Name: use of a linear accelerator for conducting in vitro radiobiology experiments
Uploaded: 2019-05-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments at JoVE.com

Мы благодарим Кливлендскую клинику за использование линейных ускорителей. Мы благодарим доктора Джереми Рича за его щедрый дар стволовых клеток, похожих на глиому. Это исследование было поддержано Кливлендской клиникой.

1. Подготовка клетки для культуры клетки подвески
<ol><li>Культура глиомы стволовых клеток в стволовых клетках культуры стволовых клеток примерно 5 х 106 клеток/ 10 см пластин в инкубаторе культуры клеток с 5% CO2, 95% относительная влажность при 37 градусов по Цельсию. ПРИМЕЧАНИЕ: Со...

<ol>
	<li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma.">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> The New England Journal of Medicine. 352 (10), 987-996 (2005).</li><li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+radiotherapy+with+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+versus+radiotherapy+alone+on+survival+in+glioblastoma+in+a+randomised+phase+III+study:+5-year+analysis+of+the+EORTC-NCIC+trial.">Effects of radiotherapy with concomitant and adjuvant temozolomide versus radiotherapy alone on survival in glioblastoma in a randomised phase III study: 5-year analysis of the EORTC-NCIC trial.</a> The Lancet Oncology. 10 (5), 459-466 (2009).</li><li>Tao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+imaging+in+upper+gastrointestinal+tumors+and+application+to+radiation+therapy.">Hypoxia imaging in upper gastrointestinal tumors and application to radiation therapy.</a> Journal of Gastrointestinal Oncology. 9 (6), 1044-1053 (2018).</li><li>Gajiwala, S., Torgeson, A., Garrido-Laguna, I., Kinsey, C., Lloyd, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+immunotherapy+and+radiation+therapy+strategies+for+pancreatic+cancer-targeting+multiple+steps+in+the+cancer+immunity+cycle.">Combination immunotherapy and radiation therapy strategies for pancreatic cancer-targeting multiple steps in the cancer immunity cycle.</a> Journal of Gastrointestinal Oncology. 9 (6), 1014-1026 (2018).</li><li>Liney, G. P., Whelan, B., Oborn, B., Barton, M., Keall, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRI-Linear+accelerator+raiotherapy+systems.">MRI-Linear accelerator raiotherapy systems.</a> Clinical Oncology Journal | The Royal College of Radiologists. 30 (11), 686-691 (2018).</li><li>Hall, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation+dose-rate:+a+factor+of+importance+in+radiobiology+and+radiotherapy.">Radiation dose-rate: a factor of importance in radiobiology and radiotherapy.</a> The British Journal of Radiology. 45 (530), 81-97 (1972).</li><li>Steel, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dose-rate+effect+in+human+tumour+cells.">The dose-rate effect in human tumour cells.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 9 (4), 299-310 (1987).</li><li>Ling, C. C., Gerweck, L. E., Zaider, M., Yorke, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose-rate+effects+in+external+beam+radiotherapy+redux.">Dose-rate effects in external beam radiotherapy redux.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 95 (3), 261-268 (2010).</li><li>Castro, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amotosalen/UVA+treatment+inactivates+T+cells+more+effectively+than+the+recommended+gammadose+for+prevention+of+transfusion-associated+graft-versus-host+disease.">Amotosalen/UVA treatment inactivates T cells more effectively than the recommended gammadose for prevention of transfusion-associated graft-versus-host disease.