Name: modeling breast cancer via an intraductal injection of cre-expressing adenovirus into the mouse mammary gland
Uploaded: 2019-06-07T13:30:00
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Questo lavoro è stato supportato dalla concessione R01 CA222560 dei National Institutes of Health (NIH) e dal Department of Defense Breakthrough Award W81XWH-18-1-0037.

Tutti i metodi qui descritti sono stati approvati dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali (IACUC) di Brigham e Women's Hospital.
1. Generazione e manutenzione di topi sxed
<ol><li>Ottenere il knockout condizionale flossed rilevante per il cancro al seno (ad esempio, Trp53tm1Brn [noto come Trp53L/L], Brca1tm1Aash [Brca1L/L]) o linee di topo knock-in condizionali (ad esempio, Gt(ROSA)26So...

<ol>
	<li>Wagner, K. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cre-mediated+gene+deletion+in+the+mammary+gland.">Cre-mediated gene deletion in the mammary gland.</a> Nucleic Acids Research. 25 (21), 4323-4330 (1997).</li><li>Selbert, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+BLG-Cre+mediated+gene+deletion+in+the+mammary+gland.">Efficient BLG-Cre mediated gene deletion in the mammary gland.</a> Transgenic Research. 7 (5), 387-396 (1998).</li><li>Jonkers, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+tumor+suppressor+activity+of+BRCA2+and+p53+in+a+conditional+mouse+model+for+breast+cancer.">Synergistic tumor suppressor activity of BRCA2 and p53 in a conditional mouse model for breast cancer.</a> Nature Genetics. 29 (4), 418-425 (2001).</li><li>van Bragt, M. P., Hu, X., Xie, Y., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RUNX1,+a+transcription+factor+mutated+in+breast+cancer,+controls+the+fate+of+ER-positive+mammary+luminal+cells.">RUNX1, a transcription factor mutated in breast cancer, controls the fate of ER-positive mammary luminal cells.</a> eLife. 3, e03881 (2014).</li><li>Tao, L., van Bragt, M. P., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Long-Lived+Luminal+Subpopulation+Enriched+with+Alveolar+Progenitors+Serves+as+Cellular+Origin+of+Heterogeneous+Mammary+Tumors.">A Long-Lived Luminal Subpopulation Enriched with Alveolar Progenitors Serves as Cellular Origin of Heterogeneous Mammary Tumors.</a> Stem Cell Reports. 5 (1), 60-74 (2015).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+mutation+of+Brca1+in+mammary+epithelial+cells+results+in+blunted+ductal+morphogenesis+and+tumour+formation.">Conditional mutation of Brca1 in mammary epithelial cells results in blunted ductal morphogenesis and tumour formation.</a> Nature Genetics. 22 (1), 37-43 (1999).</li><li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ETV6-NTRK3+fusion+oncogene+initiates+breast+cancer+from+committed+mammary+progenitors+via+activation+of+AP1+complex.">ETV6-NTRK3 fusion oncogene initiates breast cancer from committed mammary progenitors via activation of AP1 complex.</a> Cancer Cell. 12 (6), 542-558 (2007).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatic+loss+of+BRCA1+and+p53+in+mice+induces+mammary+tumors+with+features+of+human+BRCA1-mutated+basal-like+breast+cancer.">Somatic loss of BRCA1 and p53 in mice induces mammary tumors with features of human BRCA1-mutated basal-like breast cancer.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (29), 12111-12116 (2007).</li><li>Molyneux, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BRCA1+basal-like+breast+cancers+originate+from+luminal+epithelial+progenitors+and+not+from+basal+stem+cells.">BRCA1 basal-like breast cancers originate from luminal epithelial progenitors and not from basal stem cells.</a> Cell Stem Cell. 7 (3), 403-417 (2010).</li><li>Koren, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PIK3CA+induces+multipotency+and+multi-lineage+mammary+tumours.">PIK3CA induces multipotency and multi-lineage mammary tumours.</a> Nature. 525 (7567), 114-118 (2015).</li><li>Van Keymeulen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactivation+of+multipotency+by+oncogenic+PIK3CA+induces+breast+tumour+heterogeneity.">Reactivation of multipotency by oncogenic PIK3CA induces breast tumour heterogeneity.</a> Nature. 525 (7567), 119-123 (2015).</li><li>Tao, L., Xiang, D., Xie, Y., Bronson, R. T., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+p53+loss+in+mouse+luminal+cells+causes+clonal+expansion+and+development+of+mammary+tumours.">Induced p53 loss in mouse luminal cells causes clonal expansion and development of mammary tumours.</a> Nature Communications. 8, 14431 (2017).</li><li>Tao, L., van Bragt, M. P. A., Laudadio, E., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+Tracing+of+Mammary+Epithelial+Cells+Using+Cell-Type-Specific+Cre-Expressing+Adenoviruses.">Lineage Tracing of Mammary Epithelial Cells Using Cell-Type-Specific Cre-Expressing Adenoviruses.</a> Stem Cell Reports. 2 (6), 770-779 (2014).</li><li>Sutherland, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+of+origin+of+small+cell+lung+cancer:+inactivation+of+Trp53+and+Rb1+in+distinct+cell+types+of+adult+mouse+lung.">Cell of origin of small cell lung cancer: inactivation of Trp53 and Rb1 in distinct cell types of adult mouse lung.</a> Cancer Cell. 19 (6), 754-764 (2011).</li><li>Shackleton, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+functional+mammary+gland+from+a+single+stem+cell.">Generation of a functional mammary gland from a single stem cell.</a> Nature. 439 (7072), 84-88 (2006).</li><li>The Cancer Genome Atlas Network. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+molecular+portraits+of+human+breast+tumours.">Comprehensive molecular portraits of human breast tumours.</a> Nature. 490 (7418), 61-70 (2012).</li><li>Nik-Zainal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+life+history+of+21+breast+cancers.">The life history of 21 breast cancers.</a> Cell. 149 (5), 994-1007 (2012).</li><li>Abba, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Molecular+Portrait+of+High-Grade+Ductal+Carcinoma+In+Situ.">A Molecular Portrait of High-Grade Ductal Carcinoma In Situ.</a> Cancer Research. 75 (18), 3980-3990 (2015).</li></ol>

