Name: modeling breast cancer via an intraductal injection of cre-expressing adenovirus into the mouse mammary gland
Uploaded: 2019-06-07T13:30:00
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Este trabajo fue apoyado por la subvención R01 CA222560 de los Institutos Nacionales de Salud (NIH) y por el Premio Breakthrough del Departamento de Defensa W81XWH-18-1-0037.

Todos los métodos descritos aquí han sido aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) de Brigham and Women's Hospital.
1. Generación y mantenimiento de ratones floxed
<ol><li>Obtener eliminatoria condicional escamariamente relevante para el cáncer de mama (por ejemplo, Trp53tm1Brn [denominada Trp53L/L], Brca1tm1Aash [Brca1L/L]) o líneas de ratón de knock-in condicionales (p...

<ol>
	<li>Wagner, K. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cre-mediated+gene+deletion+in+the+mammary+gland.">Cre-mediated gene deletion in the mammary gland.</a> Nucleic Acids Research. 25 (21), 4323-4330 (1997).</li><li>Selbert, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+BLG-Cre+mediated+gene+deletion+in+the+mammary+gland.">Efficient BLG-Cre mediated gene deletion in the mammary gland.</a> Transgenic Research. 7 (5), 387-396 (1998).</li><li>Jonkers, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+tumor+suppressor+activity+of+BRCA2+and+p53+in+a+conditional+mouse+model+for+breast+cancer.">Synergistic tumor suppressor activity of BRCA2 and p53 in a conditional mouse model for breast cancer.</a> Nature Genetics. 29 (4), 418-425 (2001).</li><li>van Bragt, M. P., Hu, X., Xie, Y., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RUNX1,+a+transcription+factor+mutated+in+breast+cancer,+controls+the+fate+of+ER-positive+mammary+luminal+cells.">RUNX1, a transcription factor mutated in breast cancer, controls the fate of ER-positive mammary luminal cells.</a> eLife. 3, e03881 (2014).</li><li>Tao, L., van Bragt, M. P., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Long-Lived+Luminal+Subpopulation+Enriched+with+Alveolar+Progenitors+Serves+as+Cellular+Origin+of+Heterogeneous+Mammary+Tumors.">A Long-Lived Luminal Subpopulation Enriched with Alveolar Progenitors Serves as Cellular Origin of Heterogeneous Mammary Tumors.</a> Stem Cell Reports. 5 (1), 60-74 (2015).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+mutation+of+Brca1+in+mammary+epithelial+cells+results+in+blunted+ductal+morphogenesis+and+tumour+formation.">Conditional mutation of Brca1 in mammary epithelial cells results in blunted ductal morphogenesis and tumour formation.</a> Nature Genetics. 22 (1), 37-43 (1999).</li><li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ETV6-NTRK3+fusion+oncogene+initiates+breast+cancer+from+committed+mammary+progenitors+via+activation+of+AP1+complex.">ETV6-NTRK3 fusion oncogene initiates breast cancer from committed mammary progenitors via activation of AP1 complex.</a> Cancer Cell. 12 (6), 542-558 (2007).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatic+loss+of+BRCA1+and+p53+in+mice+induces+mammary+tumors+with+features+of+human+BRCA1-mutated+basal-like+breast+cancer.">Somatic loss of BRCA1 and p53 in mice induces mammary tumors with features of human BRCA1-mutated basal-like breast cancer.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (29), 12111-12116 (2007).</li><li>Molyneux, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BRCA1+basal-like+breast+cancers+originate+from+luminal+epithelial+progenitors+and+not+from+basal+stem+cells.">BRCA1 basal-like breast cancers originate from luminal epithelial progenitors and not from basal stem cells.</a> Cell Stem Cell. 7 (3), 403-417 (2010).</li><li>Koren, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PIK3CA+induces+multipotency+and+multi-lineage+mammary+tumours.">PIK3CA induces multipotency and multi-lineage mammary tumours.</a> Nature. 525 (7567), 114-118 (2015).</li><li>Van Keymeulen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactivation+of+multipotency+by+oncogenic+PIK3CA+induces+breast+tumour+heterogeneity.">Reactivation of multipotency by oncogenic PIK3CA induces breast tumour heterogeneity.</a> Nature. 525 (7567), 119-123 (2015).</li><li>Tao, L., Xiang, D., Xie, Y., Bronson, R. T., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+p53+loss+in+mouse+luminal+cells+causes+clonal+expansion+and+development+of+mammary+tumours.">Induced p53 loss in mouse luminal cells causes clonal expansion and development of mammary tumours.</a> Nature Communications. 8, 14431 (2017).</li><li>Tao, L., van Bragt, M. P. A., Laudadio, E., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+Tracing+of+Mammary+Epithelial+Cells+Using+Cell-Type-Specific+Cre-Expressing+Adenoviruses.">Lineage Tracing of Mammary Epithelial Cells Using Cell-Type-Specific Cre-Expressing Adenoviruses.</a> Stem Cell Reports. 2 (6), 770-779 (2014).</li><li>Sutherland, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+of+origin+of+small+cell+lung+cancer:+inactivation+of+Trp53+and+Rb1+in+distinct+cell+types+of+adult+mouse+lung.">Cell of origin of small cell lung cancer: inactivation of Trp53 and Rb1 in distinct cell types of adult mouse lung.</a> Cancer Cell. 19 (6), 754-764 (2011).</li><li>Shackleton, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+functional+mammary+gland+from+a+single+stem+cell.">Generation of a functional mammary gland from a single stem cell.</a> Nature. 439 (7072), 84-88 (2006).</li><li>The Cancer Genome Atlas Network. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+molecular+portraits+of+human+breast+tumours.">Comprehensive molecular portraits of human breast tumours.</a> Nature. 490 (7418), 61-70 (2012).</li><li>Nik-Zainal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+life+history+of+21+breast+cancers.">The life history of 21 breast cancers.</a> Cell. 149 (5), 994-1007 (2012).</li><li>Abba, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Molecular+Portrait+of+High-Grade+Ductal+Carcinoma+In+Situ.">A Molecular Portrait of High-Grade Ductal Carcinoma In Situ.</a> Cancer Research. 75 (18), 3980-3990 (2015).</li></ol>

