Name: use of a linear accelerator for conducting in vitro radiobiology experiments
Uploaded: 2019-05-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments at JoVE.com

Vi takker Cleveland Clinic Department of Radiation Oncology for brug af de lineære acceleratorer. Vi takker Dr. Jeremy rig for hans gavmilde gave af gliom Stem-lignende celler. Denne forskning blev støttet af Cleveland Clinic.

1. celle forberedelse til suspension cellekultur
<ol><li>Culture gliom Stem-lignende celler i stamcelle kultur medier på ca. 5 x 106 celle/10 cm plader i en cellekultur inkubator med 5% Co2, 95% relativ luftfugtighed ved 37 °c. Bemærk: tilstanden for cellekulturen er den samme i alle procedurer. De medier, der bruges i protokollen, er komplette medier.</li>
	<li>To dage før planlagt bestråling opsamles gliom Stem-lignende celler fra kultur pladen med en steril 5 ml pipette i et 15 ml centr...

<ol>
	<li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma.">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> The New England Journal of Medicine. 352 (10), 987-996 (2005).</li><li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+radiotherapy+with+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+versus+radiotherapy+alone+on+survival+in+glioblastoma+in+a+randomised+phase+III+study:+5-year+analysis+of+the+EORTC-NCIC+trial.">Effects of radiotherapy with concomitant and adjuvant temozolomide versus radiotherapy alone on survival in glioblastoma in a randomised phase III study: 5-year analysis of the EORTC-NCIC trial.</a> The Lancet Oncology. 10 (5), 459-466 (2009).</li><li>Tao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+imaging+in+upper+gastrointestinal+tumors+and+application+to+radiation+therapy.">Hypoxia imaging in upper gastrointestinal tumors and application to radiation therapy.</a> Journal of Gastrointestinal Oncology. 9 (6), 1044-1053 (2018).</li><li>Gajiwala, S., Torgeson, A., Garrido-Laguna, I., Kinsey, C., Lloyd, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+immunotherapy+and+radiation+therapy+strategies+for+pancreatic+cancer-targeting+multiple+steps+in+the+cancer+immunity+cycle.">Combination immunotherapy and radiation therapy strategies for pancreatic cancer-targeting multiple steps in the cancer immunity cycle.</a> Journal of Gastrointestinal Oncology. 9 (6), 1014-1026 (2018).</li><li>Liney, G. P., Whelan, B., Oborn, B., Barton, M., Keall, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRI-Linear+accelerator+raiotherapy+systems.">MRI-Linear accelerator raiotherapy systems.</a> Clinical Oncology Journal | The Royal College of Radiologists. 30 (11), 686-691 (2018).</li><li>Hall, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation+dose-rate:+a+factor+of+importance+in+radiobiology+and+radiotherapy.">Radiation dose-rate: a factor of importance in radiobiology and radiotherapy.</a> The British Journal of Radiology. 45 (530), 81-97 (1972).</li><li>Steel, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dose-rate+effect+in+human+tumour+cells.">The dose-rate effect in human tumour cells.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 9 (4), 299-310 (1987).</li><li>Ling, C. C., Gerweck, L. E., Zaider, M., Yorke, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose-rate+effects+in+external+beam+radiotherapy+redux.">Dose-rate effects in external beam radiotherapy redux.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 95 (3), 261-268 (2010).