Name: use of a linear accelerator for conducting in vitro radiobiology experiments
Uploaded: 2019-05-26T13:00:00
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우리는 선형 가속기의 사용을 위한 방사선 종양학의 클리블랜드 진료소 부에 감사합니다. 우리는 신경교종 줄기 와 같은 세포의 그의 관대 한 선물에 대한 박사 제레미 리치 감사합니다. 이 연구는 클리블랜드 클리닉에 의해 지원되었다.

1. 현탁액 세포 배양을 위한 세포 준비
<ol><li>배양 신경교종 줄기형 세포는 37°C에서 5% CO2, 95% 상대 습도를 가진 세포배양 인큐베이터에서 약 5 x 106 세포/10 cm 플레이트에서 줄기 세포 배양 배지에서 줄기줄기 유사 세포를 배양한다. 참고: 세포 배양 조건은 모든 절차에 걸쳐 동일합니다. 프로토콜에 사용되는 미디어는 완전한 미디어입니다.</li>
	<li>예정된 조사 이틀 전에, 배양 ?...

<ol>
	<li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma.">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> The New England Journal of Medicine. 352 (10), 987-996 (2005).</li><li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+radiotherapy+with+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+versus+radiotherapy+alone+on+survival+in+glioblastoma+in+a+randomised+phase+III+study:+5-year+analysis+of+the+EORTC-NCIC+trial.">Effects of radiotherapy with concomitant and adjuvant temozolomide versus radiotherapy alone on survival in glioblastoma in a randomised phase III study: 5-year analysis of the EORTC-NCIC trial.</a> The Lancet Oncology. 10 (5), 459-466 (2009).</li><li>Tao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+imaging+in+upper+gastrointestinal+tumors+and+application+to+radiation+therapy.">Hypoxia imaging in upper gastrointestinal tumors and application to radiation therapy.</a> Journal of Gastrointestinal Oncology. 9 (6), 1044-1053 (2018).</li><li>Gajiwala, S., Torgeson, A., Garrido-Laguna, I., Kinsey, C., Lloyd, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+immunotherapy+and+radiation+therapy+strategies+for+pancreatic+cancer-targeting+multiple+steps+in+the+cancer+immunity+cycle.">Combination immunotherapy and radiation therapy strategies for pancreatic cancer-targeting multiple steps in the cancer immunity cycle.</a> Journal of Gastrointestinal Oncology. 9 (6), 1014-1026 (2018).</li><li>Liney, G. P., Whelan, B., Oborn, B., Barton, M., Keall, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRI-Linear+accelerator+raiotherapy+systems.">MRI-Linear accelerator raiotherapy systems.</a> Clinical Oncology Journal | The Royal College of Radiologists. 30 (11), 686-691 (2018).</li><li>Hall, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation+dose-rate:+a+factor+of+importance+in+radiobiology+and+radiotherapy.">Radiation dose-rate: a factor of importance in radiobiology and radiotherapy.</a> The British Journal of Radiology. 45 (530), 81-97 (1972).</li><li>Steel, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dose-rate+effect+in+human+tumour+cells.">The dose-rate effect in human tumour cells.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 9 (4), 299-310 (1987).</li><li>Ling, C. C., Gerweck, L. E., Zaider, M., Yorke, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose-rate+effects+in+external+beam+radiotherapy+redux.">Dose-rate effects in external beam radiotherapy redux.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 95 (3), 261-268 (2010).</li><li>Castro, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amotosalen/UVA+treatment+inactivates+T+cells+more+effectively+than+the+recommended+gammadose+for+prevention+of+transfusion-associated+graft-versus-host+disease.">Amotosalen/UVA treatment inactivates T cells more effectively than the recommended gammadose for prevention of transfusion-associated graft-versus-host disease.