Name: modeling breast cancer via an intraductal injection of cre-expressing adenovirus into the mouse mammary gland
Uploaded: 2019-06-07T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland Video at JoVE.com

यह काम राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (एनआईएच) अनुदान R01 CA222560 और रक्षा निर्णायक पुरस्कार W81XWH-18-1-0037 द्वारा समर्थित किया गया था.

यहां वर्णित सभी तरीकों को ब्रिघम और महिला अस्पताल की संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (आईएसयूसी) द्वारा अनुमोदित किया गया है।
1. floxed चूहों की पीढ़ी और रखरखाव
<ol><li>स्तन कैंसर से संबंधित floxed सशर्...

<ol>
	<li>Wagner, K. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cre-mediated+gene+deletion+in+the+mammary+gland.">Cre-mediated gene deletion in the mammary gland.</a> Nucleic Acids Research. 25 (21), 4323-4330 (1997).</li><li>Selbert, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+BLG-Cre+mediated+gene+deletion+in+the+mammary+gland.">Efficient BLG-Cre mediated gene deletion in the mammary gland.</a> Transgenic Research. 7 (5), 387-396 (1998).</li><li>Jonkers, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+tumor+suppressor+activity+of+BRCA2+and+p53+in+a+conditional+mouse+model+for+breast+cancer.">Synergistic tumor suppressor activity of BRCA2 and p53 in a conditional mouse model for breast cancer.</a> Nature Genetics. 29 (4), 418-425 (2001).</li><li>van Bragt, M. P., Hu, X., Xie, Y., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RUNX1,+a+transcription+factor+mutated+in+breast+cancer,+controls+the+fate+of+ER-positive+mammary+luminal+cells.">RUNX1, a transcription factor mutated in breast cancer, controls the fate of ER-positive mammary luminal cells.</a> eLife. 3, e03881 (2014).</li><li>Tao, L., van Bragt, M. P., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Long-Lived+Luminal+Subpopulation+Enriched+with+Alveolar+Progenitors+Serves+as+Cellular+Origin+of+Heterogeneous+Mammary+Tumors.">A Long-Lived Luminal Subpopulation Enriched with Alveolar Progenitors Serves as Cellular Origin of Heterogeneous Mammary Tumors.</a> Stem Cell Reports. 5 (1), 60-74 (2015).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+mutation+of+Brca1+in+mammary+epithelial+cells+results+in+blunted+ductal+morphogenesis+and+tumour+formation.">Conditional mutation of Brca1 in mammary epithelial cells results in blunted ductal morphogenesis and tumour formation.</a> Nature Genetics. 22 (1), 37-43 (1999).</li><li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ETV6-NTRK3+fusion+oncogene+initiates+breast+cancer+from+committed+mammary+progenitors+via+activation+of+AP1+complex.">ETV6-NTRK3 fusion oncogene initiates breast cancer from committed mammary progenitors via activation of AP1 complex.</a> Cancer Cell. 12 (6), 542-558 (2007).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatic+loss+of+BRCA1+and+p53+in+mice+induces+mammary+tumors+with+features+of+human+BRCA1-mutated+basal-like+breast+cancer.">Somatic loss of BRCA1 and p53 in mice induces mammary tumors with features of human BRCA1-mutated basal-like breast cancer.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (29), 12111-12116 (2007).</li><li>Molyneux, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BRCA1+basal-like+breast+cancers+originate+from+luminal+epithelial+progenitors+and+not+from+basal+stem+cells.">BRCA1 basal-like breast cancers originate from luminal epithelial progenitors and not from basal stem cells.</a> Cell Stem Cell. 7 (3), 403-417 (2010).</li><li>Koren, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PIK3CA+induces+multipotency+and+multi-lineage+mammary+tumours.">PIK3CA induces multipotency and multi-lineage mammary tumours.</a> Nature. 525 (7567), 114-118 (2015).</li><li>Van Keymeulen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactivation+of+multipotency+by+oncogenic+PIK3CA+induces+breast+tumour+heterogeneity.">Reactivation of multipotency by oncogenic PIK3CA induces breast tumour heterogeneity.</a> Nature. 525 (7567), 119-123 (2015).</li><li>Tao, L., Xiang, D., Xie, Y., Bronson, R. T., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+p53+loss+in+mouse+luminal+cells+causes+clonal+expansion+and+development+of+mammary+tumours.">Induced p53 loss in mouse luminal cells causes clonal expansion and development of mammary tumours.</a> Nature Communications. 8, 14431 (2017).</li><li>Tao, L., van Bragt, M. P. A., Laudadio, E., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+Tracing+of+Mammary+Epithelial+Cells+Using+Cell-Type-Specific+Cre-Expressing+Adenoviruses.">Lineage Tracing of Mammary Epithelial Cells Using Cell-Type-Specific Cre-Expressing Adenoviruses.</a> Stem Cell Reports. 2 (6), 770-779 (2014).</li><li>Sutherland, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+of+origin+of+small+cell+lung+cancer:+inactivation+of+Trp53+and+Rb1+in+distinct+cell+types+of+adult+mouse+lung.">Cell of origin of small cell lung cancer: inactivation of Trp53 and Rb1 in distinct cell types of adult mouse lung.</a> Cancer Cell. 19 (6), 754-764 (2011).</li><li>Shackleton, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+functional+mammary+gland+from+a+single+stem+cell.">Generation of a functional mammary gland from a single stem cell.</a> Nature. 439 (7072), 84-88 (2006).</li><li>The Cancer Genome Atlas Network. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+molecular+portraits+of+human+breast+tumours.">Comprehensive molecular portraits of human breast tumours.</a> Nature. 490 (7418), 61-70 (2012).</li><li>Nik-Zainal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+life+history+of+21+breast+cancers.">The life history of 21 breast cancers.</a> Cell. 149 (5), 994-1007 (2012).</li><li>Abba, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Molecular+Portrait+of+High-Grade+Ductal+Carcinoma+In+Situ.">A Molecular Portrait of High-Grade Ductal Carcinoma In Situ.</a> Cancer Research. 75 (18), 3980-3990 (2015).</li></ol>

