Name: atomic absorbance spectroscopy to measure intracellular zinc pools in mammalian cells
Uploaded: 2019-05-16T15:00:00
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这项工作得到了麻省大学医学院到 t. p. b. 的教师多样性学者奖的支持。N.-T。由 SEP-CONACYT 支持, 赠款279879。J. g. n 由国家科学基金会赠款 DBI 0959476 提供支持。提交人感谢 Daryl A. Bosco 博士提供 N2A 细胞系, 并感谢 Danella Cangussu 的技术支持。

1. 哺乳动物细胞培养
<ol><li>一般考虑因素
	<ol>
<li>遵循无菌技术的哺乳动物细胞培养先前回顾了38。</li>
		<li>在37°c 的加湿 5% co2 孵化器中保持所有细胞系。细胞培养条件因细胞类型而异。重要的是要为所使用的每一个细胞系保持适当的培养条件, 因为这些程序的变化会导致异常的表型和细胞培养的失败。</li>
		<li>确保熟悉感兴趣的细胞系, 并遵循为特定实验...

原子吸收光谱是一种对小体积/质量生物样品进行锌定量的高度敏感的方法。所描述的锌测量优化使该方法的应用简单, 保证了理想的分析条件。在这里, 我们使用 GF-AAS 确定了锌在整个细胞中的浓度, 以及在来自不同细胞系的细胞质和核分裂中的浓度。结果表明, 该技术与荧光探针和 ICP-MS 的工艺具有相当的效果。例如, 几个荧光探针显示, 线粒体锌含量在0.1 至 300 Ppm 之间, Golgi 的含量低于 picomolar<sup...

