Name: a melanoma patient-derived xenograft model
Uploaded: 2019-05-20T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model at JoVE.com

Авторы благодарят Wistar институт животных фонда, микроскопии фонда, гистотехнологии фонда, и научно-исследовательский центр снабжения. Это исследование было частично профинансировано грантами U54 (CA224070-01), SPORE (CA174523), P01 (CA114046-07), Доктором Мириам и Шелдоном Г. Адельсоном, Фондом медицинских исследований меланомы.

Следующие протоколы животных следуют руководящим принципам комитета по гуманной этике Института Вистара и руководящим принципам по уходу за животными.
1. Сбор опухолевых тканей меланомы
<ol><li>Соберите опухолевую ткань (термин "переход 0") у пациентов с меланомой одним из ...

<ol>
	<li>Garman, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+Genomic+Characterization+of+462+Melanoma+Patient-Derived+Xenografts,+Tumor+Biopsies,+and+Cell+Lines.">Genetic and Genomic Characterization of 462 Melanoma Patient-Derived Xenografts, Tumor Biopsies, and Cell Lines.</a> Cell Reports. 21 (7), 1936-1952 (2017).</li><li>Krepler, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Comprehensive+Patient-Derived+Xenograft+Collection+Representing+the+Heterogeneity+of+Melanoma.">A Comprehensive Patient-Derived Xenograft Collection Representing the Heterogeneity of Melanoma.</a> Cell Reports. 21 (7), 1953-1967 (2017).</li><li>Davies, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+of+the+BRAF+gene+in+human+cancer.">Mutations of the BRAF gene in human cancer.</a> Nature. 417 (6892), 949-954 (2002).</li><li>Paraiso, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recovery+of+phospho-ERK+activity+allows+melanoma+cells+to+escape+from+BRAF+inhibitor+therapy.">Recovery of phospho-ERK activity allows melanoma cells to escape from BRAF inhibitor therapy.</a> British Journal Of Cancer. 102 (12), 1724-1730 (2010).</li><li>Long, G. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-Term+Outcomes+in+Patients+With+BRAF+V600-Mutant+Metastatic+Melanoma+Who+Received+Dabrafenib+Combined+With+Trametinib.">Long-Term Outcomes in Patients With BRAF V600-Mutant Metastatic Melanoma Who Received Dabrafenib Combined With Trametinib.</a> Journal of Clinical Oncology. 36 (7), 667-673 (2018).</li><li>Hidalgo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+xenograft+models:+an+emerging+platform+for+translational+cancer+research.">Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research.</a> Cancer Discovery. 4 (9), 998-1013 (2014).</li><li>Hausser, H. J., Brenner, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+instability+of+Saos-2+cells+in+long-term+culture.">Phenotypic instability of Saos-2 cells in long-term culture.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 333 (1), 216-222 (2005).</li><li>Fiebig, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+three+human+small+cell+lung+cancer+models+in+nude+mice.">Development of three human small cell lung cancer models in nude mice.</a> Recent Results In Cancer Research. 97, 77-86 (1985).</li><li>Izumchenko, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+xenografts+effectively+capture+responses+to+oncology+therapy+in+a+heterogeneous+cohort+of+patients+with+solid+tumors.">Patient-derived xenografts effectively capture responses to oncology therapy in a heterogeneous cohort of patients with solid tumors.</a> Annals of Oncology. 28 (10), 2595-2605 (2017).</li><li>Shi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acquired+resistance+and+clonal+evolution+in+melanoma+during+BRAF+inhibitor+therapy.">Acquired resistance and clonal evolution in melanoma during BRAF inhibitor therapy.</a> Cancer Discovery. 4 (1), 80-93 (2014).</li><li>Monsma, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanoma+patient+derived+xenografts+acquire+distinct+Vemurafenib+resistance+mechanisms.">Melanoma patient derived xenografts acquire distinct Vemurafenib resistance mechanisms.</a> American Journal of Cancer Research. 5 (4), 1507-1518 (2015).</li><li>Das Thakur, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+vemurafenib+resistance+in+melanoma+reveals+a+strategy+to+forestall+drug+resistance.">Modelling vemurafenib resistance in melanoma reveals a strategy to forestall drug resistance.</a> Nature. 494 (7436), 251-255 (2013).</li><li>Meehan, T. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDX-MI:+Minimal+Information+for+Patient-Derived+Tumor+Xenograft+Models.">PDX-MI: Minimal Information for Patient-Derived Tumor Xenograft Models.</a> Cancer Research. 77 (21), 62-66 (2017).</li><li>Gao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+screening+using+patient-derived+tumor+xenografts+to+predict+clinical+trial+drug+response.">High-throughput screening using patient-derived tumor xenografts to predict clinical trial drug response.</a> Nature Medicine. 21 (11), 1318-1325 (2015).</li><li>De La Rochere, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+Mice+for+the+Study+of+Immuno-Oncology.">Humanized Mice for the Study of Immuno-Oncology.</a> Trends in Immunology. 39 (9), 748-763 (2018).</li></ol>