</li><li>Castro, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amotosalen/UVA+treatment+inactivates+T+cells+more+effectively+than+the+recommended+gammadose+for+prevention+of+transfusion-associated+graft-versus-host+disease.">Amotosalen/UVA treatment inactivates T cells more effectively than the recommended gammadose for prevention of transfusion-associated graft-versus-host disease.</a> Transfusion. 58 (6), 1506-1515 (2018).</li><li>Gaddini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exposing+primary+rat+retina+cell+cultures+to+&#947;-rays:+An+in+vitro+model+for+evaluating+radiation+responses.">Exposing primary rat retina cell cultures to &#947;-rays: An in vitro model for evaluating radiation responses.</a> Experimental Eye Research. 166, 21-28 (2018).</li><li>Simara, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+double-strand+breaks+in+human+induced+pluripotent+stem+cell+reprogramming+and+long-term+in+vitro+culturing.">DNA double-strand breaks in human induced pluripotent stem cell reprogramming and long-term in vitro culturing.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 8 (1), 73 (2017).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+the+biological+effects+of+125I+seeds+continuous+low-dose-rate+radiation+and+60Co+high-dose-rate+gamma+radiation+on+non-small+cell+lung+cancer+cells.">A comparison of the biological effects of 125I seeds continuous low-dose-rate radiation and 60Co high-dose-rate gamma radiation on non-small cell lung cancer cells.</a> PLoS One. 10 (8), 0133728 (2015).</li><li>Lasio, G., Guerrero, M., Goetz, W., Lima, F., Baulch, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+varying+dose-per-pulse+and+average+dose+rate+in+X-ray+beam+irradiation+on+cultured+cell+survival.">Effect of varying dose-per-pulse and average dose rate in X-ray beam irradiation on cultured cell survival.</a> Radiation and Environmental Biophysics. 53 (4), 671-676 (2014).</li><li>Karan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiobiological+effects+of+altering+dose+rate+in+filter-free+photon+beams.">Radiobiological effects of altering dose rate in filter-free photon beams.</a> Physics in Medicine and Biology. 58 (4), 1075-1082 (2013).</li><li>Sarojini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+combination+of+high+dose+rate+(10X+FFF/2400+MU/min/10+MV+X-rays)+and+total+low+dose+(0.5+Gy)+induces+a+higher+rate+of+apoptosis+in+melanoma+cells+in+vitro+and+superior+preservation+of+normal+melanocytes.">A combination of high dose rate (10X FFF/2400 MU/min/10 MV X-rays) and total low dose (0.5 Gy) induces a higher rate of apoptosis in melanoma cells in vitro and superior preservation of normal melanocytes.</a> Melanoma Research. 25 (5), 376-389 (2015).</li><li>Hao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+extra+high+on+glioma+stem-like+cells.">The effects of extra high on glioma stem-like cells.</a> PLoS One. 13 (8), 0202533 (2018).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation-induced+G2/M+arrest+rarely+occurred+in+glioblastoma+stem-like+cells.">Radiation-induced G2/M arrest rarely occurred in glioblastoma stem-like cells.</a> International Journal of Radiation Biology. 94 (4), 394-402 (2018).</li><li>Mcdermott, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Physics and Technology of Radiation Therapy. , (2010).</li><li>Lohse, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+high+dose+per+pulse+flattening+filter-free+beams+on+cancer+cell+survival.">Effect of high dose per pulse flattening filter-free beams on cancer cell survival.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 101 (1), 226-232 (2011).</li></ol>

