Name: use of a linear accelerator for conducting in vitro radiobiology experiments
Uploaded: 2019-05-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments at JoVE.com

Vi tackar Cleveland Clinic Institutionen för strålning onkologi för användning av linjära acceleratorer. Vi tackar Dr Jeremy Rich för hans generösa gåva gliom Stem-liknande celler. Denna forskning stöddes av Cleveland Clinic.

1. cell förberedelse för suspension cellkultur
<ol><li>Kultur gliom Stem-liknande celler i stamceller kultur media på cirka 5 x 106 cell/10 cm plattor i en cellkultur inkubator med 5% Co2, 95% relativ luftfuktighet vid 37 ° c. Observera: cell odlings villkoret är detsamma i alla procedurer. Media som används i protokollet är kompletta medier.</li>
	<li>Två dagar före planerad bestrålning, samla gliom Stem-liknande celler från odlingsplattan med en steril 5 ml-pipett i ett 15 ml centr...

<ol>
	<li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma.">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> The New England Journal of Medicine. 352 (10), 987-996 (2005).</li><li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+radiotherapy+with+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+versus+radiotherapy+alone+on+survival+in+glioblastoma+in+a+randomised+phase+III+study:+5-year+analysis+of+the+EORTC-NCIC+trial.">Effects of radiotherapy with concomitant and adjuvant temozolomide versus radiotherapy alone on survival in glioblastoma in a randomised phase III study: 5-year analysis of the EORTC-NCIC trial.</a> The Lancet Oncology. 10 (5), 459-466 (2009).</li><li>Tao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+imaging+in+upper+gastrointestinal+tumors+and+application+to+radiation+therapy.">Hypoxia imaging in upper gastrointestinal tumors and application to radiation therapy.</a> Journal of Gastrointestinal Oncology. 9 (6), 1044-1053 (2018).</li><li>Gajiwala, S., Torgeson, A., Garrido-Laguna, I., Kinsey, C., Lloyd, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+immunotherapy+and+radiation+therapy+strategies+for+pancreatic+cancer-targeting+multiple+steps+in+the+cancer+immunity+cycle.">Combination immunotherapy and radiation therapy strategies for pancreatic cancer-targeting multiple steps in the cancer immunity cycle.</a> Journal of Gastrointestinal Oncology. 9 (6), 1014-1026 (2018).</li><li>Liney, G. P., Whelan, B., Oborn, B., Barton, M., Keall, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRI-Linear+accelerator+raiotherapy+systems.">MRI-Linear accelerator raiotherapy systems.</a> Clinical Oncology Journal | The Royal College of Radiologists. 30 (11), 686-691 (2018).</li><li>Hall, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation+dose-rate:+a+factor+of+importance+in+radiobiology+and+radiotherapy.">Radiation dose-rate: a factor of importance in radiobiology and radiotherapy.</a> The British Journal of Radiology. 45 (530), 81-97 (1972).</li><li>Steel, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dose-rate+effect+in+human+tumour+cells.">The dose-rate effect in human tumour cells.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 9 (4), 299-310 (1987).</li><li>Ling, C. C., Gerweck, L. E., Zaider, M., Yorke, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose-rate+effects+in+external+beam+radiotherapy+redux.">Dose-rate effects in external beam radiotherapy redux.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 95 (3), 261-268 (2010).