MECs के विभिन्न subpopulations से स्तन ट्यूमर inducing के लिए इस दृष्टिकोण की सफलता न केवल उचित सेल-प्रकार-विशिष्ट प्रमोटरों को चुनने पर निर्भर करता है (क्रे अभिव्यक्ति ड्राइव करने के लिए) लेकिन यह भी intraductal इंजेक्शन प्रक?...

इस विधि का समग्र लक्ष्य माउस एमजी में विज्ञापन-क्री के एक इंट्राडकल इंजेक्शन के आधार पर एक नया स्तन कैंसर मॉडलिंग दृष्टिकोण विकसित करने के लिए है। Cre/loxP पुनर्संयोजन आधारित आनुवंशिक दृष्टिकोण व्यापक रूप से चूहों में मानव स्तन कैंसर मॉडल के लिए इस्तेमाल किया गया है. Cre/loxP आधारित स्तन कैंसर माउस मॉडल की पहली पीढ़ी MEC-विशिष्ट प्रमोटरों के नियंत्रण में Cre-expressing ट्रांसजेनिक चूहों का उपयोग करके उत्पन्न कर रहे हैं (उदाहरण के लिए, MMTV-Cre luminal MECs के लिए और बेसल MECs के एक हिस्से, Wap-Cre और Blg-Cre के लिए luminal संतति और कूपिका luminal MECs, K14-Cre के लिए बेसल और luminal MECs के एक हिस्से1,2,3,4,5)6, 7 , 8 , 9.हालांकि, जबकि ये क्रे ट्रांसजेनिक लाइनें क्रे अभिव्यक्ति के स्थानिक नियंत्रण को सक्षम करती हैं (यानी, एमईसी के विभिन्न सबसेटों में), वे क्रे अभिव्यक्ति और क्रे/लोक्सपी-मध्यस्थ आनुवंशिक हेरफेर के अस्थायी नियंत्रण की अनुमति नहीं देते हैं। Cre/loxP-आधारित स्तन कैंसर माउस मॉडल की दूसरी पीढ़ी inducible Cre activity/expression दृष्टिकोण का उपयोग (जैसे, Cre-एस्ट्रोजन रिसेप्टर संलयन [CreER] का उपयोग, जो केवल tamoxifen के प्रशासन पर Cre/loxP पुनर्संयोजन प्रेरित कर सकते हैं), और एक परिणाम के रूप में, इन आनुवंशिक उपकरण MECs में oncogenic घटनाओं के सक्रियण के स्थानिक और लौकिक नियंत्रण दोनों की अनुमति (जैसे, K8-Creer- और K5-Creerआधारित मॉडल)10,11,12 . स्तन कैंसर माउस मॉडल की दोनों पीढ़ियों में, के रूप में प्रमोटरों Cre या CreER अभिव्यक्ति ड्राइव करने के लिए इस्तेमाल किया (जैसे, Krt8, Krt5) भी अन्य अंगों के उपकला कोशिकाओं में सक्रिय हो सकता है (यानी, वे सेल-प्रकार के हैं विशिष्ट लेकिन अंग विशिष्ट नहीं) या उपकला कोशिकाओं के अलावा अन्य प्रकार के सेल प्रकार में एक लीक अभिव्यक्ति है (उदा., MMTV, जो अस्थि मज्जा hematopoietic कोशिकाओं में लीक गतिविधि है), इन दृष्टिकोण अन्य अंगों में अवांछित कैंसर (ओं) के विकास के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. यदि इन अप्रत्याशित कैंसर प्रभावित चूहों में घातक कारण, इन चूहों में स्तन कैंसर मॉडलिंग का मूल उद्देश्य निषिद्ध किया जा सकता है (जैसे, MMTV-Creसंचालित oncogenic घटनाओं hematopoietic द्रोह और चूहों की जल्दी मौत के लिए नेतृत्व कर सकते हैं , हेमेटोपोइटिक कोशिकाओं में एमएमटीवी प्रमोटर के रिसाव के कारण)4.
यहाँ हम चूहों में एक स्तन कैंसर मॉडलिंग दृष्टिकोण है कि दोनों सेल प्रकार की अनुमति देता है रिपोर्ट- और एक लौकिक नियंत्रित तरीके से oncogenic घटनाओं के अंग विशेष हेरफेर. यह दृष्टिकोण माउस MGs में विज्ञापन-Cre के एक intraductal इंजेक्शन पर आधारित है (और है, इस प्रकार, अंग विशिष्ट). क्रे अभिव्यक्ति को एडेनोवायरल वेक्टर में एम्बेड किए गए विभिन्न एमईसी उप-जनसंख्या-विशिष्ट प्रमोटरों का उपयोग करके नियंत्रित किया जा सकता है (उदाहरण के लिए, एल्मिनल एमईसी के लिए Krt8, बेसल एमईसी के लिए Krt5, इस प्रकार सेल-प्रकार विशिष्टता प्राप्त करना)। MGs में कैंसर प्रेरण अस्थायी रूप से अलग अलग उम्र में चूहों में विज्ञापन-क्रे के एक इंजेक्शन द्वारा नियंत्रित किया जा सकता है, उम्र के 3-4 सप्ताह से शुरू (pubertal) वयस्क चरण के लिए.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>33-gauge needle</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7803-05</td>