Strålebehandling er en integreret del af kræftbehandling. Igangværende bestræbelser søger at forbedre effektiviteten og effektiviteten af strålebehandling. Fremskridt inden for lineær accelerator teknologi har givet mulighed for at behandle patienter med hidtil uset nøjagtighed og sikkerhed. Da de fleste patienter behandles med røntgenstråler af høj energi fra lineære acceleratorer, kan undersøgelser, der undersøger de biologiske virkninger af et stort udvalg af dosishastigheder, der udføres på lineære a...

Strålebehandling er en effektiv behandling for mange typer af kræft1,2,3,4. Ekstra høj dosishastighed bestråling er relativt nyt i strålebehandling og er muliggjort af de seneste teknologiske fremskridt i lineære acceleratorer5. De kliniske fordele ved en ekstra høj dosishastighed på bestråling med standard dosishastighed omfatter kortere behandlingstid og forbedret patientoplevelse. Lineære acceleratorer giver også en klinisk indstilling for cellekultur baseret stråling biologi undersøgelser. De biologiske og terapeutiske konsekvenser af strålingsdosis og dosis satser har været et fokus af interesse for stråling onkologer og biologer i årtier6,7,8. Men radiobiologi af ekstra høj dosis sats bestråling og flash bestråling-en ekstremt høj dosishastighed af stråling-er endnu ikke grundigt undersøgt.
Gamma stråle bestråling er meget udbredt i cellekultur baseret stråling biologi9,10,11. Stråling opnås ved gammastråler, der udsendes fra rådnende radioaktive isotop kilder, typisk cæsium-137. Anvendelse af radioaktive kilder er meget reguleret og ofte begrænset. Med kilde baseret bestråling er det udfordrende at teste en bred vifte af dosishastigheder, hvilket begrænser dets anvendelighed i analysen af de biologiske virkninger af klinisk opnåelige dosishastigheder12.
Der har været flere undersøgelser, der illustrerer både dosis og dosis sats effekter12,13,14,15,16,17. I disse undersøgelser blev der anvendt både gammabestråling fra radioaktive isotoper eller røntgenstråler genereret af lineære acceleratorer. En række cellelinjer, der repræsenterer lungekræft, livmoderhalskræft, glioblastoma, og melanom blev brugt. Strålingsvirkninger på celle overlevelse, celle cyklus anholdelse, apoptose og DNA-skader blev evalueret som udlæsninger12,13,14,15,16,17 . Her beskriver vi en metode til at definere de biologiske virkninger af klinisk relevant strålingsdosis og dosishastigheder ved at levere røntgenbaseret stråling ved hjælp af en lineær accelerator. Disse undersøgelser bør udføres med tæt samarbejde mellem biolog, stråling onkolog og medicinsk fysiker.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:925px;" width="924">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Material</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">glioma stem-like cell 4121</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td>gift from Dr. Jeremy Rich</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">293 cells</td>
			<td style="width:269px;">ATCC</td>
			<td style="width:183px;">CRL-1573</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">neuron stem cell culture media</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">21103049</td>
			<td>NeurobasalTM media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">DMEM</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">10569044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">16000044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Recombinant Human EGF Protein</td>
			<td style="width:269px;">R&#38;D Systems</td>
			<td>236-EG-01M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Recombinant Human FGF basic</td>
			<td style="width:269px;">R&#38;D Systems</td>
			<td>4114-TC-01M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">B-27&#8482; Supplement</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Sodium Pyruvate</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">11360070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">25030164</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Tripsin-EDTA</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:183px;">25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">extracellular proten matrix</td>
			<td style="width:269px;">Corning</td>
			<td style="width:183px;">354277</td>
			<td style="width:167px;">MatrigelTM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Ethanol</td>
			<td style="width:269px;">Fisher chemical</td>
			<td style="width:183px;">A4094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Equipment</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">10 cm cell culture dish</td>
			<td style="width:269px;">Denville</td>
			<td style="width:183px;">T1110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">3.5 cm cell culture dish</td>
			<td style="width:269px;">USA Scientific Inc.</td>
			<td style="width:183px;">CC7682-3340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">22x22mm glass cover slip</td>
			<td style="width:269px;">electron microscopy sciences</td>
			<td style="width:183px;">72210-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">15 ml centrifuge tube</td>
			<td style="width:269px;">Thomas Scientific</td>
			<td style="width:183px;">1159M36</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">50 ml centrifuge tube</td>
			<td style="width:269px;">Thomas Scientific</td>
			<td style="width:183px;">1158R10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">5 ml Pipette</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">14-955-233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">pipet aid</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">13-681-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Vortex mixer</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">02-215-414</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:269px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:183px;">5810R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Linear Accelerator</td>
			<td style="width:269px;">Varian</td>
			<td style="width:183px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">water equivalent material</td>
			<td style="width:269px;">Sun Nuclear corporation</td>
			<td style="width:183px;">557</td>
			<td>Solid waterTM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Reagent preparation</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:307px;">DMEM media</td>
			<td style="width:269px;">10% fetal bovine serum (FBS), 2 mM L-glutamine, 100 units/mL penicillin G, 100 &#181;g/mL streptomycin in 500 ml DMEM media</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:307px;">stem cell culture media</td>
			<td style="width:269px;">10 ml B27 supplement, 20 &#181;g hFGF, 20 &#181;g hEGF, 2 mM L-glutamine, 100 units/mL penicillin G, 100 &#181;g/mL streptomycin in 500 ml Neurobasal media</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of a linear accelerator for conducting in vitro radiobiology experiments

Strålebehandling er fortsat en af hjørnestenene i kræftbehandling. For de fleste kræftformer, det er den mest effektive, ikke-kirurgisk behandling til debulk tumorer. Her beskriver vi en metode til at irradiere kræftceller med en lineær accelerator. Udviklingen af lineær accelerator teknologi har forbedret præcisionen og effektiviteten af strålebehandling. De biologiske virkninger af en lang række strålingsdoser og dosishastigheder er fortsat et intenst undersøgelsesområde. Brug af lineære acceleratorer kan lette disse studier ved hjælp af klinisk relevante doser og dosishastigheder.

For at undersøge den celle cyklus effekt af standard dosishastighed og ekstra høj dosis rate bestråling af en lineær accelerator, tre prøver af gliom Stem-lignende celler blev udarbejdet ved hjælp af denne protokol og indsamlet 24 h efter bestråling17: en kontrolprøve , som ikke var bestrålet (figur 2A), en prøve, der var bestrålet med 400 Me/min (Monitor enhed, 4,2 Gy/min standard dosishastighed, figur 2<stron...

