Name: use of a linear accelerator for conducting in vitro radiobiology experiments
Uploaded: 2019-05-26T13:00:00
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我々は、線形加速器の使用のための放射線腫瘍学のクリーブランドクリニック部門に感謝します。私たちは、グリオーマ幹細胞の寛大な贈り物のためにジェレミー・リッチ博士に感謝します。この研究は、クリーブランドクリニックによってサポートされました。

1. 懸濁細胞培養のための細胞製剤
<ol><li>幹細胞培養培地中の神経膠腫様細胞を、細胞培養インキュベーター中の約5x106細胞/10cmプレートで、5%CO2、37°Cで95%相対湿度を用いて培養した。 注:細胞培養条件は、すべての手順を通じて同じです。プロトコルで使用されるメディアは完全なメディアです。</li>
	<li>定期照射の2日前に、無菌5mLピペットを培養板から15mL遠心管に培養?...

<ol>
	<li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma.">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> The New England Journal of Medicine. 352 (10), 987-996 (2005).</li><li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+radiotherapy+with+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+versus+radiotherapy+alone+on+survival+in+glioblastoma+in+a+randomised+phase+III+study:+5-year+analysis+of+the+EORTC-NCIC+trial.">Effects of radiotherapy with concomitant and adjuvant temozolomide versus radiotherapy alone on survival in glioblastoma in a randomised phase III study: 5-year analysis of the EORTC-NCIC trial.</a> The Lancet Oncology. 10 (5), 459-466 (2009).</li><li>Tao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+imaging+in+upper+gastrointestinal+tumors+and+application+to+radiation+therapy.">Hypoxia imaging in upper gastrointestinal tumors and application to radiation therapy.</a> Journal of Gastrointestinal Oncology. 9 (6), 1044-1053 (2018).</li><li>Gajiwala, S., Torgeson, A., Garrido-Laguna, I., Kinsey, C., Lloyd, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+immunotherapy+and+radiation+therapy+strategies+for+pancreatic+cancer-targeting+multiple+steps+in+the+cancer+immunity+cycle.">Combination immunotherapy and radiation therapy strategies for pancreatic cancer-targeting multiple steps in the cancer immunity cycle.</a> Journal of Gastrointestinal Oncology. 9 (6), 1014-1026 (2018).</li><li>Liney, G. P., Whelan, B., Oborn, B., Barton, M., Keall, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRI-Linear+accelerator+raiotherapy+systems.">MRI-Linear accelerator raiotherapy systems.</a> Clinical Oncology Journal | The Royal College of Radiologists. 30 (11), 686-691 (2018).</li><li>Hall, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation+dose-rate:+a+factor+of+importance+in+radiobiology+and+radiotherapy.">Radiation dose-rate: a factor of importance in radiobiology and radiotherapy.</a> The British Journal of Radiology. 45 (530), 81-97 (1972).</li><li>Steel, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dose-rate+effect+in+human+tumour+cells.">The dose-rate effect in human tumour cells.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 9 (4), 299-310 (1987).</li><li>Ling, C. C., Gerweck, L. E., Zaider, M., Yorke, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose-rate+effects+in+external+beam+radiotherapy+redux.">Dose-rate effects in external beam radiotherapy redux.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 95 (3), 261-268 (2010).</li><li>Castro, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amotosalen/UVA+treatment+inactivates+T+cells+more+effectively+than+the+recommended+gammadose+for+prevention+of+transfusion-associated+graft-versus-host+disease.">Amotosalen/UVA treatment inactivates T cells more effectively than the recommended gammadose for prevention of transfusion-associated graft-versus-host disease.