			<td>point style 3 blunt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7mm Reflex Clip</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>RF7 CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenovirus, Ad-K5-Cre</td>
			<td>University of Iowa Viral Vector Core</td>
			<td>Ad5-bk5-Cre (VVC-Berns-1547)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenovirus, Ad-K8-Cre</td>
			<td>University of Iowa Viral Vector Core</td>
			<td>Ad5mK8-nlsCre</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>HC800-1GAL</td>
			<td>Prepare to 70% in use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated CD31</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-0311-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated CD45</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-0451-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated TER119</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-5921-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bromophenol Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B0126-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD24-AF-700</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>564237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD24-PE</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>12-0242-83</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD29-APC</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>17-0291-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD29-PE</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>12-0291-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair Remover Lotion</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td>9 Oz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7636-01</td>
			<td>0.025 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodophors</td>
			<td>Betadine</td>
			<td></td>
			<td>10% Povidone-iodine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>NDC 10019-360-40</td>
			<td>1-2.5%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Loxicam</td>
			<td>Norbrook</td>
			<td>NDC 55529-040-10</td>
			<td>5 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lubricant Eye Ointment</td>
			<td>Akorn</td>
			<td colspan="2">NDC 17478-062-35</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting scissors</td>
			<td>Pentair</td>
			<td>9M</td>
			<td>Watchmaker&#39;s Forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting tweezers</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>M5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq 5X Master Mix</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0285L</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling breast cancer via an intraductal injection of cre-expressing adenovirus into the mouse mammary gland