</a> Transfusion. 58 (6), 1506-1515 (2018).</li><li>Gaddini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exposing+primary+rat+retina+cell+cultures+to+&#947;-rays:+An+in+vitro+model+for+evaluating+radiation+responses.">Exposing primary rat retina cell cultures to &#947;-rays: An in vitro model for evaluating radiation responses.</a> Experimental Eye Research. 166, 21-28 (2018).</li><li>Simara, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+double-strand+breaks+in+human+induced+pluripotent+stem+cell+reprogramming+and+long-term+in+vitro+culturing.">DNA double-strand breaks in human induced pluripotent stem cell reprogramming and long-term in vitro culturing.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 8 (1), 73 (2017).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+the+biological+effects+of+125I+seeds+continuous+low-dose-rate+radiation+and+60Co+high-dose-rate+gamma+radiation+on+non-small+cell+lung+cancer+cells.">A comparison of the biological effects of 125I seeds continuous low-dose-rate radiation and 60Co high-dose-rate gamma radiation on non-small cell lung cancer cells.</a> PLoS One. 10 (8), 0133728 (2015).</li><li>Lasio, G., Guerrero, M., Goetz, W., Lima, F., Baulch, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+varying+dose-per-pulse+and+average+dose+rate+in+X-ray+beam+irradiation+on+cultured+cell+survival.">Effect of varying dose-per-pulse and average dose rate in X-ray beam irradiation on cultured cell survival.</a> Radiation and Environmental Biophysics. 53 (4), 671-676 (2014).</li><li>Karan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiobiological+effects+of+altering+dose+rate+in+filter-free+photon+beams.">Radiobiological effects of altering dose rate in filter-free photon beams.</a> Physics in Medicine and Biology. 58 (4), 1075-1082 (2013).</li><li>Sarojini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+combination+of+high+dose+rate+(10X+FFF/2400+MU/min/10+MV+X-rays)+and+total+low+dose+(0.5+Gy)+induces+a+higher+rate+of+apoptosis+in+melanoma+cells+in+vitro+and+superior+preservation+of+normal+melanocytes.">A combination of high dose rate (10X FFF/2400 MU/min/10 MV X-rays) and total low dose (0.5 Gy) induces a higher rate of apoptosis in melanoma cells in vitro and superior preservation of normal melanocytes.</a> Melanoma Research. 25 (5), 376-389 (2015).</li><li>Hao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+extra+high+on+glioma+stem-like+cells.">The effects of extra high on glioma stem-like cells.</a> PLoS One. 13 (8), 0202533 (2018).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation-induced+G2/M+arrest+rarely+occurred+in+glioblastoma+stem-like+cells.">Radiation-induced G2/M arrest rarely occurred in glioblastoma stem-like cells.</a> International Journal of Radiation Biology. 94 (4), 394-402 (2018).</li><li>Mcdermott, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Physics and Technology of Radiation Therapy. , (2010).</li><li>Lohse, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+high+dose+per+pulse+flattening+filter-free+beams+on+cancer+cell+survival.">Effect of high dose per pulse flattening filter-free beams on cancer cell survival.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 101 (1), 226-232 (2011).</li></ol>