Мы описали генерацию МОДЕЛЕй pdX меланомы с тканью пациента, полученной из первичных и метастатических опухолей, основных биопсий и FNAs. При непосредственном привитом в NSG мышей, опухоли представляют аналогичные морфологические, геномные и биологические свойства для тех, наблюдается у п?...

Доклинические модели имеют решающее значение для всех аспектов трансляционных исследований рака, включая характеристику болезней, открытие действенных уязвимостей, присущих только раку, по сравнению с нормальными клетками, и развитие эффективных методов лечения, которые эксплуатируют эти уязвимости для повышения общей выживаемости пациентов. В области меланомы, десятки тысяч моделей клеточной линии были в значительной степени использованы для скрининга наркотиков, с йgt;4,000 способствовали только нашей группы (WMXXX серии). Эти модели клеточной линии были получены от пациентов с меланомой с различными формами кожной меланомы (т.е. акрала, увеального и поверхностного распространения) и различных генотипов (т.е. BRAFV600-мутант и нейробластома РАН вирусный онкоген однородный НРАС «61R-мутант»), которые охватывают спектр заболеваний, присутствующих в клинике1,2.
Однозначно, наиболее успешная, целевая стратегия терапии в области меланомы возникла из 1) геномной характеристики опухолей пациентов, определяющих мутации BRAF в 50% меланомы3 и от 2) доклинического исследования использование меланомы клеточной линии модели4. Комбинация ингибитора BRAF/MEK была утверждена Пищевых продуктов и медикаментов (FDA) в 2014 году для лечения пациентов, чья меланома гавани активации BRAFV600E / K мутаций и может похвастаться йgt;75% ответ5. Несмотря на эту начальную эффективность, сопротивление быстро возникает почти в каждом случае из-за многогранных внутренних и приобретенных механизмов сопротивления и внутриопухолевой неоднородности. К сожалению, модели клеточных линий не резюмируют репрезентативной биологической неоднородности, когда выращивается в двумерной культуре в пластиковых сосудах, что маскирует их клинически прогностический потенциал, когда исследователи пытаются экспериментально определить терапии, которые могут быть эффективными у пациентов с определенной формой или генотипом меланомы6. Понимание того, как лучше моделировать внутриопухолевую неоднородность пациента позволит следователям лучше разработать терапевтические методы, которые могут убить устойчивых к терапии субпопуляций, которые приводят к неспособности к текущим стандартам лечения.
Первостепенное значение ограниченного прогностического значения моделей клеточной линии — это то, как они изначально устанавливаются. Необратимые изменения происходят в клональном ландшафте опухоли, когда одноклеточная суспензия опухоли пациента выращивается на двухмерных, сосудах культуры пластиковой ткани, включая изменения в пролиферативном и инвазивном потенциале, устранение специфических субпопуляций, и изменение генетической информации7. Xenografts в мышей этих моделей линии клетки меланомы представляют наиболее часто используемые в vivo платформа для preclinical изучений; однако, эта стратегия также страдает от плохой перепросмотра сложной неоднородности опухоли наблюдается клинически. Чтобы преодолеть этот недостаток, наблюдается растущий интерес к включению более сложных доклинических моделей меланомы, включая модель PDX. Модели PDX были использованы для йgt;30 лет, с семенных исследований в больных раком легких, демонстрирующих соответствие между ответом пациентов на цитотоксические агенты и ответ модели PDX, полученных от того же пациента8. В последнее время наблюдается стремление использовать модели PDX в качестве инструмента выбора для доклинических исследований как в промышленности, так и в академических центрах. Модели PDX, из-за их превосходной перепросмотра неоднородности опухоли у пациентов, более клинически уместны для использования вусилиях оптимизации терапии чем xenografts линии клетки 9. В меланоме, Есть огромные препятствия, которые тупой терапевтического управления передовых заболеваний10. Клинически значимые модели PDX были использованы для моделирования клинической резистентности и определения терапевтических стратегий с клинически доступными агентами для лечения устойчивых к терапии опухолей11,12. Кратко, протокол представленный здесь для того чтобы произвести модели PDX требует subcutaneous имплантации свежей ткани от главным образом или метастатических меланом (собранных биопсией или хирургией) в NOD/scid/IL2-рецептор null (NSG) мышей. Различные различия в методологическом подходе используются различными группами; однако, фундаментальное ядро существует13.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1104px;" width="1103">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:352px;">1 M Hepes</td>
