Name: tailoring in vivo cytotoxicity assays to study immunodominance in tumor-specific cd8+ t cell responses
Uploaded: 2019-05-06T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af de canadiske institutter for sundhedsforskning (CIHR) bevilger MOP-130465 og PJT-156295 til SMMH. JC er delvist understøttet af en dronning Elizabeth II Graduate Scholarship i videnskab og teknologi fra Ontario Ministeriet for uddannelse, gymnasier og universiteter. CEM var modtager af en Alexander Graham Bell Canada Graduate Scholarship (doktor) fra naturvidenskab og ingeniør forskning Council of Canada (NSERC).

De her beskrevne eksperimenter følger protokoller for anvendelse af dyr, der er godkendt af institutionelle enheder, og overholder etablerede nationale retningslinjer.
1. inokulation af C57BL/6 mus med T AG-udtrykker tumor celler
<ol><li>Dyrk den SV40-transformerede fibrosarkom-cellelinje C57SV (eller en lignende T AG+ vedhæng ende cellelinje) i dulbeccos modificerede eagle's medium (DMEM) med 4,5 g/L D-glucose og L-glutamin (1x) og suppleret med 1 mm natriumpyruvat og 10% varme...

<ol>
	<li>Yewdell, J. W., Bennink, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominance+in+major+histocompatibility+complex+class+I-restricted+T+lymphocyte+responses.">Immunodominance in major histocompatibility complex class I-restricted T lymphocyte responses.</a> Annual Review of Immunology. 17, 51-88 (1999).</li><li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+in+the+immunodominance+hierarchy+in+secondary+CD8++T+cell+responses+to+influenza+A+virus:+roles+for+cross-presentation+and+lysis-independent+immunodomination.">Reversal in the immunodominance hierarchy in secondary CD8+ T cell responses to influenza A virus: roles for cross-presentation and lysis-independent immunodomination.</a> The Journal of Immunology. 173 (8), 5021-5027 (2004).</li><li>Otahal, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inefficient+cross-presentation+limits+the+CD8++T+cell+response+to+a+subdominant+tumor+antigen+epitope.">Inefficient cross-presentation limits the CD8+ T cell response to a subdominant tumor antigen epitope.</a> The Journal of Immunology. 175 (2), 700-712 (2005).</li><li>Lauron, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-priming+induces+immunodomination+in+the+presence+of+viral+MHC+class+I+inhibition.">Cross-priming induces immunodomination in the presence of viral MHC class I inhibition.</a> PLoS Pathogens. 14 (2), e1006883 (2018).</li><li>Crowe, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+antigen+presentation+regulates+the+changing+patterns+of+CD8++T+cell+immunodominance+in+primary+and+secondary+influenza+virus+infections.">Differential antigen presentation regulates the changing patterns of CD8+ T cell immunodominance in primary and secondary influenza virus infections.</a> The Journal of Experimental Medicine. 198 (3), 399-410 (2003).</li><li>Probst, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominance+of+an+antiviral+cytotoxic+T+cell+response+is+shaped+by+the+kinetics+of+viral+protein+expression.">Immunodominance of an antiviral cytotoxic T cell response is shaped by the kinetics of viral protein expression.</a> The Journal of Immunology. 171 (10), 5415-5422 (2003).</li><li>Gileadi, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+an+immunodominant+CTL+epitope+is+affected+by+proteasome+subunit+composition+and+stability+of+the+antigenic+protein.">Generation of an immunodominant CTL epitope is affected by proteasome subunit composition and stability of the antigenic protein.</a> The Journal of Immunology. 163 (11), 6045-6052 (1999).</li><li>Zanker, D., Waithman, J., Yewdell, J. W., Chen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mixed+proteasomes+function+to+increase+viral+peptide+diversity+and+broaden+antiviral+CD8++T+cell+responses.">Mixed proteasomes function to increase viral peptide diversity and broaden antiviral CD8+ T cell responses.</a> The Journal of Immunology. 191 (1), 52-59 (2013).</li><li>Deng, Y., Yewdell, J. W., Eisenlohr, L. C., Bennink, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MHC+affinity,+peptide+liberation,+T+cell+repertoire,+and+immunodominance+all+contribute+to+the+paucity+of+MHC+class+I-restricted+peptides+recognized+by+antiviral+CTL.">MHC affinity, peptide liberation, T cell repertoire, and immunodominance all contribute to the paucity of MHC class I-restricted peptides recognized by antiviral CTL.</a> The Journal of Immunology. 158 (4), 1507-1515 (1997).</li><li>Chen, W., Khilko, S., Fecondo, J., Margulies, D. H., McCluskey, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determinant+selection+of+major+histocompatibility+complex+class+I-restricted+antigenic+peptides+is+explained+by+class+I-peptide+affinity+and+is+strongly+influenced+by+nondominant+anchor+residues.">Determinant selection of major histocompatibility complex class I-restricted antigenic peptides is explained by class I-peptide affinity and is strongly influenced by nondominant anchor residues.</a> The Journal of Experimental Medicine. 180 (4), 1471-1483 (1994).