Радиотерапия является неотъемлемой частью борьбы с раком. Продолжающиеся усилия направлены на повышение эффективности и эффективности лучевой терапии. Достижения в технологии линейного ускорителя предоставили возможность лечить пациентов с беспрецедентной точностью и безопасност...

Радиотерапия является эффективным лечением длямногих видов рака 1,2,3,4. Дополнительное облучение высокой дозы является относительно новым в лучевой терапии и стало возможным благодаря последним технологическим достижениям в линейных ускорителях5. Клинические преимущества дополнительной высокой дозы по сравнению со стандартной дозой облучения включают в себя сокращенное время лечения и улучшение опыта пациента. Линейные ускорители также обеспечивают клинические условия для клеточной культуры на основе радиационной биологии исследований. Биологические и терапевтические последствия дозы радиации и дозы были в центре внимания радиационных онкологов и биологов на протяжениидесятилетий6,7,8. Однако радиобиология облучения с высокой дозой и облучения вспышки - чрезвычайно высокая доза радиации - до сих пор не исследована.
Облучение гамма-лучей широко используетсяв клеточной культуре на основе радиационной биологии 9,10,11. Радиация достигается гамма-лучами, испускаемыми из разлагающихся радиоактивных источников изотопа, как правило, цезия-137. Использование радиоактивных источников строго регулируется и часто ограничено. С исходным облучением, это сложно проверить широкий спектр дозовых ставок, ограничивая его полезность в анализе биологических эффектов клинических достижимых ставок дозы12.
Там было несколько исследований, которые иллюстрируют как доза и скорость дозы эффекты12,13,14,15,16,17. В этих исследованиях использовались как гамма-облучение, генерируемое радиоактивными изотопами, так и рентгеновские лучи, полученные из линейных ускорителей. Были использованы различные клеточные линии, представляющие рак легких, рак шейки матки, глиобластому и меланому. Радиационное воздействие на выживаемость клеток, арест клеточного цикла, апоптоз и повреждение ДНК были оценены как считываний12,13,14,15,16,17 . Здесь мы описываем метод определения биологических эффектов клинически релевантной дозы и дозы, обеспечивая рентгеновское излучение с помощью линейного ускорителя. Эти исследования должны проводиться при тесном сотрудничестве между биологом, радиационным онкологом и медицинским физиком.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:925px;" width="924">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Material</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">glioma stem-like cell 4121</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td>gift from Dr. Jeremy Rich</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">293 cells</td>
			<td style="width:269px;">ATCC</td>
			<td style="width:183px;">CRL-1573</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">neuron stem cell culture media</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">21103049</td>
			<td>NeurobasalTM media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">DMEM</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">10569044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">16000044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Recombinant Human EGF Protein</td>
			<td style="width:269px;">R&#38;D Systems</td>
			<td>236-EG-01M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Recombinant Human FGF basic</td>
			<td style="width:269px;">R&#38;D Systems</td>
			<td>4114-TC-01M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">B-27&#8482; Supplement</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Sodium Pyruvate</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">11360070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">25030164</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Tripsin-EDTA</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:183px;">25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">extracellular proten matrix</td>
			<td style="width:269px;">Corning</td>
			<td style="width:183px;">354277</td>
			<td style="width:167px;">MatrigelTM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Ethanol</td>
			<td style="width:269px;">Fisher chemical</td>
			<td style="width:183px;">A4094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Equipment</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">10 cm cell culture dish</td>
			<td style="width:269px;">Denville</td>
			<td style="width:183px;">T1110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">3.5 cm cell culture dish</td>
			<td style="width:269px;">USA Scientific Inc.</td>
			<td style="width:183px;">CC7682-3340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">22x22mm glass cover slip</td>
			<td style="width:269px;">electron microscopy sciences</td>
			<td style="width:183px;">72210-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">15 ml centrifuge tube</td>
			<td style="width:269px;">Thomas Scientific</td>
			<td style="width:183px;">1159M36</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">50 ml centrifuge tube</td>
			<td style="width:269px;">Thomas Scientific</td>
			<td style="width:183px;">1158R10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">5 ml Pipette</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">14-955-233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">pipet aid</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">13-681-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Vortex mixer</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">02-215-414</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:269px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:183px;">5810R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Linear Accelerator</td>
			<td style="width:269px;">Varian</td>
			<td style="width:183px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">water equivalent material</td>
			<td style="width:269px;">Sun Nuclear corporation</td>
			<td style="width:183px;">557</td>
			<td>Solid waterTM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Reagent preparation</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:307px;">DMEM media</td>
			<td style="width:269px;">10% fetal bovine serum (FBS), 2 mM L-glutamine, 100 units/mL penicillin G, 100 &#181;g/mL streptomycin in 500 ml DMEM media</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:307px;">stem cell culture media</td>
			<td style="width:269px;">10 ml B27 supplement, 20 &#181;g hFGF, 20 &#181;g hEGF, 2 mM L-glutamine, 100 units/mL penicillin G, 100 &#181;g/mL streptomycin in 500 ml Neurobasal media</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of a linear accelerator for conducting in vitro radiobiology experiments

Лучевая терапия остается одним из краеугольных камней борьбы с раком. Для большинства видов рака, это наиболее эффективная, нехирургическая терапия debulk опухолей. Здесь мы описываем метод облучения раковых клеток линейным ускорителем. Развитие технологии линейного ускорителя повысило точность и эффективность лучевой терапии. Биологическое воздействие широкого спектра доз радиации и дозы по-прежнему является интенсивной областью исследования. Использование линейных ускорителей может облегчить эти исследования с использованием клинически значимых доз и дозы.

Для изучения эффекта клеточного цикла стандартной дозы и дополнительного облучения высокой дозы линейным ускорителем, с помощью этого протокола были подготовлены три образца стволовых клеток глиомы и собрано 24 ч после облучения17: один контрольный образец , который не был...

Watch this Scientific Journal Video about Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments at JoVE.com

Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments

Использование линейного ускорителя для проведения в пробирке радиобиологических экспериментов

Клинические линейные ускорители могут быть использованы для определения биологического воздействия широкого спектра дозовых ставок на раковые клетки. Мы обсуждаем, как создать линейный ускоритель для клеточных анализов и анализов для раковых стволовых клеток, выращенных в качестве опухолевых сфер в подвеске и клеточных линиях, выращенных как адепткультуры.