</a> Transfusion. 58 (6), 1506-1515 (2018).</li><li>Gaddini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exposing+primary+rat+retina+cell+cultures+to+&#947;-rays:+An+in+vitro+model+for+evaluating+radiation+responses.">Exposing primary rat retina cell cultures to &#947;-rays: An in vitro model for evaluating radiation responses.</a> Experimental Eye Research. 166, 21-28 (2018).</li><li>Simara, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+double-strand+breaks+in+human+induced+pluripotent+stem+cell+reprogramming+and+long-term+in+vitro+culturing.">DNA double-strand breaks in human induced pluripotent stem cell reprogramming and long-term in vitro culturing.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 8 (1), 73 (2017).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+the+biological+effects+of+125I+seeds+continuous+low-dose-rate+radiation+and+60Co+high-dose-rate+gamma+radiation+on+non-small+cell+lung+cancer+cells.">A comparison of the biological effects of 125I seeds continuous low-dose-rate radiation and 60Co high-dose-rate gamma radiation on non-small cell lung cancer cells.</a> PLoS One. 10 (8), 0133728 (2015).</li><li>Lasio, G., Guerrero, M., Goetz, W., Lima, F., Baulch, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+varying+dose-per-pulse+and+average+dose+rate+in+X-ray+beam+irradiation+on+cultured+cell+survival.">Effect of varying dose-per-pulse and average dose rate in X-ray beam irradiation on cultured cell survival.</a> Radiation and Environmental Biophysics. 53 (4), 671-676 (2014).</li><li>Karan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiobiological+effects+of+altering+dose+rate+in+filter-free+photon+beams.">Radiobiological effects of altering dose rate in filter-free photon beams.</a> Physics in Medicine and Biology. 58 (4), 1075-1082 (2013).</li><li>Sarojini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+combination+of+high+dose+rate+(10X+FFF/2400+MU/min/10+MV+X-rays)+and+total+low+dose+(0.5+Gy)+induces+a+higher+rate+of+apoptosis+in+melanoma+cells+in+vitro+and+superior+preservation+of+normal+melanocytes.">A combination of high dose rate (10X FFF/2400 MU/min/10 MV X-rays) and total low dose (0.5 Gy) induces a higher rate of apoptosis in melanoma cells in vitro and superior preservation of normal melanocytes.</a> Melanoma Research. 25 (5), 376-389 (2015).</li><li>Hao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+extra+high+on+glioma+stem-like+cells.">The effects of extra high on glioma stem-like cells.</a> PLoS One. 13 (8), 0202533 (2018).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation-induced+G2/M+arrest+rarely+occurred+in+glioblastoma+stem-like+cells.">Radiation-induced G2/M arrest rarely occurred in glioblastoma stem-like cells.</a> International Journal of Radiation Biology. 94 (4), 394-402 (2018).</li><li>Mcdermott, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Physics and Technology of Radiation Therapy. , (2010).</li><li>Lohse, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+high+dose+per+pulse+flattening+filter-free+beams+on+cancer+cell+survival.">Effect of high dose per pulse flattening filter-free beams on cancer cell survival.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 101 (1), 226-232 (2011).</li></ol>

