Name: use of a linear accelerator for conducting in vitro radiobiology experiments
Uploaded: 2019-05-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments at JoVE.com

Vi takker Cleveland Clinic Department of stråling onkologi for bruk av den lineære akseleratorer. Vi takker Dr. Jeremy Rich for sin sjenerøse gave glioma stilk-lignende celler. Denne forskningen ble støttet av Cleveland Clinic.

1. celle forberedelse for suspensjon cellekultur
<ol><li>Kultur glioma stilk-lignende celler i stilk cellen kultur medier på ca 5 x 106 celle/10 cm plater i en cellekultur inkubator med 5% co2, 95% relativ fuktighet ved 37 ° c. Merk: cellen kultur tilstand er den samme gjennom alle prosedyrene. Mediet som brukes i protokollen, er komplette medier.</li>
	<li>To dager før planlagt bestråling, samle glioma-lignende celler fra kultur platen med en steril 5 mL pipette inn i et 15 mL sentrifuger?...

<ol>
	<li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma.">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> The New England Journal of Medicine. 352 (10), 987-996 (2005).</li><li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+radiotherapy+with+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+versus+radiotherapy+alone+on+survival+in+glioblastoma+in+a+randomised+phase+III+study:+5-year+analysis+of+the+EORTC-NCIC+trial.">Effects of radiotherapy with concomitant and adjuvant temozolomide versus radiotherapy alone on survival in glioblastoma in a randomised phase III study: 5-year analysis of the EORTC-NCIC trial.</a> The Lancet Oncology. 10 (5), 459-466 (2009).</li><li>Tao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+imaging+in+upper+gastrointestinal+tumors+and+application+to+radiation+therapy.">Hypoxia imaging in upper gastrointestinal tumors and application to radiation therapy.</a> Journal of Gastrointestinal Oncology. 9 (6), 1044-1053 (2018).</li><li>Gajiwala, S., Torgeson, A., Garrido-Laguna, I., Kinsey, C., Lloyd, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+immunotherapy+and+radiation+therapy+strategies+for+pancreatic+cancer-targeting+multiple+steps+in+the+cancer+immunity+cycle.">Combination immunotherapy and radiation therapy strategies for pancreatic cancer-targeting multiple steps in the cancer immunity cycle.</a> Journal of Gastrointestinal Oncology. 9 (6), 1014-1026 (2018).</li><li>Liney, G. P., Whelan, B., Oborn, B., Barton, M., Keall, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRI-Linear+accelerator+raiotherapy+systems.">MRI-Linear accelerator raiotherapy systems.</a> Clinical Oncology Journal | The Royal College of Radiologists. 30 (11), 686-691 (2018).</li><li>Hall, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation+dose-rate:+a+factor+of+importance+in+radiobiology+and+radiotherapy.">Radiation dose-rate: a factor of importance in radiobiology and radiotherapy.</a> The British Journal of Radiology. 45 (530), 81-97 (1972).</li><li>Steel, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dose-rate+effect+in+human+tumour+cells.">The dose-rate effect in human tumour cells.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 9 (4), 299-310 (1987).</li><li>Ling, C. C., Gerweck, L. E., Zaider, M., Yorke, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose-rate+effects+in+external+beam+radiotherapy+redux.">Dose-rate effects in external beam radiotherapy redux.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 95 (3), 261-268 (2010).