</a> Transfusion. 58 (6), 1506-1515 (2018).</li><li>Gaddini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exposing+primary+rat+retina+cell+cultures+to+&#947;-rays:+An+in+vitro+model+for+evaluating+radiation+responses.">Exposing primary rat retina cell cultures to &#947;-rays: An in vitro model for evaluating radiation responses.</a> Experimental Eye Research. 166, 21-28 (2018).</li><li>Simara, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+double-strand+breaks+in+human+induced+pluripotent+stem+cell+reprogramming+and+long-term+in+vitro+culturing.">DNA double-strand breaks in human induced pluripotent stem cell reprogramming and long-term in vitro culturing.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 8 (1), 73 (2017).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+the+biological+effects+of+125I+seeds+continuous+low-dose-rate+radiation+and+60Co+high-dose-rate+gamma+radiation+on+non-small+cell+lung+cancer+cells.">A comparison of the biological effects of 125I seeds continuous low-dose-rate radiation and 60Co high-dose-rate gamma radiation on non-small cell lung cancer cells.</a> PLoS One. 10 (8), 0133728 (2015).</li><li>Lasio, G., Guerrero, M., Goetz, W., Lima, F., Baulch, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+varying+dose-per-pulse+and+average+dose+rate+in+X-ray+beam+irradiation+on+cultured+cell+survival.">Effect of varying dose-per-pulse and average dose rate in X-ray beam irradiation on cultured cell survival.</a> Radiation and Environmental Biophysics. 53 (4), 671-676 (2014).</li><li>Karan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiobiological+effects+of+altering+dose+rate+in+filter-free+photon+beams.">Radiobiological effects of altering dose rate in filter-free photon beams.</a> Physics in Medicine and Biology. 58 (4), 1075-1082 (2013).</li><li>Sarojini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+combination+of+high+dose+rate+(10X+FFF/2400+MU/min/10+MV+X-rays)+and+total+low+dose+(0.5+Gy)+induces+a+higher+rate+of+apoptosis+in+melanoma+cells+in+vitro+and+superior+preservation+of+normal+melanocytes.">A combination of high dose rate (10X FFF/2400 MU/min/10 MV X-rays) and total low dose (0.5 Gy) induces a higher rate of apoptosis in melanoma cells in vitro and superior preservation of normal melanocytes.</a> Melanoma Research. 25 (5), 376-389 (2015).</li><li>Hao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+extra+high+on+glioma+stem-like+cells.">The effects of extra high on glioma stem-like cells.</a> PLoS One. 13 (8), 0202533 (2018).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation-induced+G2/M+arrest+rarely+occurred+in+glioblastoma+stem-like+cells.">Radiation-induced G2/M arrest rarely occurred in glioblastoma stem-like cells.</a> International Journal of Radiation Biology. 94 (4), 394-402 (2018).</li><li>Mcdermott, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Physics and Technology of Radiation Therapy. , (2010).</li><li>Lohse, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+high+dose+per+pulse+flattening+filter-free+beams+on+cancer+cell+survival.">Effect of high dose per pulse flattening filter-free beams on cancer cell survival.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 101 (1), 226-232 (2011).</li></ol>