			<td style="width:241px;">SIGMA-ALDRICH CORPORATION</td>
			<td style="width:344px;">Cat # H0887-100ML</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">100x PenStrep&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Cat # 15140163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">1x HBSS-/- (w/o Ca++ or Mg++)</td>
			<td>MED</td>
			<td>Cat # MT21-023-CV</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:62px;">2.5% Trypsin&#160;</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH CORPORATION</td>
			<td>Cat # T4549-100ML</td>
			<td>10 mL aliquots stored at &#8211;20oC</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">BSA</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH CORPORATION</td>
			<td>Cat # A9418-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Chlorhexidine</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Cat# 50-118-0313</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Collagenase IV (2,000 u/mL)</td>
			<td>Worthington&#160;</td>
			<td>Cat #4189</td>
			<td>make up in HBSS-/- from Collagenase IV powder stock (Worthington #4189, u/mg indicated on bottle and varies with each lot); freeze 1</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DMSO</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH CORPORATION</td>
			<td>Cat # C6295-50ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DNase</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH CORPORATION</td>
			<td>Cat # D4527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">EGTA (ethylene glycol bis(2-aminoethyl ether)-N,N,N&#8217;N&#8217;-tetraacetic acid)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>Cat # 324626.25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">FBS</td>
			<td>INVITROGEN LIFE TECHNOLOGIES</td>
			<td>Cat # 16000-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fungizone</td>
			<td>INVITROGEN LIFE TECHNOLOGIES</td>
			<td>Cat # 15290-018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Gentamicin</td>
			<td>FISHER SCIENTIFIC</td>
			<td>Cat # BW17518Z</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Isoflurane</td>
			<td>HENRY SCHEIN ANIMAL HEALTH</td>
			<td>Cat # 050031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Leibovitz&#39;s L15 media&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Cat # 21083027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>Cat # 354230</td>
			<td>Artificial extracellular matrix</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Meloxicam</td>
			<td>HENRY SCHEIN ANIMAL HEALTHRequisition # ::Henry Schein</td>
			<td>Cat # 025115</td>
			<td>1-5mg/kg, as painkiller</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NOD/SCID/IL2-receptor null (NSG) Mice</td>
			<td>The Wistar Institute, animal facility</td>
			<td></td>
			<td>breeding</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PVA (polyvinyl alcohol)</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH CORPORATION</td>
			<td>Cat # P8136-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI 1640 Medium (Mod.) 1X with L-Glutamine</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Cat# MT10041CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scalpel</td>
			<td>Feather</td>
			<td>Cat # 2976-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Virkon</td>
			<td>GALLARD-SCHLESINGER IND</td>
			<td>Cat # 222-01-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Wound clips</td>
			<td>MikRon</td>
			<td>Cat #427631</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a melanoma patient-derived xenograft model

