Name: modeling breast cancer via an intraductal injection of cre-expressing adenovirus into the mouse mammary gland
Uploaded: 2019-06-07T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland Video at JoVE.com

Detta arbete stöddes av National Institutes of Health (NIH) Grant R01 CA222560 och av Department of Defense genombrott Award W81XWH-18-1-0037.

Alla metoder som beskrivs här har godkänts av den institutionella djuromsorg och användning kommittén (IACUC) av Brigham och Women ' s Hospital.
1. generering och underhåll av floxed möss
<ol><li>Få bröstcancer relevant floxed villkorlig knockout (t. ex. Trp53tm1Brn [kallad Trp53l/l], Brca1tm1Aash [Brca1L/l]) eller villkorliga Knock-in-muslinjer (t. ex. Gt (rosa) 26SorTM1 (PIK3CA * H1047R) Egan...

<ol>
	<li>Wagner, K. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cre-mediated+gene+deletion+in+the+mammary+gland.">Cre-mediated gene deletion in the mammary gland.</a> Nucleic Acids Research. 25 (21), 4323-4330 (1997).</li><li>Selbert, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+BLG-Cre+mediated+gene+deletion+in+the+mammary+gland.">Efficient BLG-Cre mediated gene deletion in the mammary gland.</a> Transgenic Research. 7 (5), 387-396 (1998).</li><li>Jonkers, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+tumor+suppressor+activity+of+BRCA2+and+p53+in+a+conditional+mouse+model+for+breast+cancer.">Synergistic tumor suppressor activity of BRCA2 and p53 in a conditional mouse model for breast cancer.</a> Nature Genetics. 29 (4), 418-425 (2001).</li><li>van Bragt, M. P., Hu, X., Xie, Y., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RUNX1,+a+transcription+factor+mutated+in+breast+cancer,+controls+the+fate+of+ER-positive+mammary+luminal+cells.">RUNX1, a transcription factor mutated in breast cancer, controls the fate of ER-positive mammary luminal cells.</a> eLife. 3, e03881 (2014).</li><li>Tao, L., van Bragt, M. P., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Long-Lived+Luminal+Subpopulation+Enriched+with+Alveolar+Progenitors+Serves+as+Cellular+Origin+of+Heterogeneous+Mammary+Tumors.">A Long-Lived Luminal Subpopulation Enriched with Alveolar Progenitors Serves as Cellular Origin of Heterogeneous Mammary Tumors.</a> Stem Cell Reports. 5 (1), 60-74 (2015).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+mutation+of+Brca1+in+mammary+epithelial+cells+results+in+blunted+ductal+morphogenesis+and+tumour+formation.">Conditional mutation of Brca1 in mammary epithelial cells results in blunted ductal morphogenesis and tumour formation.</a> Nature Genetics. 22 (1), 37-43 (1999).</li><li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ETV6-NTRK3+fusion+oncogene+initiates+breast+cancer+from+committed+mammary+progenitors+via+activation+of+AP1+complex.">ETV6-NTRK3 fusion oncogene initiates breast cancer from committed mammary progenitors via activation of AP1 complex.</a> Cancer Cell. 12 (6), 542-558 (2007).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatic+loss+of+BRCA1+and+p53+in+mice+induces+mammary+tumors+with+features+of+human+BRCA1-mutated+basal-like+breast+cancer.">Somatic loss of BRCA1 and p53 in mice induces mammary tumors with features of human BRCA1-mutated basal-like breast cancer.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (29), 12111-12116 (2007).</li><li>Molyneux, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BRCA1+basal-like+breast+cancers+originate+from+luminal+epithelial+progenitors+and+not+from+basal+stem+cells.">BRCA1 basal-like breast cancers originate from luminal epithelial progenitors and not from basal stem cells.</a> Cell Stem Cell. 7 (3), 403-417 (2010).</li><li>Koren, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PIK3CA+induces+multipotency+and+multi-lineage+mammary+tumours.">PIK3CA induces multipotency and multi-lineage mammary tumours.</a> Nature. 525 (7567), 114-118 (2015).</li><li>Van Keymeulen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactivation+of+multipotency+by+oncogenic+PIK3CA+induces+breast+tumour+heterogeneity.">Reactivation of multipotency by oncogenic PIK3CA induces breast tumour heterogeneity.</a> Nature. 525 (7567), 119-123 (2015).</li><li>Tao, L., Xiang, D., Xie, Y., Bronson, R. T., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+p53+loss+in+mouse+luminal+cells+causes+clonal+expansion+and+development+of+mammary+tumours.">Induced p53 loss in mouse luminal cells causes clonal expansion and development of mammary tumours.</a> Nature Communications. 8, 14431 (2017).</li><li>Tao, L., van Bragt, M. P. A., Laudadio, E., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+Tracing+of+Mammary+Epithelial+Cells+Using+Cell-Type-Specific+Cre-Expressing+Adenoviruses.">Lineage Tracing of Mammary Epithelial Cells Using Cell-Type-Specific Cre-Expressing Adenoviruses.</a> Stem Cell Reports. 2 (6), 770-779 (2014).</li><li>Sutherland, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+of+origin+of+small+cell+lung+cancer:+inactivation+of+Trp53+and+Rb1+in+distinct+cell+types+of+adult+mouse+lung.">Cell of origin of small cell lung cancer: inactivation of Trp53 and Rb1 in distinct cell types of adult mouse lung.</a> Cancer Cell. 19 (6), 754-764 (2011).</li><li>Shackleton, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+functional+mammary+gland+from+a+single+stem+cell.">Generation of a functional mammary gland from a single stem cell.</a> Nature. 439 (7072), 84-88 (2006).</li><li>The Cancer Genome Atlas Network. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+molecular+portraits+of+human+breast+tumours.">Comprehensive molecular portraits of human breast tumours.</a> Nature. 490 (7418), 61-70 (2012).</li><li>Nik-Zainal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+life+history+of+21+breast+cancers.">The life history of 21 breast cancers.</a> Cell. 149 (5), 994-1007 (2012).</li><li>Abba, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Molecular+Portrait+of+High-Grade+Ductal+Carcinoma+In+Situ.">A Molecular Portrait of High-Grade Ductal Carcinoma In Situ.</a> Cancer Research. 75 (18), 3980-3990 (2015).</li></ol>