El éxito de este enfoque para inducir tumores mamarios de diferentes subpoblaciones de MEC se basa no sólo en la elección de promotores específicos de tipo celular apropiados (para impulsar la expresión De) sino también en el propio procedimiento de inyección intraductal. La idea detrás de este enfoque es que los virus Ad-Cre inyectados se retienen en el árbol ductal, que es una estructura oculta con lumen, y por lo tanto, sólo los MEC están expuestos a los virus y están infectados por Ad-Cre. Debido al espac...

El objetivo general de este método es desarrollar un nuevo enfoque de modelado de cáncer de mama basado en una inyección intraductal de Ad-Cre en el ratón MG. El enfoque genético basado en la recombinación Cre/loxP se ha utilizado ampliamente para modelar el cáncer de mama humano en ratones. La primera generación de modelos de ratón de cáncer de mama basados en Cre/loxP se generan mediante el uso de ratones transgénicos Con confirmación de Cre bajo el control de promotores específicos de MEC (por ejemplo, MMTV-Cre para MECs luminales y una parte de MECs basales, Wap-Cre y Blg-Cre para progenitores luminales y MECs luminales alveolales, K14-Cre para basal y una porción de MECs luminales1,2,3,4,5)6, 7 , 8 , 9. Sin embargo, si bien estas líneas transgénicas Cre permiten el control espacial de la expresión Cre (es decir, en diferentes subconjuntos de MEC), no permiten el control temporal de la expresión Cre y la manipulación genética mediada por Cre/loxP. La segunda generación de modelos de ratón de cáncer de mama basados en Cre/loxP utilizan enfoques inducibles de actividad/expresión de Cre (por ejemplo, el uso de fusión de receptores Cre-estrógeno [CreER], que sólo puede inducir la recombinación de Cre/loxP tras la administración de tamoxifeno), y como resultado, estas herramientas genéticas permiten controles espaciales y temporales de la activación de eventos oncogénicos en MEC (por ejemplo, modelos basados en K8-CreER- y K5-CreER)10,11,12 . En ambas generaciones de modelos de ratones con cáncer de mama, como promotores utilizados para impulsar la expresión Cre o CreER (por ejemplo, Krt8, Krt5) también pueden estar activos en células epiteliales de otros órganos (es decir, son específicos del tipo celular pero no específicos del órgano) o tienen una expresión de fuga en tipos celulares distintos de las células epiteliales (por ejemplo, MMTV, que tiene actividad con fugas en las células hematopoyéticas de la médula ósea), estos enfoques pueden conducir al desarrollo de cáncer(es) no deseado(s) en otros órganos. Si estos cánceres inesperados causan letalidad en los ratones afectados, el propósito original de modelar el cáncer de mama en estos ratones puede estar prohibido (por ejemplo, eventos oncogénicos impulsados por MMTV-Crepueden conducir a neoplasias malignas hematopoyéticas y muerte temprana de los ratones , debido a la fuga del promotor mmTV en células hematopoyéticas)4.
Aquí informamos de un enfoque de modelado de cáncer de mama en ratones que permite la manipulación específica del tipo de célula y del órgano de eventos oncogénicos de una manera controlada temporalmente. Este enfoque se basa en una inyección intraductal de Ad-Cre en los MG de ratón (y es, por lo tanto, específico del órgano). La expresión Cre se puede controlar utilizando diferentes promotores específicos de subpoblación MEC incrustados en el vector adenoviral (por ejemplo, Krt8 para MECs luminales, Krt5 para MECbasals, logrando así la especificidad de tipo celular). La inducción del cáncer en MG se puede controlar temporalmente mediante una inyección de Ad-Cre en ratones a diferentes edades, desde los 3-4 semanas de edad (pubertad) hasta la etapa adulta.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>33-gauge needle</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7803-05</td>
			<td>point style 3 blunt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7mm Reflex Clip</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>RF7 CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenovirus, Ad-K5-Cre</td>
			<td>University of Iowa Viral Vector Core</td>
			<td>Ad5-bk5-Cre (VVC-Berns-1547)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenovirus, Ad-K8-Cre</td>
			<td>University of Iowa Viral Vector Core</td>
