Name: use of a linear accelerator for conducting in vitro radiobiology experiments
Uploaded: 2019-05-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments at JoVE.com

Biz lineer hızlandırıcılar kullanımı için Cleveland Clinic radyasyon Onkoloji Anabilim Dalı teşekkür ederiz. Dr. Jeremy Rich 'e, zengin glioma hücresi gibi hücre hediyesi olarak teşekkür ediyoruz. Bu araştırma Cleveland Clinic tarafından destekleniyordu.

1. süspansiyon hücresi kültürü için hücre hazırlığı
<ol><li>Kök hücre kültürü medyasında kültür glioma kök benzeri hücreler, yaklaşık 5 x 106 hücreli/10 cm 'lik bir hücre kültüründe kuluçer hücrelerinde% 5 Co2, 95% 37 °c ' de bağıl nem. Not: hücre kültürü koşulu tüm yordamları aynıdır. Protokolde kullanılan medya tam ortamıdır.</li>
	<li>Planlanan ışınlanmadan iki gün önce, kültür plakasında, bir kültür kaputu içinde 15 mL santrifüj tüp?...

<ol>
	<li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma.">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> The New England Journal of Medicine. 352 (10), 987-996 (2005).</li><li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+radiotherapy+with+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+versus+radiotherapy+alone+on+survival+in+glioblastoma+in+a+randomised+phase+III+study:+5-year+analysis+of+the+EORTC-NCIC+trial.">Effects of radiotherapy with concomitant and adjuvant temozolomide versus radiotherapy alone on survival in glioblastoma in a randomised phase III study: 5-year analysis of the EORTC-NCIC trial.</a> The Lancet Oncology. 10 (5), 459-466 (2009).</li><li>Tao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+imaging+in+upper+gastrointestinal+tumors+and+application+to+radiation+therapy.">Hypoxia imaging in upper gastrointestinal tumors and application to radiation therapy.</a> Journal of Gastrointestinal Oncology. 9 (6), 1044-1053 (2018).</li><li>Gajiwala, S., Torgeson, A., Garrido-Laguna, I., Kinsey, C., Lloyd, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+immunotherapy+and+radiation+therapy+strategies+for+pancreatic+cancer-targeting+multiple+steps+in+the+cancer+immunity+cycle.">Combination immunotherapy and radiation therapy strategies for pancreatic cancer-targeting multiple steps in the cancer immunity cycle.</a> Journal of Gastrointestinal Oncology. 9 (6), 1014-1026 (2018).</li><li>Liney, G. P., Whelan, B., Oborn, B., Barton, M., Keall, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRI-Linear+accelerator+raiotherapy+systems.">MRI-Linear accelerator raiotherapy systems.</a> Clinical Oncology Journal | The Royal College of Radiologists. 30 (11), 686-691 (2018).</li><li>Hall, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation+dose-rate:+a+factor+of+importance+in+radiobiology+and+radiotherapy.">Radiation dose-rate: a factor of importance in radiobiology and radiotherapy.</a> The British Journal of Radiology. 45 (530), 81-97 (1972).</li><li>Steel, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dose-rate+effect+in+human+tumour+cells.">The dose-rate effect in human tumour cells.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 9 (4), 299-310 (1987).</li><li>Ling, C. C., Gerweck, L. E., Zaider, M., Yorke, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose-rate+effects+in+external+beam+radiotherapy+redux.">Dose-rate effects in external beam radiotherapy redux.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 95 (3), 261-268 (2010).