</li><li>Kotturi, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naive+precursor+frequencies+and+MHC+binding+rather+than+the+degree+of+epitope+diversity+shape+CD8++T+cell+immunodominance.">Naive precursor frequencies and MHC binding rather than the degree of epitope diversity shape CD8+ T cell immunodominance.</a> The Journal of Immunology. 181 (3), 2124-2133 (2008).</li><li>Haeryfar, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Terminal+deoxynucleotidyl+transferase+establishes+and+broadens+antiviral+CD8++T+cell+immunodominance+hierarchies.">Terminal deoxynucleotidyl transferase establishes and broadens antiviral CD8+ T cell immunodominance hierarchies.</a> The Journal of Immunology. 181 (1), 649-659 (2008).</li><li>Leon-Ponte, M., Kasprzyski, T., Mannik, L. A., Haeryfar, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+immunodominance+hierarchies+of+influenza+A+virus-specific+H-2(b)-restricted+CD8++T+cells+in+the+absence+of+terminal+deoxynucleotidyl+transferase.">Altered immunodominance hierarchies of influenza A virus-specific H-2(b)-restricted CD8+ T cells in the absence of terminal deoxynucleotidyl transferase.</a> Immunological Investigations. 37 (7), 714-725 (2008).</li><li>Kedl, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cells+compete+for+access+to+antigen-bearing+antigen-presenting+cells.">T cells compete for access to antigen-bearing antigen-presenting cells.</a> The Journal of Experimental Medicine. 192 (8), 1105-1113 (2000).</li><li>Kastenmuller, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-competition+of+CD8++T+cells+shapes+the+immunodominance+hierarchy+during+boost+vaccination.">Cross-competition of CD8+ T cells shapes the immunodominance hierarchy during boost vaccination.</a> The Journal of Experimental Medicine. 204 (9), 2187-2198 (2007).</li><li>Memarnejadian, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-1+Blockade+Promotes+Epitope+Spreading+in+Anticancer+CD8(+)+T+Cell+Responses+by+Preventing+Fratricidal+Death+of+Subdominant+Clones+To+Relieve+Immunodomination.">PD-1 Blockade Promotes Epitope Spreading in Anticancer CD8(+) T Cell Responses by Preventing Fratricidal Death of Subdominant Clones To Relieve Immunodomination.</a> The Journal of Immunology. 199 (9), 3348-3359 (2017).</li><li>Haeryfar, S. M., DiPaolo, R. J., Tscharke, D. C., Bennink, J. R., Yewdell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells+suppress+CD8++T+cell+responses+induced+by+direct+priming+and+cross-priming+and+moderate+immunodominance+disparities.">Regulatory T cells suppress CD8+ T cell responses induced by direct priming and cross-priming and moderate immunodominance disparities.</a> The Journal of Immunology. 174 (6), 3344-3351 (2005).</li><li>Rytelewski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+immunodominant+antitumor+and+antiviral+CD8++T+cell+responses+by+indoleamine+2,3-dioxygenase.">Suppression of immunodominant antitumor and antiviral CD8+ T cell responses by indoleamine 2,3-dioxygenase.</a> PLoS One. 9 (2), e90439 (2014).</li><li>Maleki Vareki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+regulation+of+simultaneous+antitumor+and+alloreactive+CD8(+)+T-cell+responses+in+the+same+host+by+rapamycin.">Differential regulation of simultaneous antitumor and alloreactive CD8(+) T-cell responses in the same host by rapamycin.</a> American Journal of Transplantation. 12 (1), 233-239 (2012).</li><li>Irvine, K., Bennink, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+influencing+immunodominance+hierarchies+in+TCD8++-mediated+antiviral+responses.">Factors influencing immunodominance hierarchies in TCD8+ -mediated antiviral responses.</a> Expert Review of Clinical Immunology. 2 (1), 135-147 (2006).</li><li>Grossmann, M. E., Davila, T., Celis, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Avoiding+tolerance+against+prostatic+antigens+with+subdominant+peptide+epitopes.">Avoiding tolerance against prostatic antigens with subdominant peptide epitopes.</a> Journal of Immunotherapy. 24 (3), 237-241 (2001).</li><li>Schreiber, H., Wu, T. H., Nachman, J., Kast, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominance+and+tumor+escape.">Immunodominance and tumor escape.</a> Seminars in Cancer Biology. 12 (1), 25-31 (2002).</li><li>Mylin, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitation+of+CD8(+)+T-lymphocyte+responses+to+multiple+epitopes+from+simian+virus+40+(SV40)+large+T+antigen+in+C57BL/6+mice+immunized+with+SV40,+SV40+T-antigen-transformed+cells,+or+vaccinia+virus+recombinants+expressing+full-length+T+antigen+or+epitope+minigenes.">Quantitation of CD8(+) T-lymphocyte responses to multiple epitopes from simian virus 40 (SV40) large T antigen in C57BL/6 mice immunized with SV40, SV40 T-antigen-transformed cells, or vaccinia virus recombinants expressing full-length T antigen or epitope minigenes.</a> Journal of Virology. 74 (15), 6922-6934 (2000).</li><li>Fu, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+endoplasmic+reticulum-targeting+signal+sequence+enhances+the+immunogenicity+of+an+immunorecessive+simian+virus+40+large+T+antigen+cytotoxic+T-lymphocyte+epitope.">An endoplasmic reticulum-targeting signal sequence enhances the immunogenicity of an immunorecessive simian virus 40 large T antigen cytotoxic T-lymphocyte epitope.