放射線療法はがん管理の不可欠な部分です。放射線治療の有効性と効率性の向上に向けた取り組みが進んでいます。線形加速器技術の進歩は前例のない正確さおよび安全の患者を扱う機会を提供した。ほとんどの患者は線形加速器からの高エネルギーX線で治療されるため、線形加速器に対して行われる広範囲の線量率の生物学的効果を調べる研究は、患者に容易に適用される可能性がある。...

放射線療法は、多くのタイプの癌1、2、3、4に対する効果的な治療法である。超高線量照射は放射線治療において比較的新しく、線形加速器5の最近の技術進歩によって可能にされる。標準的な線量率の照射に対する余分高い線量率の臨床利点は、治療時間の短縮および改善された患者経験を含む。線形加速器はまた、細胞培養ベースの放射線生物学研究のための臨床設定を提供します。放射線量と線量率の生物学的および治療的な意味合いは、放射線腫瘍学者および生物学者の関心の焦点となってきた6,7,8.しかし、超高線量照射とフラッシュ照射の放射線生物学(放射線量が非常に高い)は、まだ徹底的に調査されていない。
ガンマ線照射は、細胞培養ベースの放射線生物学9、10、11で広く使用されている。放射線は、放射性同位元素源の崩壊から放出されるガンマ線(典型的にはセシウム-137)によって達成される。放射性物質の使用は非常に規制されており、しばしば制限されています。ソースベースの照射では、広範囲の線量率を試験することは困難であり、臨床的達成可能用量率12の生物学的効果の分析におけるその有用性を制限する。
用量と線量率の効果の両方を示すいくつかの研究があります12,13,14,15,16,17.これらの研究では、放射性同位元素から発生するガンマ照射と、線形加速器から発生するX線の両方を用いた。肺癌、子宮頸癌、神経膠芽腫、黒色腫を表す様々な細胞株が用いられた。細胞生存、細胞周期停止、アポトーシスおよびDNA損傷に対する放射線影響は、読み出し12、13、14、15、16、17として評価された。.ここでは、線形加速器を用いてX線系放射線を送送ることによって、臨床的に関連する放射線量と線量率の生物学的効果を定義する方法について述べた。これらの研究は、生物学者、放射線腫瘍学者と医学物理学者の間の緊密な協力で行われるべきです。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:925px;" width="924">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Material</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">glioma stem-like cell 4121</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td>gift from Dr. Jeremy Rich</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">293 cells</td>
			<td style="width:269px;">ATCC</td>
			<td style="width:183px;">CRL-1573</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">neuron stem cell culture media</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">21103049</td>
			<td>NeurobasalTM media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">DMEM</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">10569044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">16000044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Recombinant Human EGF Protein</td>
			<td style="width:269px;">R&#38;D Systems</td>
			<td>236-EG-01M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Recombinant Human FGF basic</td>
			<td style="width:269px;">R&#38;D Systems</td>
			<td>4114-TC-01M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">B-27&#8482; Supplement</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Sodium Pyruvate</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">11360070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">25030164</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Tripsin-EDTA</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:183px;">25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">extracellular proten matrix</td>
			<td style="width:269px;">Corning</td>
			<td style="width:183px;">354277</td>
			<td style="width:167px;">MatrigelTM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Ethanol</td>
			<td style="width:269px;">Fisher chemical</td>
			<td style="width:183px;">A4094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Equipment</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">10 cm cell culture dish</td>
			<td style="width:269px;">Denville</td>
			<td style="width:183px;">T1110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">3.5 cm cell culture dish</td>
			<td style="width:269px;">USA Scientific Inc.</td>
			<td style="width:183px;">CC7682-3340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">22x22mm glass cover slip</td>
			<td style="width:269px;">electron microscopy sciences</td>
			<td style="width:183px;">72210-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">15 ml centrifuge tube</td>
			<td style="width:269px;">Thomas Scientific</td>
			<td style="width:183px;">1159M36</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">50 ml centrifuge tube</td>
			<td style="width:269px;">Thomas Scientific</td>
			<td style="width:183px;">1158R10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">5 ml Pipette</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">14-955-233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">pipet aid</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">13-681-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Vortex mixer</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">02-215-414</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:269px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:183px;">5810R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Linear Accelerator</td>
			<td style="width:269px;">Varian</td>
			<td style="width:183px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">water equivalent material</td>
			<td style="width:269px;">Sun Nuclear corporation</td>
			<td style="width:183px;">557</td>
			<td>Solid waterTM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Reagent preparation</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:307px;">DMEM media</td>
			<td style="width:269px;">10% fetal bovine serum (FBS), 2 mM L-glutamine, 100 units/mL penicillin G, 100 &#181;g/mL streptomycin in 500 ml DMEM media</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:307px;">stem cell culture media</td>
			<td style="width:269px;">10 ml B27 supplement, 20 &#181;g hFGF, 20 &#181;g hEGF, 2 mM L-glutamine, 100 units/mL penicillin G, 100 &#181;g/mL streptomycin in 500 ml Neurobasal media</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of a linear accelerator for conducting in vitro radiobiology experiments

放射線療法は、がん管理の基礎の一つです。ほとんどの癌では、腫瘍を解体する最も効果的な非外科的治療です。ここでは、線形加速器で癌細胞を照射する方法について説明する。線形加速器技術の進歩により、放射線治療の精度と効率が向上しました。広範囲の放射線量と線量率の生物学的影響は、引き続き調査の激しい領域です。線形加速器の使用は、臨床的に関連する用量および線量率を使用してこれらの研究を容易にすることができる。

線形加速器による標準線量速度および超高線量照射の細胞周期効果を調べるために、このプロトコルを用いてグリオーマ幹細胞の3つのサンプルを調製し、照射後24時間を採取した17:1つの対照試料照射されなかったもの(図2A)、400 MU/min(モニターユニット、4.2 Gy/min標準線量率、図2B)を4Gyに照射した1つのサンプル、および2100 MU/min(...

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Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments

体外放射線生物学実験における線形加速器の利用

臨床線形加速器は、癌細胞に対する幅広い線量率の生物学的効果を決定するために使用することができる。細胞系アッセイおよびがん幹様細胞の線形加速器を設定する方法について、懸濁液中の腫瘍球として増殖し、付着培養培養物として成長した細胞株について議論する。

Radiation therapy remains one of the cornerstones of cancer management. For most cancers, it is the most effective, nonsurgical therapy to debulk tumors. ...

