Name: modeling breast cancer via an intraductal injection of cre-expressing adenovirus into the mouse mammary gland
Uploaded: 2019-06-07T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland Video at JoVE.com

Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri (NıH) Grant R01 CA222560 ve bölüm savunma atılım Ödülü W81XWH-18-1-0037 tarafından desteklenmektedir.

Burada açıklanan tüm yöntemler Brigham ve kadın Hastanesi kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi (ıANUC) tarafından onaylanmıştır.
1. floxed fareler üretimi ve Bakımı
<ol><li>Meme kanserine uygun floked koşullu nakavt (örn., Trp53tm1Brn [ Trp53l/l], BRCA1tm1Aash [BRCA1L/l]) veya koşullu Knock-in fare hatları (örn., Gt (Rosa) 26SorTm1 (PIK3CA * H1047R) Egan) Jackson ...

<ol>
	<li>Wagner, K. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cre-mediated+gene+deletion+in+the+mammary+gland.">Cre-mediated gene deletion in the mammary gland.</a> Nucleic Acids Research. 25 (21), 4323-4330 (1997).</li><li>Selbert, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+BLG-Cre+mediated+gene+deletion+in+the+mammary+gland.">Efficient BLG-Cre mediated gene deletion in the mammary gland.</a> Transgenic Research. 7 (5), 387-396 (1998).</li><li>Jonkers, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+tumor+suppressor+activity+of+BRCA2+and+p53+in+a+conditional+mouse+model+for+breast+cancer.">Synergistic tumor suppressor activity of BRCA2 and p53 in a conditional mouse model for breast cancer.</a> Nature Genetics. 29 (4), 418-425 (2001).</li><li>van Bragt, M. P., Hu, X., Xie, Y., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RUNX1,+a+transcription+factor+mutated+in+breast+cancer,+controls+the+fate+of+ER-positive+mammary+luminal+cells.">RUNX1, a transcription factor mutated in breast cancer, controls the fate of ER-positive mammary luminal cells.</a> eLife. 3, e03881 (2014).</li><li>Tao, L., van Bragt, M. P., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Long-Lived+Luminal+Subpopulation+Enriched+with+Alveolar+Progenitors+Serves+as+Cellular+Origin+of+Heterogeneous+Mammary+Tumors.">A Long-Lived Luminal Subpopulation Enriched with Alveolar Progenitors Serves as Cellular Origin of Heterogeneous Mammary Tumors.</a> Stem Cell Reports. 5 (1), 60-74 (2015).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+mutation+of+Brca1+in+mammary+epithelial+cells+results+in+blunted+ductal+morphogenesis+and+tumour+formation.">Conditional mutation of Brca1 in mammary epithelial cells results in blunted ductal morphogenesis and tumour formation.</a> Nature Genetics. 22 (1), 37-43 (1999).</li><li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ETV6-NTRK3+fusion+oncogene+initiates+breast+cancer+from+committed+mammary+progenitors+via+activation+of+AP1+complex.">ETV6-NTRK3 fusion oncogene initiates breast cancer from committed mammary progenitors via activation of AP1 complex.</a> Cancer Cell. 12 (6), 542-558 (2007).