</a> Journal of Virology. 72 (2), 1469-1481 (1998).</li><li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-priming+of+CD8++T+cells+by+viral+and+tumor+antigens+is+a+robust+phenomenon.">Cross-priming of CD8+ T cells by viral and tumor antigens is a robust phenomenon.</a> European Journal of Immunology. 34 (1), 194-199 (2004).</li><li>Memarnejadian, A., Meilleur, C. E., Mazzuca, D. M., Welch, I. D., Haeryfar, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Alloantibody-Mediated+Cytotoxicity+In+Vivo.">Quantification of Alloantibody-Mediated Cytotoxicity In Vivo.</a> Transplantation. 100 (5), 1041-1051 (2016).</li><li>Aichele, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide+antigen+treatment+of+naive+and+virus-immune+mice:+antigen-specific+tolerance+versus+immunopathology.">Peptide antigen treatment of naive and virus-immune mice: antigen-specific tolerance versus immunopathology.</a> Immunity. 6 (5), 519-529 (1997).</li><li>Oehen, S., Brduscha-Riem, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+naive+CTL+to+effector+and+memory+CTL:+correlation+of+effector+function+with+phenotype+and+cell+division.">Differentiation of naive CTL to effector and memory CTL: correlation of effector function with phenotype and cell division.</a> The Journal of Immunology. 161 (10), 5338-5346 (1998).</li><li>Coles, R. M., Mueller, S. N., Heath, W. R., Carbone, F. R., Brooks, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progression+of+armed+CTL+from+draining+lymph+node+to+spleen+shortly+after+localized+infection+with+herpes+simplex+virus+1.">Progression of armed CTL from draining lymph node to spleen shortly after localized infection with herpes simplex virus 1.</a> The Journal of Immunology. 168 (2), 834-838 (2002).</li><li>Barber, D. L., Wherry, E. J., Ahmed, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+edge:+rapid+in+vivo+killing+by+memory+CD8+T+cells.">Cutting edge: rapid in vivo killing by memory CD8 T cells.</a> The Journal of Immunology. 171 (1), 27-31 (2003).</li><li>Meilleur, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+superantigens+expand+and+activate,+rather+than+delete+or+incapacitate,+preexisting+antigen-specific+memory+CD8++T+cells.">Bacterial superantigens expand and activate, rather than delete or incapacitate, preexisting antigen-specific memory CD8+ T cells.</a> The Journal of Infectious Diseases. , (2018).</li><li>Goldszmid, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+charged+with+apoptotic+tumor+cells+induce+long-lived+protective+CD4++and+CD8++T+cell+immunity+against+B16+melanoma.">Dendritic cells charged with apoptotic tumor cells induce long-lived protective CD4+ and CD8+ T cell immunity against B16 melanoma.</a> The Journal of Immunology. 171 (11), 5940-5947 (2003).</li><li>Oberg, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+or+mismatch+of+MHC+class+I+is+sufficient+to+trigger+NK+cell-mediated+rejection+of+resting+lymphocytes+in+vivo+-+role+of+KARAP/DAP12-dependent+and+-independent+pathways.">Loss or mismatch of MHC class I is sufficient to trigger NK cell-mediated rejection of resting lymphocytes in vivo - role of KARAP/DAP12-dependent and -independent pathways.</a> European Journal of Immunology. 34 (6), 1646-1653 (2004).</li><li>Wingender, G., Krebs, P., Beutler, B., Kronenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen-specific+cytotoxicity+by+invariant+NKT+cells+in+vivo+is+CD95/CD178-dependent+and+is+correlated+with+antigenic+potency.">Antigen-specific cytotoxicity by invariant NKT cells in vivo is CD95/CD178-dependent and is correlated with antigenic potency.</a> The Journal of Immunology. 185 (5), 2721-2729 (2010).</li><li>Brinster, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+harboring+SV40+T-antigen+genes+develop+characteristic+brain+tumors.">Transgenic mice harboring SV40 T-antigen genes develop characteristic brain tumors.</a> Cell. 37 (2), 367-379 (1984).</li><li>Tatum, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T+cells+targeting+a+single+immunodominant+epitope+are+sufficient+for+elimination+of+established+SV40+T+antigen-induced+brain+tumors.">CD8+ T cells targeting a single immunodominant epitope are sufficient for elimination of established SV40 T antigen-induced brain tumors.</a> The Journal of Immunology. 181 (6), 4406-4417 (2008).</li><li>Schell, T. D., Tevethia, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+advanced+choroid+plexus+tumors+in+SV40+T+antigen+transgenic+mice+following+priming+of+donor+CD8(+)+T+lymphocytes+by+the+endogenous+tumor+antigen.">Control of advanced choroid plexus tumors in SV40 T antigen transgenic mice following priming of donor CD8(+) T lymphocytes by the endogenous tumor antigen.</a> The Journal of Immunology. 167 (12), 6947-6956 (2001).</li><li>Greenberg, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostate+cancer+in+a+transgenic+mouse.">Prostate cancer in a transgenic mouse.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92 (8), 3439-3443 (1995).</li></ol>