Watch this Scientific Journal Video about Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments at JoVE.com

Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments

Anvendelse af en lineær accelerator til udførelse in vitro radiobiologi eksperimenter

Kliniske lineære acceleratorer kan anvendes til at bestemme biologiske virkninger af en bred vifte af dosishastigheder på cancerceller. Vi diskuterer, hvordan man oprette en lineær accelerator for celle-baserede assays og assays for kræft stamceller, der dyrkes som tumorspheres i suspension og cellelinjer dyrket som overtrædende kulturer.

Radiation therapy remains one of the cornerstones of cancer management. For most cancers, it is the most effective, nonsurgical therapy to debulk tumors. ...

Strålebehandling leveres oftest ved hjælp af lineære acceleratorer. Denne protokol giver forskerne mulighed for at vurdere de biologiske virkninger af stråling på celler ved hjælp af en lineær accelerator. Fordelen ved denne teknik er, at ved hjælp af en lineær accelerator, forskere kan studere en bred vifte af klinisk relevante doser og dosis satser.Endvidere, denne protokol kan bruges til alle typer af kræftceller. Denne metode kan udføres ved hjælp af samme udstyr som vist her. F.eks. lineære acceleratorer, der er fremstillet af andre leverandører.Personer, der ikke har erfaring med at udføre dosimetriske beregninger ved hjælp af en lineær accelerator, kan have svært ved at beregne det korrekte antal monitorenheder, der kræves for at levere den ønskede dosis til prøven. De ville drage fordel ved at søge råd fra en oplevelse medicinsk fysiker eller dosimetrist. Hvis dosis leveres til prøven nøjagtigt ved hjælp af en lineær accelerator, skal der foretages en omhyggelig placering.To dage før planlagt bestråling, der arbejder i en kulturhætte, skal du bruge en steril fem milliliterpipette til at indsamle gliomstamlignende celler fra en kulturplade i et 15 millilitercentrifugerør. Centrifuge cellerne ved 200 gange g i tre minutter i en bordplade centrifuge. Kassér supernatanten og resuspend cellpellet med en milliliter trypsin-EDTA.Inkuber ved stuetemperatur i fem minutter for at fordøje pellet og lave en enkelt celle suspension i trypsin-EDTA. Hvert andet minut under fordøjelsen rystes forsigtigt bunden af centrifugerøret for at sikre, at cellerne er grundigt fordøjet. Derefter tilsættes tre milliliter stamcellekultur medier til at slukke trypsin, forsigtigt blandes, og centrifuge ved 200 gange g i tre minutter i en bordplade centrifuge.Efter udsmid af supernatanten skal cellepellet resuspenderes med fem milliliter cellekulturmedier, og cellerne tælles med et hæmocytometer. Plade fem millioner celler opdelt i to 10 centimeter plader, der indeholder 10 milliliter cellekultur medier og inkubere 48 timer ved 37 grader Celsius. Lige før den planlagte bestråling, indsamle celler og centrifuge som gjort før.Kassér supernatanten og resuspend cellpellet med fem milliliter cellekulturmedier. Overfør en milliliter cellesuspension til en 35 millimeter plade, der indeholder to milliliter cellekulturmedium, og sørg for, at mediet når en højde på en centimeter. De belagte celler overføres til en sekundær beholder for at reducere risikoen for kontaminering og bringe cellerne i beholderen på en nyttevogn til bestrålingsanlægget for at bestråle cellerne.En dag før bestråling, der arbejder i cellekulturhætten, skal du bruge en Pasteur-pipette, der er forbundet til et vakuum, til at fjerne DMEM-mediet fra cellekulturpladen til den tilknyttede cellelinje. Derefter vaskes cellerne med fem milliliter steril PBS for at skylle restmediet af. Tilsæt en milliliter trypsin-EDTA i kulturskålen, og vip forsigtigt kulturpladen for at sikre, at hele skålen er dækket.Efter inkubering ved stuetemperatur i fem minutter, slukke trypsin-EDTA reaktion med tre milliliter DMEM medier. Brug en fem milliliter pipette til at samle cellerne i 15 milliliter centrifugerør, centrifuge, og derefter kultur cellerne som beskrevet i manuskriptet. At bestråle disse tidligere forberedte celler ved hjælp af LINAC's konsol software, indstille accelerator gantry og kollimator til nul grader, åbne x og y kæber til en symmetrisk fem af fem kvadratcentimeter feltstørrelse, og trække multileaf kollimatorer.Tilsæt mindst fem centimeter vandækvivalent materiale på behandlingsofaen, og anbring den celleskål, der skal bestråles, på den midt i LINAC-trådkorset. Placer cellerne i en dybde af maksimal dosis i en seks megavolt X-ray stråle omkring 1,5 centimeter og tilsæt en ekstra en centimeter vand-ækvivalent materiale på toppen af skålen. Sæt frontmarkøren på linac'ens hoved, og udvid den, indtil den berører oprustningsmaterialets overflade.Juster bordhøjden, indtil afstanden fra kilden til oprustningsoverfladen er 100 centimeter. Forlad behandlingsboksen, og sørg for, at alle andre personer har forladt. Kontroller, at der ikke er andre celler i rummet, og luk derefter døren til boksen.Bekræft feltstørrelse, monitorenheder og skærmenheder pr. minut ved konsollen, og aktivér derefter strålen for en celle med stråling. Tre prøver af gliomstam-lignende celler blev fremstillet ved hjælp af denne protokol og indsamlet 24 timer efter bestråling. Der blev cellecyklusprofiler beregnet og vist med procentdelene af celler i forskellige faser af cellecyklussen.G2-cellecyklussikring blev observeret efter bestråling af gliomstamceller med enten en standarddosishastighed eller en ekstra høj dosishastighed sammenlignet med ikke-bestrålede kontrolceller. For at få den rigtige dosis leveret, er det vigtigst at måle højden af medierne i kulturskålen for at sikre, at den når en centimeter. Efter denne procedure, andre biologiske analyser kan udføres, såsom immunostaining, vestlige blot, og celle cyklus analyse.Da denne procedure giver forskerne klinisk relevante dosis og dosis sats indstillinger, det kan bruges til at vurdere strålingseffekten på mange celle kultur baserede modeller.