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatic+loss+of+BRCA1+and+p53+in+mice+induces+mammary+tumors+with+features+of+human+BRCA1-mutated+basal-like+breast+cancer.">Somatic loss of BRCA1 and p53 in mice induces mammary tumors with features of human BRCA1-mutated basal-like breast cancer.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (29), 12111-12116 (2007).</li><li>Molyneux, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BRCA1+basal-like+breast+cancers+originate+from+luminal+epithelial+progenitors+and+not+from+basal+stem+cells.">BRCA1 basal-like breast cancers originate from luminal epithelial progenitors and not from basal stem cells.</a> Cell Stem Cell. 7 (3), 403-417 (2010).</li><li>Koren, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PIK3CA+induces+multipotency+and+multi-lineage+mammary+tumours.">PIK3CA induces multipotency and multi-lineage mammary tumours.</a> Nature. 525 (7567), 114-118 (2015).</li><li>Van Keymeulen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactivation+of+multipotency+by+oncogenic+PIK3CA+induces+breast+tumour+heterogeneity.">Reactivation of multipotency by oncogenic PIK3CA induces breast tumour heterogeneity.</a> Nature. 525 (7567), 119-123 (2015).</li><li>Tao, L., Xiang, D., Xie, Y., Bronson, R. T., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+p53+loss+in+mouse+luminal+cells+causes+clonal+expansion+and+development+of+mammary+tumours.">Induced p53 loss in mouse luminal cells causes clonal expansion and development of mammary tumours.</a> Nature Communications. 8, 14431 (2017).</li><li>Tao, L., van Bragt, M. P. A., Laudadio, E., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+Tracing+of+Mammary+Epithelial+Cells+Using+Cell-Type-Specific+Cre-Expressing+Adenoviruses.">Lineage Tracing of Mammary Epithelial Cells Using Cell-Type-Specific Cre-Expressing Adenoviruses.</a> Stem Cell Reports. 2 (6), 770-779 (2014).</li><li>Sutherland, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+of+origin+of+small+cell+lung+cancer:+inactivation+of+Trp53+and+Rb1+in+distinct+cell+types+of+adult+mouse+lung.">Cell of origin of small cell lung cancer: inactivation of Trp53 and Rb1 in distinct cell types of adult mouse lung.</a> Cancer Cell. 19 (6), 754-764 (2011).</li><li>Shackleton, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+functional+mammary+gland+from+a+single+stem+cell.">Generation of a functional mammary gland from a single stem cell.</a> Nature. 439 (7072), 84-88 (2006).</li><li>The Cancer Genome Atlas Network. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+molecular+portraits+of+human+breast+tumours.">Comprehensive molecular portraits of human breast tumours.</a> Nature. 490 (7418), 61-70 (2012).</li><li>Nik-Zainal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+life+history+of+21+breast+cancers.">The life history of 21 breast cancers.</a> Cell. 149 (5), 994-1007 (2012).</li><li>Abba, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Molecular+Portrait+of+High-Grade+Ductal+Carcinoma+In+Situ.">A Molecular Portrait of High-Grade Ductal Carcinoma In Situ.</a> Cancer Research. 75 (18), 3980-3990 (2015).</li></ol>