Cfse-baserede in vivo cytotoksicitetsassays tilbyder flere fordele i forhold til traditionelle drab analyser såsom radioaktivt chrom (51CR) frigivelse og kolorimetriske lactat dehydrogenase (LDH) frigivelse analyser. For det første tillader de overvågning af CTL funktion inden for et arkitektonisk intakt sekundært lymfoid organ.
For det andet afspejler den specifikke aflivning af målcellerne i in vivo-cytotoksicitetsassays det absolutte antal AG-specifikke TCD8, som ...

Konventionelle CD8+ t- celler (tCD8) spiller vigtige dele i anticancer immun overvågning. De fungerer primært i kapacitet af cytolytiske T-lymfocytter (CTL'er), der genkender tumor-specifikke eller-associerede peptid antigener (AGS) vises inden for den lukkede kløft af store histocompatibility Complex (MHC) klasse I molekyler. Fuldt bevæbnede CTL'er udnytter deres cytotoksiske arsenal til at ødelægge maligne celler. Anticancer TCD8 kan påvises i cirkulation eller endda inde primær og metastatisk masser af mange kræftpatienter og tumor-bærende dyr. Men de er ofte anerge eller udmattede og undlader at udrydde kræft. Derfor, mange immunotherapeutiske modaliteter er designet til at øge anticancer TCD8 frekvenser og til at genoprette og øge deres funktioner.
Tumor proteiner havnen mange peptider, hvoraf nogle kan være immunogen og potentielt immunoprotective. Men, kvantificerbare TCD8 svar er fremkaldt med varierende størrelser mod kun få peptider. Dette skaber et "immun dominans hierarki" blandt TCD8 kloner1. Derfor, immun dominant (ID) TCD8 besætte fremtrædende hierarkiske rækker, som er almindeligt bedømt af deres overflod. I modsætning, TCD8 celler, hvis t celle receptor (TCR) er specifik for subdominant (SD) epitoper forekomme i lavere frekvenser. Vi og andre har identificeret nogle af de faktorer, der dikterer eller form immun dominans i TCD8 svar. Disse omfatter blandt andet den måde, AG præsentation til naive TCD8 (dvs. direkte præsentation, Cross-præsentation, cross-dressing)2,3,4, typen af AG-præsentation celler (APCS) deltagelse i TCD8 aktivering5, overflod og stabilitet af protein AGS6,7 og virkningsgraden og kinetikken af deres nedbrydning af proteasomer7,8, relativ selektivitet af transporter forbundet med AG forarbejdning (TAP) for peptider9, affinitet af befriet peptider for MHC I molekyler9,10, tilstedeværelsen, prækursorer frekvenser og TCR mangfoldighed af kognate tCD8 i t-cellepuljer 11,12,13, kryds konkurrence mellem t-celler for adgang til APCS14,15, og den broder drab kapacitet af tCD8 kloner16. Desuden underkastes TCD8 immunodominans immunforsvar, som medieres af flere suppressor celletyper såsom naturligt forekommende regulatoriske t (ntreg) celler17, celleoverfladen Co-hæmmende molekyle programmeret Death-1 (PD-1)16, og visse intracellulære enzymer såsom indoleamin 2, 3-dioxygenase (Ido)18 og det mammale mål for Rapamycin (MTOR)19. Det er dog vigtigt at bemærke, at ovennævnte faktorer ikke altid fuldt ud tager højde for immun dominans.
Bortset fra den grundlæggende biologi TCD8 immun dominans, undersøgelsen af dette spændende fænomen har vigtige konsekvenser i kræft immunologi og immunterapi. For det første giver en ID-status ikke nødvendigvis en given TCD8 klon evnen til at forhindre tumor initiering eller progression20. Hvorvidt og hvordan ID og SD TCD8 bidrage til antitumor immunitet kan afhænge af typen og omfanget af malignitet og det anvendte forsøgssystem. For det andet, det menes, at id TCD8 kloner kan være "for synlige" til immunsystemet og dermed mere tilbøjelige til centrale og/eller perifere tolerance mekanismer16,21. Tredje, heterogene tumorer kan indeholde neoplastiske celler, der undgår påvisning af mange, hvis ikke de fleste, CTL'er ved at vise kun et snævert spektrum af peptid: MHC komplekser. Under disse omstændigheder, TCD8 svar af utilstrækkelig bredde har sandsynligvis råd til sådanne tumorceller en overlevelse fordel, hvilket forstærker deres udvækst22. Det er af ovennævnte grunde, at mange ser immun dominans som en forhindring for en vellykket TCD8-baseret vaccination og terapier mod kræft.
Inokulation af C57BL/6 mus med Simian virus 40 (SV40)-transformerede celler, der udtrykker stor tumor AG (T AG) giver et stærkt præklinisk system til at studere TCD8 immun dominans. Denne model giver flere fordele. Første, peptid epitoper af denne klinisk relevante oncoprotein er godt karakteriseret i denne mus stamme23 (tabel 1). For det andet, T AG epitopes, som kaldes sites I, II/III, IV, og V, udløser TCD8 svar, der er konsekvent arrangeret i følgende hierarkisk rækkefølge: site IV > > websted i ≥ site II/iii > &Gt; sted V. i overensstemmelse hermed, site IV-specifikke TCD8 Monter den mest robuste respons på T AG. I modsætning hertil er sites i og II/III subdominerende, og site V-specifikke TCD8 er mindst rigelige og normalt kun detekterbare i mangel af reaktionsevne til andre epitoper23,24. For det tredje, den T AG+ tumor cellelinje anvendes i protokollen beskrevet heri, nemlig C57SV fibrosarkom celler, og dem, der anvendes i vores tidligere undersøgelser16,17,18,19 ,25,26, omdannes med subgenomic SV40 fragmenter25. Derfor, de er i stand til at samle og frigive SV40 virions, der potentielt kunne inficere Host Apc'er. Desuden, C57SV celler er blottet for klassiske costimulatory molekyler såsom CD80 (B7-1), CD86 (B7-2), og CD137 ligand (4-1BBL)16. Ovenstående attributter gør disse linjer ideelle til undersøgelse af in vivo TCD8 aktivering via Cross-priming. Cross-priming er en stor vej i inducere TCD8 reaktioner, især dem, der er lanceret mod tumorceller af ikke-hæmatopoietisk oprindelse, der undlader at direkte Prime naive T-celler25.
Antitumor TCD8 frekvenser og/eller funktioner kan overvåges af MHC i tetramer farvning, intracellulær farvning for effektor cytokiner (f. eks. interferon [IFN]-γ) eller lytiske molekyler (f. eks. perforin), enzym-linked immunospot (elispot) analyser og ex vivo-cytotoksicitetassays. Siden starten i 1990 ' erne27,28, carboxyfluorescein succinimidyl ester (cfse)-baseret in vivo drab analyser har aktiveret evaluering af cytotoksiske reaktioner medieret af antivirale CTLS29,30 , 31, antitumor CTLS16,32, naturlige dræber (NK) celler33, Glycolipid-reaktiv invariant naturlige Killer T (iNKT) celler34, og allerede eksisterende og de Novo donor-specifikke alloantistoffer26. Derfor kan deres applikationer være af interesse for en bred læserskare, herunder men ikke begrænset til efterforskere, der arbejder inden for tumor immunologi og immunterapi, anti-patogen immunitet, og forebyggende og terapeutisk vaccine design.
For at vurdere cellemedieret cytotoksicitet i typiske scenarier, to populationer af naive splenocytter, der viser enten en irrelevant AG eller en kognate AG (s) er mærket med to forskellige doser af cfse, blandet i lige antal og injiceres i naive (kontrol) eller Killer celle-harboring mus. Tilstedeværelsen/fraværet af hver målpopulation undersøges derefter ved flow cytometri.
Vi har optimeret og beskæftiget in vivo drab analyser i vores undersøgelser om immun dominans i både antiviral og antitumor TCD8 svar12,16,17. Her giver vi en detaljeret protokol for den samtidige vurdering af ID og SD TCD8 svar til T AG epitopes, som let kan vedtages for lignende undersøgelser i andre eksperimentelle systemer. Vi giver også repræsentative resultater viser, at nTreg cellenedbrydning og PD-1 blokade kan selektivt forbedre ID TCD8-og SD TCD8-induceret cytotoksicitet, hhv. I slutningen, vil vi diskutere flere fordele ved in vivo drab analyser samt nogle af deres iboende begrænsninger.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:872px;" width="871">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">0.25% Trypsin-EDTA (1X)</td>
			<td style="width:164px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:163px;">25200-056</td>
			<td style="width:211px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ACK Lysing Buffer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:163px;">A1049201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-mouse CD25 (clone PC-61.5.3)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BE0012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-mouse PD-1 (clone RMP1-14)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BE0146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CFSE</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>C34554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM (1X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11965-092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Wisent Bioproducts</td>
			<td>080-150</td>
			<td>Heat-inactivate prior to use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GlutaMAX (100X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HEPES (1M)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15630080</td>
			<td>10 mM final concentration</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MEM Non-Essential Amino Acids Solution (100X)&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11140-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P0781</td>
			<td>Stock is 100X</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG1 (clone KLH/G1-2-2)</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>0116-01</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG1 (clone HRPN)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BE0088</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG1 (clone TNP6A7)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BP0290</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG2a (clone 2A3)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BP0089</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI 1640 (1X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11875-093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Pyruvate (100 mM)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11360-070</td>
			<td>1 mM final concentration</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tailoring in vivo cytotoxicity assays to study immunodominance in tumor-specific cd8+ t cell responses