Накопленные данные свидетельствуют о том, что молекулярные и биологические свойства отличаются в клетках меланомы, выращенных в традиционных двухмерных сосудах культуры тканей по сравнению с in vivo у пациентов с людьми. Это связано с узким местом выбора клональных популяций клеток меланомы, которые могут сильно расти в пробирке при отсутствии физиологических условий. Кроме того, ответы на терапию в двухмерных культурах тканей в целом не точно отражают реакцию на терапию у пациентов с меланомой, при этом большинство клинических испытаний не показывают эффективность терапевтических комбинаций, которые доказали свою эффективность в Пробирке. Хотя ксенотрансплантация клеток меланомы на мышей обеспечивает физиологический контекст виво отсутствует в двухмерных анализов культуры тканей, меланомы клеток, используемых для прививки уже претерпели узкое место выбор для клеток, которые могли бы расти под двумерные условия, когда была установлена клеточная линия. Необратимые изменения, которые происходят в результате узкого места включают изменения в росте и вторжение свойства, а также потери конкретных субпопуляций. Таким образом, модели, которые лучше резюмировать состояние человека in vivo может лучше предсказать терапевтические стратегии, которые эффективно увеличить общую выживаемость пациентов с метастатической меланомы. Методки ксенотранспланта (PDX) пациента включает в себя прямую имплантацию опухолевых клеток от пациента к получателю мыши. Таким образом, опухолевые клетки постоянно выращиваются под физиологическими нагрузками in vivo и никогда не проходят двухмерное узкое место, которое сохраняет молекулярные и биологические свойства, присутствующие при обнаружении опухоли у пациента. Примечательно, что модели PDX, полученные из органов сайтов метастазов (т.е. мозга) отображают аналогичную метастатическую способность, в то время как модели PDX, полученные из терапии наивных пациентов и пациентов с приобретенной устойчивостью к терапии (т.е. бигибаторной терапии BRAF/MEK) отображаются аналогичная чувствительность к терапии.

Опухолевые ткани для меланомы PDX модели могут поступать из различных источников, а также могут быть обработаны в динамике роста отдельных моделей и желаемого использования ткани PDX. Приоритет при создании модели PDX заключается в том, чтобы иметь достаточно материала для банка для будущ?...

Watch this Scientific Journal Video about A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model at JoVE.com

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

Пациент полученных ксенотрансплантат (PDX) модели более надежно резюмировать меланомы молекулярных и биологических особенностей и более прогностические терапии ответ по сравнению с традиционными пластиковых тканей культуры на основе анализов. Здесь мы описываем наш стандартный операционный протокол для создания новых моделей PDX и характеристики/экспериментирования существующих моделей PDX.