MECS farklı alt popülasyonlarının meme tümörleri inducing için bu yaklaşımın başarısı sadece uygun hücre tipi özgü promotörler (CRE ifade götürmek için) tercih değil, aynı zamanda intraduktal enjeksiyon prosedürü kendisi dayanır. Bu yaklaşımın arkasındaki fikir, enjekte edilen ad-CRE virüslerinin Lümen ile gizlenmiş bir yapı olan duktal ağacında korunduğunu ve bu nedenle, sadece MECs virüslere maruz kalmaktadır ve ad-CRE tarafından enfekte olmaktadır. Meme kanalları içinde sını...

Bu yöntemin genel hedefi fare mg içine ad-CRE bir intraduktal enjeksiyon dayalı yeni bir meme kanseri modelleme yaklaşımı geliştirmektir. CRE/loxP rekombinasyon tabanlı genetik yaklaşım yaygın farelerde insan meme kanseri modeli için kullanılmıştır. CRE/loxP tabanlı meme kanseri fare modellerinin ilk nesil MEC özgü promotörler kontrolü altında CRE-ifade transjenik fareler kullanılarak oluşturulur (örneğin, luminal MECs için Mmtv-CRE ve bazal MECS bir kısmı, WAP-CRE ve Luminal projenatörler ve alveoler luminal MECs için blg-CRE, bazal Için K14-CRE ve luminal MECS bir kısmı1,2,3,4,5)6, 7 , 8 , 9. ancak, bu CRE transjenik hatları CRE ifadesinin uzamsal kontrolünü etkinleştirirken (yani, MECS farklı alt kümelerinde), CRE Ifadesi ve CRE/loxp-aracılı genetik manipülasyon temporal kontrole izin vermez. CRE/loxP tabanlı meme kanseri fare modellerinin ikinci nesil indüklenebilir CRE aktivite/ifade yaklaşımlar (örneğin, CRE-estrojen reseptör Fusion kullanımı [CreER], hangi sadece Tamoxifen yönetimi üzerine CRE/loxP rekombinasyon neden olabilir) kullanmak ve Sonuç olarak, bu genetik araçlar MECS (örneğin, K8-creer-ve K5-creertabanlı modeller) Onkojenik olayların aktivasyonunun hem uzamsal ve temporal kontrolleri izin verir10,11,12 . Meme kanseri fare modellerinin her iki nesilde, CRE veya CreER ifadesi (örn., Krt8, Krt5) götürmek için kullanılan organizatörler olarak da diğer organların epitelyal hücrelerde aktif olabilir (yani, onlar hücre tipi özeldir ama organ özgü değil) veya epitelyal hücreler dışındaki hücre tiplerinde (örn., kemik iliği hematopoetik hücrelerde sızdıran aktivite olan Mmtv), bu yaklaşımlar diğer organlarda (s) istenmeyen kanserlerin gelişmesine yol açabilir. Bu beklenmeyen kanserler etkilenen farelerde kötülüğü neden olursa, bu fareler içinde modelleme meme kanserinin orijinal amacı yasaklanabilir (örn., Mmtv-CRE-Driven Onkojenik olaylar hematopoetik malignite ve fareler erken ölümü neden olabilir , hematopoetik hücrelerde mmtv Organizatör sızıntısı nedeniyle)4.
Burada bir meme kanseri modelleme yaklaşımı farelerde her iki hücre tipi-ve organ özgü manipülasyon geçici olarak kontrollü bir şekilde Onkojenik olayların sağlayan rapor. Bu yaklaşım, fare MGS içine ad-CRE bir intraduktal enjeksiyon dayanmaktadır (ve bu nedenle, organ özgü). CRE ifadesi, Adenoviral vektörü (örn., luminal MECs için Krt8 , bazal MECS için Krt5 , böylece hücre tipi özgüllüğü elde) gömülü farklı MEC alt nüfus özgü promotörler kullanılarak kontrol edilebilir. MGs kanser indüksiyon temporally farklı yaşlarda fareler içine ad-CRE bir enjeksiyon ile kontrol edilebilir, başlayarak 3-4 hafta yaş (pubertal) Yetişkin aşamaya.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>33-gauge needle</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7803-05</td>
			<td>point style 3 blunt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7mm Reflex Clip</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>RF7 CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenovirus, Ad-K5-Cre</td>
			<td>University of Iowa Viral Vector Core</td>
			<td>Ad5-bk5-Cre (VVC-Berns-1547)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenovirus, Ad-K8-Cre</td>
			<td>University of Iowa Viral Vector Core</td>
			<td>Ad5mK8-nlsCre</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>HC800-1GAL</td>
			<td>Prepare to 70% in use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated CD31</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-0311-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated CD45</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-0451-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated TER119</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-5921-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bromophenol Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B0126-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD24-AF-700</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>564237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD24-PE</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>12-0242-83</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD29-APC</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>17-0291-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD29-PE</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>12-0291-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair Remover Lotion</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td>9 Oz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7636-01</td>
			<td>0.025 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodophors</td>
			<td>Betadine</td>
			<td></td>
			<td>10% Povidone-iodine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>NDC 10019-360-40</td>
			<td>1-2.5%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Loxicam</td>
			<td>Norbrook</td>
			<td>NDC 55529-040-10</td>
			<td>5 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lubricant Eye Ointment</td>
			<td>Akorn</td>
			<td colspan="2">NDC 17478-062-35</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting scissors</td>
			<td>Pentair</td>
			<td>9M</td>
			<td>Watchmaker&#39;s Forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting tweezers</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>M5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq 5X Master Mix</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0285L</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling breast cancer via an intraductal injection of cre-expressing adenovirus into the mouse mammary gland