放射線療法は、最も頻繁に線形加速器を使用して提供される。このプロトコルは、研究者が線形加速器を使用して細胞に放射線の生物学的影響を評価することを可能にする。この技術の利点は、線形加速器を使用することにより、研究者は臨床的に関連する用量および用量率の広い範囲を研究することができるということです。さらに、このプロトコルは、すべてのタイプの癌細胞に使用することができる。この方法は、ここに示す同様の装置を使用して実行できます。たとえば、他のベンダーによって製造された線形加速器。線形加速器を使用して線量計算を行う経験がない個人は、サンプルに所望の線量を提供するために必要なモニターユニットの正しい数を計算するのに苦労するかもしれません。彼らは経験医学物理学者やドジメトリストからのアドバイスを求めることによって利益を得るでしょう。線形加速器を使用して正確にサンプルに線量を提供するには、慎重な配置が必要です。予定された照射の2日前に、培養フードで働き、無菌5ミリリットルピペットを使用して、培養プレートから15ミリリットル遠心分離管にグリオーマ幹細胞状細胞を採取する。細胞をカウンタートップ遠心分離機で3分間200回gで遠心分離する。上清を捨て、細胞ペレットを1ミリリットルのトリプシン-EDTAで再懸濁します。ペレットを消化し、トリプシン-EDTAで単一の細胞懸濁液を作るために室温で5分間インキュベートします。消化中に2分ごとに、遠心分離管の底を軽く振って細胞が完全に消化されるようにします。その後、3ミリリットルの幹細胞培養培地を加えてトリプシンをクエンチし、カウンタートップ遠心分離機で200回gで静かに混合し、遠心分離機を3分間加えます。上清を捨て、細胞ペレットを5ミリリットルの細胞培養培地で再懸濁し、ヘモサイトメーターで細胞を数える。500万個の細胞を10センチメートルのプレートに分け、10ミリリットルの細胞培養培地を含み、摂氏37度で48時間インキュベートする。予定された照射の直前に、前に行われたように細胞と遠心分離機を収集します。上清を捨て、細胞ペレットを5ミリリットルの細胞培養培地で再懸濁する。細胞懸濁液を1ミリリットルを2ミリリットルの細胞培養培地を含む35ミリプレートに移し、培地が1センチメートルの高さに達することを確認する。メッキされた細胞を二次容器に移して汚染の危険を減らし、ユーティリティカートの容器内の細胞を照射施設に持ち込んで細胞を照射する。照射の1日前に、細胞培養フードで働き、真空に接続されたパスツールピペットを使用して、取り付けられた細胞株に細胞培養板からDMEM培地を除去する。その後、残留培地を洗い流すために5ミリリットルの無菌PBSで細胞を洗います。培養皿にトリプシンEDTAを1ミリリットル加え、培養プレートを軽く傾けて皿全体が覆われていることを確認します。室温で5分間インキュベートした後、3ミリリットルのDMEM培地でトリプシン-EDTA反応を焼き付けます。5ミリリットルピペットを使用して細胞を15ミリリットル遠心管、遠心分離機に集め、次に原稿に記載されているように細胞を培養する。LINACのコンソールソフトウェアを使用して以前に準備したセルを照射するには、アクセラレータガントリーとコリメータをゼロ度に設定し、xとyの顎を対称5×5平方センチメートルのフィールドサイズに開き、マルチリーフコリメーターを後退させます。処理ソファに水に相当する材料を少なくとも5センチメートル加え、照射するセル皿をLINAC十字線の中心に置きます。1.5センチメートル前後の6メガボルトX線ビームに最大線量の深さで細胞を置き、皿の上にさらに1センチメートルの水に相当する材料を追加します。LINACの頭部にフロントポインタを貼り付け、構築材料の表面に触れるまで伸ばします。ソースから構築サーフェスまでの距離が 100 センチメートルになるまで、テーブルの高さを調整します。治療保管庫を離れ、他のすべての個人が去っていることを確認します。部屋に他のセルがないことを確認し、ボルトのドアを閉じます。フィールドサイズ、モニタユニット、モニタユニットをコンソールで1分あたりに確認し、放射線のセルに対してビームを有効にします。グリオーマ幹細胞の3つのサンプルをこのプロトコルを用いて調製し、照射後24時間回収した。そこに細胞周期プロファイルを計算し、細胞周期の異なる段階で細胞のパーセンテージで示した。G2細胞周期停止は、非照射対照細胞と比較して、標準的な線量率または余分な高用量率でグリオーマ幹細胞を照射した後に観察された。適切な用量を提供するためには、培養皿中の培地の高さを測定して、1センチメートルに達することを確認することが最も重要です。この手順に従って、免疫染色、ウェスタンブロット、および細胞周期解析などの他の生物学的アッセイを行うことができる。この手順は、研究者に臨床的に関連する線量および線量率の設定を提供するので、多くの細胞培養ベースのモデルに対する放射線効果を評価するために使用することができる。

Research

JoVE Journal

Medicine

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