Name: modeling breast cancer via an intraductal injection of cre-expressing adenovirus into the mouse mammary gland
Uploaded: 2019-06-07T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland Video at JoVE.com

이 작품은 국립 보건원 (NIH) 교부금 R01 CA222560및 국방부 획기적인 상 W81XWH-18-1-0037에 의해 지원되었습니다.

여기에 설명된 모든 방법은 브리검 및 여성 병원의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)에 의해 승인되었습니다.
1. 플록스 마우스의 생성 및 유지 보수
<ol><li>유방암 관련 플록스 조건부 녹아웃(예: Trp53Tm1Brn [Trp53L/L], Brca1Aash [Brca1L/L])또는 조건부 노크인 마우스 라인(예: GT(ROSA)26Sortm1(Pik3ca*H1047R)이건) ...

<ol>
	<li>Wagner, K. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cre-mediated+gene+deletion+in+the+mammary+gland.">Cre-mediated gene deletion in the mammary gland.</a> Nucleic Acids Research. 25 (21), 4323-4330 (1997).</li><li>Selbert, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+BLG-Cre+mediated+gene+deletion+in+the+mammary+gland.">Efficient BLG-Cre mediated gene deletion in the mammary gland.</a> Transgenic Research. 7 (5), 387-396 (1998).</li><li>Jonkers, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+tumor+suppressor+activity+of+BRCA2+and+p53+in+a+conditional+mouse+model+for+breast+cancer.">Synergistic tumor suppressor activity of BRCA2 and p53 in a conditional mouse model for breast cancer.</a> Nature Genetics. 29 (4), 418-425 (2001).</li><li>van Bragt, M. P., Hu, X., Xie, Y., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RUNX1,+a+transcription+factor+mutated+in+breast+cancer,+controls+the+fate+of+ER-positive+mammary+luminal+cells.">RUNX1, a transcription factor mutated in breast cancer, controls the fate of ER-positive mammary luminal cells.</a> eLife. 3, e03881 (2014).</li><li>Tao, L., van Bragt, M. P., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Long-Lived+Luminal+Subpopulation+Enriched+with+Alveolar+Progenitors+Serves+as+Cellular+Origin+of+Heterogeneous+Mammary+Tumors.">A Long-Lived Luminal Subpopulation Enriched with Alveolar Progenitors Serves as Cellular Origin of Heterogeneous Mammary Tumors.</a> Stem Cell Reports. 5 (1), 60-74 (2015).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+mutation+of+Brca1+in+mammary+epithelial+cells+results+in+blunted+ductal+morphogenesis+and+tumour+formation.">Conditional mutation of Brca1 in mammary epithelial cells results in blunted ductal morphogenesis and tumour formation.</a> Nature Genetics. 22 (1), 37-43 (1999).</li><li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ETV6-NTRK3+fusion+oncogene+initiates+breast+cancer+from+committed+mammary+progenitors+via+activation+of+AP1+complex.">ETV6-NTRK3 fusion oncogene initiates breast cancer from committed mammary progenitors via activation of AP1 complex.</a> Cancer Cell. 12 (6), 542-558 (2007).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatic+loss+of+BRCA1+and+p53+in+mice+induces+mammary+tumors+with+features+of+human+BRCA1-mutated+basal-like+breast+cancer.">Somatic loss of BRCA1 and p53 in mice induces mammary tumors with features of human BRCA1-mutated basal-like breast cancer.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (29), 12111-12116 (2007).</li><li>Molyneux, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BRCA1+basal-like+breast+cancers+originate+from+luminal+epithelial+progenitors+and+not+from+basal+stem+cells.">BRCA1 basal-like breast cancers originate from luminal epithelial progenitors and not from basal stem cells.</a> Cell Stem Cell. 7 (3), 403-417 (2010).</li><li>Koren, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PIK3CA+induces+multipotency+and+multi-lineage+mammary+tumours.">PIK3CA induces multipotency and multi-lineage mammary tumours.</a> Nature. 525 (7567), 114-118 (2015).</li><li>Van Keymeulen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactivation+of+multipotency+by+oncogenic+PIK3CA+induces+breast+tumour+heterogeneity.">Reactivation of multipotency by oncogenic PIK3CA induces breast tumour heterogeneity.</a> Nature. 525 (7567), 119-123 (2015).</li><li>Tao, L., Xiang, D., Xie, Y., Bronson, R. T., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+p53+loss+in+mouse+luminal+cells+causes+clonal+expansion+and+development+of+mammary+tumours.">Induced p53 loss in mouse luminal cells causes clonal expansion and development of mammary tumours.</a> Nature Communications. 8, 14431 (2017).</li><li>Tao, L., van Bragt, M. P. A., Laudadio, E., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+Tracing+of+Mammary+Epithelial+Cells+Using+Cell-Type-Specific+Cre-Expressing+Adenoviruses.">Lineage Tracing of Mammary Epithelial Cells Using Cell-Type-Specific Cre-Expressing Adenoviruses.</a> Stem Cell Reports. 2 (6), 770-779 (2014).</li><li>Sutherland, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+of+origin+of+small+cell+lung+cancer:+inactivation+of+Trp53+and+Rb1+in+distinct+cell+types+of+adult+mouse+lung.">Cell of origin of small cell lung cancer: inactivation of Trp53 and Rb1 in distinct cell types of adult mouse lung.</a> Cancer Cell. 19 (6), 754-764 (2011).</li><li>Shackleton, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+functional+mammary+gland+from+a+single+stem+cell.">Generation of a functional mammary gland from a single stem cell.</a> Nature. 439 (7072), 84-88 (2006).</li><li>The Cancer Genome Atlas Network. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+molecular+portraits+of+human+breast+tumours.">Comprehensive molecular portraits of human breast tumours.</a> Nature. 490 (7418), 61-70 (2012).</li><li>Nik-Zainal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+life+history+of+21+breast+cancers.">The life history of 21 breast cancers.</a> Cell. 149 (5), 994-1007 (2012).</li><li>Abba, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Molecular+Portrait+of+High-Grade+Ductal+Carcinoma+In+Situ.">A Molecular Portrait of High-Grade Ductal Carcinoma In Situ.</a> Cancer Research. 75 (18), 3980-3990 (2015).</li></ol>

