Name: use of a linear accelerator for conducting in vitro radiobiology experiments
Uploaded: 2019-05-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments at JoVE.com

نشكر قسم الأورام الإشعاعية في كليفلاند كلينك على استخدام المسرعات الخطية. نشكر الدكتور جيرمي ريتش على موهبته السخية من الخلايا الجذعية الشبيهة بالورم الدبقي. وقد تم دعم هذا البحث من قبل كليفلاند كلينك.

1. إعداد الخلية لثقافة الخلية تعليق
<ol><li>ثقافة الخلايا الجذعية الورم الدبقي في وسائل الإعلام ثقافة الخلايا الجذعية في ما يقرب من 5 × 106 خلية / 10 سم لوحات في حاضنة ثقافة الخلية مع 5٪ CO2،95٪ الرطوبة النسبية في 37 درجة مئوية. ملاحظة: شرط ثقافة الخلية هو نفسه خلال كافة الإجراءات. وسائط ?...

<ol>
	<li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma.">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> The New England Journal of Medicine. 352 (10), 987-996 (2005).</li><li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+radiotherapy+with+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+versus+radiotherapy+alone+on+survival+in+glioblastoma+in+a+randomised+phase+III+study:+5-year+analysis+of+the+EORTC-NCIC+trial.">Effects of radiotherapy with concomitant and adjuvant temozolomide versus radiotherapy alone on survival in glioblastoma in a randomised phase III study: 5-year analysis of the EORTC-NCIC trial.</a> The Lancet Oncology. 10 (5), 459-466 (2009).</li><li>Tao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+imaging+in+upper+gastrointestinal+tumors+and+application+to+radiation+therapy.">Hypoxia imaging in upper gastrointestinal tumors and application to radiation therapy.</a> Journal of Gastrointestinal Oncology. 9 (6), 1044-1053 (2018).</li><li>Gajiwala, S., Torgeson, A., Garrido-Laguna, I., Kinsey, C., Lloyd, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+immunotherapy+and+radiation+therapy+strategies+for+pancreatic+cancer-targeting+multiple+steps+in+the+cancer+immunity+cycle.">Combination immunotherapy and radiation therapy strategies for pancreatic cancer-targeting multiple steps in the cancer immunity cycle.</a> Journal of Gastrointestinal Oncology. 9 (6), 1014-1026 (2018).</li><li>Liney, G. P., Whelan, B., Oborn, B., Barton, M., Keall, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRI-Linear+accelerator+raiotherapy+systems.">MRI-Linear accelerator raiotherapy systems.</a> Clinical Oncology Journal | The Royal College of Radiologists. 30 (11), 686-691 (2018).</li><li>Hall, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation+dose-rate:+a+factor+of+importance+in+radiobiology+and+radiotherapy.">Radiation dose-rate: a factor of importance in radiobiology and radiotherapy.</a> The British Journal of Radiology. 45 (530), 81-97 (1972).</li><li>Steel, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dose-rate+effect+in+human+tumour+cells.">The dose-rate effect in human tumour cells.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 9 (4), 299-310 (1987).</li><li>Ling, C. C., Gerweck, L. E., Zaider, M., Yorke, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose-rate+effects+in+external+beam+radiotherapy+redux.">Dose-rate effects in external beam radiotherapy redux.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 95 (3), 261-268 (2010).</li><li>Castro, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amotosalen/UVA+treatment+inactivates+T+cells+more+effectively+than+the+recommended+gammadose+for+prevention+of+transfusion-associated+graft-versus-host+disease.">Amotosalen/UVA treatment inactivates T cells more effectively than the recommended gammadose for prevention of transfusion-associated graft-versus-host disease.</a> Transfusion. 58 (6), 1506-1515 (2018).</li><li>Gaddini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exposing+primary+rat+retina+cell+cultures+to+&#947;-rays:+An+in+vitro+model+for+evaluating+radiation+responses.">Exposing primary rat retina cell cultures to &#947;-rays: An in vitro model for evaluating radiation responses.</a> Experimental Eye Research. 166, 21-28 (2018).</li><li>Simara, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+double-strand+breaks+in+human+induced+pluripotent+stem+cell+reprogramming+and+long-term+in+vitro+culturing.">DNA double-strand breaks in human induced pluripotent stem cell reprogramming and long-term in vitro culturing.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 8 (1), 73 (2017).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+the+biological+effects+of+125I+seeds+continuous+low-dose-rate+radiation+and+60Co+high-dose-rate+gamma+radiation+on+non-small+cell+lung+cancer+cells.">A comparison of the biological effects of 125I seeds continuous low-dose-rate radiation and 60Co high-dose-rate gamma radiation on non-small cell lung cancer cells.</a> PLoS One. 10 (8), 0133728 (2015).</li><li>Lasio, G., Guerrero, M., Goetz, W., Lima, F., Baulch, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+varying+dose-per-pulse+and+average+dose+rate+in+X-ray+beam+irradiation+on+cultured+cell+survival.">Effect of varying dose-per-pulse and average dose rate in X-ray beam irradiation on cultured cell survival.</a> Radiation and Environmental Biophysics. 53 (4), 671-676 (2014).</li><li>Karan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiobiological+effects+of+altering+dose+rate+in+filter-free+photon+beams.">Radiobiological effects of altering dose rate in filter-free photon beams.</a> Physics in Medicine and Biology. 58 (4), 1075-1082 (2013).</li><li>Sarojini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+combination+of+high+dose+rate+(10X+FFF/2400+MU/min/10+MV+X-rays)+and+total+low+dose+(0.5+Gy)+induces+a+higher+rate+of+apoptosis+in+melanoma+cells+in+vitro+and+superior+preservation+of+normal+melanocytes.">A combination of high dose rate (10X FFF/2400 MU/min/10 MV X-rays) and total low dose (0.5 Gy) induces a higher rate of apoptosis in melanoma cells in vitro and superior preservation of normal melanocytes.</a> Melanoma Research. 25 (5), 376-389 (2015).</li><li>Hao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+extra+high+on+glioma+stem-like+cells.">The effects of extra high on glioma stem-like cells.</a> PLoS One. 13 (8), 0202533 (2018).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation-induced+G2/M+arrest+rarely+occurred+in+glioblastoma+stem-like+cells.">Radiation-induced G2/M arrest rarely occurred in glioblastoma stem-like cells.</a> International Journal of Radiation Biology. 94 (4), 394-402 (2018).</li><li>Mcdermott, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Physics and Technology of Radiation Therapy. , (2010).</li><li>Lohse, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+high+dose+per+pulse+flattening+filter-free+beams+on+cancer+cell+survival.">Effect of high dose per pulse flattening filter-free beams on cancer cell survival.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 101 (1), 226-232 (2011).</li></ol>