</li><li>Castro, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amotosalen/UVA+treatment+inactivates+T+cells+more+effectively+than+the+recommended+gammadose+for+prevention+of+transfusion-associated+graft-versus-host+disease.">Amotosalen/UVA treatment inactivates T cells more effectively than the recommended gammadose for prevention of transfusion-associated graft-versus-host disease.</a> Transfusion. 58 (6), 1506-1515 (2018).</li><li>Gaddini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exposing+primary+rat+retina+cell+cultures+to+&#947;-rays:+An+in+vitro+model+for+evaluating+radiation+responses.">Exposing primary rat retina cell cultures to &#947;-rays: An in vitro model for evaluating radiation responses.</a> Experimental Eye Research. 166, 21-28 (2018).</li><li>Simara, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+double-strand+breaks+in+human+induced+pluripotent+stem+cell+reprogramming+and+long-term+in+vitro+culturing.">DNA double-strand breaks in human induced pluripotent stem cell reprogramming and long-term in vitro culturing.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 8 (1), 73 (2017).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+the+biological+effects+of+125I+seeds+continuous+low-dose-rate+radiation+and+60Co+high-dose-rate+gamma+radiation+on+non-small+cell+lung+cancer+cells.">A comparison of the biological effects of 125I seeds continuous low-dose-rate radiation and 60Co high-dose-rate gamma radiation on non-small cell lung cancer cells.</a> PLoS One. 10 (8), 0133728 (2015).</li><li>Lasio, G., Guerrero, M., Goetz, W., Lima, F., Baulch, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+varying+dose-per-pulse+and+average+dose+rate+in+X-ray+beam+irradiation+on+cultured+cell+survival.">Effect of varying dose-per-pulse and average dose rate in X-ray beam irradiation on cultured cell survival.</a> Radiation and Environmental Biophysics. 53 (4), 671-676 (2014).</li><li>Karan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiobiological+effects+of+altering+dose+rate+in+filter-free+photon+beams.">Radiobiological effects of altering dose rate in filter-free photon beams.</a> Physics in Medicine and Biology. 58 (4), 1075-1082 (2013).</li><li>Sarojini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+combination+of+high+dose+rate+(10X+FFF/2400+MU/min/10+MV+X-rays)+and+total+low+dose+(0.5+Gy)+induces+a+higher+rate+of+apoptosis+in+melanoma+cells+in+vitro+and+superior+preservation+of+normal+melanocytes.">A combination of high dose rate (10X FFF/2400 MU/min/10 MV X-rays) and total low dose (0.5 Gy) induces a higher rate of apoptosis in melanoma cells in vitro and superior preservation of normal melanocytes.</a> Melanoma Research. 25 (5), 376-389 (2015).</li><li>Hao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+extra+high+on+glioma+stem-like+cells.">The effects of extra high on glioma stem-like cells.</a> PLoS One. 13 (8), 0202533 (2018).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation-induced+G2/M+arrest+rarely+occurred+in+glioblastoma+stem-like+cells.">Radiation-induced G2/M arrest rarely occurred in glioblastoma stem-like cells.</a> International Journal of Radiation Biology. 94 (4), 394-402 (2018).</li><li>Mcdermott, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Physics and Technology of Radiation Therapy. , (2010).</li><li>Lohse, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+high+dose+per+pulse+flattening+filter-free+beams+on+cancer+cell+survival.">Effect of high dose per pulse flattening filter-free beams on cancer cell survival.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 101 (1), 226-232 (2011).</li></ol>

