Name: a melanoma patient-derived xenograft model
Uploaded: 2019-05-20T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model at JoVE.com

Forfatterne takker Wistar Institute Animal Facility, mikroskopi anlegg, histologi Facility, og Research Supply Center. Denne studien ble finansiert delvis av tilskudd fra U54 (CA224070-01), SPORE (CA174523), p01 (CA114046-07), Dr. Miriam og Sheldon G. Adelson Medical Research Foundation, og melanom Research Foundation.

Følgende dyre protokoller følger retningslinjene for The Wistar Institute ' s humane etikk komité og dyr omsorg retningslinjer.
1. melanom tumor vev samling
<ol><li>Samle tumor vev (betegnet passasje 0) fra melanom pasienter ved en av følgende kirurgi eller biopsi metoder.<ol>
<li>For kirurgisk forbruker av vev, opprettholde minst 1 g vev (resect metastaser og primære lesjoner) i transport lagringsmedier (RPMI 1640 + 0,1% fungizone + 0,2% Gentamicin) ved 4 ° c eller på is.</li>
		<li>...

<ol>
	<li>Garman, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+Genomic+Characterization+of+462+Melanoma+Patient-Derived+Xenografts,+Tumor+Biopsies,+and+Cell+Lines.">Genetic and Genomic Characterization of 462 Melanoma Patient-Derived Xenografts, Tumor Biopsies, and Cell Lines.</a> Cell Reports. 21 (7), 1936-1952 (2017).</li><li>Krepler, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Comprehensive+Patient-Derived+Xenograft+Collection+Representing+the+Heterogeneity+of+Melanoma.">A Comprehensive Patient-Derived Xenograft Collection Representing the Heterogeneity of Melanoma.</a> Cell Reports. 21 (7), 1953-1967 (2017).</li><li>Davies, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+of+the+BRAF+gene+in+human+cancer.">Mutations of the BRAF gene in human cancer.</a> Nature. 417 (6892), 949-954 (2002).</li><li>Paraiso, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recovery+of+phospho-ERK+activity+allows+melanoma+cells+to+escape+from+BRAF+inhibitor+therapy.">Recovery of phospho-ERK activity allows melanoma cells to escape from BRAF inhibitor therapy.</a> British Journal Of Cancer. 102 (12), 1724-1730 (2010).</li><li>Long, G. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-Term+Outcomes+in+Patients+With+BRAF+V600-Mutant+Metastatic+Melanoma+Who+Received+Dabrafenib+Combined+With+Trametinib.">Long-Term Outcomes in Patients With BRAF V600-Mutant Metastatic Melanoma Who Received Dabrafenib Combined With Trametinib.</a> Journal of Clinical Oncology. 36 (7), 667-673 (2018).</li><li>Hidalgo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+xenograft+models:+an+emerging+platform+for+translational+cancer+research.">Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research.</a> Cancer Discovery. 4 (9), 998-1013 (2014).</li><li>Hausser, H. J., Brenner, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+instability+of+Saos-2+cells+in+long-term+culture.">Phenotypic instability of Saos-2 cells in long-term culture.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 333 (1), 216-222 (2005).</li><li>Fiebig, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+three+human+small+cell+lung+cancer+models+in+nude+mice.">Development of three human small cell lung cancer models in nude mice.</a> Recent Results In Cancer Research. 97, 77-86 (1985).</li><li>Izumchenko, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+xenografts+effectively+capture+responses+to+oncology+therapy+in+a+heterogeneous+cohort+of+patients+with+solid+tumors.">Patient-derived xenografts effectively capture responses to oncology therapy in a heterogeneous cohort of patients with solid tumors.</a> Annals of Oncology. 28 (10), 2595-2605 (2017).</li><li>Shi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acquired+resistance+and+clonal+evolution+in+melanoma+during+BRAF+inhibitor+therapy.">Acquired resistance and clonal evolution in melanoma during BRAF inhibitor therapy.</a> Cancer Discovery. 4 (1), 80-93 (2014).</li><li>Monsma, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanoma+patient+derived+xenografts+acquire+distinct+Vemurafenib+resistance+mechanisms.">Melanoma patient derived xenografts acquire distinct Vemurafenib resistance mechanisms.</a> American Journal of Cancer Research. 5 (4), 1507-1518 (2015).</li><li>Das Thakur, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+vemurafenib+resistance+in+melanoma+reveals+a+strategy+to+forestall+drug+resistance.">Modelling vemurafenib resistance in melanoma reveals a strategy to forestall drug resistance.</a> Nature. 494 (7436), 251-255 (2013).</li><li>Meehan, T. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDX-MI:+Minimal+Information+for+Patient-Derived+Tumor+Xenograft+Models.">PDX-MI: Minimal Information for Patient-Derived Tumor Xenograft Models.</a> Cancer Research. 77 (21), 62-66 (2017).</li><li>Gao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+screening+using+patient-derived+tumor+xenografts+to+predict+clinical+trial+drug+response.">High-throughput screening using patient-derived tumor xenografts to predict clinical trial drug response.</a> Nature Medicine. 21 (11), 1318-1325 (2015).</li><li>De La Rochere, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+Mice+for+the+Study+of+Immuno-Oncology.">Humanized Mice for the Study of Immuno-Oncology.</a> Trends in Immunology. 39 (9), 748-763 (2018).</li></ol>