स्तन कैंसर एक विषमांगी रोग है, संभवतः मूल और oncogenic घटनाओं के विभिन्न कोशिकाओं के बीच जटिल बातचीत के कारण. माउस मॉडल इन जटिल प्रक्रियाओं में अंतर्दृष्टि प्राप्त करने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाई है. हालांकि कई माउस मॉडल विभिन्न oncogenic घटनाओं और स्तन tumorigenesis के लिए मूल की कोशिकाओं के योगदान का अध्ययन करने के लिए विकसित किया गया है, इन मॉडलों अक्सर सेल प्रकार या अंग विशिष्ट नहीं हैं या एक में स्तन tumorigenesis की दीक्षा प्रेरित नहीं कर सकते लौकिक रूप से नियंत्रित तरीके से। यहाँ हम एक प्रोटोकॉल का वर्णन करने के लिए स्तन कैंसर माउस मॉडल के एक नए प्रकार के आधार पर Cre-expressing एडेनोवायरस (विज्ञापन-Cre) माउस स्तन ग्रंथियों (MGs) में intraductal इंजेक्शन उत्पन्न करने के लिए. स्तन नलिकाओं में विज्ञापन-क्री के प्रत्यक्ष इंजेक्शन के कारण, इस दृष्टिकोण एमजी विशिष्ट है, अन्य अंगों में किसी भी अवांछित कैंसर प्रेरण के बिना. इंट्राडकटल इंजेक्शन प्रक्रिया चूहों में उनके एमजी विकास के विभिन्न चरणों में किया जा सकता है (इस प्रकार, यह कैंसर प्रेरण के अस्थायी नियंत्रण की अनुमति देता है, उम्र के 3-4 सप्ताह से शुरू). सेल-प्रकार की विशिष्टता एडेनोवायरल वेक्टर में क्रे एक्सप्रेशन को ड्राइव करने के लिए विभिन्न सेल-प्रकार-विशिष्ट प्रमोटरों का उपयोग करके प्राप्त की जा सकती है। हम बताते हैं कि luminal और बेसल स्तन उपकला कोशिकाओं (MECs) कसकर Cre/loxP के लिए लक्षित किया जा सकता है आधारित आनुवंशिक हेरफेर के नियंत्रण में विज्ञापन-Cre के एक intraductal इंजेक्शन के माध्यम से 8 या Keratin 5 प्रमोटर, क्रमशः. एक सशर्त क्रे रिपोर्टर को शामिल करके (जैसे, Cre/loxP-प्रेरित Rosa26-YFP रिपोर्टर), हम बताते हैं कि एमईसी विज्ञापन-Cre द्वारा लक्षित है, और ट्यूमर कोशिकाओं उन से व्युत्पन्न, इंट्रासेटल इंजेक्शन के बाद रिपोर्टर सकारात्मक कोशिकाओं का पालन करके पता लगाया जा सकता है।

R26Y और Trp53एल एललीज़ के लिए प्रतिनिधि पीसीआर जीनोटाइपिंग परिणाम चित्र 1में दिखाए गए हैं।
हालांकि, सिद्धांत रूप में, सभी 10 MGs intraductal इंजेक्शन प्रक्रिय?...