</li><li>Castro, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amotosalen/UVA+treatment+inactivates+T+cells+more+effectively+than+the+recommended+gammadose+for+prevention+of+transfusion-associated+graft-versus-host+disease.">Amotosalen/UVA treatment inactivates T cells more effectively than the recommended gammadose for prevention of transfusion-associated graft-versus-host disease.</a> Transfusion. 58 (6), 1506-1515 (2018).</li><li>Gaddini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exposing+primary+rat+retina+cell+cultures+to+&#947;-rays:+An+in+vitro+model+for+evaluating+radiation+responses.">Exposing primary rat retina cell cultures to &#947;-rays: An in vitro model for evaluating radiation responses.</a> Experimental Eye Research. 166, 21-28 (2018).</li><li>Simara, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+double-strand+breaks+in+human+induced+pluripotent+stem+cell+reprogramming+and+long-term+in+vitro+culturing.">DNA double-strand breaks in human induced pluripotent stem cell reprogramming and long-term in vitro culturing.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 8 (1), 73 (2017).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+the+biological+effects+of+125I+seeds+continuous+low-dose-rate+radiation+and+60Co+high-dose-rate+gamma+radiation+on+non-small+cell+lung+cancer+cells.">A comparison of the biological effects of 125I seeds continuous low-dose-rate radiation and 60Co high-dose-rate gamma radiation on non-small cell lung cancer cells.</a> PLoS One. 10 (8), 0133728 (2015).</li><li>Lasio, G., Guerrero, M., Goetz, W., Lima, F., Baulch, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+varying+dose-per-pulse+and+average+dose+rate+in+X-ray+beam+irradiation+on+cultured+cell+survival.">Effect of varying dose-per-pulse and average dose rate in X-ray beam irradiation on cultured cell survival.</a> Radiation and Environmental Biophysics. 53 (4), 671-676 (2014).</li><li>Karan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiobiological+effects+of+altering+dose+rate+in+filter-free+photon+beams.">Radiobiological effects of altering dose rate in filter-free photon beams.</a> Physics in Medicine and Biology. 58 (4), 1075-1082 (2013).</li><li>Sarojini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+combination+of+high+dose+rate+(10X+FFF/2400+MU/min/10+MV+X-rays)+and+total+low+dose+(0.5+Gy)+induces+a+higher+rate+of+apoptosis+in+melanoma+cells+in+vitro+and+superior+preservation+of+normal+melanocytes.">A combination of high dose rate (10X FFF/2400 MU/min/10 MV X-rays) and total low dose (0.5 Gy) induces a higher rate of apoptosis in melanoma cells in vitro and superior preservation of normal melanocytes.</a> Melanoma Research. 25 (5), 376-389 (2015).</li><li>Hao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+extra+high+on+glioma+stem-like+cells.">The effects of extra high on glioma stem-like cells.</a> PLoS One. 13 (8), 0202533 (2018).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation-induced+G2/M+arrest+rarely+occurred+in+glioblastoma+stem-like+cells.">Radiation-induced G2/M arrest rarely occurred in glioblastoma stem-like cells.</a> International Journal of Radiation Biology. 94 (4), 394-402 (2018).</li><li>Mcdermott, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Physics and Technology of Radiation Therapy. , (2010).</li><li>Lohse, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+high+dose+per+pulse+flattening+filter-free+beams+on+cancer+cell+survival.">Effect of high dose per pulse flattening filter-free beams on cancer cell survival.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 101 (1), 226-232 (2011).</li></ol>