Vi har her beskrevet generere PDX modeller av melanom med pasient vev avledet fra primær og metastatisk svulster, kjerne biopsier, og FNAs. Når direkte engrafted til NSG-mus, svulster presentere lignende morfologiske, genomisk, og biologiske egenskaper til de observert i pasienten. I tilfelle når bare en liten mengde vev er tilgjengelig for etterforskere, som ofte skjer med FNAs, gjør PDX teknikken for utvidelse av tumor vev for DNA, RNA, og protein karakterisering, samt for terapi forsøk for å tillate prekliniske ...

Prekliniske modeller er avgjørende for alle aspekter av translational kreftforskning, inkludert sykdoms karakterisering, oppdagelse av nyttige sårbarheter unik for kreft versus normale celler, og utvikling av effektiv terapier som utnytter disse sikkerhetsproblemene for å øke den generelle overlevelsen av pasientene. I melanom feltet, titusenvis av cellelinje modeller har blitt sterkt benyttet for narkotika screening, med > 4000 bidratt av vår gruppe alene (WMXXX-serien). Disse cellelinje modeller ble avledet fra melanom pasienter med ulike former for hud melanom (dvs. acral, uveal, og overfladisk spredning) og diverse genotyper (dvs. BRAFV600-mutant og neuroblastom RAS viral diagnostisk homologe [ NRAS Q61R-mutant]), som spenner over spekteret av sykdom som finnes i klinikken1,2.
Utvetydig, den mest vellykkede, målrettede terapi strategi i melanom feltet har dukket opp fra 1) den genomisk karakterisering av pasientens svulster identifisere BRAF mutasjoner i ~ 50% av melanomer3 og fra 2) prekliniske etterforskning utnytte melanom cellelinje modeller4. Den BRAF/MEK inhibitor kombinasjon var Food and Drug Administration (FDA)-godkjent i 2014 for behandling av pasienter som melanomer havnen aktivere BRAFV600E/K mutasjoner og har en > 75% responsrate5. Til tross for denne innledende effekten, oppstår motstanden raskt i nesten alle tilfeller på grunn av mangfoldige indre og ervervet motstands mekanismer og intratumoral heterogenitet. Dessverre, cellelinje modeller ikke recapitulate representative biologiske heterogenitet når vokst i to-dimensjonal kultur i plast fartøy, som masker deres klinisk prediktiv potensial når etterforskere forsøker å eksperimentelt bestemme behandling som kan være effektive hos pasienter med en bestemt form eller genotype av melanom6. Forstå hvordan du best modell pasienten intratumoral heterogenitet vil tillate etterforskerne å bedre utvikle terapeutiske modaliteter som kan drepe terapi-resistente subpopulasjoner at stasjonen svikt til dagens standard-of-Care terapier.
Paramount til begrenset prediktiv verdi av cellelinje modeller er hvordan de er i utgangspunktet etablert. Irreversible forandringer oppstår i tumor klonal landskapet når en enkelt celle suspensjon av en pasientenes svulst er dyrket på todimensjonale, plast vev kultur fartøy, inkludert endringer i proliferativ og invasiv potensial, eliminering av spesifikke subpopulasjoner, og endring av genetisk informasjon7. Xenotransplantater inn mus av disse melanom cellelinje modeller representerer den mest brukte in vivo plattform for prekliniske studier; imidlertid lider denne strategien også fra de fattige recapitulation av komplekse tumor heterogenitet observert klinisk. For å overvinne denne brist, har det vært en økende interesse i å innlemme mer sofistikerte prekliniske modeller av melanom, inkludert PDX modell. PDX-modellene har blitt benyttet i > 30 år, med banebrytende studier hos pasienter med lungekreft som viser samsvar mellom pasientens respons på cytotoksisk midler og responsen til PDX-modellen som stammer fra samme pasient8. Nylig har det vært en stasjon for å utnytte PDX modeller som verktøyet for valg for prekliniske undersøkelser både i bransjen og i akademiske sentre. PDX-modeller, på grunn av sin overlegne recapitulation av tumor heterogenitet hos mennesker, er mer klinisk relevante å bruke i behandlings optimalisering innsats enn cellelinje xenotransplantater9. I melanom, det er enorme hekk som sløv den terapeutiske forvaltningen av avansert sykdom10. Klinisk relevante PDX modeller har blitt brukt til å modellere klinisk motstand og identifisere terapeutiske strategier med klinisk tilgjengelige agenter for å behandle terapi-resistente svulster11,12. Kort sagt, protokollen som presenteres her for å generere PDX modeller krever subkutan implantation av ferskt vev fra primær eller metastatisk melanomer (samlet inn av biopsi eller kirurgi) til NOD/scid/IL2-reseptor null (NSG) mus. Ulike variasjoner i metodisk tilnærming brukes av ulike grupper; Imidlertid finnes en fundamental kjerne13.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1104px;" width="1103">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:352px;">1 M Hepes</td>