过渡和重金属, 如锌、铜、锰和铁, 在食物和污染物的营养物质中都是天然存在的。所有生物都需要不同数量的这些微量营养素;然而, 暴露在高水平是有害的生物。金属采集主要是通过饮食, 但金属也可以通过皮肤吸入或吸收 1,2,3, 4,5。必须指出, 大气颗粒中金属的存在正在增加, 在很大程度上与健康风险有关。由于人为活动, 在大气颗粒物、雨水和土壤6、7中检测到银、砷、镉、铬、汞、镍、铁和铅等重金属含量的增加。这些金属有可能与基本的生理微量元素竞争, 特别是锌和铁, 它们通过使生物过程中的基本酶失活而产生毒性效应。
微量元素锌是氧化还原中性的, 在生物反应中表现为刘易斯酸, 这使得它成为超过10% 的哺乳动物蛋白 8, 9 的蛋白质折叠和催化活性所必需的基本辅因子。10;因此, 它是必要的, 为不同的生理功能8,11。然而, 像许多微量元素一样, 这些金属之间存在着微妙的平衡, 促进了正常的生理功能并产生毒性。在哺乳动物中, 锌缺乏症会导致贫血、发育迟缓、性腺功能低下、皮肤异常、腹泻、脱发、味觉障碍、慢性炎症以及免疫和神经功能受损11、12、 13,14,15,16,17,18。锌过量, 具有细胞毒性, 会损害铜19、20、21 等其他基本金属的吸收。
此外, 铜、铁等一些金属有可能参与有害反应。通过芬顿化学生产活性氧 (ros) 会干扰铁硫簇蛋白的组装, 改变 22, 23,24的脂质代谢.为了防止这种损害, 细胞利用金属结合的伴侣和转运体来防止毒性的影响。毫无疑问, 必须严格控制金属的稳态, 以确保特定的细胞类型保持适当水平的金属。因此, 非常需要改进准确测量生物样品中微量金属的技术。在发育中的生物体和成熟的生物体中, 在细胞水平、不同的发育阶段以及正常和病理条件下对微量元素的生物需求存在差异。因此, 精确测定组织和全身金属水平是必要的, 以了解组织金属的稳态。
石墨炉原子吸收光谱法 (gf-aas) 是一种高度敏感的技术, 用于小样本量, 使其成为测量生物和环境样品中存在的过渡和重金属的理想选择25,26,27,28. 此外, 由于该技术的灵敏度高, 已被证明适合于研究钠++ atpase 和胃 h+/k +-atpase的优良输运特性。卵母细胞作为模型系统29。在 GF-AAS 中, 样品中的雾化元素吸收含有感兴趣金属的光源发出的辐射波长, 吸收的辐射与元素的浓度成正比。元素电子激发是在吸收紫外线或可见光辐射时进行的, 过程对每个化学元素来说都是独一无二的。在单个电子过程中, 光子的吸收涉及一个电子从较低的能级移动到原子内的较高能级, 而 GF-AAS 决定了样品吸收的光子的数量, 这与辐射吸收的数量成正比元素在石墨管中雾化。
这种技术的选择性依赖于原子的电子结构, 其中每个元素都有一个特定的吸收/发射谱线。在锌的情况下, 吸收波长为23.9 纳米, 可以与其他金属精确区分。总体而言, GF-AAS 可用于量化具有足够的检测极限 (LOD) 和高灵敏度和选择性25的锌。吸收波长的变化是积分的, 并表现为特定波长和孤立波长的能量吸收峰。根据啤酒-兰伯特定律, 在给定样品中锌的浓度通常是根据已知浓度的标准曲线计算的, 在该曲线中, 吸收率与样品中锌的浓度成正比。然而, 将啤酒-兰伯特方程应用于 GF-AAS 分析也存在一些复杂问题。例如, 样品的雾化和/或非均质浓度的变化会影响金属测量。
GF AAS 痕量元素分析所需的金属雾化由三个基本步骤组成。第一步是脱盐, 液体溶剂被蒸发;在熔炉达到约100°c 的温度后留下干燥的化合物。然后, 化合物通过加热从800到 1, 400°c (取决于要分析的元素) 蒸发, 并成为气体。最后, 在气态的化合物被雾化的温度范围从1500到 2, 500°c。如上所述, 感兴趣的金属的浓度的增加将使 GF-AAS 检测到的吸收成比例增加, 但熔炉减少了动态分析范围, 即可以是浓度的工作范围。由仪器确定。因此, 该技术需要低浓度和通过确定啤酒-兰伯特定律的 LOD 和线性极限 (LOL) 来仔细确定该方法的动态范围。LOD 是检测物质所需的最小数量, 定义为矩阵中锌标准偏差的三倍。LOL 是使用啤酒-兰伯特定律可以检测到的最大浓度。
在这项工作中, 我们描述了一个标准的方法来分析锌在整个细胞提取物, 细胞质和核分裂, 以及在增殖和分化培养细胞中的水平 (图 1)。我们将原子核协议的快速隔离调整到不同的细胞系统中, 以防止样品制备过程中的金属损失。所使用的细胞模型有来自小鼠卫星细胞的原代成肌细胞、小鼠神经母细胞 (N2A 或 Neuro2A)、小鼠 3T3 L1 脂肪细胞、人类非致瘤乳房上皮细胞 (MCF10A) 和马丁-达比犬肾上皮 (单元格。这些细胞是从不同的谱系建立的, 是研究体外金属水平的谱系特异性变化的良好模型。
从小鼠卫星细胞中提取的原代成肌细胞构成了一个非常适合的体外模型来研究骨骼肌的分化。在高血清条件下培养时, 这些细胞的增殖速度很快。然后, 低血清条件30导致分化为肌肉谱系.小鼠神经母细胞瘤 (N2A) 建立细胞系来源于小鼠神经冠。这些细胞呈现神经元和阿米巴状干细胞形态。在分化刺激时, N2A 细胞呈现神经元的几个特性, 如神经丝。N2a 细胞用于调查阿尔茨海默氏症、神经元生长和神经毒性31, 32,33。3T3-l1 小鼠脂肪细胞前建立的细胞系通常用于研究与脂肪生成相关的代谢和生理变化。这些细胞呈现成纤维细胞样的形态, 但一旦刺激分化, 它们就会呈现与脂质合成和甘油三酯积累相关的酶激活。这可以观察到形态的变化, 产生细胞质脂滴 34,35。MCF10A 是一种非肿瘤乳腺上皮细胞系, 来源于绝经前患有乳腺纤维囊性疾病的妇女 36.它已被广泛用于与乳腺癌有关的生化、分子和细胞研究, 如增殖、细胞迁移和侵袭。马丁-达比犬肾 (MDCK) 上皮细胞系已被广泛用于研究与建立上皮表型相关的性质和分子事件。到达融合后, 这些细胞变得极化, 并建立细胞粘连, 哺乳动物上皮组织的特点 37.
为了测试 AAS 测量哺乳动物细胞中锌含量的能力, 我们分析了这五个细胞系的整体和亚细胞分数 (细胞溶胶和细胞核)。AAS 测量显示, 在这些细胞类型中, 锌的浓度不同。在增殖和分化原代成肌细胞中, 浓度较低 (4 至 7 nmomg/mg), 在4个已建立的细胞系 (蛋白质含量从20到 40 nmomg/mg 不等) 中浓度较高。与增殖细胞相比, 在鉴别原代成肌细胞和神经母细胞瘤细胞时, 锌水平有少量不显著的增加。在分化的脂肪细胞中检测到相反的效果。然而, 增殖的3T3-l1 细胞表现出更高的浓度的金属相比分化的细胞。重要的是, 在这三个细胞系中, 亚细胞分馏表明, 根据细胞的代谢状态, 锌在细胞溶胶和细胞核中分布不同。例如, 在增殖成肌细胞、N2A 细胞和3T3-l1 前脂肪细胞中, 大部分金属被定位到细胞核。在使用特定细胞处理诱导分化时, 锌在这三种细胞类型中定位到细胞溶胶。有趣的是, 与达到融合时相比, 两个上皮细胞系在增殖过程中的锌含量都较高, 在融合处形成了一种特征紧密的单层。在增殖的上皮细胞中, 乳腺细胞系 MCF10A 在细胞溶胶和细胞核之间具有相等的锌分布, 而在肾源性细胞系中, 大部分金属位于细胞核内。在这两种细胞类型中, 当细胞到达汇合处时, 锌主要位于细胞溶胶上。这些结果表明, GF-AAS 是一种在低产量样品中进行元素分析的高度敏感和准确的技术。GF-AAS 与亚细胞分馏相结合, 可用于研究不同细胞系和组织中微量元素的水平。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>3-isobutyl-1-methylxanthine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>I5879</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic Acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>1005706</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti Brg1-antibody (G7)</td>
			<td>Santa Cruz biotechnologies</td>