Framgången för detta tillvägagångssätt för att inducera brösttumörer från olika subpopulationer av mecs förlitar sig inte bara på att välja lämpliga cell-typ-specifika initiativtagare (för att driva CRE uttryck) men också på intraduktalt injektionsproceduren själv. Tanken bakom detta tillvägagångssätt är att de injicerade AD-CRE virus bevaras i duktal trädet, som är en dold struktur med lumen, och därför är endast mecs utsätts för virus och är smittade av AD-CRE. På grund av den begränsade ...

Det övergripande målet med denna metod är att utveckla en ny modell för bröstcancer modellering baserat på en intraduktalt injektion av AD-CRE i mus mg. Den CRE/loxP recombination-baserade genetiska metoden har använts i stor utsträckning för att modellera Human bröstcancer hos möss. Den första generationen av CRE/loxP-baserade bröstcancer musmodeller genereras med hjälp av CRE-uttrycker transgena möss under kontroll av MEC-specifika initiativtagare (t. ex. Mmtv-CRE för luminala mecs och en del av basala mecs, WAP-CRE och BLG-CRE för luminala progenitorer och alveolära luminala mecs, k14-CRE för basal och en portion av luminala mecs1,2,3,4,5)6, 7 , 8 , 9. medan dessa CRE-transgena linjer möjliggör rumslig kontroll av CRE-uttryck (dvs. i olika delmängder av mecs) tillåter de dock inte temporala kontroller av CRE-uttryck och CRE/loxP-medierad genetisk manipulation. Den andra generationen av CRE/loxP-baserade bröstcancer musmodeller använder inducerbara CRE aktivitet/uttryck metoder (t. ex. användning av CRE-östrogen receptor fusion [CreER], som endast kan inducera CRE/loxP rekombination vid administrering av tamoxifen), och som ett resultat, dessa genetiska verktyg tillåter både rumsliga och temporala kontroller av aktiveringen av onkogena händelser i mecs (t. ex., K8-creer-och K5-creer-baserade modeller)10,11,12 . I båda generationerna av bröstcancer musmodeller, som initiativtagare används för att driva CRE eller CreER uttryck (t. ex., Krt8, Krt5) kan också vara aktiv i epitelceller i andra organ (dvs., de är cell-typ-specifika men inte organspecifika) eller har en läckande uttryck i andra celltyper än epitelceller (t. ex., Mmtv, som har läckande aktivitet i benmärgs hematopoietiska celler), dessa metoder kan leda till utveckling av oönskade cancer (s) i andra organ (s). Om dessa oväntade cancerformer orsakar dödlighet hos de drabbade mössen, kan det ursprungliga syftet att modellera bröstcancer hos dessa möss vara förbjudet (t. ex. kan Mmtv-CRE-drivna onkogena händelser leda till hematopoietiska maligniteter och tidig död hos möss , på grund av läckage av Mmtv promotorn i hematopoietiska celler)4.
Här rapporterar vi en modell bröstcancer modellering i möss som tillåter både cell-typ-och organspecifik manipulation av onkogena händelser i ett temporally kontrollerat sätt. Detta tillvägagångssätt är baserat på en intraduktalt injektion av AD-CRE i mus MGS (och är, sålunda, organspecifika). CRE-uttrycket kan kontrolleras med hjälp av olika MEC-specifika projektansvariga som är inbäddade i adenovirala vektor (t. ex. Krt8 för luminala-mecs, Krt5 för basala mecs, vilket uppnår cell typs specificitet). Cancer induktion i MGs kan vara temporally kontrolleras av en injektion av AD-CRE i möss i olika åldrar, med början från 3-4 veckors ålder (pubertal) till vuxen stadiet.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>33-gauge needle</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7803-05</td>
			<td>point style 3 blunt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7mm Reflex Clip</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>RF7 CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenovirus, Ad-K5-Cre</td>
			<td>University of Iowa Viral Vector Core</td>
			<td>Ad5-bk5-Cre (VVC-Berns-1547)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenovirus, Ad-K8-Cre</td>
			<td>University of Iowa Viral Vector Core</td>
			<td>Ad5mK8-nlsCre</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>HC800-1GAL</td>