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)-baseret in vivo cytotoksicitetsassays muliggør følsom og nøjagtig kvantitation af CD8 + cytolytisk T- lymfocyt (CTL) svar fremkaldt mod tumor-og patogen afledte peptider. De tilbyder flere fordele i forhold til traditionelle drab assays. For det første tillader de overvågning af CTL-medieret cytotoksicitet inden for arkitektonisk intakte sekundære lymfoide organer, typisk i milten. For det andet giver de mulighed for Mekanistiske undersøgelser under priming, effektor og tilbagekaldelse faser af CTL svar. For det tredje, de giver nyttige platforme for vaccine/Drug effektivitet test i en virkelig in vivo indstilling. Her giver vi en optimeret protokol til undersøgelse af samtidige CTL svar mod mere end én peptid epitop af en model tumor antigen (AG), nemlig Simian virus 40 (SV40)-kodet store T AG (t AG). Ligesom de fleste andre klinisk relevante tumor proteiner, er T AG havne mange potentielt immunogeniske peptider. Men, kun fire sådanne peptider inducerer detekterbare CTL svar i C57BL/6 mus. Disse svar er konsekvent arrangeret i en hierarkisk rækkefølge baseret på deres størrelsesorden, som danner grundlag for TCD8 "immunodominans" i dette kraftfulde system. Derfor er hovedparten af t AG-specifikke tCD8 respons fokuseret mod en enkelt immun dominant epitop, mens de andre tre epitoper er anerkendt og reageret på kun svagt. Immun dominans kompromitterer bredden af antitumor TCD8 svar og er, som sådan, anses af mange som en hindring for en vellykket vaccination mod kræft. Derfor er det vigtigt at forstå de cellulære og molekylære faktorer og mekanismer, der dikterer eller former TCD8 immunodominans. Den protokol, vi beskriver her, er skræddersyet til undersøgelsen af dette fænomen i T AG immuniserings modellen, men kan let modificeres og udvides til lignende undersøgelser i andre tumormodeller. Vi giver eksempler på, hvordan virkningen af eksperimentelle immunotherapeutiske interventioner kan måles ved hjælp af in vivo cytotoksicitetsassays.