Meme kanseri heterojen bir hastalıktır, muhtemelen kökenleri ve Onkojenik olayların farklı hücreler arasındaki karmaşık etkileşimler nedeniyle. Fare modelleri, bu karmaşık süreçlere bilgi kazanma konusunda enstrümantal. Birçok fare modeli, çeşitli Onkojenik olayların ve menşe hücrelerinin meme tümörijenezde katkıları çalışmak için geliştirilmiştir rağmen, bu modeller genellikle hücre tipi veya Organ spesifik değildir veya bir içinde meme tümörijenezde başlamasını teşvik edemez geçici olarak kontrollü bir şekilde. Burada CRE-ifade adenovirüsü (ad-CRE) fare meme bezleri (MGS) içine intraduktal enjeksiyon dayalı meme kanseri fare modelleri yeni bir tür oluşturmak için bir protokol açıklanmaktadır. Ad-CRE ' nin meme kanallarına doğrudan enjekte edilmesi nedeniyle, bu yaklaşım diğer organlarda herhangi bir istenmeyen kanser indüksiyonu olmaksızın MG spesifik olarak görülmektedir. İntraduktal enjeksiyon prosedürü fareler içinde kendi mg gelişimi farklı aşamalarında yapılabilir (böylece, kanser indüksiyon temporal kontrole izin verir, başlayarak ~ 3-4 hafta yaş). Hücre tipi özgüllüğü, Adenoviral Vektördeki CRE ifadesini götürmek için farklı hücre türüne özgü promotörler kullanılarak elde edilebilir. Biz luminal ve bazal meme epitelyal hücreler (MECS) sıkı CRE/loxp tabanlı genetik manipülasyon Keratin 8 veya Keratin 5 Promoter, sırasıyla ad-CRE bir intraduktal enjeksiyon yoluyla hedeflenebilir olduğunu göstermektedir. Koşullu bir CRE muhabiri (örn., CRE/loxp-indüklenebilir Rosa26-YFP Reporter) ekleyerek, reklam-CRE tarafından hedeflenen MECS ve onlardan türeyen tümör hücreleri, intraduktal enjeksiyon sonrasında muhabir-pozitif hücreleri takip ederek takip edilebilir.

R26Y ve Trp53L alelleri için temsilci PCR Genotipleme sonuçları Şekil 1' de gösterilmiştir.
Her ne kadar, prensip olarak, tüm 10 MGS intraduktal enjeksiyon prosedürü tabi olabilir, pratikte, iki dördüncü inguinal MGS genellikle enjeksiyon için seçilir, onların kolay erişilebilirlik ve daha büyük mg boyutları nedeniyle (Şekil 2</s...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland Video at JoVE.com

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland Video (Video) | JoVE

Bu protokol amacı yeni bir meme kanseri modelleme yaklaşımı CRE-ifade adenovirüsü fare meme bezleri içine intraduktal enjeksiyon dayalı açıklamak için. Bu yaklaşım, Onkojenik olayların hem hücre tipi hem de Organ spesifik manipülasyon geçici olarak kontrollü bir şekilde sağlar.

CRE-ifade Adenovirus fare mammary bezi içine bir Intraductal enjeksiyon yoluyla meme kanseri modelleme

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are ...