			<td>Prepare to 70% in use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated CD31</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-0311-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated CD45</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-0451-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated TER119</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-5921-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bromophenol Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B0126-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD24-AF-700</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>564237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD24-PE</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>12-0242-83</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD29-APC</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>17-0291-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD29-PE</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>12-0291-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair Remover Lotion</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td>9 Oz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7636-01</td>
			<td>0.025 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodophors</td>
			<td>Betadine</td>
			<td></td>
			<td>10% Povidone-iodine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>NDC 10019-360-40</td>
			<td>1-2.5%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Loxicam</td>
			<td>Norbrook</td>
			<td>NDC 55529-040-10</td>
			<td>5 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lubricant Eye Ointment</td>
			<td>Akorn</td>
			<td colspan="2">NDC 17478-062-35</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting scissors</td>
			<td>Pentair</td>
			<td>9M</td>
			<td>Watchmaker&#39;s Forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting tweezers</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>M5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq 5X Master Mix</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0285L</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling breast cancer via an intraductal injection of cre-expressing adenovirus into the mouse mammary gland

Bröstcancer är en heterogen sjukdom, möjligen på grund av komplexa interaktioner mellan olika celler av ursprung och onkogena händelser. Musmodeller bidrar till att få insikter i dessa komplexa processer. Även om många musmodeller har utvecklats för att studera bidrag från olika onkogena händelser och celler av ursprung till bröst tumorigenes, dessa modeller är ofta inte cell-typ eller organspecifika eller kan inte inducera initiering av bröst tumorigenes i en på ett tidsmässigt kontrollerat sätt. Här beskriver vi ett protokoll för att generera en ny typ av bröstcancer musmodeller baserade på den intraduktalt injektion av CRE-uttrycker adenovirus (AD-CRE) i mus bröstkörtlar (MGS). På grund av direkt injektion av AD-CRE i bröst kanaler, detta tillvägagångssätt är MG specifik, utan någon oönskad cancerinduktion i andra organ. Den intraduktalt injektion förfarande kan utföras i möss i olika stadier av deras mg utveckling (alltså, det tillåter temporala kontroll av cancerinduktion, från ~ 3-4 veckors ålder). Den cell-typ specificitet kan uppnås genom att använda olika cell-typ-specifika initiativtagare att köra CRE uttryck i adenovirala vektor. Vi visar att luminala och basal bröst epitelceller (mecs) kan vara tätt riktade för CRE/loxP-baserad genetisk manipulation via en intraduktalt injektion av AD-CRE under kontroll av keratin 8 eller keratin 5 promotor, respektive. Genom att införliva en villkorlig CRE reporter (t. ex., CRE/loxP-inducible Rosa26-yfp reporter), visar vi att mecs riktade av AD-CRE, och tumörceller som härrör från dem, kan spåras genom att följa reportern-positiva celler efter intraduktalt injektion.