			<td>sc-17796</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti b-tubulin-antibody (BT7R)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>MA5-16308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bradford</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>5000205</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethasone</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D4902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Media (DMEM)</td>
			<td>ThermoFischer-Gibco</td>
			<td>11965092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Media/Nutrient Mix (DMEM/F12)</td>
			<td>ThermoFischer-Gibco</td>
			<td>11320033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline (DPBS)</td>
			<td>ThermoFischer-Gibco</td>
			<td>14190144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epidemal Growth Factor (EGF)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E9644</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>ThermoFischer-Gibco</td>
			<td>16000044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibroblastic Growth Factor-Basic (FGF) (AA 10-155)</td>
			<td>ThermoFischer-Gibco</td>
			<td>PHG0024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse serum</td>
			<td>ThermoFischer-Gibco</td>
			<td>16050122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H0888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen Peroxide (H2O2)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>95321</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>91077C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin-Transferrin-Selenium-A</td>
			<td>ThermoFischer</td>
			<td>51300044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitric Acid (HNO3)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>438073</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nonidet P-40 (NP-40)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>85125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiMEM (Reduced Serum Media)</td>
			<td>ThermoFischer-Gibco</td>
			<td>31985070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>ThermoFischer-Gibco</td>
			<td>15140148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PureCol (Collagen)</td>
			<td>Advanced BioMatrix</td>
			<td>5005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retionic Acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>PHR1187</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Troglitazone</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>648469-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td>
			<td>ThermoFischer-Gibco</td>
			<td>25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zinc (Zn) Pure Single-Element Standard, 1,000 &#181;g/mL, 2% HNO3</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>N9300168</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Established Cell Lines</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3T3-L1</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>CL-173</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MCDK</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>CCL-34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MCF10A</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>CRL-10317</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2A</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>CCL-131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atomic Absortion spectrophotometer</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>Aanalyst 800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioruptor</td>
			<td>Diagnode</td>
			<td>UCD-200</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

