Name: tailoring in vivo cytotoxicity assays to study immunodominance in tumor-specific cd8+ t cell responses
Uploaded: 2019-05-06T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses at JoVE.com

Dit werk werd gesteund door Canadese instituten van het onderzoek van de gezondheid (CIHR) verleent MOP-130465 en PJT-156295 aan SMMH. JC wordt gedeeltelijk gesteund door een koningin Elizabeth II gediplomeerde beurs in wetenschap en technologie van het ministerie van Ontario van opleiding, hogescholen en universiteiten. CEM was een ontvanger van een Alexander Graham Bell Canada Graduate Scholarship (doctoraal) van natuurwetenschappen en Engineering Research Council van Canada (NSERC).

De hier beschreven experimenten volgen de door institutionele entiteiten goedgekeurde protocollen voor het gebruik van dieren en houden zich aan de vastgestelde nationale richtlijnen.
1. inenting van C57BL/6 muizen met T AG-het uitdrukken van tumor cellen
<ol><li>Kweek de SV40-getransformeerde fibrosarcoom Cell line C57SV (of een soortgelijke T AG+ aanhanger cel lijn) in Dulbecco gemodificeerde Eagle 's medium (DMEM) met 4,5 g/l D-glucose en l-glutamine (1x) en aangevuld met 1 mm ...

<ol>
	<li>Yewdell, J. W., Bennink, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominance+in+major+histocompatibility+complex+class+I-restricted+T+lymphocyte+responses.">Immunodominance in major histocompatibility complex class I-restricted T lymphocyte responses.</a> Annual Review of Immunology. 17, 51-88 (1999).</li><li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+in+the+immunodominance+hierarchy+in+secondary+CD8++T+cell+responses+to+influenza+A+virus:+roles+for+cross-presentation+and+lysis-independent+immunodomination.">Reversal in the immunodominance hierarchy in secondary CD8+ T cell responses to influenza A virus: roles for cross-presentation and lysis-independent immunodomination.</a> The Journal of Immunology. 173 (8), 5021-5027 (2004).</li><li>Otahal, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inefficient+cross-presentation+limits+the+CD8++T+cell+response+to+a+subdominant+tumor+antigen+epitope.">Inefficient cross-presentation limits the CD8+ T cell response to a subdominant tumor antigen epitope.</a> The Journal of Immunology. 175 (2), 700-712 (2005).</li><li>Lauron, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-priming+induces+immunodomination+in+the+presence+of+viral+MHC+class+I+inhibition.">Cross-priming induces immunodomination in the presence of viral MHC class I inhibition.</a> PLoS Pathogens. 14 (2), e1006883 (2018).</li><li>Crowe, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+antigen+presentation+regulates+the+changing+patterns+of+CD8++T+cell+immunodominance+in+primary+and+secondary+influenza+virus+infections.">Differential antigen presentation regulates the changing patterns of CD8+ T cell immunodominance in primary and secondary influenza virus infections.</a> The Journal of Experimental Medicine. 198 (3), 399-410 (2003).</li><li>Probst, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominance+of+an+antiviral+cytotoxic+T+cell+response+is+shaped+by+the+kinetics+of+viral+protein+expression.">Immunodominance of an antiviral cytotoxic T cell response is shaped by the kinetics of viral protein expression.</a> The Journal of Immunology. 171 (10), 5415-5422 (2003).</li><li>Gileadi, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+an+immunodominant+CTL+epitope+is+affected+by+proteasome+subunit+composition+and+stability+of+the+antigenic+protein.">Generation of an immunodominant CTL epitope is affected by proteasome subunit composition and stability of the antigenic protein.</a> The Journal of Immunology. 163 (11), 6045-6052 (1999).</li><li>Zanker, D., Waithman, J., Yewdell, J. W., Chen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mixed+proteasomes+function+to+increase+viral+peptide+diversity+and+broaden+antiviral+CD8++T+cell+responses.">Mixed proteasomes function to increase viral peptide diversity and broaden antiviral CD8+ T cell responses.