العلاج الإشعاعي هو جزء لا يتجزأ من إدارة السرطان. وتسعى الجهود الجارية إلى تحسين فعالية وكفاءة العلاج الإشعاعي. وقد أتاحت التطورات في تكنولوجيا المسرع الخطي الفرصة لعلاج المرضى بدقة وسلامة لم يسبق لهما مثيل. لأن معظم المرضى يتم التعامل مع الأشعة السينية عالية الطاقة من المسرّعات الخطية، ...

العلاج الإشعاعي هو علاج فعال لأنواعكثيرة من السرطان 1،2،3،4. التشعيع معدل جرعة عالية اضافية جديدة نسبيا في العلاج الإشعاعي ويتحقق من خلال التطورات التكنولوجية الأخيرة في المسرعات الخطية5. وتشمل المزايا السريرية لمعدل جرعة عالية اضافية على التشعيع معدل الجرعة القياسية تقصير وقت العلاج وتحسين تجربة المريض. كما توفر المسرّعات الخطية إعدادًا سريريًا لدراسات بيولوجيا الإشعاع القائمة على ثقافة الخلايا. وكانت الآثار البيولوجية والعلاجية لمعدلات الجرعة الإشعاعية والجرعة محور اهتمام أخصائيي الأورام الإشعاعية وعلماء الأحياء على مدى العقود6و7و8. ولكن البيولوجيا الإشعاعية لتشعيع معدل الجرعة المرتفعة جدا والتشعيع الفلاش - وهو معدل جرعة عالية للغاية من الإشعاع - لم يتم بعد التحقيق فيها بدقة.
يستخدم على نطاق واسع أشعة غاما التشعيع في خلية الثقافة القائمة على البيولوجيا الإشعاع9،10،11. ويتحقق الإشعاع عن طريق أشعة غاما المنبعثة من مصادر النظائر المشعة المتحللة، وهي عادة السيزيوم-137. واستخدام المصادر المشعة منظم تنظيما ً عالياً وكثيراً ما يكون مقيداً. مع التشعيع القائم على المصدر، فإنه من الصعب اختبار مجموعة واسعة من معدلات الجرعة، والحد من فائدتها في تحليل الآثار البيولوجية لمعدلات الجرعة السريرية القابلة للتحقيق12.
كانت هناك العديد من الدراسات التي توضح كل من الجرعة ومعدل الآثار12،13،14،15،16،17. وفي هذه الدراسات، استُخدم كل من تشعيع غاما المتولد من النظائر المشعة أو الأشعة السينية المتولدة عن المسرعات الخطية. تم استخدام مجموعة متنوعة من خطوط الخلايا التي تمثل سرطان الرئة، وسرطان عنق الرحم، والورم الأرومي الدبقي، والورم الميلانيني. تم تقييم الآثار الإشعاعية على بقاء الخلية، والقبض على دورة الخلية، وتلف الحمض النووي والحمض النووي على أنها قراءة12،13،14،15،16،17 . هنا، نقوم بوصف طريقة لتحديد الآثار البيولوجية لجرعات الإشعاع ذات الصلة سريريا ومعدلات الجرعة عن طريق تقديم الأشعة السينية باستخدام مسرع خطي. وينبغي إجراء هذه الدراسات بالتعاون الوثيق بين عالم الأحياء وأخصائي الأورام الإشعاعية والفيزيائي الطبي.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:925px;" width="924">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Material</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">glioma stem-like cell 4121</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td>gift from Dr. Jeremy Rich</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">293 cells</td>
			<td style="width:269px;">ATCC</td>
			<td style="width:183px;">CRL-1573</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">neuron stem cell culture media</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">21103049</td>
			<td>NeurobasalTM media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">DMEM</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">10569044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">16000044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Recombinant Human EGF Protein</td>
			<td style="width:269px;">R&#38;D Systems</td>
			<td>236-EG-01M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Recombinant Human FGF basic</td>
			<td style="width:269px;">R&#38;D Systems</td>
			<td>4114-TC-01M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">B-27&#8482; Supplement</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Sodium Pyruvate</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">11360070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">25030164</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Tripsin-EDTA</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:183px;">25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">extracellular proten matrix</td>
			<td style="width:269px;">Corning</td>
			<td style="width:183px;">354277</td>
			<td style="width:167px;">MatrigelTM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Ethanol</td>
			<td style="width:269px;">Fisher chemical</td>
			<td style="width:183px;">A4094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Equipment</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">10 cm cell culture dish</td>
			<td style="width:269px;">Denville</td>
			<td style="width:183px;">T1110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">3.5 cm cell culture dish</td>
			<td style="width:269px;">USA Scientific Inc.</td>
			<td style="width:183px;">CC7682-3340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">22x22mm glass cover slip</td>
			<td style="width:269px;">electron microscopy sciences</td>
			<td style="width:183px;">72210-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">15 ml centrifuge tube</td>
			<td style="width:269px;">Thomas Scientific</td>
			<td style="width:183px;">1159M36</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">50 ml centrifuge tube</td>
			<td style="width:269px;">Thomas Scientific</td>
			<td style="width:183px;">1158R10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">5 ml Pipette</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">14-955-233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">pipet aid</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">13-681-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Vortex mixer</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">02-215-414</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:269px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:183px;">5810R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Linear Accelerator</td>
			<td style="width:269px;">Varian</td>
			<td style="width:183px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">water equivalent material</td>
			<td style="width:269px;">Sun Nuclear corporation</td>
			<td style="width:183px;">557</td>
			<td>Solid waterTM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Reagent preparation</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:307px;">DMEM media</td>
			<td style="width:269px;">10% fetal bovine serum (FBS), 2 mM L-glutamine, 100 units/mL penicillin G, 100 &#181;g/mL streptomycin in 500 ml DMEM media</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:307px;">stem cell culture media</td>
			<td style="width:269px;">10 ml B27 supplement, 20 &#181;g hFGF, 20 &#181;g hEGF, 2 mM L-glutamine, 100 units/mL penicillin G, 100 &#181;g/mL streptomycin in 500 ml Neurobasal media</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of a linear accelerator for conducting in vitro radiobiology experiments