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Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland Video (Video) | JoVE

इस प्रोटोकॉल का लक्ष्य माउस स्तन ग्रंथियों में क्रे-सब्सक्राइफिंग एडेनोवायरस के इंट्राडक्टल इंजेक्शन के आधार पर एक नए स्तन कैंसर मॉडलिंग दृष्टिकोण का वर्णन करना है। यह दृष्टिकोण दोनों सेल प्रकार की अनुमति देता है- और एक लौकिक नियंत्रित तरीके से oncogenic घटनाओं के अंग विशेष हेरफेर.

मॉडलिंग स्तन कैंसर माउस मैमरी Gland में क्रे-एडिनोवायरस के एक इंट्राडकियल इंजेक्शन के माध्यम से

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are ...

यह प्रोटोकॉल शोधकर्ताओं को स्तन एपिथेलियल कोशिकाओं के विभिन्न सबसेट से मानव स्तन कैंसर के विकास को फिर से शुरू करने के लिए एक नए प्रकार के माउस मॉडल उत्पन्न करने में मदद करेगा । यह तकनीक शोधकर्ताओं को एक सेल प्रकार विशिष्ट तरीके से और व्यापक माउस प्रजनन की आवश्यकता के बिना विकासीय चरण ऊतक में स्तन कैंसर माउस मॉडल उत्पन्न करने की अनुमति देती है। इस प्रक्रिया को शुरू करने के लिए, टेक्स्ट प्रोटोकॉल में वर्णित चूहों को उत्पन्न, बनाए रखना और एनेस्थेटाइज करना।माउस को एक अलग क्षेत्र में लाएं जहां से सर्जरी की जानी है। एक पंजे चुटकी प्रदर्शन करके संज्ञाहरण की पुष्टि करने के बाद, सर्जिकल प्रक्रिया के लिए तैयार करने के लिए प्रति किलोग्राम पांच मिलीग्राम की खुराक पर एनाल्जेसिया के रूप में Meloxicam इंजेक्ट करें । बालों को हटाने क्रीम की कई बूंदें लागू करके निप्पल सर्जिकल साइट का पर्दाफाश करें।सॉफ्ट पेपर टॉवेल का इस्तेमाल कर अत्यधिक क्रीम और ढीले बालों को हटा दें। निपल्स को नुकसान से बचने के लिए शेविंग की सिफारिश नहीं की जाती है। शल्य चिकित्सा साइट को पहले 70% अल्कोहल के बाद कीटाणुरहित करें और स्क्रब इओडोफर्स के अंतिम अनुप्रयोग के साथ समाप्त करें।एक धुंध स्पंज या एक कपास इत्तला दे दी applicator का उपयोग कर परिधि की ओर कार्य क्षेत्र के केंद्र से एक परिपत्र गति में ऐसा करते हैं । चक्र को तीन से चार बार दोहराएं। सर्जिकल प्रक्रिया के दौरान aseptic तकनीकों का उपयोग करें।दो चौथे इंजिनियल स्तन ग्रंथियों के बीच लगभग एक सेंटीमीटर की लंबाई में त्वचा पर एक चीरा साइट बनाएं। ध्यान से त्वचा फ्लैप को पैरीटल पेरिटोनम से अलग करें ताकि स्तन डक्टल पेड़ का दृश्य हो सके। माइक्रोडिसेक्शन कैंची का उपयोग करके किसी भी आस-पास की त्वचा को काटने के बिना बाहरी निप्पल को हटाने के लिए वॉचमेकर्स के संदंश के साथ निप्पल को ध्यान से पकड़ें।क्रे-एडेनोवायरस इंजेक्शन मिश्रण के लगभग तीन से पांच माइक्रोलीटर को 33 गेज मेटल हब सुई के साथ 25 माइक्रोलीटर हैमिल्टन सिरिंज में लोड करें। मिश्रण में शामिल नीले रंग के आधार पर सिरिंज में इंजेक्शन मिश्रण की मात्रा का अनुमान लगाएं। धीरे-धीरे एक ठीक घुमावदार चिमटी के साथ त्वचा फ्लैप के किनारे पकड़ो और स्तन डक्टल पेड़ में नीले रंग के प्रसार की निगरानी करते हुए निप्पल में धीरे-धीरे क्रे-एडेनोवायरस इंजेक्शन मिश्रण इंजेक्ट करें।