			<td style="width:241px;">SIGMA-ALDRICH CORPORATION</td>
			<td style="width:344px;">Cat # H0887-100ML</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">100x PenStrep&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Cat # 15140163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">1x HBSS-/- (w/o Ca++ or Mg++)</td>
			<td>MED</td>
			<td>Cat # MT21-023-CV</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:62px;">2.5% Trypsin&#160;</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH CORPORATION</td>
			<td>Cat # T4549-100ML</td>
			<td>10 mL aliquots stored at &#8211;20oC</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">BSA</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH CORPORATION</td>
			<td>Cat # A9418-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Chlorhexidine</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Cat# 50-118-0313</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Collagenase IV (2,000 u/mL)</td>
			<td>Worthington&#160;</td>
			<td>Cat #4189</td>
			<td>make up in HBSS-/- from Collagenase IV powder stock (Worthington #4189, u/mg indicated on bottle and varies with each lot); freeze 1</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DMSO</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH CORPORATION</td>
			<td>Cat # C6295-50ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DNase</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH CORPORATION</td>
			<td>Cat # D4527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">EGTA (ethylene glycol bis(2-aminoethyl ether)-N,N,N&#8217;N&#8217;-tetraacetic acid)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>Cat # 324626.25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">FBS</td>
			<td>INVITROGEN LIFE TECHNOLOGIES</td>
			<td>Cat # 16000-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fungizone</td>
			<td>INVITROGEN LIFE TECHNOLOGIES</td>
			<td>Cat # 15290-018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Gentamicin</td>
			<td>FISHER SCIENTIFIC</td>
			<td>Cat # BW17518Z</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Isoflurane</td>
			<td>HENRY SCHEIN ANIMAL HEALTH</td>
			<td>Cat # 050031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Leibovitz&#39;s L15 media&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Cat # 21083027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>Cat # 354230</td>
			<td>Artificial extracellular matrix</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Meloxicam</td>
			<td>HENRY SCHEIN ANIMAL HEALTHRequisition # ::Henry Schein</td>
			<td>Cat # 025115</td>
			<td>1-5mg/kg, as painkiller</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NOD/SCID/IL2-receptor null (NSG) Mice</td>
			<td>The Wistar Institute, animal facility</td>
			<td></td>
			<td>breeding</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PVA (polyvinyl alcohol)</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH CORPORATION</td>
			<td>Cat # P8136-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI 1640 Medium (Mod.) 1X with L-Glutamine</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Cat# MT10041CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scalpel</td>
			<td>Feather</td>
			<td>Cat # 2976-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Virkon</td>
			<td>GALLARD-SCHLESINGER IND</td>
			<td>Cat # 222-01-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Wound clips</td>
			<td>MikRon</td>
			<td>Cat #427631</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a melanoma patient-derived xenograft model