			<td>Ad5mK8-nlsCre</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>HC800-1GAL</td>
			<td>Prepare to 70% in use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated CD31</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-0311-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated CD45</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-0451-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated TER119</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-5921-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bromophenol Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B0126-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD24-AF-700</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>564237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD24-PE</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>12-0242-83</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD29-APC</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>17-0291-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD29-PE</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>12-0291-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair Remover Lotion</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td>9 Oz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7636-01</td>
			<td>0.025 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodophors</td>
			<td>Betadine</td>
			<td></td>
			<td>10% Povidone-iodine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>NDC 10019-360-40</td>
			<td>1-2.5%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Loxicam</td>
			<td>Norbrook</td>
			<td>NDC 55529-040-10</td>
			<td>5 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lubricant Eye Ointment</td>
			<td>Akorn</td>
			<td colspan="2">NDC 17478-062-35</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting scissors</td>
			<td>Pentair</td>
			<td>9M</td>
			<td>Watchmaker&#39;s Forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting tweezers</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>M5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq 5X Master Mix</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0285L</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling breast cancer via an intraductal injection of cre-expressing adenovirus into the mouse mammary gland

El cáncer de mama es una enfermedad heterogénea, posiblemente debido a interacciones complejas entre diferentes células de origen y eventos oncogénicos. Los modelos de ratón son fundamentales para obtener información sobre estos procesos complejos. Aunque muchos modelos de ratón se han desarrollado para estudiar las contribuciones de varios eventos oncogénicos y células de origen a la tumorigenesis de mama, estos modelos a menudo no son de tipo celular u órgano específico o no pueden inducir el inicio de la tumorigenesis mamaria en un temporalmente controlado. Aquí describimos un protocolo para generar un nuevo tipo de modelos de ratón de cáncer de mama basados en la inyección intraductal de adenovirus Cre-expressing (Ad-Cre) en glándulas mamarias de ratón (GM). Debido a la inyección directa de Ad-Cre en los conductos mamarios, este enfoque es específico de MG, sin ninguna inducción de cáncer no deseado en otros órganos. El procedimiento de inyección intraductal se puede realizar en ratones en diferentes etapas de su desarrollo MG (por lo tanto, permite el control temporal de la inducción del cáncer, a partir de las 3-4 semanas de edad). La especificidad del tipo de célula se puede lograr mediante el uso de diferentes promotores específicos del tipo de celda para impulsar la expresión Cre en el vector adenoviral. Mostramos que las células epiteliales mamarias luminales y basales (MEC) pueden estar estrechamente dirigidas a la manipulación genética basada en Cre/loxP a través de una inyección intraductal de Ad-Cre bajo el control del promotor de queratina 8 o queratina 5, respectivamente. Al incorporar un reportero Condicional de Cre (por ejemplo, reportero Rosa26-YFP inducible cre/loxP), mostramos que los MEC atacados por Ad-Cre, y las células tumorales derivadas de ellos, se pueden rastrear siguiendo las células positivas del reportero después de la inyección intraductal.