</li><li>Castro, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amotosalen/UVA+treatment+inactivates+T+cells+more+effectively+than+the+recommended+gammadose+for+prevention+of+transfusion-associated+graft-versus-host+disease.">Amotosalen/UVA treatment inactivates T cells more effectively than the recommended gammadose for prevention of transfusion-associated graft-versus-host disease.</a> Transfusion. 58 (6), 1506-1515 (2018).</li><li>Gaddini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exposing+primary+rat+retina+cell+cultures+to+&#947;-rays:+An+in+vitro+model+for+evaluating+radiation+responses.">Exposing primary rat retina cell cultures to &#947;-rays: An in vitro model for evaluating radiation responses.</a> Experimental Eye Research. 166, 21-28 (2018).</li><li>Simara, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+double-strand+breaks+in+human+induced+pluripotent+stem+cell+reprogramming+and+long-term+in+vitro+culturing.">DNA double-strand breaks in human induced pluripotent stem cell reprogramming and long-term in vitro culturing.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 8 (1), 73 (2017).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+the+biological+effects+of+125I+seeds+continuous+low-dose-rate+radiation+and+60Co+high-dose-rate+gamma+radiation+on+non-small+cell+lung+cancer+cells.">A comparison of the biological effects of 125I seeds continuous low-dose-rate radiation and 60Co high-dose-rate gamma radiation on non-small cell lung cancer cells.</a> PLoS One. 10 (8), 0133728 (2015).</li><li>Lasio, G., Guerrero, M., Goetz, W., Lima, F., Baulch, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+varying+dose-per-pulse+and+average+dose+rate+in+X-ray+beam+irradiation+on+cultured+cell+survival.">Effect of varying dose-per-pulse and average dose rate in X-ray beam irradiation on cultured cell survival.</a> Radiation and Environmental Biophysics. 53 (4), 671-676 (2014).</li><li>Karan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiobiological+effects+of+altering+dose+rate+in+filter-free+photon+beams.">Radiobiological effects of altering dose rate in filter-free photon beams.</a> Physics in Medicine and Biology. 58 (4), 1075-1082 (2013).</li><li>Sarojini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+combination+of+high+dose+rate+(10X+FFF/2400+MU/min/10+MV+X-rays)+and+total+low+dose+(0.5+Gy)+induces+a+higher+rate+of+apoptosis+in+melanoma+cells+in+vitro+and+superior+preservation+of+normal+melanocytes.">A combination of high dose rate (10X FFF/2400 MU/min/10 MV X-rays) and total low dose (0.5 Gy) induces a higher rate of apoptosis in melanoma cells in vitro and superior preservation of normal melanocytes.</a> Melanoma Research. 25 (5), 376-389 (2015).</li><li>Hao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+extra+high+on+glioma+stem-like+cells.">The effects of extra high on glioma stem-like cells.</a> PLoS One. 13 (8), 0202533 (2018).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation-induced+G2/M+arrest+rarely+occurred+in+glioblastoma+stem-like+cells.">Radiation-induced G2/M arrest rarely occurred in glioblastoma stem-like cells.</a> International Journal of Radiation Biology. 94 (4), 394-402 (2018).</li><li>Mcdermott, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Physics and Technology of Radiation Therapy. , (2010).</li><li>Lohse, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+high+dose+per+pulse+flattening+filter-free+beams+on+cancer+cell+survival.">Effect of high dose per pulse flattening filter-free beams on cancer cell survival.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 101 (1), 226-232 (2011).</li></ol>