</a> The Journal of Immunology. 191 (1), 52-59 (2013).</li><li>Deng, Y., Yewdell, J. W., Eisenlohr, L. C., Bennink, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MHC+affinity,+peptide+liberation,+T+cell+repertoire,+and+immunodominance+all+contribute+to+the+paucity+of+MHC+class+I-restricted+peptides+recognized+by+antiviral+CTL.">MHC affinity, peptide liberation, T cell repertoire, and immunodominance all contribute to the paucity of MHC class I-restricted peptides recognized by antiviral CTL.</a> The Journal of Immunology. 158 (4), 1507-1515 (1997).</li><li>Chen, W., Khilko, S., Fecondo, J., Margulies, D. H., McCluskey, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determinant+selection+of+major+histocompatibility+complex+class+I-restricted+antigenic+peptides+is+explained+by+class+I-peptide+affinity+and+is+strongly+influenced+by+nondominant+anchor+residues.">Determinant selection of major histocompatibility complex class I-restricted antigenic peptides is explained by class I-peptide affinity and is strongly influenced by nondominant anchor residues.</a> The Journal of Experimental Medicine. 180 (4), 1471-1483 (1994).</li><li>Kotturi, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naive+precursor+frequencies+and+MHC+binding+rather+than+the+degree+of+epitope+diversity+shape+CD8++T+cell+immunodominance.">Naive precursor frequencies and MHC binding rather than the degree of epitope diversity shape CD8+ T cell immunodominance.</a> The Journal of Immunology. 181 (3), 2124-2133 (2008).</li><li>Haeryfar, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Terminal+deoxynucleotidyl+transferase+establishes+and+broadens+antiviral+CD8++T+cell+immunodominance+hierarchies.">Terminal deoxynucleotidyl transferase establishes and broadens antiviral CD8+ T cell immunodominance hierarchies.</a> The Journal of Immunology. 181 (1), 649-659 (2008).</li><li>Leon-Ponte, M., Kasprzyski, T., Mannik, L. A., Haeryfar, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+immunodominance+hierarchies+of+influenza+A+virus-specific+H-2(b)-restricted+CD8++T+cells+in+the+absence+of+terminal+deoxynucleotidyl+transferase.">Altered immunodominance hierarchies of influenza A virus-specific H-2(b)-restricted CD8+ T cells in the absence of terminal deoxynucleotidyl transferase.</a> Immunological Investigations. 37 (7), 714-725 (2008).</li><li>Kedl, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cells+compete+for+access+to+antigen-bearing+antigen-presenting+cells.">T cells compete for access to antigen-bearing antigen-presenting cells.</a> The Journal of Experimental Medicine. 192 (8), 1105-1113 (2000).</li><li>Kastenmuller, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-competition+of+CD8++T+cells+shapes+the+immunodominance+hierarchy+during+boost+vaccination.">Cross-competition of CD8+ T cells shapes the immunodominance hierarchy during boost vaccination.</a> The Journal of Experimental Medicine. 204 (9), 2187-2198 (2007).</li><li>Memarnejadian, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-1+Blockade+Promotes+Epitope+Spreading+in+Anticancer+CD8(+)+T+Cell+Responses+by+Preventing+Fratricidal+Death+of+Subdominant+Clones+To+Relieve+Immunodomination.">PD-1 Blockade Promotes Epitope Spreading in Anticancer CD8(+) T Cell Responses by Preventing Fratricidal Death of Subdominant Clones To Relieve Immunodomination.</a> The Journal of Immunology. 199 (9), 3348-3359 (2017).</li><li>Haeryfar, S. M., DiPaolo, R. J., Tscharke, D. C., Bennink, J. R., Yewdell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells+suppress+CD8++T+cell+responses+induced+by+direct+priming+and+cross-priming+and+moderate+immunodominance+disparities.">Regulatory T cells suppress CD8+ T cell responses induced by direct priming and cross-priming and moderate immunodominance disparities.</a> The Journal of Immunology. 174 (6), 3344-3351 (2005).</li><li>Rytelewski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+immunodominant+antitumor+and+antiviral+CD8++T+cell+responses+by+indoleamine+2,3-dioxygenase.">Suppression of immunodominant antitumor and antiviral CD8+ T cell responses by indoleamine 2,3-dioxygenase.