Il successo di questo approccio per indurre tumori mammari provenienti da diverse sottopopolazioni di MEC si basa non solo sulla scelta di promotori specifici del tipo di cellula appropriati (per guidare l'espressione Cre), ma anche sulla procedura di iniezione intraduttiva stessa. L'idea alla base di questo approccio è che i virus Ad-Cre iniettati sono conservati nell'albero duttale, che è una struttura nascosta con lumen, e quindi, solo i MEC sono esposti ai virus e sono infettati da Ad-Cre. A causa dello spazio limi...

L'obiettivo generale di questo metodo è quello di sviluppare un nuovo approccio di modellazione del cancro al seno basato su un'iniezione intraduttiva di Ad-Cre nel topo MG. L'approccio genetico basato sulla ricombinazione Cre/loxP è stato ampiamente utilizzato per modellare il cancro al seno umano nei topi. La prima generazione di modelli di topo di carcinoma mammario a base di Cre/loxP viene generata utilizzando topi transgenici che esprimono Cre-expressing sotto il controllo di promotori specifici del MEC (ad esempio, MMTV-Cre per i MEC luminosi e una porzione di MEC basali, Wap-Cre e Blg-Cre per progenitori luminali e MEC luminali alveolar, K14-Cre per basale e una porzione di MEC luminali1,2,3,4,5)6, 7 (in questo stato , 8 (IN vio , 9. , tuttavia, sebbene queste linee transgeniche Del Cre consentano il controllo spaziale dell'espressione Cre (cioè in diversi sottoinsiemi di MEC), non consentono il controllo temporale dell'espressione Cre e della manipolazione genetica mediata da Cre/loxP. La seconda generazione di modelli di topo di carcinoma mammario basati su Cre/loxP utilizza approcci inducibili per l'attività/espressione del creme (ad esempio, l'uso della fusione del recettore Cre-estrogeno [CreER], che può indurre la ricombinazione Cre/loxP solo dopo la somministrazione di tamoxifene) e di conseguenza, questi strumenti genetici consentono controlli spaziali e temporali dell'attivazione di eventi oncogeni nei MEC (ad esempio, modelli basati su K8-CreER- e K5-CreER)10,11,12 . In entrambe le generazioni di modelli di topo di cancro al seno, come promotori utilizzati per guidare l'espressione Cre o CreER (ad esempio, Krt8, Krt5) possono anche essere attivi nelle cellule epiteliali di altri organi (cioè, sono specifiche di tipo di cellula ma non specifiche dell'organo) o hanno un'espressione che perde in tipi di cellule diverse dalle cellule epiteliali (ad esempio, MMTV, che ha un'attività che perde nelle cellule ematopoietiche del midollo osseo), questi approcci possono portare allo sviluppo di tumori indesiderati in altri organi. Se questi tumori inaspettati causano letalità nei topi colpiti, lo scopo originale della modellazione del cancro al seno in questi topi può essere vietato (ad esempio, eventi oncogeni MMTV-Cre-driven può portare a neoplasie ematopoietiche e morte precoce dei topi , a causa della perdita del promotore MMTV nelle cellule ematopoietiche)4.
Qui segnaliamo un approccio di modellazione del cancro al seno nei topi che consente la manipolazione sia tipo di cellula che organo-specifica degli eventi oncogeni in modo controllato materialmente. Questo approccio si basa su un'iniezione intraduttiva di Ad-Cre nelle MG del topo (ed è, quindi, specifico dell'organo). L'espressione del creme può essere controllata utilizzando diversi promotori specifici del MEC incorporati nel vettore adenovirale (ad esempio, Krt8 per MEC luminali, Krt5 per i MEC basali, ottenendo così la specificità del tipo di cellula). L'induzione del cancro nelle MG può essere controllata temporaneamente mediante un'iniezione di Ad-Cre nei topi di età diverse, a partire da 3-4 settimane di età (pageratale) allo stadio adulto.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>33-gauge needle</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7803-05</td>
			<td>point style 3 blunt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7mm Reflex Clip</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>RF7 CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenovirus, Ad-K5-Cre</td>
			<td>University of Iowa Viral Vector Core</td>
			<td>Ad5-bk5-Cre (VVC-Berns-1547)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenovirus, Ad-K8-Cre</td>