Radyoterapi kanser yönetiminin ayrılmaz bir parçasıdır. Devam eden çabaları radyasyon tedavisinin etkinliğini ve verimliliğini artırmak için arama. Doğrusal Hızlandırıcı teknolojisindeki gelişmeler, hastaları görülmemiş doğruluk ve güvenlik ile tedavi etme fırsatı sağlamıştır. Çoğu hastada doğrusal hızlandırıcalardaki yüksek enerji X-ışınları ile tedavi edildiğinden, lineer hızlandırıcılar üzerinde gerçekleştirilen çok çeşitli doz oranlarının biyolojik etkilerini incel...

Radyoterapi birçok kanser türü için etkili bir tedavidir1,2,3,4. Ekstra yüksek doz hızı ışınlama radyasyon tedavisinde nispeten yeni ve Doğrusal Hızlandırıcılar son teknolojik gelişmeler tarafından mümkün hale5. Standart doz oranı ışınlama üzerinde ekstra yüksek doz oranının klinik avantajları kısaltılmış tedavi süresi ve gelişmiş hasta deneyimi içerir. Doğrusal Hızlandırıcılar da hücre kültürü bazlı radyasyon biyoloji çalışmaları için bir klinik ayar sağlar. Radyasyon dozu ve doz oranlarının biyolojik ve terapötik etkileri, radyasyon onkologların ve biyologlar için onlarca yıl6,7,8ilgi odağı olmuştur. Ama, ekstra yüksek doz hızı ışınlama ve flaş ışınlama Radyobiyoloji-radyasyon son derece yüksek doz oranı-henüz iyice incelenmiştir.
Gama ışını ışınlama yaygın hücre kültürü bazlı radyasyon biyoloji kullanılır9,10,11. Radyasyon, radyoaktif izotop kaynaklarından yayılan gama ışınları tarafından elde edilir, genellikle sezyum-137. Radyoaktif kaynakların kullanımı son derece düzenlenmiş ve genellikle kısıtlanmıştır. Kaynak tabanlı ışınlama ile, bu doz oranlarının geniş bir yelpazede test etmek için zor, klinik ulaşılabilir doz oranlarının biyolojik etkileri analizinde onun yarar sınırlama12.
Hem doz ve doz oranı etkilerini gösteren çeşitli çalışmalar olmuştur12,13,14,15,16,17. Bu çalışmalarda, hem radyoaktif izotoplardan oluşturulan gama-ışınlama ya da doğrusal hızlandırıclardan oluşturulan X-ışınları kullanılmıştır. Akciğer kanseri, servikal kanser, glioblastoma ve melanom temsil eden çeşitli hücre hatları kullanılmıştır. Hücre hayatta kalma, hücre döngüsü tutuklama, apoptozis ve DNA hasarı üzerinde radyasyon etkileri okuma olarak değerlendirildi12,13,14,15,16,17 . Burada, doğrusal bir Hızlandırıcı kullanarak X-ışını bazlı radyasyon sağlayarak, klinik olarak ilgili radyasyon dozu ve doz oranlarının biyolojik etkilerini tanımlamak için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu çalışmalar biyolog, radyasyon onkolog ve tıbbi fizikçi arasında yakın işbirliği ile yapılmalıdır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:925px;" width="924">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Material</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">glioma stem-like cell 4121</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td>gift from Dr. Jeremy Rich</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">293 cells</td>
			<td style="width:269px;">ATCC</td>
			<td style="width:183px;">CRL-1573</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">neuron stem cell culture media</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">21103049</td>
			<td>NeurobasalTM media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">DMEM</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">10569044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">16000044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Recombinant Human EGF Protein</td>
			<td style="width:269px;">R&#38;D Systems</td>
			<td>236-EG-01M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Recombinant Human FGF basic</td>
			<td style="width:269px;">R&#38;D Systems</td>
			<td>4114-TC-01M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">B-27&#8482; Supplement</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Sodium Pyruvate</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">11360070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">25030164</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Tripsin-EDTA</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:183px;">25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">extracellular proten matrix</td>
			<td style="width:269px;">Corning</td>
			<td style="width:183px;">354277</td>
			<td style="width:167px;">MatrigelTM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Ethanol</td>
			<td style="width:269px;">Fisher chemical</td>
			<td style="width:183px;">A4094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Equipment</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">10 cm cell culture dish</td>
			<td style="width:269px;">Denville</td>
			<td style="width:183px;">T1110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">3.5 cm cell culture dish</td>
			<td style="width:269px;">USA Scientific Inc.</td>
			<td style="width:183px;">CC7682-3340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">22x22mm glass cover slip</td>
			<td style="width:269px;">electron microscopy sciences</td>
			<td style="width:183px;">72210-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">15 ml centrifuge tube</td>
			<td style="width:269px;">Thomas Scientific</td>
			<td style="width:183px;">1159M36</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">50 ml centrifuge tube</td>
			<td style="width:269px;">Thomas Scientific</td>
			<td style="width:183px;">1158R10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">5 ml Pipette</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">14-955-233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">pipet aid</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">13-681-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Vortex mixer</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">02-215-414</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:269px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:183px;">5810R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Linear Accelerator</td>
			<td style="width:269px;">Varian</td>
			<td style="width:183px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">water equivalent material</td>
			<td style="width:269px;">Sun Nuclear corporation</td>
			<td style="width:183px;">557</td>
			<td>Solid waterTM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Reagent preparation</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:307px;">DMEM media</td>
			<td style="width:269px;">10% fetal bovine serum (FBS), 2 mM L-glutamine, 100 units/mL penicillin G, 100 &#181;g/mL streptomycin in 500 ml DMEM media</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:307px;">stem cell culture media</td>
			<td style="width:269px;">10 ml B27 supplement, 20 &#181;g hFGF, 20 &#181;g hEGF, 2 mM L-glutamine, 100 units/mL penicillin G, 100 &#181;g/mL streptomycin in 500 ml Neurobasal media</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of a linear accelerator for conducting in vitro radiobiology experiments