Representativa PCR-genotypresultat för R26Y och Trp53L -alleler visas i figur 1.
Även om, i princip, alla 10 MGS kan utsättas för intraduktalt injektion förfarande, praktiskt taget, de två fjärde ljumsk MGS är typiskt utvalda för injektion, på grund av deras lättare tillgänglighet och större mg storlekar (figur 2). Under operat...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland Video at JoVE.com

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland Video (Video) | JoVE

Målet med detta protokoll är att beskriva en ny modell för bröstcancer modellering baserad på den intraduktalt injektion av CRE-uttrycker adenovirus i mus mjölkkörtlar. Detta tillvägagångssätt tillåter både cell-typ-och organspecifik manipulation av onkogena händelser på ett tidsmässigt kontrollerat sätt.

Modellering bröst cancer via en intraductal injektion av CRE-uttrycker adenovirus i musen bröstkörteln

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are ...

Detta protokoll kommer att hjälpa forskare att generera en ny typ av mus modell för att rekapitulera mänskliga bröstcancer utveckling från olika delmängder av bröst epitelceller. Denna teknik gör det möjligt för forskare att generera bröstcancer musmodeller i utvecklingsstadium vävnad på en cell typ specifikt sätt och utan behov av omfattande mus avel. För att påbörja denna procedur, generera, underhålla och bedöva floxed möss som beskrivs i textprotokollet.Ta med musen till ett område som är skilt från där operationen ska utföras. Efter att ha bekräftat anestesi genom att utföra en tå nypa, injicera Meloxikam som analgesi subkutant vid en dos av fem milligram per kilogram för att förbereda för det kirurgiska ingreppet. Exponera bröstvårtan kirurgiska webbplats genom att tillämpa flera droppar av hårborttagning grädde.Ta bort överdriven grädde och löst hår med hjälp av mjuka hushållspapper. Rakning rekommenderas inte för att undvika skador på bröstvårtorna. Desinficera operationsstället med jodoforer först följt av 70%alkohol och sluta med en slutlig tillämpning av scrub jodoforer.Gör detta i en cirkulär rörelse från mitten av arbetsområdet mot periferin med hjälp av en gasväv svamp eller en bomull-tippade applikator. Upprepa cykeln tre till fyra gånger. Använd aseptiska tekniker under hela det kirurgiska ingreppet.Gör ett snittsställe på huden vid en längd av ungefär en centimeter mellan de två fjärde inguinal bröstkörtlarna. Försiktigt separera huden flik från parietal bukhinnan så att visuella bröst-duktal träd. Håll försiktigt i bröstvårtan med urmakare'forceps för att avlägsna den yttre bröstvårtan utan att skära någon hud i närheten med hjälp av en mikrodissectionsax.Ladda ungefär tre till fem mikroliter av Cre-adenovirus injektion blandning i en 25 microliter Hamilton spruta med en 33 gauge metall nav nål fäst. Uppskatta volymen av injektionsblandningen i sprutan baserat på det blå färgämne som ingår i blandningen. Håll försiktigt i kanten av hudfliken med en fin böjd pincett och injicera Cre-adenovirus-injektionsblandningen långsamt i bröstvårtan samtidigt som du övervakar spridningen av blått färgämne i bröstdukten.Bibehåll injektionshastigheten vid långsam som möjligt för att undvika skador på duktallumen. En lyckad intraduktiv injektion indikeras genom injicerade vätskor som sprider sig i hela duktalträdet utan att läcka ut i stromafacket. Dra försiktigt tillbaka nålen från nippeln för att undvika eventuellt läckage av den injicerade vätskan.Undersök den distala sidan av bröstkörteln eller det omgivande området av den injicerade bröstvårtan. Dye diffusing i närheten stroma som visas här indikerar en bröstfett pad injektion snarare än en framgångsrik intraduktiv injektion. Stäng de kirurgiska såren i huden med sårklämmor.Ta bort musen från anestesi och placera den på en värmedyna inuti en ren bur för återhämtning. Övervaka utvecklingen av bröst tumör som beskrivs i textprotokollet. De yngsta honmössen för vilka intraduktiv injektion kan utföras framgångsrikt är de vid ungefär tre veckors ålder.Även för de flesta bröst tumör induktion experiment, unga vuxna kvinnliga möss används. Intraduktiv injektion med en större volym av injektionsblandningen kan utföras på honmöss under tidig till mitten av dräktigheten för att rikta in sig på alveolarceller. För att rikta olika däggdjur epitelial cell subpopulationer för bröst tumör induktion, Cre-adenoviruses under kontroll av olika bröst epitelial cell delmängd specifika främjare användes för injektion.Till exempel Cre-adenovirus under kontroll av keratin 8 promotorn användes för att rikta luminal bröst epitelceller. Cre-adenovirus under kontroll av keratin 5 promotorn riktade basala härstamning leder till genetisk märkning av endast basala bröst epitelceller. För en kvinnlig P53 floxed homozygous möss med en ROSA26-YFP reporter, intraductal injektion av keratin 8 Cre-adenovirus ledde till utvecklingen av bröst tumörer flera månader efter injektionen.På grund av att införandet av den villkorliga R26-Y reporter, tumör epitelial celler typiskt märkt av YFP och kunde upptäckas av flöde cytometry. Cellerna kan berikas av flödessorteringen av YFP positiva celler för vidare analys. De viktigaste sakerna att komma ihåg när du försöker detta förfarande är att använda en liten injektion volym, injicera långsamt, och även dra tillbaka nålen långsamt.Efter detta förfarande kan man övervaka progression av den riktade YFP positiva bröst epitelceller till pre-maligna och cancer stadier av flöde cytometry eller co-immunofluorescens färgning av den injicerade körtel. Denna teknik kommer att bana väg för forskare att studera celler av ursprung bröstcancer, hur de svarar på olika autogena händelser och hur de går vidare till cancerceller. Både adenovirus och nålen för injektion är potentiellt farliga.Därför bör man alltid använda handskar och använda säkerhetsnålar och sprutor när man utför intraduktiv injektion.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis Video (Video) | JoVE