방사선 요법은 암 관리의 필수적인 부분입니다. 지속적인 노력은 방사선 치료의 효능과 효율성을 개선하기 위해 노력한다. 선형 가속기 기술의 발전은 전례없는 정확성과 안전성으로 환자를 치료할 수 있는 기회를 제공했습니다. 대부분의 환자는 선형 가속기에서 고에너지 엑스레이로 취급되기 때문에, 선형 가속기에 수행된 복용량 비율의 큰 범위의 생물학 효력을 검토하는 연구 결과는 환자에...

방사선 요법은 암 1, 2,3,4의많은 유형에 대한 효과적인 치료입니다. 초고용량 조사는 방사선 요법에서 비교적 새로운 것이며 선형 가속기 5의 최근기술 발전에 의해 가능하게된다. 표준 복용량 비율 조사에 비해 추가 높은 복용량 비율의 임상 이점은 단축된 처리 시간 및 향상한 참을성 있는 경험을 포함합니다. 선형 가속기는 또한 세포 배양 기반 방사선 생물학 연구를 위한 임상 설정을 제공합니다. 방사선 선량 및 용량 비율의 생물학적 및 치료적 의미는 수십 년 동안 방사선종양전문의와 생물학자의 관심의 초점이었다 6,7,8. 그러나, 여분의 높은 복용량 비율 조사 및 플래시 조사의 방사선 생물학 - 방사선의 매우 높은 복용량 속도 - 아직 철저하게 조사되지 않았습니다.
감마선 조사는 세포 배양 기반 방사선생물학 9,10,11에널리 사용된다. 방사선은 부패 방사성 동위원소 소스에서 방출 감마선에 의해 달성된다, 일반적으로 세슘-137. 방사성 소스의 사용은 매우 규제되고 종종 제한됩니다. 소스 기반 조사를 통해 광범위한 용량 비율을 테스트하는 것이 어렵고, 임상 달성 가능한 용량 비율12의생물학적 효과 분석에 그 유용성이 제한됩니다.
복용량 과 복용량 속도 효과 모두 설명 하는 여러 연구 되었습니다12,13, 14,15,16,17. 이러한 연구에서는, 선형 가속기에서 생성된 방사성 동위원소 또는 X선으로부터 생성된 감마-조사가 모두 사용되었다. 폐암, 자궁경부암, 아교모세포종 및 흑색종을 나타내는 다양한 세포주를 사용했습니다. 세포 생존, 세포 주기 체포, 세포 사멸 및 DNA 손상에 대한 방사선 효과는 판독12,13,14,15,16,17로 평가되었다. . 여기서, 우리는 선형 가속기를 사용하여 X선 기반 방사선을 전달함으로써 임상적으로 관련 방사선 선량 및 선량의 생물학적 효과를 정의하는 방법을 기술한다. 이 연구 결과는 생물학자, 방사선 종양전문의 및 의학 물리학자 사이 가까운 협력으로 수행되어야 합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:925px;" width="924">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Material</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">glioma stem-like cell 4121</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td>gift from Dr. Jeremy Rich</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">293 cells</td>
			<td style="width:269px;">ATCC</td>
			<td style="width:183px;">CRL-1573</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">neuron stem cell culture media</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">21103049</td>
			<td>NeurobasalTM media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">DMEM</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">10569044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">16000044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Recombinant Human EGF Protein</td>
			<td style="width:269px;">R&#38;D Systems</td>
			<td>236-EG-01M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Recombinant Human FGF basic</td>
			<td style="width:269px;">R&#38;D Systems</td>
			<td>4114-TC-01M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">B-27&#8482; Supplement</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Sodium Pyruvate</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">11360070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">25030164</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Tripsin-EDTA</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:183px;">25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">extracellular proten matrix</td>
			<td style="width:269px;">Corning</td>
			<td style="width:183px;">354277</td>
			<td style="width:167px;">MatrigelTM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Ethanol</td>
			<td style="width:269px;">Fisher chemical</td>
			<td style="width:183px;">A4094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Equipment</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">10 cm cell culture dish</td>
			<td style="width:269px;">Denville</td>
			<td style="width:183px;">T1110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">3.5 cm cell culture dish</td>
			<td style="width:269px;">USA Scientific Inc.</td>
			<td style="width:183px;">CC7682-3340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">22x22mm glass cover slip</td>
			<td style="width:269px;">electron microscopy sciences</td>
			<td style="width:183px;">72210-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">15 ml centrifuge tube</td>
			<td style="width:269px;">Thomas Scientific</td>
			<td style="width:183px;">1159M36</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">50 ml centrifuge tube</td>
			<td style="width:269px;">Thomas Scientific</td>
			<td style="width:183px;">1158R10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">5 ml Pipette</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">14-955-233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">pipet aid</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">13-681-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Vortex mixer</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">02-215-414</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:269px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:183px;">5810R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Linear Accelerator</td>
			<td style="width:269px;">Varian</td>
			<td style="width:183px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">water equivalent material</td>
			<td style="width:269px;">Sun Nuclear corporation</td>
			<td style="width:183px;">557</td>
			<td>Solid waterTM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Reagent preparation</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:307px;">DMEM media</td>
			<td style="width:269px;">10% fetal bovine serum (FBS), 2 mM L-glutamine, 100 units/mL penicillin G, 100 &#181;g/mL streptomycin in 500 ml DMEM media</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:307px;">stem cell culture media</td>
			<td style="width:269px;">10 ml B27 supplement, 20 &#181;g hFGF, 20 &#181;g hEGF, 2 mM L-glutamine, 100 units/mL penicillin G, 100 &#181;g/mL streptomycin in 500 ml Neurobasal media</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of a linear accelerator for conducting in vitro radiobiology experiments