Strålebehandling er en integrert del av kreft styring. Pågående arbeidet søker å forbedre effekten og effektiviteten av strålebehandling. Fremskritt innen lineær akselerator teknologi har gitt muligheten til å behandle pasienter med uovertruffen nøyaktighet og sikkerhet. Siden de fleste pasientene behandles med røntgenstråler med høy energi fra lineære akseleratorer, kan studier som undersøker de biologiske virkningene av et stort utvalg av dose rater som utføres på lineære akseleratorer, være lett å b...

Strålebehandling er en effektiv behandling for mange typer kreft1,2,3,4. Ekstra høy dose rate bestråling er relativt nytt i strålebehandling og er gjort mulig av nyere teknologiske fremskritt i lineære akseleratorer5. Kliniske fordeler med ekstra høy dose rate over standard dose rate bestråling inkluderer forkortet behandlingstid og forbedret pasient opplevelse. Lineære akseleratorer gir også en klinisk innstilling for cellekultur basert stråling biologi studier. Den biologiske og terapeutiske implikasjoner av stråling dose og dose ratene har vært et fokus av interesse for stråling onkologer og biologer i flere ti år6,7,8. Men, radiobiology av ekstra høy dose rate bestråling og blits bestråling-en ekstremt høy dose frekvens av stråling-har ennå ikke grundig undersøkt.
Gamma Ray bestråling er mye brukt i cellekultur basert stråling biologi9,10,11. Stråling oppnås ved gamma stråler som slippes ut fra råtnende radioaktive isotop kilder, typisk cesium-137. Bruk av radioaktive kilder er sterkt regulert og ofte begrenset. Med kildebasert bestråling, er det utfordrende å teste et bredt spekter av dose rater, noe som begrenser nytten i analysen av de biologiske virkningene av kliniske oppnåelige dose rater12.
Det har vært flere studier som illustrerer både dose og dose rate effekter12,13,14,15,16,17. I disse studiene ble både gamma-bestråling generert fra radioaktive isotoper eller røntgenstråler generert fra lineære akseleratorer brukt. En rekke cellelinjer som representerer lungekreft, livmorhalskreft, glioblastom og melanom ble brukt. Stråle effekter på celle overlevelse, celle syklus arrest, apoptose og DNA skade ble evaluert som readouts12,13,14,15,16,17 . Her beskriver vi en metode for å definere de biologiske virkningene av klinisk relevant stråledose og dose rater ved å levere røntgenstråling ved hjelp av en lineær akselerator. Disse studiene bør utføres med nært samarbeid mellom biolog, stråling onkolog og medisinsk fysiker.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:925px;" width="924">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Material</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">glioma stem-like cell 4121</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td>gift from Dr. Jeremy Rich</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">293 cells</td>
			<td style="width:269px;">ATCC</td>
			<td style="width:183px;">CRL-1573</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">neuron stem cell culture media</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">21103049</td>
			<td>NeurobasalTM media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">DMEM</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">10569044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">16000044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Recombinant Human EGF Protein</td>
			<td style="width:269px;">R&#38;D Systems</td>
			<td>236-EG-01M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Recombinant Human FGF basic</td>
			<td style="width:269px;">R&#38;D Systems</td>
			<td>4114-TC-01M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">B-27&#8482; Supplement</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Sodium Pyruvate</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">11360070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">25030164</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Tripsin-EDTA</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:183px;">25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">extracellular proten matrix</td>
			<td style="width:269px;">Corning</td>
			<td style="width:183px;">354277</td>
			<td style="width:167px;">MatrigelTM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Ethanol</td>
			<td style="width:269px;">Fisher chemical</td>
			<td style="width:183px;">A4094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Equipment</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">10 cm cell culture dish</td>
			<td style="width:269px;">Denville</td>
			<td style="width:183px;">T1110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">3.5 cm cell culture dish</td>
			<td style="width:269px;">USA Scientific Inc.</td>
			<td style="width:183px;">CC7682-3340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">22x22mm glass cover slip</td>
			<td style="width:269px;">electron microscopy sciences</td>
			<td style="width:183px;">72210-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">15 ml centrifuge tube</td>
			<td style="width:269px;">Thomas Scientific</td>
			<td style="width:183px;">1159M36</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">50 ml centrifuge tube</td>
			<td style="width:269px;">Thomas Scientific</td>
			<td style="width:183px;">1158R10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">5 ml Pipette</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">14-955-233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">pipet aid</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">13-681-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Vortex mixer</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">02-215-414</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:269px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:183px;">5810R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Linear Accelerator</td>
			<td style="width:269px;">Varian</td>
			<td style="width:183px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">water equivalent material</td>
			<td style="width:269px;">Sun Nuclear corporation</td>
			<td style="width:183px;">557</td>
			<td>Solid waterTM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Reagent preparation</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:307px;">DMEM media</td>
			<td style="width:269px;">10% fetal bovine serum (FBS), 2 mM L-glutamine, 100 units/mL penicillin G, 100 &#181;g/mL streptomycin in 500 ml DMEM media</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:307px;">stem cell culture media</td>
			<td style="width:269px;">10 ml B27 supplement, 20 &#181;g hFGF, 20 &#181;g hEGF, 2 mM L-glutamine, 100 units/mL penicillin G, 100 &#181;g/mL streptomycin in 500 ml Neurobasal media</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of a linear accelerator for conducting in vitro radiobiology experiments

Strålebehandling er fortsatt en av hjørnesteinene i kreft ledelse. For de fleste kreftformer, er det den mest effektive, nonsurgical terapi til debulk svulster. Her beskriver vi en metode for å irradiate kreftceller med en lineær akselerator. Fremme av lineær akselerator teknologi har forbedret presisjon og effektivitet av strålebehandling. De biologiske virkningene av et bredt spekter av strålingsdoser og dose rater fortsetter å være et intenst undersøkelses område. Bruk av lineære akseleratorer kan forenkle disse studiene ved hjelp av klinisk relevante doser og dose rater.

Å undersøke celle syklus effekten av standard dose rate og ekstra høy dose rate bestråling av en lineær akselerator, tre prøver av glioma Stem-lignende celler ble utarbeidet ved hjelp av denne protokollen og samlet 24 h etter bestråling17: en kontroll prøve som ikke var bestrålt (figur 2A), en prøve bestrålt med 400 MU/min (Monitor enhet, 4,2 gy/min standard dose rate, figur 2B) til 4 Gy, og en...

