Name: modeling breast cancer via an intraductal injection of cre-expressing adenovirus into the mouse mammary gland
Uploaded: 2019-06-07T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland Video at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av National Institutes of Health (NIH) stipend R01 CA222560 og ved Department of Defense gjennombrudd Award W81XWH-18-1-0037.

Alle metoder beskrevet her er godkjent av den institusjonelle Animal Care og use Committee (IACUC) av Brigham og Women ' s Hospital.
1. generering og vedlikehold av floxed mus
<ol><li>Få brystkreft-relevant floxed betinget knockout (f. eks Trp53tm1Brn [referert til som Trp53L/l], Brca1tm1Aash [Brca1L/l]) eller betingede knock-in muse linjer (f. eks Gt (rosa) 26SorTm1 (PIK3CA * H1047R) Egan)...

<ol>
	<li>Wagner, K. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cre-mediated+gene+deletion+in+the+mammary+gland.">Cre-mediated gene deletion in the mammary gland.</a> Nucleic Acids Research. 25 (21), 4323-4330 (1997).</li><li>Selbert, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+BLG-Cre+mediated+gene+deletion+in+the+mammary+gland.">Efficient BLG-Cre mediated gene deletion in the mammary gland.</a> Transgenic Research. 7 (5), 387-396 (1998).</li><li>Jonkers, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+tumor+suppressor+activity+of+BRCA2+and+p53+in+a+conditional+mouse+model+for+breast+cancer.">Synergistic tumor suppressor activity of BRCA2 and p53 in a conditional mouse model for breast cancer.</a> Nature Genetics. 29 (4), 418-425 (2001).</li><li>van Bragt, M. P., Hu, X., Xie, Y., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RUNX1,+a+transcription+factor+mutated+in+breast+cancer,+controls+the+fate+of+ER-positive+mammary+luminal+cells.">RUNX1, a transcription factor mutated in breast cancer, controls the fate of ER-positive mammary luminal cells.</a> eLife. 3, e03881 (2014).</li><li>Tao, L., van Bragt, M. P., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Long-Lived+Luminal+Subpopulation+Enriched+with+Alveolar+Progenitors+Serves+as+Cellular+Origin+of+Heterogeneous+Mammary+Tumors.">A Long-Lived Luminal Subpopulation Enriched with Alveolar Progenitors Serves as Cellular Origin of Heterogeneous Mammary Tumors.</a> Stem Cell Reports. 5 (1), 60-74 (2015).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+mutation+of+Brca1+in+mammary+epithelial+cells+results+in+blunted+ductal+morphogenesis+and+tumour+formation.">Conditional mutation of Brca1 in mammary epithelial cells results in blunted ductal morphogenesis and tumour formation.</a> Nature Genetics. 22 (1), 37-43 (1999).</li><li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ETV6-NTRK3+fusion+oncogene+initiates+breast+cancer+from+committed+mammary+progenitors+via+activation+of+AP1+complex.">ETV6-NTRK3 fusion oncogene initiates breast cancer from committed mammary progenitors via activation of AP1 complex.</a> Cancer Cell. 12 (6), 542-558 (2007).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatic+loss+of+BRCA1+and+p53+in+mice+induces+mammary+tumors+with+features+of+human+BRCA1-mutated+basal-like+breast+cancer.">Somatic loss of BRCA1 and p53 in mice induces mammary tumors with features of human BRCA1-mutated basal-like breast cancer.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (29), 12111-12116 (2007).</li><li>Molyneux, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BRCA1+basal-like+breast+cancers+originate+from+luminal+epithelial+progenitors+and+not+from+basal+stem+cells.">BRCA1 basal-like breast cancers originate from luminal epithelial progenitors and not from basal stem cells.</a> Cell Stem Cell. 7 (3), 403-417 (2010).</li><li>Koren, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PIK3CA+induces+multipotency+and+multi-lineage+mammary+tumours.">PIK3CA induces multipotency and multi-lineage mammary tumours.</a> Nature. 525 (7567), 114-118 (2015).</li><li>Van Keymeulen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactivation+of+multipotency+by+oncogenic+PIK3CA+induces+breast+tumour+heterogeneity.">Reactivation of multipotency by oncogenic PIK3CA induces breast tumour heterogeneity.</a> Nature. 525 (7567), 119-123 (2015).</li><li>Tao, L., Xiang, D., Xie, Y., Bronson, R. T., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+p53+loss+in+mouse+luminal+cells+causes+clonal+expansion+and+development+of+mammary+tumours.">Induced p53 loss in mouse luminal cells causes clonal expansion and development of mammary tumours.</a> Nature Communications. 8, 14431 (2017).</li><li>Tao, L., van Bragt, M. P. A., Laudadio, E., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+Tracing+of+Mammary+Epithelial+Cells+Using+Cell-Type-Specific+Cre-Expressing+Adenoviruses.">Lineage Tracing of Mammary Epithelial Cells Using Cell-Type-Specific Cre-Expressing Adenoviruses.</a> Stem Cell Reports. 2 (6), 770-779 (2014).</li><li>Sutherland, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+of+origin+of+small+cell+lung+cancer:+inactivation+of+Trp53+and+Rb1+in+distinct+cell+types+of+adult+mouse+lung.">Cell of origin of small cell lung cancer: inactivation of Trp53 and Rb1 in distinct cell types of adult mouse lung.</a> Cancer Cell. 19 (6), 754-764 (2011).</li><li>Shackleton, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+functional+mammary+gland+from+a+single+stem+cell.">Generation of a functional mammary gland from a single stem cell.</a> Nature. 439 (7072), 84-88 (2006).</li><li>The Cancer Genome Atlas Network. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+molecular+portraits+of+human+breast+tumours.">Comprehensive molecular portraits of human breast tumours.</a> Nature. 490 (7418), 61-70 (2012).</li><li>Nik-Zainal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+life+history+of+21+breast+cancers.">The life history of 21 breast cancers.</a> Cell. 149 (5), 994-1007 (2012).</li><li>Abba, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Molecular+Portrait+of+High-Grade+Ductal+Carcinoma+In+Situ.">A Molecular Portrait of High-Grade Ductal Carcinoma In Situ.</a> Cancer Research. 75 (18), 3980-3990 (2015).</li></ol>