방사선 요법은 암 관리의 초석 중 하나입니다. 대부분의 암에 대 한, 그것은 가장 효과적인, 비 수술 치료 는 종양을 debulk. 여기서, 우리는 선형 가속기로 암세포를 조사하는 방법을 기술한다. 선형 가속기 기술의 발전은 방사선 요법의 정밀도와 효율성을 향상시켰습니다. 방사선 복용량 및 복용량 비율의 넓은 범위의 생물학적 효과 조사의 강렬한 영역을 계속. 선형 가속기의 사용은 임상적으로 관련된 복용량 및 복용량 비율을 사용하여 이러한 연구를 용이하게 할 수 있습니다.

선형 가속기에 의한 표준 투여량 율 및 엑스트라 고용량 레이트 조사의 세포 주기 효과를 조사하기 위해, 신경교종 줄기 유사 세포의 3개의 샘플을 이 프로토콜을 사용하여 제조하고 조사 후 24시간 수집한 1개의 대조군 샘플17:1개의 대조군 샘플 조사되지 않은(그림2A), 400 MU/min(모니터 유닛, 4.2 Gy/min 표준 투여량, 도 2B)으로...

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Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments

체외 방사선 생물학 실험을 수행하기위한 선형 가속기 의 사용

임상 선형 가속기는 암세포에 대한 광범위한 투여량 비율의 생물학적 효과를 결정하는 데 사용될 수 있다. 우리는 세포 기지를 둔 계산서를 위한 선형 가속기를 설치하는 방법 토론하고 암 줄기 같이 세포를 위한 세포 기지를 둔 세포 같이 세포는 부착한 문화로 성장한 현탁액 및 세포주에서 종양구로 성장했습니다.

Radiation therapy remains one of the cornerstones of cancer management. For most cancers, it is the most effective, nonsurgical therapy to debulk tumors. ...