Bu protokol araştırmacılar meme epitel hücrelerinin farklı alt kümelerinden insan meme kanseri gelişimini özetlemek için fare modeli yeni bir tür oluşturmada yardımcı olacaktır. Bu teknik araştırmacılar bir hücre tipi belirli bir şekilde ve kapsamlı fare ıslahı için bir ihtiyaç olmadan gelişimsel evre doku meme kanseri fare modelleri oluşturmak için izin verir. Bu yordamı başlatmak için metin protokolünde açıklandığı gibi floxed fareleri oluşturun, koruyun ve büyütün.Fareyi ameliyatın yapılacağı yerden ayrı bir alana getirin. Bir ayak tutam yaparak anestezi doğruladıktan sonra, cerrahi işlem için hazırlamak için kilogram başına beş miligram bir dozda analjezi subkutan olarak Meloxicam enjekte. Epilasyon kremi birkaç damla uygulayarak meme cerrahi site ortaya çıkarmak.Yumuşak kağıt havlu kullanarak aşırı krem ve gevşek saç çıkarın. Meme uçlarının zarar görmesini önlemek için tıraş önerilir. Cerrahi bölgeyi ilk önce %70 alkol le iyodophors ile dezenfekte edin ve son uygulama scrub iodophors ile sona erer.Bunu çalışma alanının merkezinden çevreye doğru bir gazlı bez sünger ivedilik veya pamuk uçlu aplikatör kullanarak dairesel bir hareketle yapın. Döngüyü 3-4 kez tekrarlayın. Cerrahi işlem boyunca aseptik teknikler kullanın.İki dördüncü inguinal meme bezleri arasında yaklaşık bir santimetre uzunluğunda cilt üzerinde bir kesi sitesi olun. Dikkatle meme duktal ağaç görsel olarak parietal periton deri flep ayırın. Dikkatle bir mikrodiskes makas kullanarak yakındaki herhangi bir cilt kesmeden dış meme kaldırmak için saatçilerin forceps ile meme tutun.25 mikrolitrehamilton şırıngasına yaklaşık 3-5 mikrolitre Cre-adenovirüs enjeksiyon karışımı yükleyin ve 33 gauge metal göbek iğnesi yapıştırın. Karışımda bulunan mavi boyaya göre şırıngadaki enjeksiyon karışımının hacmini tahmin edin. İnce kavisli bir cıvık cıvık ile cilt kapağının kenarını hafifçe tutun ve meme kanalı ağacına mavi boyanın yayılmasını izlerken Cre-adenovirus enjeksiyon karışımını yavaşça meme ucuna enjekte edin.Duktal lümenin zarar görmesini önlemek için enjeksiyon hızını mümkün olduğunca yavaş koruyun. Başarılı bir intradüktal enjeksiyon stroma bölmesi içine sızmadan tüm duktal ağaç yayılmış enjekte sıvılar tarafından gösterilir. Enjekte edilen sıvının herhangi bir sızıntısını önlemek için iğneyi meme ucundan yavaşça çekin.Meme bezinin distal tarafını veya enjekte edilen meme ucunun çevresini inceleyin. Burada gösterildiği gibi yakındaki stroma difüzyon Boya başarılı bir intradüktal enjeksiyon yerine bir meme yağ pedi enjeksiyonu gösterir. Derideki cerrahi yaraları yara klipsleri ile kapatın.Fareyi anesteziden çıkarın ve iyileşmek için temiz bir kafesin içine bir ısıtma yastığına yerleştirin. Metin protokolünde açıklandığı gibi meme tümörü gelişimini izleyin. İntraduktal enjeksiyonun başarıyla yapıldığı en genç dişi fareler yaklaşık üç haftalık farelerdir.Çoğu meme tümörü indüksiyon deneylerinde genç yetişkin dişi fareler kullanılmaktadır. Enjeksiyon karışımıdaha büyük bir hacim ile intraduktal enjeksiyon alveoler hücreleri hedef erken ve orta gebelik sırasında dişi farelerde yapılabilir. Mammary tümör indüksiyonu için farklı meme epitel hücre alt popülasyonlarını hedeflemek için, enjeksiyon için farklı mammary epitel hücre alt kümesi spesifik organizatörlerin kontrolü altında Cre-adenovirüsler kullanıldı.Örneğin krem-adenovirüs keratin kontrolü altında 8 organizatörü luminal meme epitel hücrelerini hedeflemek için kullanılmıştır. Keratin kontrolü altında Cre-adenovirus 5 organizatörü sadece bazal meme epitel hücrelerinin genetik işaretleme yol açan bazal soy hedeflenmiştir. Bir ROSA26-YFP muhabiri ile bir kadın P53 floxed homozigot fareler için, keratin intraduktal enjeksiyon 8 Cre-adenovirus enjeksiyondan birkaç ay sonra meme tümörlerinin gelişmesine yol açtı.Koşullu R26-Y muhabirinin dahil edilmesi nedeniyle tümör epitel hücreleri tipik olarak YFP ile işaretlendi ve akış sitometrisi ile saptandı. Hücreler daha fazla analiz için YFP pozitif hücrelerin akış sıralama ile zenginleştirilmiş olabilir. Bu prosedürü çalışırken hatırlanması gereken en önemli şey küçük bir enjeksiyon hacmi kullanmak, yavaş yavaş enjekte etmek ve aynı zamanda yavaş yavaş iğne çekmek vardır.Bu prosedürü takiben, hedeflenen YFP pozitif meme epitelyal hücrelerinin, enjekte edilen bezin akış sitometrisi veya ko-immünofülans boyama ile pre-malign ve kanser evrelerine ilerlemesini izleyebilirsiniz. Bu teknik, araştırmacıların meme kanserinin kökeni ne kadar farklı otojenik olaylara nasıl tepki verdiklerini ve kanser hücrelerine nasıl ilerlediklerini incelemelerinin önünü açacaktır. Hem adenovirüs hem de enjeksiyon iğnesi potansiyel olarak tehlikelidir.Bu nedenle, intradüktal enjeksiyon yaparken her zaman eldiven takmalı ve güvenlik iğneleri ve şırıngalar kullanılmalıdır.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis Video (Video) | JoVE