Suksessen til denne tilnærmingen for inducing melke svulster fra ulike subpopulasjoner av MECs stoler ikke bare på å velge riktig celle-type-spesifikke arrangører (for å drive grobunn uttrykk), men også på intraductal injeksjon prosedyren selv. Ideen bak denne tilnærmingen er at injisert ad-grobunn virus beholdes i ductal treet, som er en skjult struktur med lumen, og derfor bare MECs er eksponert for virus og er infisert av ad-grobunn. På grunn av den begrensede lumen i melke kanalene, er det viktig å bare inj...

Det overordnede målet med denne metoden er å utvikle en ny brystkreft modellering tilnærming basert på en intraductal injeksjon av ad-grobunn i musen MG. Den grobunn/loxP rekombinasjon genetiske tilnærmingen har vært mye brukt til å modellere menneskelig brystkreft hos mus. Den første generasjonen av grobunn/loxP-baserte brystkreft mus modeller er generert ved hjelp av grobunn-uttrykker transgene mus under kontroll av MEC-spesifikke arrangører (f. eks MMTV-grobunn for luminal MECs og en del av basal MECs, WAP-grobunn og Blg-grobunn for luminal forfedre og alveolære Luminal MECs, K14-grobunn for basal og en del av luminal MECs1,2,3,4,5)6, 7 andre er , 8 på alle , 9. men selv om disse grobunn transgene Lines muliggjør romlig kontroll av grobunn uttrykk (dvs. i ulike delsett av MECs), de ikke tillater timelig kontroll av grobunn uttrykk og grobunn/loxP-mediert genetisk manipulasjon. Den andre generasjonen av grobunn/loxP-baserte brystkreft mus modeller benytte induserbart grobunn aktivitet/uttrykk tilnærminger (f. eks bruk av grobunn-østrogen reseptor fusjon [CreER], som bare kan indusere grobunn/loxP rekombinasjon ved administrering av Tamoxifen), og som et resultat, disse genetiske verktøyene tillater både romlige og timelige kontroller av aktiveringen av kreftfremkallende hendelser i MECs (f. eks, K8-CreER-og K5-CreER-baserte modeller)10,11,12 . I begge generasjoner av brystkreft mus modeller, som arrangører brukes til å drive grobunn eller CreER uttrykk (f. eks Krt8, Krt5) kan også være aktiv i epitelceller i andre organer (dvs. de er celle-type-spesifikke, men ikke organ-spesifikk) eller har en lekk uttrykk i celletyper enn epitelceller (f. eks, MMTV, som har Leaky aktivitet i benmarg blodkreft celler), kan disse tilnærmingene føre til utvikling av uønsket kreft (s) i andre organ (s). Hvis disse uventede kreft forårsaker dødelighet i de berørte mus, det opprinnelige formålet med modellering brystkreft i disse musene kan være forbudt (f. eks, MMTV-grobunn-drevet kreftfremkallende hendelser kan føre til blodkreft ondartet og tidlig død av mus , på grunn av leakiness av MMTV arrangøren i blodkreft celler)4.
Her rapporterer vi en brystkreft modellering tilnærming i mus som gjør at både celle-type-og organ-spesifikk manipulering av kreftfremkallende hendelser i en timelig kontrollert måte. Denne tilnærmingen er basert på en intraductal injeksjon av ad-grobunn i musen MGs (og er dermed organ-spesifikke). Grobunn uttrykket kan styres ved hjelp av ulike MEC pasientpopulasjonen-spesifikke arrangører innebygd i adenoviral vektor (f. eks Krt8 for luminal MECs, Krt5 for basal MECs, og dermed oppnå Cell-type spesifisitet). Kreft induksjon i MGs kan være timelig styrt av en injeksjon av ad-grobunn i mus på ulike aldre, fra 3-4 ukers alder (pubertale) til voksen scenen.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>33-gauge needle</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7803-05</td>
			<td>point style 3 blunt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7mm Reflex Clip</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>RF7 CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenovirus, Ad-K5-Cre</td>
			<td>University of Iowa Viral Vector Core</td>
			<td>Ad5-bk5-Cre (VVC-Berns-1547)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenovirus, Ad-K8-Cre</td>
			<td>University of Iowa Viral Vector Core</td>
			<td>Ad5mK8-nlsCre</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>HC800-1GAL</td>