방사선 요법은 선형 가속기를 사용하여 가장 자주 전달됩니다. 이 프로토콜은 연구원이 선형 가속기를 사용하여 세포에 방사선의 생물학적 효력을 평가할 수 있게 합니다. 이 기술의 장점은 선형 가속기를 사용하여 연구자들은 임상적으로 관련된 다양한 용량과 용량 비율을 연구 할 수 있다는 것입니다.더욱이, 이 프로토콜은 암세포의 모든 모형을 위해 이용될 수 있습니다. 이 방법은 여기에 표시된 것과 유사한 장비를 사용하여 수행할 수 있습니다. 예를 들어 다른 공급업체에서 제조한 선형 가속기입니다.선형 가속기를 사용하여 도시메트릭 계산을 수행하는 데 경험이 없는 개인은 원하는 용량을 샘플에 전달하는 데 필요한 정확한 모니터 단위 수를 계산하는 데 어려움을 겪을 수 있습니다. 그(것)들은 경험 의학 물리학자 또는 점안사에게서 조언을 구함으로써 유익할 것입니다. 선형 가속기를 사용하여 시료에 용량을 정확하게 전달하려면 신중한 배치가 필요합니다.예정된 조사 이틀 전에, 배양 후드에서 일하는 멸균 5 밀리리터 파이펫을 사용하여 배양 판에서 신경교종 줄기와 같은 세포를 15 밀리리터 원심분리기 튜브로 수집합니다. 원심 분리기는 싱크대 원심분리기에서 3분 동안 200배 g의 세포를 원심분리합니다. 상체를 버리고 트립신-EDTA의 1 밀리리터로 셀 펠릿을 다시 놓습니다.펠릿을 소화하고 트립신-EDTA에서 단일 세포 현탁액을 만들기 위해 실온에서 5 분 동안 배양하십시오. 소화 중 2분마다 원심분리기 튜브바닥을 부드럽게 흔들어 세포가 철저히 소화되도록 합니다. 그런 다음 줄기 세포 배양 매체의 3 밀리리터를 추가하여 트립신을 담금질하고 부드럽게 혼합하고 원심분리기를 200회 g에서 싱크로원심분리기에서 3분간 첨가합니다.상체를 폐기한 후, 세포 배양 배지의 5밀리리터로 세포 펠릿을 다시 중단하고 혈류계로 세포를 계산한다. 플레이트 5백만 개의 세포는 세포 배양 배지 의 10 밀리리터를 포함하는 2개의 10센티미터 판으로 나누고 섭씨 37도에서 48시간을 배양합니다. 예정된 조사 직전에 이전과 마찬가지로 세포와 원심분리기를 수집합니다.상체를 버리고 세포 배양 배지의 5 밀리리터로 세포 펠릿을 재중단합니다. 세포 배양 배지의 2밀리리터를 포함하는 35 밀리미터 플레이트로 세포 현탁액1 밀리리터를 전달하여 배지가 1센티미터의 높이에 도달하는지 확인합니다. 도금 된 세포를 이차 용기로 옮겨 오염 위험을 줄이고 유틸리티 카트의 용기에 있는 세포를 조사 시설로 가져와 세포를 조사합니다.조사 하루 전에 세포 배양 후드에서 작업하는 파스퇴르 파이펫을 사용하여 세포 배양판에서 부착된 세포주까지 DMEM 배지를 제거합니다. 그런 다음 멸균 PBS의 5 밀리리터로 세포를 씻어 잔류 배지를 헹구는 것입니다. 트립신-EDTA 1밀리리터를 문화 요리에 넣고 배양 판을 부드럽게 기울여 전체 접시가 덮여 있는지 확인합니다.실온에서 5분 동안 배양한 후, DMEM 미디어의 3밀리리터로 트립신-EDTA 반응을 담금질한다. 5 밀리 리터 파이펫을 사용하여 15 밀리리터 원심분리기 튜브, 원심분리기로 세포를 수집한 다음 원고에 설명된 바와 같이 세포를 배양합니다. LINAC의 콘솔 소프트웨어를 사용하여 이전에 준비된 이러한 세포를 조사하려면 가속기 갠트리및 콜리메이터를 0도로 설정하고 x 와 y 턱을 대칭 5xx의 대칭 5로 열고 멀티리프 콜리메이터를 철회합니다.처리 소파에 물 등가물 물질의 적어도 5 센티미터를 추가하고 LINAC 십자선의 중심에 조사 할 세포 접시를 배치합니다. 세포를 최대 용량의 깊이에 최대 용량의 깊이에 배치 약 1.5 센티미터 의 6 메가 볼트 X 선 빔과 접시 위에 물 등가 물질의 추가 1 센티미터를 추가. 앞포인터를 LINAC의 머리에 부착하고 빌드업 재료의 표면에 닿을 때까지 확장합니다.소스에서 축적 표면까지의 거리가 100cm가 될 때까지 테이블 높이를 조정합니다. 치료 금고를 떠나 다른 모든 개인이 떠났는지 확인하십시오. 방에 다른 셀이 없는지 확인한 다음 볼트 도어를 닫습니다.콘솔에서 분당 필드 크기, 모니터 장치 및 모니터 유닛을 확인한 다음 방사선 셀에 빔을 활성화합니다. 신경교종 줄기 와 같은 세포의 3개의 견본은 이 프로토콜을 사용하여 준비하고 조사 후에 24 시간을 집합했습니다. 거기 세포 주기 단면도계산 하 고 세포 주기의 다른 단계에서 세포의 백분율로 표시 되었다.G2 세포 주기 체포는 비조사 대조군 세포와 비교하여 표준 투여량 비율 또는 추가 고용량 비율로 신경교종 줄기 세포의 조사 후에 관찰되었습니다. 올바른 복용량을 전달하기 위해, 그것은 1 센티미터에 도달 있는지 확인하기 위해 문화 접시에서 미디어의 높이를 측정하는 것이 가장 중요합니다. 이 절차에 이어 면역염색, 서부 블롯 및 세포 주기 분석과 같은 다른 생물학적 분석이 수행될 수 있다.이 절차는 연구원에게 임상적으로 관련 된 복용량 및 복용량 속도 설정을 제공 하기 때문에, 그것은 많은 세포 배양 기반 모델에 방사선 효과 평가 하는 데 사용할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Medicine

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연구

의학

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