Radiation therapy remains one of the cornerstones of cancer management. For most cancers, it is the most effective, nonsurgical therapy to debulk tumors. ...

Лучевая терапия чаще всего доставляется с использованием линейных ускорителей. Этот протокол позволяет исследователям оценить биологическое воздействие излучения на клетки с помощью линейного ускорителя. Преимущество этого метода заключается в том, что с помощью линейного ускорителя, исследователи могут изучать широкий спектр клинически значимых доз и доз.Кроме того, этот протокол может быть использован для всех типов раковых клеток. Этот метод может быть выполнен с использованием аналогичного оборудования, показанного здесь. Например, линейные ускорители, изготовленные другими поставщиками.Лица, не опытные в выполнении дозиметрических расчетов с помощью линейного ускорителя, могут бороться за расчет правильного количества блоков монитора, необходимых для доставки желаемой дозы в образец. Они выиграют, посоветовав опыт медицинского физика или дозиметриста. Доставка дозы в образец точно с помощью линейного ускорителя требует тщательного размещения.За два дня до запланированного облучения, работая в культуре капюшон, использовать стерильные пять миллилитров пипетки для сбора глиомы стволовых клеток из культуры пластины в 15 миллилитров центрифуги трубки. Центрифуга клетки при 200 раз г в течение трех минут в центрифуге столешницы. Откажитесь от супернатанта и повторно посовелите клеточные гранулы одним миллилитром трипсина-ЭДТА.Инкубировать при комнатной температуре в течение пяти минут, чтобы переварить гранулы и сделать одну подвеску клетки в трипсин-ЭДТА. Каждые две минуты во время пищеварения, осторожно встряхните дно центрифуги трубки, чтобы убедиться, что клетки тщательно усваивается. Затем добавьте три миллилитров средств культуры стволовых клеток, чтобы утолить трипсин, аккуратно перемешать и центрифугу при 200 раз г в течение трех минут в центрифуге столешницы.После отбрасывания супернатанта, повторное производство клеточной гранулы с пятью миллилитров клеточной культуры средств массовой информации и рассчитывать клетки с гемоцитометром. Плита пять миллионов клеток, разделенных на две 10 сантиметров пластин, содержащих 10 миллилитров клеточной культуры средств массовой информации и инкубировать 48 часов при 37 градусов по Цельсию. Прямо перед запланированным облучением собирайте клетки и центрифугу, как это было раньше.Откажитесь от супернатанта и повторно посовелите клеточные гранулы пятью миллилитров средств массовой информации клеточной культуры. Перенесите один миллилитр клеточной суспензии в 35-миллиметровую пластину, содержащую два миллилитра клеточной культуры среды, убедившись, что среда достигает высоты одного сантиметра. Перенесите потрохавые клетки во вторичный контейнер, чтобы снизить риск заражения и принести клетки в контейнер на утилите корзину на облучение объекта для облучения клеток.За день до облучения, работая в капюшоне клеточной культуры, используйте пипетки Pasteur, подключенные к вакууму, чтобы удалить DMEM-среду из пластины клеточной культуры к прикрепленной клеточной линии. Затем промыть клетки пятью миллилитров стерильных PBS, чтобы смыть остаточную среду. Добавьте один миллилитр трипсина-ЭДТА в блюдо культуры и аккуратно наклоните культурную тарелку, чтобы убедиться, что все блюдо покрыто.После инкубации при комнатной температуре в течение пяти минут, утолить трипсин-ЭДТА реакции с тремя миллилитров DMEM средств массовой информации. Используйте пятими миллилитровую пипетку, чтобы собрать клетки в 15-миллилитровую центрифугу, центрифугу, а затем культурировать клетки, как описано в рукописи. Чтобы облучить эти ранее подготовленные ячейки с помощью программного обеспечения консоли LINAC, установите ускоритель gantry и коллиматор до нуля градусов, откройте х и у челюстей до симметричных пять на пять квадратных сантиметров размер поля, и втягивать многолифовых коллиматоров.Добавьте не менее пяти сантиметров водного эквивалента материала на диване и поместите клеточное блюдо для облучения на него в центре перекрестия LINAC. Поместите клетки на глубину максимальной дозы в шестимилометровый рентгеновский луч размером около 1,5 сантиметра и добавьте еще один сантиметр водного эквивалентного материала поверх блюда. Прикрепите передний указатель к голове LINAC и продлите его до тех пор, пока он не коснется поверхности материала накопления.Отрегулируйте высоту стола до тех пор, пока расстояние от источника до поверхности накопления не будет 100 сантиметров. Оставьте хранилище лечения, убедившись, что все остальные люди ушли. Убедитесь, что в комнате нет других камер, а затем закройте дверь хранилища.Подтвердите размер поля, блоки монитора и блоки монитора в минуту на консоли, а затем включите луч для ячейки излучения. Три образца стволовых клеток глиомы были подготовлены с помощью этого протокола и собраны через 24 часа после облучения. Там профили клеточного цикла были рассчитаны и показаны с процентами клеток в различных фазах клеточного цикла.Арест клеточного цикла G2 наблюдался после облучения стволовых клеток глиомы либо со стандартной дозой, либо с дополнительной высокой дозой, по сравнению с необлученными контрольными клетками. Для того, чтобы иметь правильную дозу доставлены, это наиболее важно для измерения высоты средств массовой информации в культуре блюдо, чтобы убедиться, что она достигает одного сантиметра. После этой процедуры могут быть проведены другие биологические анализы, такие как иммуностеинирование, западная помарка и анализ клеточного цикла.Так как эта процедура обеспечивает исследователям клинически соответствующие дозы и параметры скорости дозы, она может быть использована для оценки радиационного воздействия на многие модели, основанные на клеточной культуре.