			<td>Prepare to 70% in use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated CD31</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-0311-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated CD45</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-0451-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated TER119</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-5921-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bromophenol Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B0126-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD24-AF-700</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>564237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD24-PE</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>12-0242-83</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD29-APC</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>17-0291-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD29-PE</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>12-0291-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair Remover Lotion</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td>9 Oz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7636-01</td>
			<td>0.025 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodophors</td>
			<td>Betadine</td>
			<td></td>
			<td>10% Povidone-iodine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>NDC 10019-360-40</td>
			<td>1-2.5%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Loxicam</td>
			<td>Norbrook</td>
			<td>NDC 55529-040-10</td>
			<td>5 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lubricant Eye Ointment</td>
			<td>Akorn</td>
			<td colspan="2">NDC 17478-062-35</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting scissors</td>
			<td>Pentair</td>
			<td>9M</td>
			<td>Watchmaker&#39;s Forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting tweezers</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>M5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq 5X Master Mix</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0285L</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling breast cancer via an intraductal injection of cre-expressing adenovirus into the mouse mammary gland

Brystkreft er en heterogen sykdom, muligens på grunn av komplekse interaksjoner mellom ulike celler av opprinnelse og kreftfremkallende hendelser. Musemodeller er medvirkende til å få innsikt i disse komplekse prosessene. Selv om mange musemodeller har blitt utviklet for å studere bidrag av ulike kreftfremkallende hendelser og Opprinnelses celler til bryst tumorigenesis, er disse modellene ofte ikke celle-type eller organ spesifikk eller kan ikke indusere initiering av bryst tumorigenesis i en midlertidig kontrollert måte. Her beskriver vi en protokoll for å generere en ny type brystkreft mus modeller basert på intraductal injeksjon av grobunn-uttrykker adenovirus (ad-grobunn) i mus melkekjertler (MGs). På grunn av direkte injeksjon av ad-grobunn i melke kanaler, denne tilnærmingen er MG spesifikk, uten uønsket kreft induksjon i andre organer. Den intraductal injeksjon prosedyren kan utføres i mus på ulike stadier av deres MG utvikling (dermed tillater det Temporal kontroll av kreft induksjon, fra ~ 3-4 ukers alder). Den celle-type spesifisitet kan oppnås ved å bruke ulike celle-type-spesifikke arrangører til å drive grobunn uttrykk i adenoviral vektor. Vi viser at luminal og basal melke epitelceller (MECs) kan være tett målrettet for grobunn/loxP-basert genetisk manipulasjon via en intraductal injeksjon av ad-grobunn under kontroll av keratin 8 eller keratin 5 promoter, henholdsvis. Ved å innlemme en betinget grobunn reporter (f. eks grobunn/loxP-induserbart Rosa26-YFP reporter), viser vi at MECs målrettet av ad-grobunn, og tumorceller avledet fra dem, kan spores ved å følge reporter-positive celler etter intraductal injeksjon.