Mikroskopik Kemik Metastazı Verimli ve Seçici Modelleme için intra-iliak arter Enjeksiyon

Intra-iliac artery (IIA) injection is an efficient approach to introduce metastatic lesions of various cancer cells in animals. Compared to the widely ...

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures Video (Video) | JoVE

İşlevsel Genomik Tarama kullanılması Kanser Hücre Sfero Kültürleri Potansiyel Yeni İlaç Hedefleri Belirlemek İçin

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis Video (Video) | JoVE

Intracarotid Kanser Hücre Enjeksiyon Beyin metastaz Fare modelleri üretmek için

Metastasis, the spread and growth of malignant cells at secondary sites within a patient&#39;s body, accounts for &#62; 90% of cancer-related mortality. ...

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification Video (Video) | JoVE

Lezyon Tanımlaması için Meme Bandı Bütün Dağılımları

Normal mammary gland development may be altered by exposure to environmental toxicants and pharmaceutical products, excessive exposure to hormones, and ...

Modeling Osteosarcoma Using Li-Fraumeni Syndrome Patient-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Modeling Osteosarcoma Using Li-Fraumeni Syndrome Patient-derived Induced Pluripotent Stem Cells Video (Video) | JoVE

Li-Fraumeni sendromu hasta kaynaklı indüklenmiş Pluripotent kök hücreler kullanılarak osteosarkom modelleme

Li-Fraumeni syndrome (LFS) is an autosomal dominant hereditary cancer disorder. Patients with LFS are predisposed to a various type of tumors, including ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad Video (Video) | JoVE

Fareler meme yağ yastığı içine meme kanser hücrelerinin Orthotopic enjeksiyon

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad Video (Video) | JoVE

Interscapular Beyaz Yağ Ped içine Rat Mammary Epitel Hücre Nakli

As early as the 1970s, researchers have successfully transplanted mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of rats. Grafting mammary ...

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging Video (Video) | JoVE

İntrakraniyal Enjeksiyon ve Manyetik Rezonans Görüntüleme Ile Beyin Metastazlarının Modellenmesi

Metastatic spread of cancer is an unfortunate consequence of disease progression, aggressive cancer subtypes, and/or late diagnosis. Brain metastases are ...

Modeling Breast Cancer in Human Breast Tissue using a Microphysiological System

Modeling Breast Cancer in Human Breast Tissue using a Microphysiological System Video (Video) | JoVE

Mikrofizyolojik Sistem Kullanarak İnsan Meme Dokusunda Meme Kanseri Modellemesi

Breast cancer (BC) remains a leading cause of death for women. Despite more than $700 million invested in BC research annually, 97% of candidate BC drugs ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells Video (Video) | JoVE

İnflamatuar Meme Kanseri Hücrelerinin Kuyruk-Ven Enjeksiyonu ile Beyin Metastazının Modellenmesi

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...