			<td>University of Iowa Viral Vector Core</td>
			<td>Ad5mK8-nlsCre</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>HC800-1GAL</td>
			<td>Prepare to 70% in use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated CD31</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-0311-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated CD45</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-0451-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated TER119</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-5921-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bromophenol Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B0126-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD24-AF-700</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>564237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD24-PE</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>12-0242-83</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD29-APC</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>17-0291-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD29-PE</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>12-0291-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair Remover Lotion</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td>9 Oz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7636-01</td>
			<td>0.025 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodophors</td>
			<td>Betadine</td>
			<td></td>
			<td>10% Povidone-iodine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>NDC 10019-360-40</td>
			<td>1-2.5%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Loxicam</td>
			<td>Norbrook</td>
			<td>NDC 55529-040-10</td>
			<td>5 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lubricant Eye Ointment</td>
			<td>Akorn</td>
			<td colspan="2">NDC 17478-062-35</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting scissors</td>
			<td>Pentair</td>
			<td>9M</td>
			<td>Watchmaker&#39;s Forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting tweezers</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>M5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq 5X Master Mix</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0285L</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling breast cancer via an intraductal injection of cre-expressing adenovirus into the mouse mammary gland

Il cancro al seno è una malattia eterogenea, probabilmente a causa di complesse interazioni tra diverse cellule di origine ed eventi oncogeni. I modelli di topo sono fondamentali per ottenere informazioni approfondite su questi processi complessi. Sebbene molti modelli murini siano stati sviluppati per studiare i contributi di vari eventi oncogeni e cellule di origine alla tumorigenesi mammaria, questi modelli spesso non sono di tipo cellulare o organo specifico o non possono indurre l'avvio della tumorigenesi mammaria in un modo controllato temporaneamente. Qui descriviamo un protocollo per generare un nuovo tipo di modelli di topo di cancro al seno basati sull'iniezione intraduttiva di adenovirus che esprime Cre (Ad-Cre) nelle ghiandole mammarie del topo (MG). A causa dell'iniezione diretta di Ad-Cre nei dotti mammari, questo approccio è specifico di MG, senza alcuna induzione indesiderata del cancro in altri organi. La procedura di iniezione intraduttiva può essere eseguita nei topi in diverse fasi del loro sviluppo di MG (quindi, permette il controllo temporale dell'induzione del cancro, a partire da 3-4 settimane di età). La specificità del tipo di cellula può essere ottenuta utilizzando diversi promotori specifici del tipo di cellula per guidare l'espressione Cre nel vettore adenovirale. Dimostriamo che le cellule epiteliali mammarie luminali e basali (MEC) possono essere strettamente mirate per la manipolazione genetica basata su Cre/loxP tramite un'iniezione intraduttiva di Ad-Cre sotto il controllo del promotore Keratin 8 o Keratin 5, rispettivamente. Incorporando un reporter Cre condizionale (ad esempio, Reporter Inducibile in Cre/loxP Rosa26-YFP), mostriamo che i MEC presi di mira da Ad-Cre, e le cellule tumorali da essi derivate, possono essere rintracciati seguendo le cellule reporter-positive dopo l'iniezione intraductale.