يبقى العلاج الإشعاعي أحد الأركان الأساسية لإدارة السرطان. بالنسبة لمعظم أنواع السرطان، هو العلاج غير الجراحي الأكثر فعالية لأورام debulk. هنا، ونحن نصف طريقة لتشعيع الخلايا السرطانية مع مسرع خطي. وقد أدى تقدم تكنولوجيا المسرع الخطي إلى تحسين دقة وكفاءة العلاج الإشعاعي. ولا تزال الآثار البيولوجية لمجموعة واسعة من الجرعات الإشعاعية ومعدلات الجرعات مجالا مكثفا للتحقيق. استخدام المسرعات الخطية يمكن أن يسهل هذه الدراسات باستخدام جرعات ذات صلة سريريا ومعدلات الجرعة.

للتحقيق في تأثير دورة الخلية من معدل الجرعة القياسية والأشعة معدل جرعة عالية اضافية من قبل مسرع خطي، تم إعداد ثلاث عينات من الخلايا الجذعية الورم الدبقي باستخدام هذا البروتوكول وجمع 24 ساعة بعد التشعيع17: عينة تحكم واحدة التي لم تكن مشعة (الشكل2ألف)، عي...

Watch this Scientific Journal Video about Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments at JoVE.com

Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments

استخدام مسرّع خطي لإجراء تجارب البيولوجيا الإشعاعية في المختبر

يمكن استخدام المسرعات الخطية السريرية لتحديد الآثار البيولوجية لمجموعة واسعة من معدلات الجرعة على الخلايا السرطانية. نناقش كيفية إعداد مسرّع خطي للتشخيصات القائمة على الخلايا والاختبارات للخلايا الجذعية السرطانية التي نمت كأورام في التعليق وخطوط الخلايا نمت كثقافات ملتصقة.

Radiation therapy remains one of the cornerstones of cancer management. For most cancers, it is the most effective, nonsurgical therapy to debulk tumors. ...