Formålet med forsøget, hvis resultater er afbildet i figur 1 , var at fastslå, om nTreg-cellernes tilstedeværelse og funktioner udgør eller ændrer immun dominans hierarkiet for t AG-specifikke tCD8. C57BL/6-musene blev injiceret med PBS eller med 0,5 mg anti-CD25 mAb (klon-PC-61.5.3 [PC61]) fire dage før de fik 2 x 107 C57SV tumorceller IP I separate eksperimenter, en rotte IgG1 isotype kontrol blev anvendt i stedet for PBS. Vellykket nTreg cellenedbrydning af PC...

Watch this Scientific Journal Video about Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses at JoVE.com

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Skræddersy in vivo cytotoksiske assays til at studere immun dominans i tumor specifikke CD8+ T- celle respons

Vi beskriver her en flow cytometri-baseret in vivo drab assay, der muliggør undersøgelse af immun dominans i cytotoksiske T-lymfocyt (CTL) svar til en model tumor antigen. Vi giver eksempler på, hvordan denne elegante analyse kan anvendes til Mekanistiske undersøgelser og til Drug effektivitet test.

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)-based in vivo cytotoxicity assays enable sensitive and accurate quantitation of CD8+ cytolytic T lymphocyte ...

Denne analyse kan anvendes til at kvantificere T-celle-medieret cytotoksicitet mod to forskellige peptid epitoper af tumor antigener samtidigt. In vivo-analysens in vivo-karakter gør det muligt at måle T-cellernes cytotoksiske funktion inden for det sekundære lymfoide organs intakte arkitektur. Desuden er den observerede drab en nøjagtig afspejling af det absolutte antal T-celler, og ikke kun deres frekvenser, som kan være vildledende.Denne analyse gør det muligt at undersøge cytotoksiske T-celle reaktioner på immunodominant og sub-dominerende tumor antigener. Det giver derfor værdifulde oplysninger, når du designer en vaccine, samt immunterapeutiske protokoller for kræft. Vores protokol er skræddersyet til at studere CD8 T-celleresponser.Men, Det kan ændres til at måle cytotoksicitet fremkaldt af andre killer celletyper, såsom NK celler og medfødte-lignende T lymfocytter. Denne analyse kræver erfaring i aseptisk teknik, mus væv håndtering, mål celle prep, samt ekspertise i hale vene injektioner. Man er nødt til at erhverve denne færdighed sæt, før du forsøger in vivo drab assay.Når T-antigen-positive klæbende tumor cellelinje er blevet fuldt sammenflydende eller lidt over-sammenløbet, forsigtigt skylle monolayer med sterile, varme PBS, og løsrive tumorceller med 0,25% trypsin EDTA i en biosikkerhed kabinet. Bank på siderne af kulturkolben flere gange for at frigøre de resterende klæbende celler, og stop reaktionen efter ca. fem minutter med tilsætning af fem milliliter DMEM-medium. Pipette celleopløsningen et par gange, før cellesuspensionen filtreres gennem en 70-mikrometer-porecelles si i et 50-milliliter konisk rør.Cellerne opsamls ved centrifugering, og pelletsuspendres igen i 10 milliliter steril, kold PBS til den første af tre vaske under de samme betingelser. Efter den tredje vask, resuspenderede cellerne på en fire gange 10 til de syv celler pr milliliter steril PBS koncentration, og injicere 500 mikroliter af T-antigen-positive tumor celle suspension intraperitoneally i hver seks-til-12-ugergamle C57 Black 6 mus modtager. For mål milt forberedelse, placere aflivede donor mus i den udsatte position, og spray dyret med 70% ethanol.Brug sterile kraftbecer og saks, løft huden og lav en lille ventral midterlinje snit. Skær huden i en cross-lignende måde at udsætte bughinden, og bruge de kraftbeton til at trække op bughinden i et telt-lignende måde, uden at fange nogen af de indre organer. Skær bughinden op for at udsætte bughulen, og overfør forsigtigt milten til en 15-milliliter Dounce vævssliber indeholdende fem milliliter steril PBS.Brug stemplet til at trykke manuelt, indtil miltvævet spredes til en rød homogen cellesuspension, og overfør homogenatet til et 15-milliliterrør. Suspensionen opsamres ved centrifugering, og pelletsussuseres i fire milliliter ammoniumchlorid kaliumlyinbuffer for at fjerne erythrocytterne. Efter fire minutter stoppes processen med otte milliliter komplet medium, og cellesuspensionen filtreres gennem en 70-mikrometer-porecellestud i et nyt 50-milliliterrør.Adskå de hvide blodlegemer fra de røde blodlegemer vragrester ved centrifugering, og resuspend pellet i 12 milliliter komplet medium. Derefter opdeles miltaffyringen i tre lige fire milliliter aliquots. For peptid kodning af målet splenocytter, puls en