Radyasyon terapisi kanser yönetiminin temel taşlarından biri olarak kalır. Çoğu kanser için, tümör Hayır için en etkili, cerrahi olmayan tedavi olduğunu. Burada, kanser hücrelerini doğrusal bir Hızlandırıcı ile ışınlamakta bir yöntem tarif ediyoruz. Lineer Hızlandırıcı teknolojisinin ilerlemesi radyasyon tedavisinin hassasiyetini ve verimliliğini artırmıştır. Radyasyon dozları ve doz oranlarının geniş bir biyolojik etkileri araştırma yoğun bir alan olmaya devam ediyor. Doğrusal Hızlandırıcıların kullanımı bu çalışmalar klinik olarak ilgili dozlar ve doz oranları kullanarak kolaylaştırabilir.

Doğrusal bir Hızlandırıcı ile standart doz oranı ve ekstra yüksek doz hızı ışınlama hücre döngüsü etkisini araştırmak için, glioma kök benzeri hücrelerin üç numuneleri bu protokol kullanılarak hazırlanmış ve toplanan 24 saat ışınlama sonra17: bir kontrol örneği ışınlanmış değildi (Şekil 2A), 400 mu/Min ile ışınlanmış bir örnek (monitör ünitesi, 4,2 GY/min standart doz oranı, Şekil 2...

Watch this Scientific Journal Video about Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments at JoVE.com

Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments

In vitro Radiobiology denemeleri için Lineer Hızlandırıcı kullanımı

Klinik Doğrusal Hızlandırıcılar kanser hücrelerinde doz oranlarının geniş bir yelpazede biyolojik etkilerini belirlemek için kullanılabilir. Biz hücre tabanlı deneyleri için doğrusal bir Hızlandırıcı kurmak için nasıl tartışıyoruz ve kanser kök benzeri hücreler için süspansiyon ve hücre hatları yapışkanlık kültürler olarak yetiştirilen içinde tumorspheres olarak yetiştirilen için deneyleri.

Radiation therapy remains one of the cornerstones of cancer management. For most cancers, it is the most effective, nonsurgical therapy to debulk tumors. ...