Intra-iliaca Injection för effektiv och selektiv Modellering av Mikroskopisk skelettmetastaser

Intra-iliac artery (IIA) injection is an efficient approach to introduce metastatic lesions of various cancer cells in animals. Compared to the widely ...

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures Video (Video) | JoVE

Med hjälp av funktionsgenomik screening för att identifiera potentiellt ny läkemedelsmål för cancercellernas Spheroid Kulturer

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis Video (Video) | JoVE

Intracarotid Cancer Cell Injection att producera musmodeller av metastaser i hjärnan

Metastasis, the spread and growth of malignant cells at secondary sites within a patient&#39;s body, accounts for &#62; 90% of cancer-related mortality. ...

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification Video (Video) | JoVE

Sektion Mammary Gland Whole Mounts för Lesion Identification

Normal mammary gland development may be altered by exposure to environmental toxicants and pharmaceutical products, excessive exposure to hormones, and ...

Modeling Osteosarcoma Using Li-Fraumeni Syndrome Patient-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Modeling Osteosarcoma Using Li-Fraumeni Syndrome Patient-derived Induced Pluripotent Stem Cells Video (Video) | JoVE

Modeling osteosarkom med Li-Fraumeni syndrom patientderiverade inducerade pluripotenta stamceller

Li-Fraumeni syndrome (LFS) is an autosomal dominant hereditary cancer disorder. Patients with LFS are predisposed to a various type of tumors, including ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad Video (Video) | JoVE

Ortotop injektion av bröstcancerceller i möss mjölkkörtlar fettet Pad

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad Video (Video) | JoVE

Råtta Mammary Epitel Cell Transplantation i Interscapular White Fat Pad

As early as the 1970s, researchers have successfully transplanted mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of rats. Grafting mammary ...

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging Video (Video) | JoVE

Modellering Brain Metastaser genom intrakraniell injektion och magnetisk resonanstomografi

Metastatic spread of cancer is an unfortunate consequence of disease progression, aggressive cancer subtypes, and/or late diagnosis. Brain metastases are ...

Modeling Breast Cancer in Human Breast Tissue using a Microphysiological System

Modeling Breast Cancer in Human Breast Tissue using a Microphysiological System Video (Video) | JoVE

Modellering av bröstcancer i bröstvävnad hos människa med hjälp av ett mikrofysiskt system

Breast cancer (BC) remains a leading cause of death for women. Despite more than $700 million invested in BC research annually, 97% of candidate BC drugs ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells Video (Video) | JoVE

Modellering av hjärnmetastaser via svansveninjektion av inflammatoriska bröstcancerceller

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...