milnocyte aliquot med en mikromolar af irrelevant peptid, en aliquot med en mikromolar af Site I peptid, og en aliquot med en mikromolar af Site IV peptid i en time ved 37 grader Celsius og 5% kuldioxid.Ved inkubationens afslutning fjernes det overskydende peptid ved centrifugering, og peptid-pulserende miltytter vaskes to gange i 12 milliliter steril, kold PBS pr. vask pr. rør. Efter den anden vask opspjænkes cellerne igen i fire milliliter frisk, steril PBS pr. rør. Tilføj 025, 0,25 og to-mikromolar CFSE i den irrelevante, Site I, og Site IV peptid-pulserende miltust suspensioner hhv.Placer rørene ved 37 grader Celsius i 15 minutter med manuel inversion en gang hvert femte minut. Ved inkubationens afslutning tilsættes der tre milliliter varmeinaktiveret føtalt kvægserum til hvert rør for at standse CFSE-reaktionen og bringe det endelige volumen i hvert rør op på 15 milliliter med PBS. Derefter opsamler de farvemærkede celler ved centrifugering i to skiver i 12 milliliter frisk, steril PBS pr. vask.For at bekræfte en passende CFSE mærkning af målet miltytter, resuspend pellet i tre milliliter PBS og blandes med blid vortexing. Overfør 10 mikroliter fra hver CFSE-mærket celle suspension i en individuel fem-milliliter rund bund polystyren fluorescens-aktiveret cellesortering, eller FACS rør, der indeholder PBS, og læg røret på et flow cytometer udstyret med en 488-nanometer laser. I flow cytometer software, oprette en lymfocyt gate baseret på den forreste scatter og side scatter egenskaber af cellerne, før der erhverves 5, 000 begivenheder, der falder inden for lymfocyt porten i Fluorescens 1 kanal.Inden for den forælder CFSE-positive population, trække yderligere histogram porte til at identificere CFSE-lav, CFSE-mellemliggende, og CFSE-høj delpopulationer. Bekræft derefter et lige- eller næsten ligeværdigt hændelsesnummer inden for de tre porte for de to andre rør af mærkede celler. Til injektion af målcellerne skal du først forsigtigt vortexe kilderørene og samle de tre CFSE-mærkede cellesuspensioner i et nyt rør i lige store forhold.Topn indholdet af røret med steril PBS, og opsaml cellerne ved centrifugering til optælling. Juster derefter volumen til en gange 10 til de syv blandede målceller pr. 200 mikroliter PBS pr. recipientkoncentration, og indsprøjt 200 mikrolitervolumener af cellesuspensionen i halevene for hver modtager C57 Black 6 mus. To eller fire timer efter injektionen fjernes og behandles milten for hvert recipientdyr som påvist, og de isolerede hvide blodlegemer opsplitning i tre milliliter PBS pr. milt.Overfør ca. en gang 10 til de syv celler fra hver behandlet milt i et rent FACS-rør, og kør straks cellerne på flowcytometeret som vist at gate de CFSE-lave, mellemliggende og høje målcellepopulationer. Derefter erhverve i alt 2, 000 CFSE-lav begivenheder i Fluorescens 1 kanal, og beregne de specifikke lysis af hver cognate målcellepopulation i henhold til den formel, der er beskrevet i teksten. I dette repræsentative eksperiment blev succesen med udtømningen af naturligt forekommende regulerende T-celler i mus injiceret med anti-CD25 monoklonale antistof bekræftet ved flowcytometri.Som forventet kunne der påvises næsten lige toppe svarende til kontrol- og cognatmålcellerne i naive mus. I modsætning hertil var Site-IV-displayet målceller næsten helt fraværende i T-antigen-primede mus, uanset deres tidligere behandling med anti-CD25 monoklonale antistof eller PBS. Interessant, naturligt forekommende T reg celle udtynding af anti-CD25 monoklonale antistof forstærket i vivo cytotoksiske T-lymfocyt-medieret lysis af Site-I-pulserende målceller.I denne anden repræsentative undersøgelse, programmeret død 1 blokade forbedret sub-dominerende CD8-positive T-celle sites en og to-skråstreg-tre-specifikke reaktioner, tyder på, at forstyrre programmeret død 1/programmeret død ligand 1 interaktioner kan fremkalde epitop-spredning i anti-cancer CD8-positive T-celle reaktioner. Det er vigtigt, når du mærker dine donorceller med CFSE, sørg for at dine koncentrationer er præcise. Ellers kan dette resultere i overlappende histogram toppe, hvilket gør dine nødvendige beregninger og data fortolkning vanskelig, hvis ikke umuligt.Det vil være vigtigt at optimere in vivo cytotoksicitet assays at kvantificere effektor funktioner fremkaldt af forskellige killer celletyper, der genkender peptid og ikke-peptid antigener i samme vært.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Competitive Homing Assays to Study Gut-tropic T Cell Migration