Research

JoVE Journal

Medicine

Use of a Hanging Weight System for Coronary Artery Occlusion in Mice

Murine studies of acute injury are an area of intense investigation, as knockout mice for different genes are becoming increasingly available 1-38. ...

Use of a Hanging-weight System for Isolated Renal Artery Occlusion

In hospitalized patients, over 50% of cases of acute kidney injury (AKI) are caused by renal ischemia 1-3. A recent study of hospitalized patients ...

Use of a Hanging-weight System for Liver Ischemia in Mice

Anvendelse af en hængende vægt System til Lever iskæmi i mus

Acute liver injury due to ischemia can occur during several clinical procedures e.g. liver transplantation, hepatic tumor resection or trauma repair and ...

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

	The lower urinary tract (LUT) functions as a  dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a  convenient time. While ...

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Heterotypisk tredimensionale<em&gt; In Vitro</em&gt; Modellering af Stromal-Epiteliale Interactions Under Kræft i æggestokkene Indledning og Progression

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Halspulsåren infusioner farmakokinetisk og farmakodynamisk analyse af Taxaner i mus

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Setting Up a Stroke Team Algorithm and Conducting Simulation-based Training in the Emergency Department - A Practical Guide

Opsætning af en Stroke Team algoritme og Udførelse Simulation-baserede Træning på skadestuen - En praktisk vejledning

Time is of the essence when caring for an acute stroke patient. The ultimate goal is to restore blood flow to the ischemic brain. This can ...

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Forberedelse af urtemedicin: Er-Xian Decoction og Er-Xian-indeholdende Serum for<em&gt; In vivo</em&gt; Og<em&gt; In Vitro</em&gt; Eksperimenter

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

Conducting Maximal and Submaximal Endurance Exercise Testing to Measure Physiological and Biological Responses to Acute Exercise in Humans

Gennemføre maksimal og Submaximal udholdenhedstræning test for at måle fysiologiske og biologiske svar til akut øvelse i mennesker

Regular physical activity has a positive effect on human health, but the mechanisms controlling these effects remain unclear. The physiologic and biologic ...

Preparation Of Gushukang (GSK) Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

Klargøring af Gushukang (GSK) granulat til in vivo-og in vitro-forsøg

Traditional Chinese herbal medicine plays a role as an alternative method in treating many diseases, such as postmenopausal osteoporosis (POP). Gushukang ...