Akkumulere bevis tyder på at molekylære og biologiske egenskaper varierer i melanom celler dyrket i tradisjonelle to-dimensjonale vev kultur fartøy versus in vivo i menneskelige pasienter. Dette er på grunn av flaskehalsen utvalg av klonal bestander av melanom celler som kan robust vokse in vitro i fravær av fysiologiske forhold. Videre svar på behandling i todimensjonale vev kulturer generelt ikke reflekterer trofast svar på behandling hos melanom pasienter, med de fleste kliniske studier unnlater å vise effekten av terapeutiske kombinasjoner vist å være effektive i Vitro. Selv om xenografting av melanom celler til mus gir den fysiologiske in vivo kontekst fraværende fra to-dimensjonale vev kultur analyser, melanom cellene som brukes for engraftment har allerede gjennomgått flaskehals utvalg for celler som kan vokse under todimensjonale tilstander når cellelinjen ble opprettet. Den irreversible forandringer som oppstår som en konsekvens av flaskehalsen inkluderer endringer i vekst og invasjon egenskaper, samt tap av spesifikke subpopulasjoner. Derfor, modeller som bedre recapitulate den menneskelige tilstand in vivo kan bedre forutsi terapeutiske strategier som effektivt øker den generelle overlevelse av pasienter med metastatisk melanom. Den pasient-avledet xenograft (PDX) teknikken innebærer direkte implantation av tumorceller fra den menneskelige pasienten til en mus mottaker. På denne måten tumorceller er konsekvent dyrket under fysiologiske påkjenninger i vivo og aldri gjennomgår to-dimensjonal flaskehals, som bevarer den molekylære og biologiske egenskaper til stede når svulsten var i den menneskelige pasient. Kjente, PDX modeller avledet fra organ nettsteder av metastaser (dvs. hjernen) vise lignende metastatisk kapasitet, mens PDX modeller avledet fra terapi naive pasienter og pasienter med ervervet resistens mot terapi (dvs. BRAF/MEK inhibitor terapi) display lignende følsomhet for terapi.

Tumor vev for melanom PDX-modeller kan komme fra en rekke ulike kilder, og kan også behandles i henhold til vekst dynamikken i enkelte modeller og ønsket bruk av PDX-vevet. Prioriteten for å etablere en PDX-modell er å ha tilstrekkelig materiale til banken for fremtidig bruk og DNA for karakterisering (figur 1).
Når tilstrekkelig materiale er banken, kan tumor vev utvides i en av tre viktigste metodene for å vokse nok svulst til å utføre en formell terapi ...

Watch this Scientific Journal Video about A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model at JoVE.com

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

Pasient-avledet xenograft (PDX) modeller mer robust recapitulate melanom molekylær og biologiske egenskaper og er mer prediktiv behandling respons i forhold til tradisjonelle plast vev kultur-baserte analyser. Her beskriver vi vår standard drifts protokoll for etablering av nye PDX-modeller og karakterisering/eksperimentering av eksisterende PDX-modeller.