يتم تسليم العلاج الإشعاعي في أغلب الأحيان باستخدام المسرعات الخطية. يسمح هذا البروتوكول للباحثين بتقييم الآثار البيولوجية للإشعاع على الخلايا باستخدام مسرع خطي. وميزة هذه التقنية هي أنه باستخدام مسرع خطي، يمكن للباحثين دراسة مجموعة واسعة من الجرعات ذات الصلة سريريا ومعدلات الجرعة.وعلاوة على ذلك، يمكن استخدام هذا البروتوكول لجميع أنواع الخلايا السرطانية. يمكن تنفيذ هذه الطريقة باستخدام معدات مماثلة لتلك الموضحة هنا. على سبيل المثال، المسرعات الخطية المصنعة من قبل موردين آخرين.الأفراد الذين لا خبرة في إجراء حسابات قياس الجرعات باستخدام مسرع خطي قد النضال لحساب العدد الصحيح من وحدات رصد المطلوبة لتقديم الجرعة المطلوبة للعينة. وسوف تستفيد من خلال التماس المشورة من الفيزيائي الطبي خبرة أو dosimetrist. تسليم الجرعة إلى العينة بدقة باستخدام مسرع خطي يتطلب وضع دقيق.قبل يومين من التشعيع المقرر، والعمل في غطاء الثقافة، واستخدام ماصة معقمة خمسة ملليلتر لجمع الخلايا الجذعية مثل الورم الدبقي من لوحة الثقافة في أنبوب الطرد المركزي 15 ملليلتر. الطرد المركزي الخلايا في 200 مرة ز لمدة ثلاث دقائق في جهاز طرد مركزي كونترتوب. تجاهل السوبر و resuspend بيليه الخلية مع ملليلتر واحد من تريبسين-EDTA.احتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة خمس دقائق لهضم بيليه وجعل تعليق خلية واحدة في تريبسين-EDTA. كل دقيقتين أثناء عملية الهضم، يهز بلطف الجزء السفلي من أنبوب الطرد المركزي للتأكد من أن الخلايا هي هضمها جيدا. ثم إضافة ثلاثة ملليلترات من الخلايا الجذعية وسائل الإعلام ثقافة لإخماد التربسين، مزيج بلطف، والطرد المركزي في 200 مرة ز لمدة ثلاث دقائق في جهاز طرد مركزي كونترتوب.بعد التخلص من المابير، resuspend بيليه الخلية مع خمسة ملليلتر من وسائل الإعلام ثقافة الخلية وعد الخلايا مع مقياس الهيموسيت. لوحة خمسة ملايين خلية مقسمة إلى طبقين 10 سنتيمترات تحتويان على 10 ملليلترات من وسائط ثقافة الخلايا وتحتضن 48 ساعة بـ 37 درجة مئوية. مباشرة قبل التشعيع المقرر، وجمع الخلايا والطرد المركزي كما فعلت من قبل.تجاهل افراط وإعادة فرض بيليه الخلية مع خمسة ملليلتر من وسائل الإعلام ثقافة الخلية. نقل ملليلتر واحد من تعليق الخلية إلى لوحة 35 ملليمتر تحتوي على مليلترين من خلية ثقافة المتوسطة، والتأكد من أن المتوسطة تصل إلى ارتفاع سنتيمتر واحد. نقل الخلايا المطلية إلى حاوية ثانوية للحد من خطر التلوث وجلب الخلايا في الحاوية على عربة المرافق العامة إلى مرفق التشعيع لتشعيع الخلايا.