Los resultados representativos del genotipado de PCR para los alelos R26Y y Trp53L se muestran en la Figura1.
Aunque, en principio, los 10 MG pueden someterse al procedimiento de inyección intraductal, prácticamente, los dos cuartos GM inguinales se seleccionan típicamente para inyección, debido a su accesibilidad más fácil y tamaños mg más grandes (Figura<stron...

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Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland Video (Video) | JoVE

El objetivo de este protocolo es describir un nuevo enfoque de modelado de cáncer de mama basado en la inyección intraductal de adenovirus Cre-expressing en las glándulas mamarias del ratón. Este enfoque permite la manipulación específica del tipo de célula y del órgano de los eventos oncogénicos de una manera controlada temporalmente.

Modelar el cáncer de mama a través de una inyección intraductal de Adenovirus C-expreso en la Glándula Mamaria del Ratón

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are ...

Este protocolo ayudará a los investigadores a generar un nuevo tipo de modelo de ratón para recapitular el desarrollo del cáncer de mama humano a partir de diferentes subconjuntos de células epiteliales mamarias. Esta técnica permite a los investigadores generar modelos de ratón de cáncer de mama en el tejido del escenario del desarrollo de una manera específica de tipo celular y sin necesidad de una extensa cría de ratón. Para comenzar este procedimiento, genere, mantenga y anesthetice ratones con floxed como se describe en el protocolo de texto.Lleve el ratón a un área separada de donde se va a realizar la cirugía. Después de confirmar la anestesia mediante la realización de un pellizco de los dedos, inyecte Meloxicam como analgesia por vía subcutánea a una dosis de cinco miligramos por kilogramo para prepararse para el procedimiento quirúrgico. Exponga el sitio quirúrgico del pezón aplicando varias gotas de crema de depilación.Retire la crema excesiva y el cabello suelto con toallas de papel suaves. No se recomienda afeitarse para evitar daños en los pezones. Desinfectar el sitio quirúrgico con yodoforos primero seguido de 70%alcohol y terminar con una aplicación final de yodoforos de exfoliación.Haga esto en un movimiento circular desde el centro del área de trabajo hacia la periferia usando una esponja de gasa o un aplicador con punta de algodón. Repita el ciclo de tres a cuatro veces. Utilizar técnicas asépticas durante todo el procedimiento quirúrgico.Haga una incisión en la piel a una longitud de aproximadamente un centímetro entre las dos cuartas glándulas mamarias inguinales. Separe cuidadosamente el colgajo de la piel del peritoneo parietal para visualizar el árbol ductal mamario. Sostenga cuidadosamente el pezón con los fórceps de los relojeros para quitar el pezón exterior sin cortar ninguna piel cercana con una tijera de microdisección.Cargue aproximadamente de tres a cinco microlitros de la mezcla de inyección de Cre-adenovirus en una jeringa Hamilton de 25 microlitros con una aguja de cubo de metal de calibre 33 colocada. Estimar el volumen de la mezcla de inyección en la jeringa a partir del tinte azul incluido en la mezcla. Sostenga suavemente el borde de la solapa de la piel con una pinza curva fina e inyecte lentamente la mezcla de inyección de Cre-adenovirus en el pezón mientras monitorea la propagación del tinte azul en el árbol ductal mamario.Mantenga la velocidad de inyección a la menor velocidad posible para evitar daños en el lumen ductal. Una inyección intraductal exitosa está indicada por fluidos inyectados que se extienden por todo el árbol ductal sin filtrarse en el compartimento del estroma. Retire suavemente la aguja del pezón para evitar cualquier fuga del líquido inyectado.Examine el lado distal de la glándula mamaria o el área circundante del pezón inyectado. El colorante que se difunde en el estroma cercano como se muestra aquí indica una inyección de almohadilla de grasa mamaria en lugar de una inyección intraductal exitosa. Cierre las heridas quirúrgicas en la piel con clips para la herida.Retire el ratón de la anestesia y colóquelo en una almohadilla de calentamiento dentro de una jaula limpia para su recuperación. Supervisar el desarrollo del tumor mamario como se describe en el protocolo de texto. Los ratones hembra más jóvenes para los que se puede realizar con éxito la inyección intraductal son aquellos a aproximadamente tres semanas de edad.Aunque para la mayoría de los experimentos de inducción de tumores mamarios, se utilizan ratones hembra adultos jóvenes. La inyección intraductal con un volumen mayor de la mezcla de inyección se puede realizar en ratones hembra durante la gestación temprana a media para atacar las células alveolares. Para dirigirse a diferentes subpoblaciones de células epiteliales mamarias para la inducción de tumores mamarios, se utilizaron para inyección Cre-adenovirus bajo el control de diferentes promotores específicos de subconjuntos epiteliales mamarios.Por ejemplo, Cre-adenovirus bajo el control del promotor de la queratina 8 se utilizó para atacar las células epiteliales mamarias luminales. El cre-adenovirus bajo el control del promotor de la queratina 5 se dirigió al linaje basal que conduce al marcado genético de sólo células epiteliales mamarias basales. Para una hembra de ratones homocigotos con floxed P53 con un reportero ROSA26-YFP, la inyección intraductal de queratina 8 Cre-adenovirus condujo al desarrollo de tumores mamarios varios meses después de la inyección.Debido a la inclusión del reportero condicional R26-Y, las células epiteliales tumorales estaban típicamente marcadas por YFP y podían ser detectadas por citometría de flujo. Las celdas se pueden enriquecer mediante la clasificación de flujo de células positivas YFP para un análisis posterior. Las cosas más importantes a recordar al intentar este procedimiento son utilizar un pequeño volumen de inyección, inyectar lentamente, y también retirar la aguja lentamente.Después de este procedimiento, se puede monitorear la progresión de las células epiteliales mamarias positivas de YFP objetivo a las etapas pre-malignas y cancerosas por citometría de flujo o tinción de co-inmunofluorescencia de la glándula inyectada. Esta técnica allanará el camino para que los investigadores estudien las células de origen del cáncer de mama, cómo responden a diferentes eventos autogénicos y cómo progresan a las células cancerosas. Tanto el adenovirus como la aguja inyectable son potencialmente peligrosos.Por lo tanto, siempre se deben usar guantes y utilizar agujas y jeringas de seguridad al realizar la inyección intraductal.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis

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Intra-ilíaca Arteria inyección de Modelamiento eficiente y selectiva de microscópico metástasis en los huesos

Intra-iliac artery (IIA) injection is an efficient approach to introduce metastatic lesions of various cancer cells in animals. Compared to the widely ...

Investigación

Investigación sobre el cáncer

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

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La utilización de la genómica funcional de selección para identificar dianas farmacológicas potencialmente nueva en la celda cáncer culturas Esferoide

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis

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Intracarotídea inyección de las células del cáncer para Producción de ratón Modelos de metástasis cerebral

Metastasis, the spread and growth of malignant cells at secondary sites within a patient&#39;s body, accounts for &#62; 90% of cancer-related mortality. ...

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification

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Seccionando los Montes Enteros de las Glándulas Mamarias para la Identificación de Lesiones

Normal mammary gland development may be altered by exposure to environmental toxicants and pharmaceutical products, excessive exposure to hormones, and ...

Modeling Osteosarcoma Using Li-Fraumeni Syndrome Patient-derived Induced Pluripotent Stem Cells

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Modelado de Osteosarcoma usando las células de vástago de Pluripotent inducido derivados del paciente el síndrome de Li-Fraumeni

Li-Fraumeni syndrome (LFS) is an autosomal dominant hereditary cancer disorder. Patients with LFS are predisposed to a various type of tumors, including ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

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Ortotópico inyección de las células de cáncer de mama en la almohadilla de grasa mamaria de ratones

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad

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Trasplante de células epiteliales de rata mamaria en la almohadilla de grasa blanca interescapular

As early as the 1970s, researchers have successfully transplanted mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of rats. Grafting mammary ...

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging

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Modelado de metástasis cerebrales a través de inyección intracraneal e imágenes de resonancia magnética

Metastatic spread of cancer is an unfortunate consequence of disease progression, aggressive cancer subtypes, and/or late diagnosis. Brain metastases are ...

Modeling Breast Cancer in Human Breast Tissue using a Microphysiological System

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Modelado del cáncer de mama en el tejido mamario humano utilizando un sistema microfisiológico

Breast cancer (BC) remains a leading cause of death for women. Despite more than $700 million invested in BC research annually, 97% of candidate BC drugs ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

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Modelado de metástasis cerebral mediante inyección en la vena de cola de células inflamatorias de cáncer de mama

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...