En melanom pasient-avledet Xenograft modell

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

PDX har revolusjonert kreft eksperimentelle prekliniske studier. Vi kan nå etterligne, i laboratoriet, hva som skjer hos pasientene. Og nå kan vi jobbe med hvordan vi kan overvinne motstanden og hvordan vi på lang sikt kan øke pasientenes overlevelse.Demonstrere prosedyren vil være Min Xiao. For å begynne, overfør tidligere samlet melanomvev til en steril petriskål. Arbeide med kirurgisk saks, skalpellblad og tang, først fjerne normalt vev fra det normale vevet så mye som mulig.Og fjern deretter det nekrotiske vevet identifisert av blek hvitt vev som ligger sentralt i svulsten. Bruk deretter en skalpell til å dele en innledende tumorbit i omtrent like deler for kirurgisk museimplantasjon. Hvis tumorvevet er for vanskelig for mekanisk dissosiasjon, bruk en skalpell til å hakke tumorbitene så fint som mulig for å danne en slurry.Overfør slammet til et 50 ml ml kald Hanks balanserte saltløsning uten kalsium- og magnesiumioner. Sentrifuge på 220 ganger g i fire minutter ved fire grader Celsius. Etter å ha fjernet det overnaturlige, re-suspendere slurry i 10 milliliter varmet, frisk fordøye media per ett gram tumorvev.Plasser røret i et 37 grader Celsius vannbad i 20 minutter og bland kraftig hvert femte minutt med en engangspipette. Vask slammet med opptil 50 milliliter HBSS, sentrifuge ved 220 ganger g i fire minutter ved fire grader Celsius, og fjern deretter supernatanten. Tilsett fem milliliter forhåndsoppvarmet TEG-buffer per ett gram tumorvev, rist for å forsiktig suspendere, og plasser røret ved 37 grader Celsius i to minutter, uten blanding.For å slukke trypsin, tilsett minst ett likt volum av kaldt fargemedier og sentrifuge på 220 ganger g i fire minutter ved fire grader Celsius. Etter å ha fjernet det overnaturante, legg til 10 milliliter flekker av fargingsmedier per ett gram tumorvev, og re-suspendere pellet ved å pipettering opp og ned. Filtrer den gjennom en 40 mikrometercellesil for å få en enkelt cellesuspensjon for museinjeksjon.For å implantere kirurgisk eksisjon eller kirurgisk biopsivev, barberer du først håret fra nedre del av NSG seks til åtte uker gamle bedøvede mus, og etterlater et ca. 1,5 centimeter til tre centimeter område uten hår. Forbered tumorbiter, og del tumorslam i en Petri i individuelle hauger for kirurgisk implantasjon. Ved hjelp av et skalpellblad, gjør et omtrent fem millimeter langt snitt på midten av musens bak.Med ett par tang, livet opp huden på siden av snittet overfor operatøren. Med saks i den annen side, skille huden fra muskellaget ved å forsiktig kutte fascial membranen med små saks kutt, og dermed skape en lomme for svulstvevet. Bruk et skalpellblad til å plukke opp en tumor chuck, samt en individuell haug av tumor slurry vev, og forsiktig plassere vevet i den opprettede lommen.Tilsett deretter 100 mikroliter kunstig ekstracellulær matrise på tumorvevshaugen i lommen. Bruk to par tang, trekk opp snittet i begge ender slik at sårkantene kommer tett sammen. Påfør deretter en eller to sårklemmer for å lukke såret.Subkutant injisere en til fem milligram per kilo smertestillende. Når helbredelse er helt, fjern sårklemmene etter omtrent syv dager. Overvåk mus en gang i uken for å se etter håndgripelige svulster.Når svulster når et ønsket volum, bruk kirurgiske tang for å løfte huden ved siden av svulsten i den eutaniserte musen og lage et horisontalt kutt ved hjelp av buet saks. Bruk en stump separasjonsteknikk for å mobilisere huden på begge sider av svulsten og over svulsten, og eksponere svulsten. Bruk saks og et skalpellblad for å skille svulsten fra fascia.Klipp ut svulsten og overfør den til en steril petriskål. Skjær svulsten i små biter og fjern nekrotisk vev fra svulsten. For å banke tumorvev for fremtidig implantasjon, ta to til tre små tumorstykker og hakke dem i stykker mindre enn en etter en millimeter.Overfør alt hakket vev til en to milliliter kryogen ondskap. Tilsett en milliliter frysemedier og bland godt. Legg hetteglassene i en forhåndskjølt isopropanolbasert cellefrysingsbeholder på tørris, oppbevar beholderen i en minus 80 grader Celsius fryser over natten, og overfør deretter hetteglassene til flytende nitrogenlagring.For å snappe frysevev for nedstrøms analyser, legg tumorvevsbitene i et kryogent hetteglass, legg kryogen sjofel i flytende nitrogen umiddelbart, og lagre hetteglassene i en minus 80 grader Celsius fryser. Når tre forskjellige metoder for voksende tumorvev ble sammenlignet, var encellesuspensjon av tumorceller ved bruk av enzymatisk fordøyelse mest vellykket. Foruten å tillate raskere tumorvekst, var det også tilstrekkelig for en innledende svulst å bli utvidet til 10 til 20 mus, mens tumor chuck og slurry metoden kan bare utvides til fem til 10 mus.Melanom pasientavledede xenograft modeller reflekterer ofte legemiddelfølsomheten pasienten viste når den er på terapi. En xenograft avledet fra melanompasient som i utgangspunktet reagerte på en BRAF-hemmer, men til slutt tilbakefall, viste også innledende følsomhet for BRAF proteinhemming, pluss MEK kinasehemmer, men svulstene til slutt tilbakefall. Det er viktig å ta vare når du forbereder PDX vev for banktjenester, da dette vil sikre suksess i fremtidige PDX-utvidelser, terapistudier, samt karakterisering.Med PDX-materiale er enkeltcellede RNA-sekvensering, sekvensering av hele eksom og proteomisk karakterisering blant de mange metodene laboratoriet vårt utnytter for å spre terapiresistens. PDX-teknikken gjør det mulig for forskere å undersøke behandlingsresistens ved hjelp av tumorceller som bedre rekahaler tumorbiologien hos en menneskelig pasient i forhold til tradisjonelle kreftmodeller dyrket på plast. Denne fordelen gir mer prediktiv innsikt.Forskere bør alltid ta vare og bruke biosikkerhet nivå to forholdsregler når du håndterer tumorvev avledet fra en menneskelig pasient.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Development and Maintenance of a Preclinical Patient Derived Tumor Xenograft Model for the Investigation of Novel Anti-Cancer Therapies