Research

JoVE Journal

Medicine

Use of a Hanging Weight System for Coronary Artery Occlusion in Mice

Использование Висячие Вес системы для коронарной окклюзии артерии у мышей

Murine studies of acute injury are an area of intense investigation, as knockout mice for different genes are becoming increasingly available 1-38. ...

Use of a Hanging-weight System for Isolated Renal Artery Occlusion

Использование Висячие вес системы для изолированного почечной артерии Окклюзия

In hospitalized patients, over 50% of cases of acute kidney injury (AKI) are caused by renal ischemia 1-3. A recent study of hospitalized patients ...

Use of a Hanging-weight System for Liver Ischemia in Mice

Использование Hanging вес системы для печени ишемии у мышей

Acute liver injury due to ischemia can occur during several clinical procedures e.g. liver transplantation, hepatic tumor resection or trauma repair and ...

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

Использование Цистометрия в мелких грызунов: исследование мочевого пузыря Chemosensation

	The lower urinary tract (LUT) functions as a  dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a  convenient time. While ...

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Гетеротипические Трехмерные<em&gt; In Vitro</em&gt; Моделирование Стромальные-эпителиальных взаимодействий во время посвящения яичников Рак и прогресс

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Сонной артерии Настои для Фармакокинетические и фармакодинамические анализ Таксаны в мышах

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Setting Up a Stroke Team Algorithm and Conducting Simulation-based Training in the Emergency Department - A Practical Guide

Настройка Stroke команды алгоритма и проведения обучающих на основе моделирования в Департаменте по чрезвычайным ситуациям - Практическое руководство

Time is of the essence when caring for an acute stroke patient. The ultimate goal is to restore blood flow to the ischemic brain. This can ...

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Подготовка травяной медицины: Er-Xian Decoction и Er-Xian-содержащая сыворотка для<em&gt; В Виво</em&gt; И<em&gt; In Vitro</em&gt; Эксперименты

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

Conducting Maximal and Submaximal Endurance Exercise Testing to Measure Physiological and Biological Responses to Acute Exercise in Humans

Проведение тестирования для измерения физиологических и биологических ответы на острые упражнения в организме человека субмаксимальных и максимальная выносливость

Regular physical activity has a positive effect on human health, but the mechanisms controlling these effects remain unclear. The physiologic and biologic ...

Preparation Of Gushukang (GSK) Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

Подготовка Гушукан (GSK) Гранулы для In Vivo и In Vitro Эксперименты

Traditional Chinese herbal medicine plays a role as an alternative method in treating many diseases, such as postmenopausal osteoporosis (POP). Gushukang ...