डक्टल ल्यूमेन को नुकसान से बचने के लिए इंजेक्शन की दर को धीमी गति से बनाए रखें। स्ट्रोमा डिब्बे में लीक किए बिना पूरे डक्टल पेड़ में फैले इंजेक्शन तरल पदार्थ द्वारा एक सफल इंट्राडक्टल इंजेक्शन का संकेत दिया जाता है। इंजेक्शन तरल पदार्थ के किसी भी रिसाव से बचने के लिए धीरे-धीरे निप्पल से सुई वापस लें।मैमेरी ग्रंथि या इंजेक्शन निप्पल के आसपास के क्षेत्र के डिस्टल साइड की जांच करें। पास के स्ट्रोमा में डाई डिस्टर्बिंग के रूप में यहां दिखाया गया है एक सफल इंट्राडक्टल इंजेक्शन के बजाय एक स्तन वसा पैड इंजेक्शन इंगित करता है । घाव क्लिप के साथ त्वचा में सर्जिकल घावों को बंद करें।संज्ञाहरण से माउस निकालें और वसूली के लिए एक साफ पिंजरे के अंदर एक हीटिंग पैड पर जगह है। पाठ प्रोटोकॉल में वर्णित स्तन ट्यूमर के विकास की निगरानी करें। सबसे कम उम्र की महिला चूहों जिसके लिए इंट्राडक्टल इंजेक्शन सफलतापूर्वक किया जा सकता है, वे लगभग तीन सप्ताह की उम्र में हैं।हालांकि अधिकांश स्तन ट्यूमर प्रेरण प्रयोगों के लिए, युवा वयस्क महिला चूहों का उपयोग किया जाता है। इंजेक्शन मिश्रण की एक बड़ी मात्रा के साथ इंट्राड्यूक्टल इंजेक्शन अल्वियोलर कोशिकाओं को लक्षित करने के लिए जल्दी से मध्य गर्भ के दौरान मादा चूहों में किया जा सकता है। स्तन ट्यूमर प्रेरण के लिए विभिन्न स्तन एपिथेलियल सेल उपजनसंख्या को लक्षित करने के लिए, विभिन्न स्तन एपिथेलियल सेल सबसेट विशिष्ट प्रमोटरों के नियंत्रण में क्रे-एडेनोवायरस इंजेक्शन के लिए उपयोग किए जाते थे।उदाहरण के लिए केराटिन 8 प्रमोटर के नियंत्रण में क्रे-एडेनोवायरस का उपयोग ल्यूमिनल मैमेरी एपिथेलियल कोशिकाओं को लक्षित करने के लिए किया गया था। केराटिन 5 प्रमोटर के नियंत्रण में क्रे-एडेनोवायरस ने बेसल वंश को लक्षित किया जिससे केवल बेसल स्तन एपिथेलियल कोशिकाओं का आनुवंशिक अंकन हुआ । एक महिला P53 के लिए एक ROSA26-YFP रिपोर्टर के साथ होमोक्सिगस चूहों, केराटिन 8 क्रे-adenovirus के इंट्राडक्टल इंजेक्शन इंजेक्शन के बाद कई महीने स्तन ट्यूमर के विकास के लिए नेतृत्व किया ।सशर्त R26-Y रिपोर्टर के शामिल किए जाने के कारण, ट्यूमर एपिथेलियल कोशिकाओं को आम तौर पर YFP द्वारा चिह्नित किया गया था और प्रवाह साइटोमेट्री द्वारा पता लगाया जा सकता है । कोशिकाओं को आगे के विश्लेषण के लिए YFP सकारात्मक कोशिकाओं के प्रवाह छंटाई से समृद्ध किया जा सकता है । इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय याद रखने वाली सबसे महत्वपूर्ण चीजें एक छोटे इंजेक्शन की मात्रा का उपयोग करना, धीरे-धीरे इंजेक्ट करना और सुई को धीरे-धीरे वापस लेना भी है।इस प्रक्रिया के बाद, एक लक्षित YFP सकारात्मक स्तन epithelial कोशिकाओं की प्रगति की निगरानी कर सकते है पूर्व घातक और कैंसर के चरणों के प्रवाह साइटोमेट्री या सह इम्यूनोफ्लोरेसेंस इंजेक्शन ग्रंथि के धुंधला द्वारा चरण । इस तकनीक से शोधकर्ताओं के लिए स्तन कैंसर की उत्पत्ति की कोशिकाओं का अध्ययन करने का मार्ग प्रशस्त होगा, वे विभिन्न ऑटोजेनिक घटनाओं का जवाब कैसे देते हैं और वे कैंसर कोशिकाओं के लिए कैसे प्रगति करते हैं । इंजेक्शन के लिए एडेनोवायरस और सुई दोनों संभावित रूप से खतरनाक हैं।इसलिए, किसी को हमेशा दस्ताने पहनना चाहिए और इंट्राडक्टल इंजेक्शन करते समय सुरक्षा सुई और सीरिंज का उपयोग करना चाहिए।