MECs의 다른 하위 집단에서 유방 종양을 유도하기위한이 접근법의 성공은 적절한 세포 유형 특이적 프로모터를 선택하는 것뿐만 아니라 (Cre 발현을 유도하기 위해) 뿐만 아니라 자궁 내 주사 절차 자체에 의존합니다. 이 접근의 뒤에 아이디어는 주입된 Ad-Cre 바이러스가 루멘을 가진 은폐한 구조물인 덕트 트리에서 유지된다는 것입니다, 그러므로, 단지 MECs는 바이러스에 드러내고 Ad-Cre에 의해 감염...

이 방법의 전반적인 목표는 마우스 MG에 Ad-Cre의 경내 주입에 근거를 둔 새로운 유방암 모델링 접근을 개발하는 것입니다. Cre/loxP 재조합 기반 유전 적 접근법은 마우스에서 인간 유방암을 모델링하는 데 널리 사용되어 왔습니다. Cre/loxP 기반 유방암 마우스 모델의 1세대는 MEC 특이적 프로모터(예: 광ME및 기저 MEC의 일부인 MMTV-Cre) 및 기저 MEC의 일부, Wap-Cre 및 발광 선조 및 폐포 광도 MEC, K14-Cre 기저 및 발광 MEC의 일부에 대한 Blg-Cre 1, 2,3,4,5)6, 7명 , 8개 , 9. 그러나, 이러한 Cre 형질전환 선은 Cre 발현의 공간 제어를 가능하게하지만 (즉, MEC의 다른 하위 세트에서), 그들은 Cre 발현 및 Cre / loxP 매개 유전 조작의 시간적 제어를 허용하지 않습니다. Cre/loxP 기반 유방암 마우스 모델의 2세대는 유도성 Cre 활성/발현 접근법을 활용합니다(예를 들어, 타목시펜 투여 시 크레/록스P 재조합을 유도할 수 있는 Cre-에스트로겐 수용체 융합[CreER]의 사용),, 그 결과, 이러한 유전 적 도구는 MECs에서 의 한인 발생 이벤트의 활성화의 공간 적 및 시간적 제어를 모두 허용 (예를 들어, K8-CreER- 및 K5-CreER기반 모델)10,11,12 . 유방암 마우스 모델의 두 세대에서, Cre 또는 CreER 발현을 구동하는 데 사용되는 프로모터로서 (예를 들어, Krt8, Krt5)또한 다른 장기의 상피 세포에서 활성화 될 수있다 (즉, 그들은 세포 유형 특이적이지만 장기 특이적이지 않음) 또는 상피 세포 이외의 세포 유형에서 새는 발현을 가지고 (예를 들어, MMTV,이는 골수 조혈 세포에서 새는 활성을 가지고), 이러한 접근 방식은 다른 기관에서 원치 않는 암의 개발로 이어질 수 있습니다.. 이러한 예기치 않은 암이 영향을받는 마우스에서 치사를 일으키는 경우,이 마우스에서 유방암을 모델링하는 원래의 목적은 금지 될 수있다 (예를 들어, MMTV-Cre-구동 종양 발생 이벤트는 조혈 악성 종양과 마우스의 조기 사망으로 이어질 수 있습니다 , 조혈 세포에서 MMTV 프로모터의 누설로 인해)4.
여기에서 우리는 일시적으로 통제된 방식으로 세포 모형 및 기관 특정 조작을 둘 다 허용하는 마우스에 있는 유방암 모델링 접근을 보고합니다. 이 접근법은 마우스 MGs에 Ad-Cre의 내 삽입을 기반으로 합니다 (따라서 장기별). Cre 발현은 아데노바이러스 벡터에 내장된 상이한 MEC 서브모멘트 특이적 프로모터를 사용하여 제어될 수 있다(예를 들어, 발광 MEC의 경우, 기저 MEC의 경우 Krt8, 따라서 세포 형 특이성을 달성). MGs에 있는 암 유도는 성인 단계에 나이의 3-4 주 (사춘기)에서 시작하여 다른 나이에 마우스로 Ad-Cre의 주입에 의해 일시적으로 통제될 수 있습니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>33-gauge needle</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7803-05</td>
			<td>point style 3 blunt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7mm Reflex Clip</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>RF7 CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenovirus, Ad-K5-Cre</td>
			<td>University of Iowa Viral Vector Core</td>
			<td>Ad5-bk5-Cre (VVC-Berns-1547)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenovirus, Ad-K8-Cre</td>
			<td>University of Iowa Viral Vector Core</td>
			<td>Ad5mK8-nlsCre</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>HC800-1GAL</td>