Меланома пациента-производные Ксенотрансплантат Модель

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

PDX произвел революцию в экспериментальных доклинических исследованиях рака. Теперь мы можем имитировать в лаборатории то, что происходит у пациентов. И теперь мы можем работать над тем, как преодолеть сопротивление и как в долгосрочной перспективе мы можем увеличить выживаемость пациентов.Демонстрацией процедуры будет Мин Сяо. Для начала перенесите ранее собранную ткань меланомы в стерильную чашку Петри. Работая с хирургическими ножницами, лезвием скальпеля и типсами, сначала удалите нормальную ткань из нормальной ткани как можно больше.А затем удалить некротические ткани, выявленные бледно-бело-иш ткани, расположенные в центре опухоли. Затем используйте скальпель, чтобы подраздеть начальный кусок опухоли примерно на равные части для хирургической имплантации мыши. Если опухолевая ткань слишком трудная для механической диссоциации, используйте скальпель, чтобы измельчить куски опухоли как можно тоньше, чтобы сформировать суспензию.Перенесите суспензию в 50-миллилитровую трубку с сбалансированным солевым раствором холодного Хэнка без ионов кальция и магния. Центрифуга при 220 раз g в течение четырех минут при четырех градусах Цельсия. После удаления супернатанта, повторно приостановить суспензии в 10 миллилитров нагревается, свежие средства пищеварения на один грамм опухолевой ткани.Поместите трубку в 37 градусов по Цельсию водяной бане в течение 20 минут и энергично смешивать каждые пять минут с одноразовой пипеткой. Вымойте суспензию с использованием до 50 миллилитров HBSS, центрифуги при 220 раз g в течение четырех минут при четырех градусах по Цельсию, а затем удалить супернатант. Добавьте пять миллилитров предварительно разогретого буфера TEG на один грамм опухолевой ткани, встряхните, чтобы аккуратно приостановить, и поместите трубку на 37 градусов по Цельсию в течение двух минут, без смешивания.Чтобы утолить трипсин, добавьте по крайней мере один равный объем холодного окрашивания и центрифуги при 220 раз g в течение четырех минут при четырех градусах Цельсия. После удаления супернатанта добавьте 10 миллилитров окрашивающих средств на один грамм опухолевой ткани и повторно приостановите гранулы трубами вверх и вниз. Фильтр его через 40 микрометровый ситечко клеток, чтобы получить одноклеточную подвеску для инъекций мыши.Для имплантации хирургического иссечения или хирургической биопсии ткани, первый бритья волос из нижней части спины NSG шесть-восемь недель анестезировал мышей, в результате чего примерно от 1,5 сантиметров до трех сантиметров области без волос. Подготовка опухоли куски, и разделить опухоль суспензии в Петри на отдельные курганы для хирургической имплантации. Используя лезвие скальпеля, сделайте разрез длиной около пяти миллиметров по центру задней части мыши.С одной парой типсов, жизнь до кожи на стороне разреза напротив оператора. Ножницами в другой руке отделяйте кожу от мышечного слоя, аккуратно разрезая фасциальную мембрану небольшими ножницами, создавая тем самым карман для опухолевой ткани. Используйте лезвие скальпеля, чтобы забрать один опухолевый патрон, а также один отдельный курган ткани опухолевой суспензии, и аккуратно поместите ткань в созданный карман.Затем добавьте 100 микролитров искусственной внеклеточной матрицы на насыпь опухолевых тканей в кармане. Используя две пары типсов, поднимите разрез на обоих концах так, чтобы края раны сблизились. Затем нанесите один или два зажима раны, чтобы закрыть рану.Подкожно вводят от одного до пяти миллиграммов на килограмм анальгетики. Когда заживление полностью, примерно через семь дней, удалить раны клипс. Мониторинг мышей один раз в неделю, чтобы проверить на ощутимые опухоли.Как только опухоли достигают желаемого объема, используйте хирургические миппы, чтобы поднять кожу, прилегающую к опухоли усыпляемой мыши, и сделать горизонтальный разрез с помощью изогнутых ножниц. Используйте тупую технику разделения, чтобы мобилизовать кожу по обе стороны опухоли и над опухолью, подвергая опухоли. Используйте ножницы и лезвие скальпеля, чтобы отделить опухоль от фасции.Вырежьте опухоль и перенесите ее в стерильную чашку Петри. Разрежьте опухоль на мелкие кусочки и удалите некротические ткани из опухоли. Чтобы банк опухолевых тканей для будущей имплантации, принять два-три небольших кусочков опухоли и фарш их на куски меньше, чем один на один миллиметр.Перенесите весь рубленый фарш в двухмилитарную криогенную мерзкую. Добавить один миллилитр замораживания средств массовой информации и хорошо перемешать. Поместите флаконы в предварительно охлажденный изопропанол основе ячейки замораживания контейнера на сухом льду, хранить контейнер в минус 80 градусов по Цельсию морозильник на ночь, а затем передать флаконы для хранения жидкого азота.Чтобы заморозить ткани для анализа ниже по течению, поместите кусочки опухолевой ткани в криогенный флакон, немедленно поместите криогенную мерзку в жидкий азот и храните флаконы в морозильной камере минус 80 градусов по Цельсию. При сопоставлении трех различных методов выращивания опухолевой ткани наиболее успешной была одноклеточная суспензия опухолевых клеток с использованием энзиматического пищеварения. Помимо обеспечения более быстрого роста опухоли, было также достаточно для одной первоначальной опухоли, которая будет расширена на 10 до 20 мышей, в то время как опухоль патрон и суспензии метод может быть расширена только на пять-10 мышей.Меланома пациента полученных ксенотрансплантата модели часто отражают чувствительность препарата пациента отображается при терапии. Ксенотрансплантат, полученный от пациента меланомы, который первоначально ответил на ингибитор BRAF, но в конечном итоге рецидив, также отображается первоначальная чувствительность к ингибированию белка BRAF, плюс ингибитор киназы MEK, но опухоли в конечном итоге рецидив. Очень важно заботиться при подготовке ткани PDX для банковского дела, так как это обеспечит успех в будущих расширениях PDX, испытаниях терапии, а также характеристике.С материалом PDX, одноклеточной РНК секвенирования, всего экзома секвенирования, и протеомной характеристики, являются одними из многих методов нашей лаборатории рычаги для вскрытия резистентности к терапии. Техника PDX позволяет исследователям исследовать устойчивость к терапии с помощью опухолевых клеток, которые лучше резюмируют биологию опухоли у пациента по сравнению с традиционными моделями рака, выращенными на пластике. Это преимущество позволяет получить более прогностический анализ.Исследователи должны всегда заботиться и использовать биобезопасность уровне два меры предосторожности при обработке опухолевых тканей, полученных от человека пациента.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Development and Maintenance of a Preclinical Patient Derived Tumor Xenograft Model for the Investigation of Novel Anti-Cancer Therapies