Strålbehandling är en integrerad del av cancer hanteringen. Pågående insatser syftar till att förbättra strålnings behandlingens effektivitet och effektivitet. Framsteg inom linjär acceleratorteknik har gett möjlighet att behandla patienter med oöverträffad noggrannhet och säkerhet. Eftersom de flesta patienter behandlas med hög energi röntgen från linjära acceleratorer, kan studier som undersöker de biologiska effekterna av ett stort antal dospriser som utförs på linjära acceleratorer lätt applicera...

Strålbehandling är en effektiv behandling för många typer av cancer1,2,3,4. Extra hög dosraten bestrålning är relativt ny i strålbehandling och möjliggörs genom nya tekniska framsteg i linjära acceleratorer5. Kliniska fördelar med extra hög doshastighet jämfört med standard dos frekvens bestrålning inkluderar förkortad behandlingstid och förbättrad patient erfarenhet. Linjära acceleratorer ger också en klinisk inställning för cellkulturbaserade strålningsbiologi studier. De biologiska och terapeutiska konsekvenserna av stråldos och dospriser har varit i fokus för strålning onkologer och biologer i årtionden6,7,8. Men, radiobiologi av extra hög dosraten strålning och blixt bestrålning-en extremt hög doshastighet av strålning-har ännu inte grundligt undersökas.
Gamma ray bestrålning används ofta i cellkultur baserad strålningsbiologi9,10,11. Strålning uppnås genom gammastrålar som avges från sönderruttnande radioaktiva isotoper, typiskt cesium-137. Användningen av radioaktiva källor är starkt reglerad och ofta begränsad. Med källbaserad bestrålning, det är utmanande att testa ett brett spektrum av dospriser, begränsa dess nytta i analysen av de biologiska effekterna av kliniska uppnåeliga dos hastigheter12.
Det har förekommit flera studier som illustrerar både dos-och dos frekvens effekter12,13,14,15,16,17. I dessa studier användes både gammastrålning som genererats från radioaktiva isotoper eller röntgenstrålar från linjära acceleratorer. En mängd olika cellinjer som representerar lungcancer, livmoderhalscancer, glioblastom, och melanom användes. Strålningseffekter på cellöverlevnad, cellcykelarrest, apoptos och DNA-skador utvärderades som avläsning12,13,14,15,16,17 . Här beskriver vi en metod för att definiera de biologiska effekterna av kliniskt relevanta strålningsdoser och dospriser genom att leverera röntgenbaserad strålning med hjälp av en linjär Accelerator. Dessa studier bör utföras med nära samarbete mellan biologen, onkolog strålning och medicinsk fysiker.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:925px;" width="924">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Material</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">glioma stem-like cell 4121</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td>gift from Dr. Jeremy Rich</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">293 cells</td>
			<td style="width:269px;">ATCC</td>
			<td style="width:183px;">CRL-1573</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">neuron stem cell culture media</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">21103049</td>
			<td>NeurobasalTM media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">DMEM</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">10569044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">16000044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Recombinant Human EGF Protein</td>
			<td style="width:269px;">R&#38;D Systems</td>
			<td>236-EG-01M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Recombinant Human FGF basic</td>
			<td style="width:269px;">R&#38;D Systems</td>
			<td>4114-TC-01M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">B-27&#8482; Supplement</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Sodium Pyruvate</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">11360070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">25030164</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Tripsin-EDTA</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:183px;">25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">extracellular proten matrix</td>
			<td style="width:269px;">Corning</td>
			<td style="width:183px;">354277</td>
			<td style="width:167px;">MatrigelTM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Ethanol</td>
			<td style="width:269px;">Fisher chemical</td>
			<td style="width:183px;">A4094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Equipment</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">10 cm cell culture dish</td>
			<td style="width:269px;">Denville</td>
			<td style="width:183px;">T1110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">3.5 cm cell culture dish</td>
			<td style="width:269px;">USA Scientific Inc.</td>
			<td style="width:183px;">CC7682-3340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">22x22mm glass cover slip</td>
			<td style="width:269px;">electron microscopy sciences</td>
			<td style="width:183px;">72210-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">15 ml centrifuge tube</td>
			<td style="width:269px;">Thomas Scientific</td>
			<td style="width:183px;">1159M36</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">50 ml centrifuge tube</td>
			<td style="width:269px;">Thomas Scientific</td>
			<td style="width:183px;">1158R10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">5 ml Pipette</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">14-955-233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">pipet aid</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">13-681-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Vortex mixer</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">02-215-414</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:269px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:183px;">5810R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Linear Accelerator</td>
			<td style="width:269px;">Varian</td>
			<td style="width:183px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">water equivalent material</td>
			<td style="width:269px;">Sun Nuclear corporation</td>
			<td style="width:183px;">557</td>
			<td>Solid waterTM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Reagent preparation</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:307px;">DMEM media</td>
			<td style="width:269px;">10% fetal bovine serum (FBS), 2 mM L-glutamine, 100 units/mL penicillin G, 100 &#181;g/mL streptomycin in 500 ml DMEM media</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:307px;">stem cell culture media</td>
			<td style="width:269px;">10 ml B27 supplement, 20 &#181;g hFGF, 20 &#181;g hEGF, 2 mM L-glutamine, 100 units/mL penicillin G, 100 &#181;g/mL streptomycin in 500 ml Neurobasal media</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of a linear accelerator for conducting in vitro radiobiology experiments

Strålbehandling är fortfarande en av hörnstenarna i cancer hanteringen. För de flesta cancerformer, det är den mest effektiva, icke-kirurgisk terapi för att debulk tumörer. Här beskriver vi en metod för att bestråla cancerceller med en linjär Accelerator. Utvecklingen av linjär acceleratorteknik har förbättrat precisionen och effektiviteten i strålbehandling. De biologiska effekterna av ett brett spektrum av stråldoser och dospriser fortsätter att vara ett intensivt undersökningsområde. Användning av linjära acceleratorer kan underlätta dessa studier med kliniskt relevanta doser och dospriser.

För att undersöka cellcykelns effekt av standard doshastighet och bestrålning med extra hög doshastighet av en linjär Accelerator, utarbetades tre prover av gliom-liknande celler med detta protokoll och samlades in 24 h efter bestrålning17: ett kontrollprov som inte bestrålades (figur 2A), ett prov som bestrålats med 400 me/min (Monitor enhet, 4,2 Gy/min standard doshastighet, figur 2B) till 4 Gy,...