			<td>Prepare to 70% in use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated CD31</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-0311-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated CD45</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-0451-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated TER119</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-5921-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bromophenol Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B0126-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD24-AF-700</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>564237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD24-PE</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>12-0242-83</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD29-APC</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>17-0291-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD29-PE</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>12-0291-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair Remover Lotion</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td>9 Oz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7636-01</td>
			<td>0.025 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodophors</td>
			<td>Betadine</td>
			<td></td>
			<td>10% Povidone-iodine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>NDC 10019-360-40</td>
			<td>1-2.5%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Loxicam</td>
			<td>Norbrook</td>
			<td>NDC 55529-040-10</td>
			<td>5 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lubricant Eye Ointment</td>
			<td>Akorn</td>
			<td colspan="2">NDC 17478-062-35</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting scissors</td>
			<td>Pentair</td>
			<td>9M</td>
			<td>Watchmaker&#39;s Forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting tweezers</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>M5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq 5X Master Mix</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0285L</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling breast cancer via an intraductal injection of cre-expressing adenovirus into the mouse mammary gland

유방암은 이기종 질병, 기원의 다른 세포 와 종양 발생 이벤트 사이의 복잡 한 상호 작용 때문일 수 있습니다. 마우스 모델은 이러한 복잡한 프로세스에 대한 통찰력을 얻는 데 중요한 역할을 합니다. 많은 마우스 모형이 유방 종양발생에 각종 종양 발생및 기원의 세포의 기여를 공부하기 위하여 개발되었더라도, 이 모형은 수시로 세포 모형 또는 기관 특정이 아니거나 유방 종양 발생의 개시를 유도할 수 없습니다 일시적으로 제어 방식. 여기에서 우리는 마우스 유방 땀샘 (MGs)으로 Cre 발현 아데노 바이러스 (Ad-Cre)의 경막 주사에 근거를 둔 유방암 마우스 모형의 새로운 모형을 생성하는 프로토콜을 기술합니다. 유선 덕트에 Ad-Cre를 직접 주입하기 때문에이 접근법은 다른 장기에서 원치 않는 암 유도없이 MG 특정입니다. 경막 주사 절차는 MG 발달의 다른 단계에서 마우스에서 수행 될 수있다 (따라서, 그것은 암 유도의 시간적 제어를 허용, ~에서 시작 ~3-4 나이의 주). 세포 형 특이성은 아데노 바이러스 벡터에서 Cre 발현을 유도하기 위해 상이한 세포 형 특이적 프로모터를 사용하여 달성될 수 있다. 우리는 발광 및 기저 유방 상피 세포 (MECs)가 각각 케라틴 8 또는 케라틴 5 프로모터의 통제하에 Ad-Cre의 경막 주사를 통해 Cre /loxP 기반 유전자 조작을 위해 단단히 표적으로 할 수 있음을 보여줍니다. 조건부 Cre 리포터(예를 들어, Cre/loxP-유도성 Rosa26-YFP 리포터)를 통합함으로써, 우리는 Ad-Cre에 의해 표적화된 MECs, 및 그로부터 유래된 종양 세포가, 유도 내 주사 후 리포터 양성 세포를 따라 추적될 수 있음을 보여준다.