قبل يوم واحد من التشعيع، والعمل في غطاء الخلية ثقافة، استخدام ماصة باستير متصلة فراغ لإزالة متوسطة DMEM من لوحة ثقافة الخلية إلى خط الخلية المرفقة. ثم غسل الخلايا مع خمسة ملليلتر من برنامج تلفزيوني عقيم لشطف قبالة المتوسطة المتبقية. أضف ملليلترًا واحدًا من التربسين-EDTA في طبق الثقافة وإمالة لوحة الثقافة بلطف للتأكد من تغطية الطبق بأكمله.بعد احتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة خمس دقائق، إخماد رد فعل التربسين EDTA مع ثلاثة ملليلتر من وسائل الإعلام DMEM. استخدم ماصة خمسة ملليلتر لجمع الخلايا في أنبوب جهاز طرد مركزي 15 ملليلتر، وطارد مركزي، ثم قم بزرع الخلايا كما هو موضح في المخطوطة. لإشعاع هذه الخلايا المعدة سابقا باستخدام برنامج وحدة التحكم في LINAC، تعيين جسر المسرع وcollimator إلى درجة الصفر، وفتح الفكين س و ص إلى حجم حقل خمسة في خمسة سنتيمترات مربعة متناظرة، والتراجع عن التكميمات multileaf.إضافة ما لا يقل عن خمسة سنتيمترات من المواد المكافئة للماء على أريكة المعالجة ووضع طبق الخلية ليتم تشعيعها على ذلك في وسط مرمى LINAC. ضع الخلايا على عمق الجرعة القصوى في أشعة سينية 6 ميجافولت حوالي 1.5 سنتيمتر وأضف سنتيمترًا إضافيًا من المواد المكافئة للماء فوق الطبق. ضع المؤشر الأمامي على رأس LINAC وابسطه حتى يلمس سطح مواد التراكم.ضبط ارتفاع الجدول حتى المسافة من المصدر إلى سطح تراكم 100 سم. اترك قبو العلاج، وتأكد من أن جميع الأفراد الآخرين قد غادروا. تحقق من عدم وجود خلايا أخرى في الغرفة، ثم أغلق باب القبو.تأكيد حجم الحقل، وحدات المراقبة، والوحدات مراقبة في الدقيقة في وحدة التحكم، ومن ثم تمكين شعاع لخلية من الإشعاع. وقد أُعدت ثلاث عينات من الخلايا الشبيهة بالخلايا الجذعية الدبقية باستخدام هذا البروتوكول وتم جمعها بعد 24 ساعة من التشعيع. هناك تم حساب ملامح دورة الخلية وأظهرت مع النسب المئوية للخلايا في مراحل مختلفة من دورة الخلية.لوحظت دورة الخلايا G2 القبض بعد تشعيع الخلايا الجذعية الورم الدبقي مع معدل جرعة قياسية أو معدل جرعة إضافية عالية, مقارنة مع الخلايا التحكم غير المشعع. من أجل الحصول على الجرعة الصحيحة تسليمها، من المهم للغاية قياس ارتفاع وسائل الإعلام في طبق الثقافة للتأكد من أنها تصل إلى سنتيمتر واحد. بعد هذا الإجراء، يمكن إجراء فحوصات بيولوجية أخرى، مثل الكبت المناعي، واللطخة الغربية، وتحليل دورة الخلية.منذ هذا الإجراء يوفر للباحثين سريريا ذات الصلة الجرعة وإعدادات معدل الجرعة, ويمكن استخدامه لتقييم تأثير الإشعاع على العديد من الخلايا ثقافة النماذج القائمة.

