, aggressive cancer subtypes, and/or late diagnosis. Brain metastases are ...

Modeling Breast Cancer in Human Breast Tissue using a Microphysiological System

Modeling Breast Cancer in Human Breast Tissue using a Microphysiological System (Video) | JoVE

דוגמנות סרטן השד ברקמת השד האנושית באמצעות מערכת מיקרופיזיולוגית

Breast cancer (BC) remains a leading cause of death for women. Despite more than $700 million invested in BC research annually, 97% of candidate BC drugs ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells (Video) | JoVE

מידול גרורות במוח באמצעות הזרקת ורידים בזנב של תאי סרטן שד דלקתיים

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...