R26Y 및 Trp53L 대두에 대한 대표적인 PCR 지질형 검사 결과는 도1에 나타내고 있다.
원칙적으로, 모든 10개의 MGs는 모두 경감 내 주사 절차를 실시할 수 있지만, 실질적으로, 두 개의 제4 인큐니탈 MG는 일반적으로주입을 위해 선택되며, 이는 그들의 접근성및 더 큰 ...

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이 프로토콜의 목표는 마우스 유방 땀샘으로 Cre 발현 아데노바이러스의 자궁 내 주입에 기초한 새로운 유방암 모델링 접근을 기술하는 것입니다. 이 접근은 세포 모형 및 기관 특정 조작을 시간적으로 통제한 방식으로 oncogenic 사건을 둘 다 허용합니다.

마우스 유방 동맥에 Cre 발현 아데노 바이러스의 경막 주사를 통해 유방암 모델링

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are ...

이 프로토콜은 연구원이 유방 상피 세포의 다른 하위 집합에서 인간 적인 유방암 발달을 다시 상백하기 위하여 마우스 모형의 새로운 모형을 생성하는 것을 도울 것입니다. 이 기술은 연구원이 광범위한 마우스 사육을 위한 필요 없이 세포 모형 특정 방식으로 발달 단계 조직에 있는 유방암 마우스 모형을 생성할 수 있게 합니다. 이 절차를 시작하려면 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 플로크스 마우스를 생성, 유지 관리 및 마취합니다.수술이 수행될 영역과 는 별개의 영역으로 마우스를 가져오십시오. 발가락 핀치를 수행 하 여 마취를 확인 한 후, 수술 절차에 대 한 준비를 킬로그램 당 5 밀리 그램의 복용량에서 실체로 멜록시캄을 주입. 제모 크림 몇 방울을 적용하여 젖꼭지 수술 부위를 노출하십시오.부드러운 종이 타월을 사용하여 과도한 크림과 느슨한 머리카락을 제거하십시오. 면도는 젖꼭지의 손상을 피하기 위해 권장되지 않습니다. 먼저 70 %의 알코올다음으로 요오도프로 수술 부위를 소독하고 스크럽 요도의 최종 적용으로 끝납니다.거즈 스폰지 또는 면에 기울어진 어플리케이터를 사용하여 작업 영역의 중심에서 주변으로 원을 그리며 이 작업을 수행하십시오. 주기를 3~4회 반복합니다. 외과 적 수술 전반에 걸쳐 무균 기술을 사용합니다.두 네 번째 잉게인 유방 땀샘 사이의 약 1 센티미터길이로 피부에 절개 부위를 만듭니다. 유방 덕트 트리를 시각적으로 정수리 복막에서 피부 플랩을 조심스럽게 분리합니다. 조심스럽게 마이크로 절제 가위를 사용하여 근처의 피부를 절단하지 않고 외부 젖꼭지를 제거하기 위해 워치 메이커의 집게로 젖꼭지를 잡아.33 게이지 금속 허브 바늘이 부착된 25 마이크로리터 해밀턴 주사기에 크레아데노바이러스 주입 혼합물의 약 3~5마이크로리터를 적재한다. 혼합물에 포함된 청색 염료에 기초하여 주사기내의 주사 혼합물의 부피를 추정한다. 미세한 곡선 트위저로 피부 플랩의 가장자리를 부드럽게 잡고 유방 덕트 트리에 푸른 염료의 확산을 모니터링하면서 Cre-adenovirus 주입 혼합물을 젖꼭지에 천천히 주입합니다.덕트 루멘의 손상을 피하기 위해 가능한 한 느리게 주입 속도를 유지합니다. 성공적인 내트라덕트 주입은 스트로마 구획으로 누출되지 않고 전체 덕트 트리 전체에 퍼지는 주입 된 유체에 의해 표시됩니다. 주입된 액체의 누출을 피하기 위해 젖꼭지에서 바늘을 부드럽게 철회합니다.매명선의 탈면 또는 주입된 젖꼭지의 주변 부위를 검사합니다. 여기에 표시된 바와 같이 근처 스트로마로 확산염료는 성공적인 내막 주사보다는 유방 지방 패드 주사를 나타냅니다. 상처 클립으로 피부의 수술 상처를 닫습니다.마취에서 마우스를 제거하고 복구를 위해 깨끗한 케이지 내부의 가열 패드에 놓습니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 바와 같이 유방 종양의 발달을 모니터링한다. 자궁 내 주사를 성공적으로 수행 할 수있는 가장 젊은 여성 마우스는 약 3 주에 그입니다.