Watch this Scientific Journal Video about Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments at JoVE.com

Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments

Bruk av en lineær akselerator for å gjennomføre in vitro Radiobiology eksperimenter

Kliniske lineære akseleratorer kan brukes til å bestemme biologiske effekter av et bredt spekter av dose rater på kreftceller. Vi diskuterer hvordan du setter opp en lineær akselerator for celle-baserte analyser og analyser for kreft stilk-lignende celler dyrket som tumorspheres i suspensjon og cellelinjer vokst som tilhenger kulturer.

Radiation therapy remains one of the cornerstones of cancer management. For most cancers, it is the most effective, nonsurgical therapy to debulk tumors. ...

Strålebehandling leveres oftest ved hjelp av lineære akseleratorer. Denne protokollen gjør det mulig for forskere å vurdere de biologiske effektene av stråling på celler ved hjelp av en lineær akselerator. Fordelen med denne teknikken er at ved hjelp av en lineær akselerator, forskere kan studere et bredt spekter av klinisk relevante doser og dosepriser.Videre kan denne protokollen brukes til alle typer kreftceller. Denne metoden kan utføres ved hjelp av lignende utstyr som det som vises her. Lineære akseleratorer produsert av andre leverandører.Personer som ikke har erfaring med å utføre dosometriske beregninger ved hjelp av en lineær akselerator, kan slite med å beregne riktig antall monitorenheter som kreves for å levere ønsket dose til prøven. De ville ha nytte av å søke råd fra en erfaring medisinsk fysiker eller dosimetrist. Å levere dose til prøven nøyaktig ved hjelp av en lineær akselerator krever nøye plassering.To dager før planlagt bestråling, som arbeider i en kulturhette, bruker du en steril fem milliliter pipette til å samle gliomstamlignende celler fra en kulturplate til et 15 milliliter sentrifugerør. Sentrifuger cellene ved 200 ganger g i tre minutter i en benkeplate sentrifuge. Kast den overnaturlige og gjenoppusser cellepelleten med en milliliter trypsin-EDTA.Inkuber ved romtemperatur i fem minutter for å fordøye pellet og lage en enkelt celle suspensjon i trypsin-EDTA. Hvert annet minutt under fordøyelsen rister du forsiktig bunnen av sentrifugerøret for å sikre at cellene er grundig fordøyd. Deretter legger du til tre milliliter stamcellekulturmedier for å slukke trypsin, forsiktig blande og sentrifuge på 200 ganger g i tre minutter i en benkeplate sentrifuge.Etter å ha kastet den overnaturlige, resuspend cellen pellet med fem milliliter cellekultur media og telle cellene med et hemocytometer. Plate fem millioner celler delt i to 10 centimeter plater som inneholder 10 milliliter cellekultur media og inkubere 48 timer ved 37 grader Celsius. Rett før planlagt bestråling, samle cellene og sentrifuge som gjort før.Kast den overnaturlige og gjenoppusser cellepelleten med fem milliliter cellekulturmedier. Overfør en milliliter cellefjæring til en 35 millimeter plate som inneholder to milliliter cellekulturmedium, og pass på at mediet når en høyde på en centimeter. Overfør de belagte cellene til en sekundær beholder for å redusere risikoen for forurensning og bringe cellene i beholderen på en nyttevogn til bestrålingsanlegget for å bestråle cellene.En dag før bestråling, arbeider i cellekultur hette, bruke en Pasteur pipette koblet til et vakuum for å fjerne DMEM medium fra celle kulturplaten til den vedlagte cellelinjen. Vask deretter cellene med fem milliliter steril PBS for å skylle av gjenværende medium. Tilsett en milliliter trypsin-EDTA i kulturfatet og vipp forsiktig kulturplaten for å sikre at hele parabolen er dekket.Etter å ha inkubert ved romtemperatur i fem minutter, slukke trypsin-EDTA-reaksjonen med tre milliliter DMEM-medier. Bruk en fem milliliter pipette til å samle cellene i 15 milliliter sentrifugerør, sentrifuge, og deretter kultur cellene som beskrevet i manuskriptet. For å bestråle disse tidligere forberedte cellene ved hjelp av LINAC konsollprogramvare, sett akseleratoren gantry og collimator til null grader, åpne x og y kjever til en symmetrisk fem og fem kvadratcentimeter feltstørrelse, og trekk multileaf collimators.Tilsett minst fem centimeter vannekvivalent materiale på behandlingssofaen og plasser cellefatet som skal bestråles på den i midten av LINAC-trådkorset. Legg cellene på en dybde av maksimal dose i en seks megavolt røntgenstråle rundt 1,5 centimeter og tilsett ytterligere en centimeter vannekvivalent materiale på toppen av parabolen. Fest frontpekeren til hodet på LINAC og trekk den til den berører overflaten av oppbyggingsmaterialet.Juster bordhøyden til avstanden fra kilden til oppbyggingsoverflaten er 100 centimeter. Forlat behandlingshvelvet, og sørg for at alle andre individer har forlatt. Kontroller at det ikke er andre celler i rommet, og lukk deretter hvelvdøren.Bekreft feltstørrelsen, skjermenhetene og skjermenhetene per minutt på konsollen, og aktiver deretter strålen for en strålingscelle. Tre prøver av glioma stamceller ble utarbeidet ved hjelp av denne protokollen og samlet 24 timer etter bestråling. Det celle syklus profiler ble beregnet og vist med prosentandeler av celler i ulike faser av cellesyklusen.G2 celle syklus arrest ble observert etter bestråling av glioma stamceller med enten en standard dose rate eller en ekstra høy dose rate, sammenlignet med ikke-bestrålte kontrollceller. For å få den riktige dosen levert, er det viktigst å måle høyden på media i kulturretten for å sikre at den når en centimeter. Etter denne prosedyren kan andre biologiske analyser utføres, for eksempel immunstaining, vestlig flekk og cellesyklusanalyse.Siden denne prosedyren gir forskerne klinisk relevante dose- og dosehastighetsinnstillinger, kan den brukes til å evaluere strålingseffekten på mange cellekulturbaserte modeller.