atomic absorbance spectroscopy to measure intracellular zinc pools in mammalian cells

过渡金属是生物体必不可少的微量营养素, 但通过与蛋白质中的生理金属竞争并产生氧化还原应力, 可能对高浓度细胞有毒。导致金属枯竭或积累的病理条件是不同人类疾病的因果因素。一些例子包括贫血, 肠道炎, 威尔逊和门克斯的疾病。因此, 重要的是能够以高灵敏度和高精度测量生物样品中过渡金属的水平和迁移, 以便利研究探索这些元素如何有助于正常的生理功能和毒性。例如, 锌 (Zn) 是许多哺乳动物蛋白质中的辅因子, 参与信号事件, 是细胞中的二次信使。锌过量, 有毒, 可以抑制其他金属的吸收, 而在赤字中, 它可以导致各种潜在的致命条件。

石墨炉原子吸收光谱 (GF-AAS) 为测定不同生物样品中的锌和其他过渡金属浓度提供了一种高度敏感和有效的方法。通过 GF-AAS 进行电热雾化, 通过雾化少量样品对金属进行量化, 以便随后使用感兴趣元素的激发波长进行选择性吸收分析。在啤酒-兰伯特定律的线性范围内, 金属对光的吸收与分析物的浓度成正比。与其他测定锌含量的方法相比, GF-AAS 检测蛋白质中的游离锌和复合锌, 并可能检测出小样本量中灵敏度高的小细胞内分子中的游离锌。此外, 与电感耦合等离子体质谱 (ICP-MS) 或基于同步 x 射线荧光相比, GF-AAS 也更容易获得。在该方法中, 描述了在 GF-AAS 中对不同培养细胞系进行系统样品制备的方法。比较了该微量元素在增殖和分化细胞的全细胞裂解物和细胞下组分中的变化, 以证明其原理。

我们测试了 GF-AAS 检测哺乳动物细胞中锌的微小水平的能力 (图 1)。因此, 我们培养了来自小鼠卫星细胞的原代成肌细胞, 以及已建立的细胞系 N2A (神经母细胞瘤)、3T3 L1 (脂肪细胞)、MCF10A (乳腺上皮) 和 MDCK 细胞 (狗肾上皮)。首先, 我们分离了所有这些细胞类型的整个细胞、细胞质和核组分, 并通过西方印迹评估了这些组分的纯度 (图 2</st...

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Atomic Absorbance Spectroscopy to Measure Intracellular Zinc Pools in Mammalian Cells

原子吸纳光谱测量哺乳动物细胞细胞内锌池

培养的原生细胞系或已建立的细胞系通常用于在使用动物模型之前解决基本的生物和机械问题, 作为初步方法。该方案介绍了如何利用原子吸收光谱制备用于锌 (Zn) 和其他微量元素研究的全细胞提取物和亚细胞组分。

Transition metals are essential micronutrients for organisms but can be toxic to cells at high concentrations by competing with physiological metals in ...