Radyasyon tedavisi en sık lineer hızlandırıcılar kullanılarak yapılır. Bu protokol, araştırmacıların doğrusal bir hızlandırıcı kullanarak radyasyonun hücreler üzerindeki biyolojik etkilerini değerlendirmelerine olanak tanır. Bu tekniğin avantajı doğrusal bir hızlandırıcı kullanarak, araştırmacılar klinik olarak ilgili doz ve doz oranları geniş bir yelpazede çalışabilirsiniz.Ayrıca, bu protokol kanser hücrelerinin her türlü için kullanılabilir. Bu yöntem, burada gösterilen benzer ekipman kullanılarak gerçekleştirilebilir. Örneğin, diğer satıcılar tarafından üretilen doğrusal hızlandırıcılar.Doğrusal hızlandırıcı kullanarak dosimetrik hesaplamalar yaparken deneyimli olmayan bireyler, numuneye istenilen dozu sağlamak için gerekli monitör birimlerinin doğru sayısını hesaplamak için mücadele edebilirler. Onlar bir deneyim tıbbi fizikçi veya dosimetrist tavsiye arayarak yararlanacaktır. Doğrusal bir hızlandırıcı kullanarak numuneye doğru doz teslim etmek dikkatli bir yerleştirme gerektirir.Planlanan ışınlama iki gün önce, bir kültür başlık çalışan, 15 mililitrelik santrifüj tüp içine bir kültür plakası glioma kök benzeri hücreleri toplamak için steril beş mililitrelik pipet kullanın. Bir tezgah santrifüj üç dakika için 200 kez g hücreleri santrifüj. Supernatant atın ve tripsin-EDTA bir mililitre ile hücre pelet resuspend.Pelet sindirmek ve tripsin-EDTA tek bir hücre süspansiyon yapmak için beş dakika oda sıcaklığında kuluçka. Sindirim sırasında her iki dakikada bir, yavaşça hücrelerin iyice sindirilir emin olmak için santrifüj tüp alt sallamak. Sonra trypsin söndürmek için kök hücre kültürü medya üç mililitre ekleyin, yavaşça karıştırın, ve santrifüj 200 kez g bir tezgah santrifüj üç dakika.Supernatant attıktan sonra, hücre kültürü medya beş mililitre ile hücre pelet resuspend ve bir hemositometre ile hücreleri saymak. Plaka beş milyon hücre hücre kültürü medya 10 mililitre içeren iki 10 santimetre plakaları bölünmüş ve 37 santigrat derece 48 saat kuluçka. Planlanan ışınlamahemen önce, hücreleri ve santrifüj daha önce yapıldığı gibi toplamak.Supernatant atın ve hücre kültürü medya beş mililitre ile hücre pelet resuspend. Bir mililitre hücre süspansiyonunun iki mililitre hücre kültürü ortamı içeren 35 milimetrelik bir plakaya aktarılması, ortamın bir santimetre yüksekliğe ulaştığından emin olun. Kontaminasyon riskini azaltmak için kaplamalı hücreleri ikincil bir konteynere aktarın ve hücreleri ışınlamak için bir yardımcı araç üzerindeki kaptaki hücreleri ışınlama tesisine getirin.Bir gün önce, hücre kültürü başlık çalışan, bağlı hücre hattı için hücre kültürü plaka DMEM orta kaldırmak için bir vakum bağlı bir Pasteur pipet kullanın. Daha sonra hücreleri beş mililitre steril PBS ile yıkayın ve artık ortamı durulayın. Kültür yemeğiiçine bir mililitre tripsin-EDTA ekleyin ve tüm yemeğin kapalı olduğundan emin olmak için kültür plakasını yavaşça yatırın.Beş dakika oda sıcaklığında kuluçkadan sonra, üç mililitre DMEM ortam ile tripsin-EDTA reaksiyonu söndürün. Hücreleri 15 mililitrelik santrifüj tüpü, santrifüj tüpü, santrifüj içine toplamak ve daha sonra el yazmasıaçıklandığı gibi hücreleri kültüre almak için beş mililitrelik pipet kullanın. LINAC'ın konsol yazılımını kullanarak bu önceden hazırlanmış bu hücreleri ışınlamak için hızlandırıcı gantry ve kolimatör sıfır dereceye ayarlayın, x ve y çenelerini simetrik beş santimetre kare alan boyutuna açın ve çok yapraklı kolimatörleri geri çekin.Tedavi kanepesine en az beş santimetre su eşdeğeri malzeme ekleyin ve hücre çanamasını LINAC'ın hedefinin ortasına ışınlanacak şekilde yerleştirin. Hücreleri 1,5 santimetre civarında altı megavoltluk bir X-ışınına maksimum dozda yerleştirin ve yemeğin üzerine bir santimetre daha su eşdeğeri malzeme ekleyin. Ön işaretçiyi LINAC'ın başına yapıştırın ve birikme malzemesinin yüzeyine değene kadar uzatın.Tablo yüksekliğini kaynaktan birikme yüzeyine olan uzaklık 100 santimetre olana kadar ayarlayın. Tedavi kasasını bırak, diğer tüm bireylerin gittiğinden emin ol. Odada başka hücre olmadığını doğrulayın ve kasa kapısını kapatın.Alan boyutunu doğrulayın, birimleri izleyin ve konsoldaki dakika başına birimleri izleyin ve ardından radyasyon hücresi için ışını etkinleştirin. Bu protokol kullanılarak üç glioma kök benzeri hücre örneği hazırlandı ve ışınlamadan 24 saat sonra toplandı. Hücre döngüsü profilleri hesaplandı ve hücre döngüsünün farklı aşamalarında hücrelerin yüzdeleri ile gösterildi.G2 hücre döngüsü arrest glioma kök hücrelerinin ışınlandıktan sonra standart doz oranı veya ekstra yüksek doz oranı ile, ışınlandırılmayan kontrol hücreleri ile karşılaştırıldığında gözlendi. Doğru dozu teslim etmek için, bir santimetre ulaştığından emin olmak için kültür çanağında ortamın yüksekliğini ölçmek en önemlidir. Bu prosedürü takiben, diğer biyolojik tahliller yapılabilir, immünboyama gibi, batı leke, ve hücre döngüsü analizi.Bu prosedür araştırmacılar klinik olarak ilgili doz ve doz oranı ayarları sağlar yana, birçok hücre kültürü tabanlı modellerüzerinde radyasyon etkisini değerlendirmek için kullanılabilir.