Utvikling og vedlikehold av en Preklinisk Pasient Avledet Tumor Xenotransplantat Modell for Undersøkelse av Novel Anti-Cancer Therapies

Patient derived tumor xenograft (PDTX) models provide a necessary platform in facilitating anti-cancer drug development prior to human trials. Human tumor ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

Svulst Engraftment i en Xenograft musemodell av menneskelig mantelen celle lymfomer

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Establishment of a Primary Culture of Patient-derived Soft Tissue Sarcoma

Etablering av en primære kultur for pasient-avledede bløtvev sarkom

Soft tissue sarcomas (STS) represent a spectrum of heterogeneous malignancies with a difficult diagnosis, classification, and management. To date, more ...

A 3D Organotypic Melanoma Spheroid Skin Model

3D Organotypic melanom Spheroid huden modell

Malignant transformation of melanocytes, the pigment cells of human skin, causes formation of melanoma, a highly aggressive cancer with increased ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Pasient-avledet Orthotopic Xenograft modeller for Human Urotelialt Cell kreft og tykktarmskreft tumor vekst og spontan metastasering

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Patient-derived Heterogeneous Xenograft Model of Pancreatic Cancer Using Zebrafish Larvae as Hosts for Comparative Drug Assessment

Pasient-avledet heterogen Xenograft modell av bukspyttkjertelen Cancer bruke sebrafisk larver som verter for sammenlignende Drug Assessment

Patient-derived tumor xenograft (PDX) and cell-derived tumor xenograft (CDX) are important techniques for preclinical assessment, medication guidance and ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Etablering av magekreft pasient-avledet Xenograft modeller og primær celle Lines

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Generation of a Liver Orthotopic Human Uveal Melanoma Xenograft Platform in Immunodeficient Mice

Generering av en Liver Orthotopic Human uveal melanom Xenograft Platform i Immunodeficient mus

In recent decades, subcutaneously implanted patient-derived xenograft tumors or cultured human cell lines have been increasingly recognized as more ...

The Establishment and Utilization of Patient Derived Xenograft Models of Central Nervous System Metastasis

Etablering og utnyttelse av pasientavledede xenograftmodeller av metastaser i sentralnervesystemet

The development of novel therapies for central nervous system (CNS) metastasis has been hindered by the lack of preclinical models that accurately ...

Assessment of Chimeric Antigen Receptor T Cell-Associated Toxicities Using an Acute Lymphoblastic Leukemia Patient-Derived Xenograft Mouse Model

Vurdering av kimær antigenreseptor T-celleassosiert toksisitet ved bruk av en akutt lymfoblastisk leukemi pasientavledet xenograftmusemodell

Chimeric antigen receptor T (CART) cell therapy has emerged as a powerful tool for the treatment of multiple types of CD19+ malignancies, which has led to ...