Representative PCR genotyperingteknologi resultater for R26Y og Trp53L alleler er vist i figur 1.
Selv om, i prinsippet, alle 10 MGs kan bli utsatt for intraductal injeksjon prosedyre, praktisk talt, de to fjerde lysken MGs er vanligvis valgt for injeksjon, på grunn av deres lettere tilgjengelighet og større MG størrelser (figur 2). Unde...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland Video at JoVE.com

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland Video (Video) | JoVE

Målet med denne protokollen er å beskrive en ny brystkreft modellering tilnærming basert på intraductal injeksjon av grobunn-uttrykker adenovirus inn mus melkekjertler. Denne tilnærmingen gjør at både celle-type-og organ-spesifikk manipulering av kreftfremkallende hendelser i en timelig kontrollert måte.

Modellering brystkreft via en intraductal injeksjon av grobunn-uttrykker Adenovirus inn i mus bryst kjertel

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are ...

Denne protokollen vil hjelpe forskere generere en ny type musemodell for å rekapilere menneskelig brystkreft utvikling fra ulike undergrupper av pattedyr epitelceller. Denne teknikken gjør det mulig for forskere å generere brystkreftmusmodeller i utviklingsstadiumvev på en celletype spesifikk måte og uten behov for omfattende museavl. For å begynne denne prosedyren, generere, vedlikeholde og bedøve floxed mus som beskrevet i tekstprotokollen.Ta musen til et område atskilt fra der operasjonen skal utføres. Etter å ha bekreftet anestesi ved å utføre en tåklemme, injiser Meloksikam som analgesi subkutant i en dose på fem milligram per kilo for å forberede seg på kirurgisk prosedyre. Eksponer brystvortekirurgisk sted ved å bruke flere dråper hårfjerningskrem.Fjern overdreven krem og løst hår med myke papirhåndklær. Barbering anbefales ikke for å unngå skade på brystvortene. Desinfiser operasjonsstedet med iodophors først etterfulgt av 70% alkohol og avslutt med en endelig påføring av skrubbe iodophors.Gjør dette i en sirkulær bevegelse fra midten av arbeidsområdet mot periferien ved hjelp av en gasbind svamp eller en bomull-tippet applikator. Gjenta syklusen tre til fire ganger. Bruk aseptiske teknikker gjennom hele kirurgisk prosedyre.Lag et snitt på huden i en lengde på omtrent en centimeter mellom de to fjerde inguinal brystkjertlene. Separer forsiktig hudklaffen fra parietal bukhinnen for å visualisere pattedyrkanaltreet. Hold forsiktig brystvorten med urmakerens tang for å fjerne den utvendige brystvorten uten å kutte noen nærliggende hud ved hjelp av en mikrodisseksjonsaks.Legg ca tre til fem mikroliter av Cre-adenovirus injeksjon blanding i en 25 mikroliter Hamilton sprøyte med en 33 gauge metall hub nål festet. Anslå volumet av injeksjonsblandingen i sprøyten basert på det blå fargestoffet som inngår i blandingen. Hold forsiktig kanten av hudklaffen med en fin buet pinsett og injiser Cre-adenovirusinjeksjonsblandingen sakte inn i brystvorten mens du overvåker spredningen av blått fargestoff inn i det brystddeptiske treet.Hold injeksjonshastigheten langsom som mulig for å unngå skade på kanallumen. En vellykket intraduktal injeksjon indikeres av injiserte væsker som sprer seg over hele kanaltreet uten å lekke inn i stromarommet. Trekk nålen forsiktig ut av brystvorten for å unngå lekkasje av den injiserte væsken.Undersøk den distale siden av brystkjertelen eller det omkringliggende området av den injiserte brystvorten. Fargestoff som sprer seg inn i den nærliggende stroma som vist her indikerer en brystfettpute injeksjon i stedet for en vellykket intraductal injeksjon. Lukk de kirurgiske sårene i huden med sårklips.Fjern musen fra anestesi og legg den på en varmepute inne i et rent bur for gjenoppretting. Overvåk utviklingen av brystsvulsten som beskrevet i tekstprotokollen. De yngste hunnmusene som intraduktal injeksjon kan utføres for, er de ved ca. tre ukers alder.Selv om for de fleste pattedyr tumor induksjon eksperimenter, unge voksne kvinnelige mus brukes. Intraduktal injeksjon med et større volum av injeksjonsblandingen kan utføres hos hunnmus tidlig til midten av svangerskapet for å målrette alveolære celler. For å målrette ulike bryst epitelcelle subpopulasjoner for mammary tumor induksjon, Cre-adenovirus under kontroll av ulike pattedyr epitelcelle subsett spesifikke arrangører ble brukt til injeksjon.For eksempel cre-adenovirus under kontroll av keratin 8 promotor ble brukt til å målrette luminal mammary epitelceller. Cre-adenovirus under kontroll av keratin 5 promotor målrettet basal avstamning fører til genetisk merking av bare basal mammary epitelceller. For en kvinnelig P53 floxed homozygous mus med en ROSA26-YFP reporter, intraductal injeksjon av keratin 8 Cre-adenovirus førte til utvikling av brystsvulster flere måneder etter injeksjonen.På grunn av inkluderingen av den betingede R26-Y-reporteren, var tumorepitelceller vanligvis preget av YFP og kunne oppdages ved strømningscytometri. Cellene kan berikes ved flytsortering av YFP-positive celler for videre analyse. Det viktigste å huske når du prøver denne prosedyren er å bruke et lite injeksjonsvolum, injisere sakte, og også trekke nålen sakte.Etter denne prosedyren kan man overvåke utviklingen av de målrettede YFP-positive brystepitele cellene til pre-ondartede og kreftstadier ved strømningscytmetri eller co-immunofluorescence farging av injisert kjertel. Denne teknikken vil bane vei for forskere å studere celler av opprinnelse av brystkreft, hvordan de reagerer på ulike autogene hendelser og hvordan de utvikler seg til kreftceller. Både adenovirus og nålen til injeksjon er potensielt farlige.Derfor bør man alltid bruke hansker og bruke sikkerhetsnåler og sprøyter når man utfører intraduktal injeksjon.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis Video (Video) | JoVE