Research

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Cancer Research

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Intra-iliac artery (IIA) injection is an efficient approach to introduce metastatic lesions of various cancer cells in animals. Compared to the widely ...

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures Video (Video) | JoVE

उपयोग कार्यात्मक जीनोमिक्स स्क्रीनिंग कैंसर सेल उपगोल संस्कृतियों में संभावित उपन्यास ड्रग लक्ष्यों की पहचान करने के लिए

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis Video (Video) | JoVE

Intracarotid कैंसर सेल इंजेक्शन मस्तिष्क मेटास्टेसिस के माउस मॉडल का उत्पादन

Metastasis, the spread and growth of malignant cells at secondary sites within a patient&#39;s body, accounts for &#62; 90% of cancer-related mortality. ...

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification

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घाव पहचान के लिए स्तन मंडल पूरे माउंटिंग का हिस्सा

Normal mammary gland development may be altered by exposure to environmental toxicants and pharmaceutical products, excessive exposure to hormones, and ...

Modeling Osteosarcoma Using Li-Fraumeni Syndrome Patient-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Modeling Osteosarcoma Using Li-Fraumeni Syndrome Patient-derived Induced Pluripotent Stem Cells Video (Video) | JoVE

ली-Fraumeni सिंड्रोम रोगी-व्युत्पंन प्रेरित Pluripotent स्टेम सेल का उपयोग ऑस्टियो मॉडलिंग

Li-Fraumeni syndrome (LFS) is an autosomal dominant hereditary cancer disorder. Patients with LFS are predisposed to a various type of tumors, including ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad Video (Video) | JoVE

स्तन कैंसर कोशिकाओं के चूहों स्तन वसा पैड में Orthotopic इंजेक्शन

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad

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इंटरस्केपुलर व्हाइट फैट पैड में चूहा मैमेरी एपिथेलियल सेल प्रत्यारोपण

As early as the 1970s, researchers have successfully transplanted mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of rats. Grafting mammary ...

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging

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इंट्राक्रैनियल इंजेक्शन और चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग के माध्यम से मॉडलिंग ब्रेन मेटास्टेस

Metastatic spread of cancer is an unfortunate consequence of disease progression, aggressive cancer subtypes, and/or late diagnosis. Brain metastases are ...

Modeling Breast Cancer in Human Breast Tissue using a Microphysiological System

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एक माइक्रोफिजियोलॉजिकल सिस्टम का उपयोग कर मानव स्तन ऊतक में स्तन कैंसर मॉडलिंग

Breast cancer (BC) remains a leading cause of death for women. Despite more than $700 million invested in BC research annually, 97% of candidate BC drugs ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

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भड़काऊ स्तन कैंसर कोशिकाओं के टेल-वेन इंजेक्शन के माध्यम से मस्तिष्क मेटास्टेसिस मॉडलिंग

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...