I risultati di genotipizzazione PCR rappresentativi per gli alleli R26Y e Trp53L sono illustrati nella Figura 1.
Anche se, in linea di principio, tutti i 10 MG possono essere sottoposti alla procedura di iniezione intraducttale, praticamente, i due quattro MG inguinali sono tipicamente selezionati per l'iniezione, a causa della loro accessibilità più facile e di dimen...

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L'obiettivo di questo protocollo è descrivere un nuovo approccio di modellazione del cancro al seno basato sull'iniezione intraduttiva di adenovirus che esprime Cre nelle ghiandole mammarie dei topi. Questo approccio consente la manipolazione sia di tipo cellulare che di un organo degli eventi oncogeni in modo controllato temporaneamente.

Modellare il cancro al seno tramite un'iniezione intraduttiva di adenovirus che esprime la creminazione nella ghiandola mammaria del topo

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are ...

Questo protocollo aiuterà i ricercatori a generare un nuovo tipo di modello di topo per ricapitolare lo sviluppo del cancro al seno umano da diversi sottoinsiemi di cellule epiteliali mammarie. Questa tecnica consente ai ricercatori di generare modelli di topi del cancro al seno nel tessuto dello stadio di sviluppo in modo specifico di tipo cellulare e senza la necessità di un allevamento estensivo di topi. Per iniziare questa procedura, generare, mantenere e anestetizzare topi flox come descritto nel protocollo di testo.Portare il mouse in un'area separata da dove deve essere eseguito l'intervento chirurgico. Dopo aver confermato l'anestesia eseguendo un pizzico di dito, iniettare Meloxicam come analgesia per via sottocutanea a una dose di cinque milligrammi per chilogrammo per prepararsi alla procedura chirurgica. Esporre il sito chirurgico del capezzolo applicando diverse gocce di crema per la depilazione.Rimuovere la crema eccessiva e i capelli sciolti con asciugamani di carta morbidi. La rasatura non è raccomandata per evitare danni ai capezzoli. Disinfettare il sito chirurgico con iodofori prima seguito dal 70% di alcol e terminare con un'applicazione finale di iodofori scrub.Eseguire questa procedura con un movimento circolare dal centro dell'area di lavoro verso la periferia utilizzando una spugna di garza o un applicatore con punta di cotone. Ripetere il ciclo da tre a quattro volte. Utilizzare tecniche asettiche durante la procedura chirurgica.Fai un sito di incisione sulla pelle a una lunghezza di circa un centimetro tra le due quattro ghiandole mammarie inguinali. Separare accuratamente il lembo della pelle dal peritoneo parietale in modo da visualizzare l'albero duttale mammario. Tenere con cura il capezzolo con le pinza degli orologiai per rimuovere il capezzolo esterno senza tagliare la pelle vicina usando una forbice a microdisezione.Caricare da tre a cinque microlitri della miscela di iniezione di Cre-adenovirus in una siringa Hamilton da 25 microlitri con un ago del mozzo metallico calibro 33 apposto. Stimare il volume della miscela di iniezione nella siringa in base al colorante blu incluso nella miscela. Tenere delicatamente il bordo del lembo cutaneo con una pinzetta curva fine e iniettare lentamente la miscela di iniezione di Cre-adenovirus nel capezzolo mentre si monitora la diffusione del colorante blu nell'albero duttale mammario.Mantenere la velocità di iniezione il più lentamente possibile per evitare danni al lume duttale. Un'iniezione intraduttale di successo è indicata da fluidi iniettati che si diffondono in tutto l'albero duttale senza perdite nel compartimento stroma. Ritirare delicatamente l'ago dal capezzolo per evitare perdite del fluido iniettato.Esaminare il lato distale della ghiandola mammaria o l'area circostante del capezzolo iniettato. La diffusione del colorante nello stroma vicino come mostrato qui indica un'iniezione di cuscinetto di grasso mammario piuttosto che un'iniezione intraduttale di successo. Chiudere le ferite chirurgiche nella pelle con clip per ferite.Rimuovere il mouse dall'anestesia e posizionarlo su una pastiglia di riscaldamento all'interno di una gabbia pulita per il recupero. Monitorare lo sviluppo del tumore mammario come descritto nel protocollo di testo. I topi femmine più giovani per i quali l'iniezione intraduttale può essere eseguita con successo sono quelli di circa tre settimane di età.Sebbene per la maggior parte degli esperimenti di induzione tumorale mammaria, vengono utilizzati giovani topi femmine adulti. L'iniezione intraduttale con un volume maggiore della miscela di iniezione può essere eseguita nei topi femmine durante la gestazione precoce-media per colpire le cellule alveolari. Per indirizzare diverse sottopopolazioni di cellule epiteliali mammarie per l'induzione del tumore mammario, sono stati utilizzati per l'iniezione cre-adenovirus sotto il controllo di diversi promotori specifici del sottoinsieme di cellule epiteliali mammarie.Ad esempio, il Cre-adenovirus sotto il controllo del promotore della cheratina 8 è stato utilizzato per colpire le cellule epiteliali mammarie luminali. Il cre-adenovirus sotto il controllo del promotore della cheratina 5 ha preso di mira il lignaggio basale che porta alla marcatura genetica solo delle cellule epiteliali mammarie basali. Per una femmina di topi omozigoti floxed P53 con un reporter ROSA26-YFP, l'iniezione intraduttale di cheratina 8 Cre-adenovirus ha portato allo sviluppo di tumori mammari diversi mesi dopo l'iniezione.A causa dell'inclusione del reporter condizionale R26-Y, le cellule epiteliali tumorali erano tipicamente marcate dall'YFP e potevano essere rilevate dalla citometria del flusso. Le cellule possono essere arricchite dallo smistamento del flusso delle cellule positive YFP per ulteriori analisi. Le cose più importanti da ricordare quando si tenta questa procedura sono usare un piccolo volume di iniezione, iniettare lentamente e anche ritirare lentamente l'ago.Seguendo questa procedura, si può monitorare la progressione delle cellule epiteliali mammarie positive YFP mirate alle fasi pre-maligne e tumorali per citometria del flusso o colorazione co-immunofluorescenza della ghiandola iniettata. Questa tecnica aprirà la strada ai ricercatori per studiare le cellule di origine del cancro al seno, come rispondono a diversi eventi autogenici e come progrediscono verso le cellule tumorali. Sia l'adenovirus che l'ago per iniezione sono potenzialmente pericolosi.Pertanto, si dovrebbero sempre indossare guanti e utilizzare aghi e siringhe di sicurezza quando si esegue l'iniezione intraduttale.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis

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Intra-iliaca iniezione per un efficiente e selettivo Modellazione di microscopico metastasi ossee

Intra-iliac artery (IIA) injection is an efficient approach to introduce metastatic lesions of various cancer cells in animals. Compared to the widely ...

Ricerca

Ricerca sul cancro

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

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Utilizzando Genomica Funzionale screening per identificare gli obiettivi farmaco potenzialmente romanzo in Cancer Cell Culture Spheroid

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis

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Intracarotidea Cancer Cell iniezione per produrre modelli murini di cervello Metastasi

Metastasis, the spread and growth of malignant cells at secondary sites within a patient&#39;s body, accounts for &#62; 90% of cancer-related mortality. ...

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification

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Sezione delle ghiandole mammarie per tutti gli attacchi per identificazione delle lesioni

Normal mammary gland development may be altered by exposure to environmental toxicants and pharmaceutical products, excessive exposure to hormones, and ...

Modeling Osteosarcoma Using Li-Fraumeni Syndrome Patient-derived Induced Pluripotent Stem Cells

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Modellazione di Osteosarcoma con la sindrome di Li-Fraumeni paziente-derivato indotto Pluripotent Stem Cells

Li-Fraumeni syndrome (LFS) is an autosomal dominant hereditary cancer disorder. Patients with LFS are predisposed to a various type of tumors, including ...

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Orthotopic iniezione delle cellule di cancro al seno in topi cuscinetto grasso mammario

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Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad

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Rat mammary Epithelial Cell Transplantation nel Pad Grasso Bianco Interscapular

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Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging

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Modellazione delle metastasi cerebrali attraverso l'iniezione intracraniciale e la risonanza magnetica

Metastatic spread of cancer is an unfortunate consequence of disease progression, aggressive cancer subtypes, and/or late diagnosis. Brain metastases are ...

Modeling Breast Cancer in Human Breast Tissue using a Microphysiological System

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Modellazione del cancro al seno nel tessuto mammario umano utilizzando un sistema microfisiologico

Breast cancer (BC) remains a leading cause of death for women. Despite more than $700 million invested in BC research annually, 97% of candidate BC drugs ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

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Modellazione delle metastasi cerebrali tramite iniezione di vena della coda di cellule infiammatorie del cancro al seno

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...