Watch this Scientific Journal Video about Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments at JoVE.com

Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments

Användning av en linjär Accelerator för att genomföra in vitro-radiobiologi experiment

Kliniska linjära acceleratorer kan användas för att fastställa biologiska effekter av ett brett spektrum av dospriser på cancerceller. Vi diskuterar hur man ställer in en linjär Accelerator för cellbaserade analyser och analyser för cancer Stem-liknande celler som odlas som tumorspheres i fjädring och cellinjer odlas som anhängare kulturer.

Radiation therapy remains one of the cornerstones of cancer management. For most cancers, it is the most effective, nonsurgical therapy to debulk tumors. ...

Strålbehandling levereras oftast med hjälp av linjäracceleratorer. Detta protokoll gör det möjligt för forskare att bedöma de biologiska effekterna av strålning på celler med hjälp av en linjär accelerator. Fördelen med denna teknik är att genom att använda en linjär accelerator, forskare kan studera ett brett spektrum av kliniskt relevanta doser och doshastigheter.Vidare kan detta protokoll användas för alla typer av cancerceller. Denna metod kan utföras med hjälp av liknande utrustning som den som visas här. Till exempel linjära acceleratorer som tillverkas av andra leverantörer.Individer som inte har erfarenhet av att utföra dosimetriska beräkningar med hjälp av en linjär accelerator kan kämpa för att beräkna rätt antal övervaka enheter som krävs för att leverera önskad dos till provet. De skulle gynnas av att söka råd från en erfarenhet sjukhusfysiker eller dosimetrist. Att leverera dos till provet exakt med hjälp av en linjär accelerator kräver noggrann placering.Två dagar före planerad bestrålning, som arbetar i en kultur huva, använda en steril fem milliliter pipett för att samla gliom stamceller från en odlingsplatta i en 15 milliliter centrifuge röret. Centrifugera cellerna på 200 gånger g i tre minuter i en bänkskiva centrifug. Kassera supernatanten och resuspend cellpelleten med en milliliter trypsin-EDTA.Inkubera i rumstemperatur i fem minuter för att smälta pelleten och göra en enda cell suspension i trypsin-EDTA. Varannan minut under matsmältningen, skaka försiktigt botten av centrifugröret för att se till att cellerna är grundligt smält. Tillsätt sedan tre milliliter av stamcellsodlingsmedia för att släcka trypsin, försiktigt blanda och centrifug på 200 gånger g i tre minuter i en bänkskiva centrifug.Efter att ha kastat överstjärnen, resuspend cell pelleten med fem milliliter cellodling media och räkna cellerna med en hemocytometer. Platta fem miljoner celler uppdelade i två 10 centimeter plattor som innehåller 10 milliliter cellodlingsmedier och inkubera 48 timmar vid 37 grader Celsius. Precis före den planerade bestrålningen, samla in cellerna och centrifugen som gjort tidigare.Kassera supernatanten och resuspend cellpelletsen med fem milliliter av cellkulturmedia. Överför en milliliter cellupphängning till en 35 millimeters platta som innehåller två milliliter cellkulturmedium, och se till att mediet når en höjd av en centimeter. Överför de pläterade cellerna till en sekundär behållare för att minska risken för kontaminering och för cellerna i behållaren på en nyttovagn till bestrålningsanläggningen för att bestråla cellerna.En dag före bestrålning, som arbetar i cellodlingshuven, använd en Pasteurpipett ansluten till ett vakuum för att avlägsna DMEM-medium från cellodlingsplattan till den bifogade cellinjen. Tvätta sedan cellerna med fem milliliter steril PBS för att skölja bort restmediet. Lägg till en milliliter trypsin-EDTA i odlingsskålen och luta försiktigt odlingsplattan för att se till att hela skålen är täckt.Efter inkubering i rumstemperatur i fem minuter, släck trypsin-EDTA-reaktionen med tre milliliter DMEM-media. Använd en fem milliliterpipett för att samla in cellerna i 15 milliliter centrifugrör, centrifug och sedan odla cellerna som beskrivs i manuskriptet. För att bestråla dessa tidigare beredda celler med linac's konsol programvara, ställ in gaspedalen gantry och kollimator till noll grader, öppna x och y käkar till en symmetrisk fem av fem kvadrat centimeter fältstorlek, och dra tillbaka multileaf collimators.Tillsätt minst fem centimeter vattenekvivalent material på behandlingssoffan och placera cellskålen som ska bestrålas på den i mitten av LINAC-hårkorset. Placera cellerna på ett djup av maximal dos i en sex megavolt röntgenstråle runt 1,5 centimeter och tillsätt ytterligare en centimeter vattenekvivalent material ovanpå skålen. Fäst frampekaren på linachuvudet och förläng den tills den vidrör ytan på uppbyggnadsmaterialet.Justera bordshöjden tills avståndet från källan till uppbyggd yta är 100 centimeter. Lämna behandlingsvalvet, se till att alla andra individer har lämnat. Verifiera att det inte finns några andra celler i rummet och stäng sedan valvdörren.Bekräfta fältstorleken, bildskärmsenheterna och bildskärmsenheterna per minut vid konsolen och aktivera sedan strålen för en cell med strålning. Tre prover av gliom stamceller som utarbetades med hjälp av detta protokoll och samlas in 24 timmar efter bestrålning. Där cellcykelprofiler beräknades och visades med procentandelarna celler i olika faser av cellcykeln.G2-cellcykelarrest observerades efter bestrålning av stamceller från gliom med antingen en standarddosrat eller en extra hög dosrat, jämfört med icke bestrålade kontrollceller. För att få rätt dos levererad är det viktigast att mäta höjden på media i odlingsskålen för att se till att den når en centimeter. Efter denna procedur kan andra biologiska analyser utföras, såsom immunfärgning, western blot, och cell cykel analys.Eftersom denna procedur ger forskarna kliniskt relevanta dos- och doshastighetsinställningar, kan den användas för att utvärdera strålningseffekten på många cellodlingsbaserade modeller.