Research

JoVE Journal

Medicine

Use of a Hanging Weight System for Coronary Artery Occlusion in Mice

Murine studies of acute injury are an area of intense investigation, as knockout mice for different genes are becoming increasingly available 1-38. ...

Use of a Hanging-weight System for Isolated Renal Artery Occlusion

In hospitalized patients, over 50% of cases of acute kidney injury (AKI) are caused by renal ischemia 1-3. A recent study of hospitalized patients ...

Use of a Hanging-weight System for Liver Ischemia in Mice

Bruk av en hengende vekt System for Liver ischemia i Mus

Acute liver injury due to ischemia can occur during several clinical procedures e.g. liver transplantation, hepatic tumor resection or trauma repair and ...

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

	The lower urinary tract (LUT) functions as a  dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a  convenient time. While ...

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Heterotypic Tredimensjonal<em&gt; In Vitro</em&gt; Modellering av stromal-Epiteliale interaksjoner Ovarian Cancer initiering og progresjon

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Carotisar infusjoner for farmakokinetiske og farmakodynamiske Analyse av Taxaner i Mus

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Setting Up a Stroke Team Algorithm and Conducting Simulation-based Training in the Emergency Department - A Practical Guide

Sette opp en slagteam Algoritmen og drive simuleringsbasert opplæring i akuttmottaket - A Practical Guide

Time is of the essence when caring for an acute stroke patient. The ultimate goal is to restore blood flow to the ischemic brain. This can ...

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Forberedelse av urtemedisin: Er-Xian Decoction og Er-Xian-holdig Serum for<em&gt; In vivo</em&gt; Og<em&gt; I Vitro</em&gt; Eksperimenter

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

Conducting Maximal and Submaximal Endurance Exercise Testing to Measure Physiological and Biological Responses to Acute Exercise in Humans

Gjennomføre maksimal og Submaximal utholdenhet trening Testing for å måle fysiologiske og biologiske svar akutt trening hos mennesker

Regular physical activity has a positive effect on human health, but the mechanisms controlling these effects remain unclear. The physiologic and biologic ...

Preparation Of Gushukang (GSK) Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

Utarbeidelse av Gushukang (GSK) granulat for in vivo og in vitro eksperimenter

Traditional Chinese herbal medicine plays a role as an alternative method in treating many diseases, such as postmenopausal osteoporosis (POP). Gushukang ...