Research

JoVE Journal

Medicine

Use of a Hanging Weight System for Coronary Artery Occlusion in Mice

استخدام نظام وزن المعلقة لانسداد الشريان التاجي في الفئران

Murine studies of acute injury are an area of intense investigation, as knockout mice for different genes are becoming increasingly available 1-38. ...

Use of a Hanging-weight System for Isolated Renal Artery Occlusion

استخدام نظام تعليق الوزن المعزولة عن انسداد الشريان الكلوي

In hospitalized patients, over 50% of cases of acute kidney injury (AKI) are caused by renal ischemia 1-3. A recent study of hospitalized patients ...

Use of a Hanging-weight System for Liver Ischemia in Mice

استخدام نظام اعدام الوزن لالإسكيمية الكبد في الفئران

Acute liver injury due to ischemia can occur during several clinical procedures e.g. liver transplantation, hepatic tumor resection or trauma repair and ...

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

استعمال قياس المثانة في القوارض الصغيرة: دراسة في Chemosensation المثانة

	The lower urinary tract (LUT) functions as a  dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a  convenient time. While ...

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

غيروي ثلاثي الأبعاد<em&gt; في المختبر</em&gt; نمذجة التفاعلات اللحمية-طلائي سرطان المبيض خلال بدء والتقدم

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

الحقن الشريان السباتي لوأضافا الدوائية وتحليل Taxanes في الفئران

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Setting Up a Stroke Team Algorithm and Conducting Simulation-based Training in the Emergency Department - A Practical Guide

إعداد السكتة الدماغية فريق خوارزمية وإجراء التدريب القائم على المحاكاة في قسم الطوارئ - دليل عملي

Time is of the essence when caring for an acute stroke patient. The ultimate goal is to restore blood flow to the ischemic brain. This can ...

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

إعداد الأدوية العشبية: إير-زيان ديكوتيون و إير-زيان التي تحتوي على مصل ل<em&gt; في فيفو</em&gt; و<em&gt; في المختبر</em&gt; التجارب

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

Conducting Maximal and Submaximal Endurance Exercise Testing to Measure Physiological and Biological Responses to Acute Exercise in Humans

إجراء عملية التحمل القصوى وسوبماكسيمال الاختبار لقياس الاستجابات الفسيولوجية والبيولوجية لممارسة الحادة في البشر

Regular physical activity has a positive effect on human health, but the mechanisms controlling these effects remain unclear. The physiologic and biologic ...

Preparation Of Gushukang (GSK) Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

إعداد حبيبات غوشوكانغ (GSK) للتجارب في الجسم الحي وفي المختبر

Traditional Chinese herbal medicine plays a role as an alternative method in treating many diseases, such as postmenopausal osteoporosis (POP). Gushukang ...