Разработка и ведение доклинической пациента Derived Опухоль модели ксенотрансплантата для исследования принципиально новых видов лечения рака

Patient derived tumor xenograft (PDTX) models provide a necessary platform in facilitating anti-cancer drug development prior to human trials. Human tumor ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

Опухоль приживления в гранулы ксенотрансплантата мыши модель человека Мантия клеточная лимфома

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Establishment of a Primary Culture of Patient-derived Soft Tissue Sarcoma

Создание основной культуры саркомы мягких тканей, пациент производные

Soft tissue sarcomas (STS) represent a spectrum of heterogeneous malignancies with a difficult diagnosis, classification, and management. To date, more ...

A 3D Organotypic Melanoma Spheroid Skin Model

Модель 3D Organotypic меланомы кожи сфероида

Malignant transformation of melanocytes, the pigment cells of human skin, causes formation of melanoma, a highly aggressive cancer with increased ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Пациент полученных ортотопические ксенотрансплантат Модели для человека Уротелиальной карциномы клеток и колоректального рака опухоли роста и спонтанного метастаза

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Patient-derived Heterogeneous Xenograft Model of Pancreatic Cancer Using Zebrafish Larvae as Hosts for Comparative Drug Assessment

Пациент полученных гетерогенных Xenograft Модель рака поджелудочной железы использованием черыщения зебрав в качестве хозяев для сравнительной оценки наркотиков

Patient-derived tumor xenograft (PDX) and cell-derived tumor xenograft (CDX) are important techniques for preclinical assessment, medication guidance and ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Создание желудка рака пациента полученных Ксенотрансплантат Модели и первичные линии клеток

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Generation of a Liver Orthotopic Human Uveal Melanoma Xenograft Platform in Immunodeficient Mice

Поколение печени ортотопические человека увеянные меланомы Ксенотрансплантат Платформы в иммунодефицитных мышей

In recent decades, subcutaneously implanted patient-derived xenograft tumors or cultured human cell lines have been increasingly recognized as more ...

The Establishment and Utilization of Patient Derived Xenograft Models of Central Nervous System Metastasis

Создание и использование моделей ксенотрансплантатов, полученных от пациентов, для метастазирования в центральную нервную систему

The development of novel therapies for central nervous system (CNS) metastasis has been hindered by the lack of preclinical models that accurately ...

Assessment of Chimeric Antigen Receptor T Cell-Associated Toxicities Using an Acute Lymphoblastic Leukemia Patient-Derived Xenograft Mouse Model

Оценка токсичности, ассоциированной с Т-клетками химерного антигенного рецептора, с использованием мышиной модели ксенотрансплантата пациента с острым лимфобластным лейкозом

Chimeric antigen receptor T (CART) cell therapy has emerged as a powerful tool for the treatment of multiple types of CD19+ malignancies, which has led to ...