Research

JoVE Journal

Medicine

Use of a Hanging Weight System for Coronary Artery Occlusion in Mice

Användning av en hängande viktsystem för koronar artärocklusion hos möss

Murine studies of acute injury are an area of intense investigation, as knockout mice for different genes are becoming increasingly available 1-38. ...

Use of a Hanging-weight System for Isolated Renal Artery Occlusion

Användning av en hängande vikt System för isolerade Renal artärocklusion

In hospitalized patients, over 50% of cases of acute kidney injury (AKI) are caused by renal ischemia 1-3. A recent study of hospitalized patients ...

Use of a Hanging-weight System for Liver Ischemia in Mice

Användning av en hängande vikt System för Lever Ischemi i möss

Acute liver injury due to ischemia can occur during several clinical procedures e.g. liver transplantation, hepatic tumor resection or trauma repair and ...

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

Användning av cystometri i smågnagare: En studie av urinblåsan Chemosensation

	The lower urinary tract (LUT) functions as a  dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a  convenient time. While ...

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Heterotypisk Tredimensionell<em&gt; In Vitro</em&gt; Modellering av Stromal-Epithelial interaktioner Under äggstockscancer Inledande och progression

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Halspulsådern Tinkturer för farmakokinetiska och farmakodynamiska Analys av taxaner i möss

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Setting Up a Stroke Team Algorithm and Conducting Simulation-based Training in the Emergency Department - A Practical Guide

Installera en Stroke Team algoritm och dirigering Simulation baserad utbildning i akutmottagningen - En praktisk guide

Time is of the essence when caring for an acute stroke patient. The ultimate goal is to restore blood flow to the ischemic brain. This can ...

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Beredning av växtbaserad medicin: Er-Xian Decoction och Er-Xian-innehållande serum för<em&gt; In vivo</em&gt; Och<em&gt; In Vitro</em&gt; Experiment

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

Conducting Maximal and Submaximal Endurance Exercise Testing to Measure Physiological and Biological Responses to Acute Exercise in Humans

Bedriva Maximal och Submaximal uthållighetsträning tester för att mäta fysiologiska och biologiska Svaren till akut övning i människor

Regular physical activity has a positive effect on human health, but the mechanisms controlling these effects remain unclear. The physiologic and biologic ...

Preparation Of Gushukang (GSK) Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

Beredning av Gushukang (GSK) granulat för in vivo-och in vitro-experiment

Traditional Chinese herbal medicine plays a role as an alternative method in treating many diseases, such as postmenopausal osteoporosis (POP). Gushukang ...