Research

JoVE Journal

Medicine

Use of a Hanging Weight System for Coronary Artery Occlusion in Mice

Asma Ağırlık Sistemi Fare Koroner Arter Tıkanıklığı için kullanın

Murine studies of acute injury are an area of intense investigation, as knockout mice for different genes are becoming increasingly available 1-38. ...

Use of a Hanging-weight System for Isolated Renal Artery Occlusion

İzole Renal Arter Tıkanıklığı Asılı ağırlık Sistemi

In hospitalized patients, over 50% of cases of acute kidney injury (AKI) are caused by renal ischemia 1-3. A recent study of hospitalized patients ...

Use of a Hanging-weight System for Liver Ischemia in Mice

Farelerde Karaciğer İskemi için Asılı ağırlık Sistem Kullanımı

Acute liver injury due to ischemia can occur during several clinical procedures e.g. liver transplantation, hepatic tumor resection or trauma repair and ...

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

Küçük Kemirgenler sistometri ve Kullanımı: Mesane Chemosensation Çalışması

	The lower urinary tract (LUT) functions as a  dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a  convenient time. While ...

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Üç boyutlu heterotipik<em&gt; In Vitro</emYumurtalık Kanseri Başlatma ve İlerleme sırasında Stromal-Epitel Etkileşimleri&gt; Modelleme

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Farelerde Taksanlar Farmakokinetik ve Farmakodinamik Analiz Karotis Arter İnfüzyonlar

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Setting Up a Stroke Team Algorithm and Conducting Simulation-based Training in the Emergency Department - A Practical Guide

Bir Stroke Takım Algoritma Kurma ve acil serviste Simülasyon tabanlı Eğitim yürütmek - Pratik Bir Rehber

Time is of the essence when caring for an acute stroke patient. The ultimate goal is to restore blood flow to the ischemic brain. This can ...

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Bitkisel Tıbbın Hazırlanması: Er-Xian Kaynatma ve Er-Xian içeren Serum<emIn vivo</emVe<em&gt; In vitro</em&gt; Deneyler

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

Conducting Maximal and Submaximal Endurance Exercise Testing to Measure Physiological and Biological Responses to Acute Exercise in Humans

Maksimal ve Submaximal dayanıklılık egzersiz akut egzersiz insanlarda biyolojik ve fizyolojik yanıtlarını ölçmek için test iletken

Regular physical activity has a positive effect on human health, but the mechanisms controlling these effects remain unclear. The physiologic and biologic ...

Preparation Of Gushukang (GSK) Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

In vivo ve In vitro deneyler için Gushukang (GSK) granül hazırlanması

Traditional Chinese herbal medicine plays a role as an alternative method in treating many diseases, such as postmenopausal osteoporosis (POP). Gushukang ...