Intra-iliaca Injection for effektiv og selektiv Modellering av Mikroskopisk Bone Metastase

Intra-iliac artery (IIA) injection is an efficient approach to introduce metastatic lesions of various cancer cells in animals. Compared to the widely ...

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures Video (Video) | JoVE

Utnytte Funksjonell genom Screening for å identifisere potensielt Novel narkotika mål i Cancer Cell spheroid kulturer

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis Video (Video) | JoVE

Intracarotid Cancer Cell Injection å produsere mus modeller av hjernemetastaser

Metastasis, the spread and growth of malignant cells at secondary sites within a patient&#39;s body, accounts for &#62; 90% of cancer-related mortality. ...

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification Video (Video) | JoVE

Seksjon Mammary Gland Whole Mount for Lesion Identification

Normal mammary gland development may be altered by exposure to environmental toxicants and pharmaceutical products, excessive exposure to hormones, and ...

Modeling Osteosarcoma Using Li-Fraumeni Syndrome Patient-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Modeling Osteosarcoma Using Li-Fraumeni Syndrome Patient-derived Induced Pluripotent Stem Cells Video (Video) | JoVE

Modellering Osteosarcoma bruker Li-Fraumeni syndrom pasient-avledede Induced Pluripotent stamceller

Li-Fraumeni syndrome (LFS) is an autosomal dominant hereditary cancer disorder. Patients with LFS are predisposed to a various type of tumors, including ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad Video (Video) | JoVE

Orthotopic injeksjon av brystkreft celler i mus Mammary fett puten

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad Video (Video) | JoVE

Rotte mammary epitelcelletransplantasjon i Interscapular Hvit Fett Pad

As early as the 1970s, researchers have successfully transplanted mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of rats. Grafting mammary ...

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging Video (Video) | JoVE

Modellering av hjernemetastaser gjennom intrakraniell injeksjon og magnetisk resonansavbildning

Metastatic spread of cancer is an unfortunate consequence of disease progression, aggressive cancer subtypes, and/or late diagnosis. Brain metastases are ...

Modeling Breast Cancer in Human Breast Tissue using a Microphysiological System

Modeling Breast Cancer in Human Breast Tissue using a Microphysiological System Video (Video) | JoVE

Modellering av brystkreft i humant brystvev ved hjelp av et mikrofysiologisk system

Breast cancer (BC) remains a leading cause of death for women. Despite more than $700 million invested in BC research annually, 97% of candidate BC drugs ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells Video (Video) | JoVE

Modellering av hjernemetastase via hale-vene-injeksjon av inflammatoriske brystkreftceller

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...