过渡金属在哺乳动物发育中的作用在很大程度上被低估了。新的证据表明，金属平衡继续根据细胞和组织发育阶段的变化。此外，金属的特定细胞目的地在开发中也是品种，当然，要确定它们的位置也具有挑战性。迄今为止，已经开发了不同的分析技术来量化金属，但大多数是昂贵的或无法访问的。深入的研究的重点是以更方便和更有效率的方式改进金属测定。石墨炉原子吸收光谱，GF-AAS，有两个主要优点。它提供了低锌检测限值，允许精确的微量锌分析。它也是一种不需要大量样品的技术，溶液的微升往往足以进行分析。这两个优势的结合使GF-AAS成为分析低体积样品中微量元素的理想之选。几种人类病理状况与金属失衡有关。一些例子是贫血，杂技炎肠病，威尔逊和门克斯的疾病。因此，必须开发高效可靠的方法，以高灵敏度和准确性测量生物样品中过渡金属的水平。GF-AAS 是一项技术上的一个极好示例，该技术有助于在正常生理条件下和致病情况下确定任何给定金属。这种方法用途广泛。它可以应用于许多系统，许多元素可以使用GF-AAS进行分析。面临的挑战是建立实际检测的方法限制，确保样本在此限制内。鉴于样品数量很少，因此没有很多检测空间，因此从一开始就需要仔细检查数据。在对样品进行第一次分析后，我们需要确定将样品带到定量所需的限值所需的稀释因子。在进入 AAS 之前，请确保能够正确分馏核。在光谱分析之前，西方的印迹总是很好的验证。虽然 GF-AAS 需要低容量，但细胞内池的容量已经很低。这几乎没有测试的余地。第一次测量需要仔细完成和检查，因此样品处理可以最小化为只有一个稀释因子。首先，在55平方厘米的板块中培养感兴趣的细胞。使用真空陷阱吸气文化介质。请务必删除所有介质痕迹。使用不含钙和镁的冰冷PBS从所需时间点或培养条件冲洗细胞三次。然后向板中加入一毫升冰冷PBS，然后刮掉板上的细胞。将细胞悬浮液转移到1.5毫升微离心管中，并放在冰上。在10，000倍G下离心10秒，通过吸气去除上一代。如果需要对细胞质和核馏分进行金属分析，将细胞颗粒重新暂停在含有0.1%NP-40（非离子洗涤剂）的400微升冰冷PBS中。将100微升转移到一个新的微离心管作为整个细胞样品，并储存在零下20摄氏度。要分离核，请使用 P1000 微移液器尖端移液 400 微升细胞悬浮液上下 5 到 10 次冰上。然后，提取细胞悬浮液的五微升，将其转移到显微镜玻璃幻灯片上。使用 40 倍的镜片将五个微升置于光学显微镜下，以验证核的完整性。将剩余的395微升细胞在10，000倍G下分离10秒，将含有细胞酸分的上流液转移到一个新的微离心管中。接下来，加入500微升含有0.1%NP-40的PBS，用核馏分冲洗颗粒，并在10000倍G.下离心10秒，然后在同一溶液的100微升中重新暂停含有核的颗粒。要对细胞进行解塞，使用生物破坏器对整个细胞和含有溶液的核进行三次声波化，每次五分钟。继续使用针对核或细胞细胞酸分的抗体，由西方印迹对分数的纯度进行质量控制。首先，在1.5毫升微离心管中，向含有100、500和100微升细胞悬浮液的细胞悬浮液的整个细胞、细胞质和核成分中加入同等体积的微金属品位的浓缩硝酸，并将其放在80摄氏度的热块中，使细胞培养体分矿化一小时。之后，从热块中拿出管子，放在机架中，在20摄氏度下持续一夜的酸消化。加入过氧化氢样品体积的30%来停止反应。将样品体积与 18 兆欧姆纯化水一起带到 500 微升。接下来，在15毫升猎鹰管稀释分析级标准一氧化氮在纯净水18兆欧姆，以准备两体积百分之一硝酸溶液作为空白溶液在校准期间。然后，使用两体积百分之一的硝酸溶液稀释一个市售的1000ppm锌库存溶液，浓度为每十亿分之1000。从每百万锌标准溶液1000份、每1000份每十亿个锌标准溶液中准备工作标准解决方案，然后直接用2体积硝酸溶液稀释至5、8、10、15、20和25ppb。将一毫升0.1%硝酸镁基质改性剂放入聚丙烯样品杯中，然后将杯装入自动取样器旋转木马中。编程原子吸收光谱仪自动将基体改性剂的五微升添加到锌标准和空白。为标准溶液和样品在原子吸收光谱仪上设置相同的优化条件，引入流量为每分钟250毫升，喷射温度为20摄氏度，石墨炉温在四步法中达到1800摄氏度。应同时测量单个实验的所有标准和样本，以避免因校准差异或蒸发而出错。将灯 C-HCL 优化为 20 安培，波长为 213.9 纳米，狭缝为 0.7 纳米。将样品放入聚丙烯样品杯中，并放入自动取样器旋转木马中。锌检测的下限为十亿分之0.01。通过提高标准的浓度，锌检测的上限确定为十亿分之20。获得锌标准曲线后，测量矿化样品以确定金属含量。如果获得的数据超过检测限值，用18兆欧姆纯净水稀释样品，用0.1%的分析级硝酸处理。在这种核协议的快速分离中，从区分原核细胞的代表性西方斑点显示了亚细胞分数的纯度。染色质重塑酶Brg1用于识别核分数，而多布蛋白用于识别细胞酸分。此图显示了每种细胞类型的增殖、分化或汇合单层具有代表性的光显微图，以及全细胞提取物、细胞和核分数中相应的锌含量。本研究中分析的所有细胞系都显示锌浓度在纳米摩尔范围内。分化的原发性 myotube 的锌含量高于增殖细胞。在神经母细胞瘤衍生细胞系N2A中检测到类似的锌亚细胞分布。另一方面，在脂肪细胞前增殖时，已建立的3T3-L1细胞系表现出比诱导或分化时更高的锌含量。MCF10A细胞在增殖细胞中细胞和核分数之间的锌含量相等。一旦MCF10A细胞达到汇合，全细胞锌含量下降40%，金属最集中在细胞细胞分块中。石墨炉原子吸收光谱仪是测量生物和环境样品中过渡和重金属的一种高度灵敏的技术。在制备亚细胞分馏时应特别小心和清洁，因为由于设备的敏感性，最小的污染可能会干扰分析。鉴于每个实验中金属的体积和微量含量较低，很难想到比 GF-AAS 更好、更准确的锌测量技术。目前没有任何技术可以提供检测限制和低容量所需的低容量，在相对较低的GF-AAS成本。石墨炉原子吸收光谱法准确、灵敏、经济高效且易于访问。随着元素检测技术的不断发展，这种分析技术将继续改进。GF-AAS未来用于检测锌和其他金属的应用将包括器官、从动物模型中获得的组织，以及来自与全身金属失衡相关的疾病患者的活检。硝酸是一种极腐蚀性的酸，能够迅速引起严重的化学灼伤。这种化学物质也会与某些化合物（如金属粉末）发生剧烈反应。由于硝酸带来的危险，在处理硝酸时，必须采取严格的安全措施。处理硝酸时，我们强烈建议您佩戴安全化学眼镜、防溅面罩、手套和经批准的蒸汽呼吸（如果通风不足）。

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