대부분의 유방 종양 유도 실험에 대 한 비록, 젊은 성인 여성 마우스 사용 됩니다. 주사 혼합물의 더 큰 부피를 가진 내트라덕트 주사는 폐포 세포를 표적으로 하기 위하여 초기에서 중간 임신 도중 여성 마우스에서 수행될 수 있다. 유방 종양 유도를 위한 상이한 유방 상피 세포 하위 집단을 표적으로 하기 위하여, 다른 유방 상피 세포 subset 특정 프로모터의 통제 하에 Cre-adenoviruses는 주입을 위해 이용되었다.예를 들어 케라틴 8 프로모터의 제어하에 Cre-adenovirus는 발광 유방 상피 세포를 표적으로 하는 데 사용되었다. 케라틴 5 프로모터의 통제 하에 있는 Cre-adenovirus는 기저 유방 상피 세포의 유전 표시로 이끌어 내는 기저 혈통을 표적으로 했습니다. ROSA26-YFP 리포터를 가진 여성 P53 floxed homozygous 마우스의 경우, 케라틴 8 Cre-adenovirus의 내막 주사는 주사 후 몇 달 후에 유방 종양의 발달로 이끌어 냈습니다.조건부 R26-Y 기자의 포함으로 인해 종양 상피 세포는 전형적으로 YFP에 의해 표시되었으며 유동 세포측정에 의해 검출될 수 있었다. 세포는 추가 분석을 위해 YFP 양성 세포의 유량 분류에 의해 농축될 수 있다. 이 절차를 시도 할 때 기억해야 할 가장 중요한 것은 작은 주사 볼륨을 사용하고 천천히 주입하고 바늘을 천천히 철회하는 것입니다.이 절차에 따라, 하나는 주입 된 동맥의 세포 질 또는 공동 면역 형광 염색에 의해 사전 악성 및 암 단계에 표적 YFP 양성 유방 상피 세포의 진행을 모니터링 할 수 있습니다. 이 기술은 연구원이 유방암의 기원의 세포를 공부하는 방법, 다른 자가 발생에 어떻게 반응하는지 그리고 암세포에 어떻게 진행되는지 연구하는 길을 열어줄 것입니다. 아데노바이러스와 주사바늘 은 모두 잠재적으로 위험합니다.따라서, 하나는 항상 장갑을 착용하고 내회 주사를 수행 할 때 안전 바늘과 주사기를 사용해야합니다.

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As early as the 1970s, researchers have successfully transplanted mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of rats. Grafting mammary ...

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging Video (Video) | JoVE

두개 내 주입 및 자기 공명 이미징을 통해 뇌 전이를 모델링

Metastatic spread of cancer is an unfortunate consequence of disease progression, aggressive cancer subtypes, and/or late diagnosis. Brain metastases are ...

Modeling Breast Cancer in Human Breast Tissue using a Microphysiological System

Modeling Breast Cancer in Human Breast Tissue using a Microphysiological System Video (Video) | JoVE

미생물 시스템을 사용하여 인간 유방 조직에서 유방암 모델링

Breast cancer (BC) remains a leading cause of death for women. Despite more than $700 million invested in BC research annually, 97% of candidate BC drugs ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells Video (Video) | JoVE

염증성 유방암 세포의 꼬리 정맥 주입을 통한 뇌 전이 모델링

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...