In order to exert their function lymphocytes need to leave the blood and migrate into different tissues in the body. Lymphocyte adhesion to endothelial ...

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Ændring af primære humane T-celler

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

Quantitative High-throughput Single-cell Cytotoxicity Assay For T Cells

Kvantitativ Højkapacitetsforskning encellede cytotoksicitetsassay for T-celler

Cancer immunotherapy can harness the specificity of  immune response to target and eliminate tumors. Adoptive cell therapy (ACT)  based on the adoptive ...

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

Anvendelse af fluorescerende Skud Arrays for Vurdering af T-celle respons<em&gt; In vivo</em

The ability to monitor T cell responses in vivo is important for the development of our understanding of the immune response and the design of ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Transplantation af Tail Hud til Study Allogen CD4 T-celle respons i mus

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Whole-animal Imaging and Flow Cytometric Techniques for Analysis of Antigen-specific CD8+ T Cell Responses after Nanoparticle Vaccination

Whole-dyr Imaging og Flowcytometrisk Teknikker til analyse af antigen-specifikke CD8 + T-celle responser efter Nanopartikel Vaccination

Traditional vaccine adjuvants, such as alum, elicit suboptimal CD8+ T cell responses. To address this major challenge in vaccine development, various ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolering af Salmonella typhimurium-indeholdende Phagosomes fra makrofager

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

En suge Blister protokol at studere Human T-celle hjemkalde svar In Vivo

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Karakterisering af Thymus-afhængige og Thymus-uafhængig Immunoglobulin Isotype svar i mus ved hjælp af enzym-forbundet Immunosorbent Assay

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...