</a> PLoS One. 9 (2), e90439 (2014).</li><li>Maleki Vareki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+regulation+of+simultaneous+antitumor+and+alloreactive+CD8(+)+T-cell+responses+in+the+same+host+by+rapamycin.">Differential regulation of simultaneous antitumor and alloreactive CD8(+) T-cell responses in the same host by rapamycin.</a> American Journal of Transplantation. 12 (1), 233-239 (2012).</li><li>Irvine, K., Bennink, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+influencing+immunodominance+hierarchies+in+TCD8++-mediated+antiviral+responses.">Factors influencing immunodominance hierarchies in TCD8+ -mediated antiviral responses.</a> Expert Review of Clinical Immunology. 2 (1), 135-147 (2006).</li><li>Grossmann, M. E., Davila, T., Celis, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Avoiding+tolerance+against+prostatic+antigens+with+subdominant+peptide+epitopes.">Avoiding tolerance against prostatic antigens with subdominant peptide epitopes.</a> Journal of Immunotherapy. 24 (3), 237-241 (2001).</li><li>Schreiber, H., Wu, T. H., Nachman, J., Kast, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominance+and+tumor+escape.">Immunodominance and tumor escape.</a> Seminars in Cancer Biology. 12 (1), 25-31 (2002).</li><li>Mylin, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitation+of+CD8(+)+T-lymphocyte+responses+to+multiple+epitopes+from+simian+virus+40+(SV40)+large+T+antigen+in+C57BL/6+mice+immunized+with+SV40,+SV40+T-antigen-transformed+cells,+or+vaccinia+virus+recombinants+expressing+full-length+T+antigen+or+epitope+minigenes.">Quantitation of CD8(+) T-lymphocyte responses to multiple epitopes from simian virus 40 (SV40) large T antigen in C57BL/6 mice immunized with SV40, SV40 T-antigen-transformed cells, or vaccinia virus recombinants expressing full-length T antigen or epitope minigenes.</a> Journal of Virology. 74 (15), 6922-6934 (2000).</li><li>Fu, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+endoplasmic+reticulum-targeting+signal+sequence+enhances+the+immunogenicity+of+an+immunorecessive+simian+virus+40+large+T+antigen+cytotoxic+T-lymphocyte+epitope.">An endoplasmic reticulum-targeting signal sequence enhances the immunogenicity of an immunorecessive simian virus 40 large T antigen cytotoxic T-lymphocyte epitope.</a> Journal of Virology. 72 (2), 1469-1481 (1998).</li><li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-priming+of+CD8++T+cells+by+viral+and+tumor+antigens+is+a+robust+phenomenon.">Cross-priming of CD8+ T cells by viral and tumor antigens is a robust phenomenon.</a> European Journal of Immunology. 34 (1), 194-199 (2004).</li><li>Memarnejadian, A., Meilleur, C. E., Mazzuca, D. M., Welch, I. D., Haeryfar, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Alloantibody-Mediated+Cytotoxicity+In+Vivo.">Quantification of Alloantibody-Mediated Cytotoxicity In Vivo.</a> Transplantation. 100 (5), 1041-1051 (2016).</li><li>Aichele, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide+antigen+treatment+of+naive+and+virus-immune+mice:+antigen-specific+tolerance+versus+immunopathology.">Peptide antigen treatment of naive and virus-immune mice: antigen-specific tolerance versus immunopathology.</a> Immunity. 6 (5), 519-529 (1997).</li><li>Oehen, S., Brduscha-Riem, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+naive+CTL+to+effector+and+memory+CTL:+correlation+of+effector+function+with+phenotype+and+cell+division.">Differentiation of naive CTL to effector and memory CTL: correlation of effector function with phenotype and cell division.</a> The Journal of Immunology. 161 (10), 5338-5346 (1998).</li><li>Coles, R. M., Mueller, S. N., Heath, W. R., Carbone, F. R., Brooks, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progression+of+armed+CTL+from+draining+lymph+node+to+spleen+shortly+after+localized+infection+with+herpes+simplex+virus+1.">Progression of armed CTL from draining lymph node to spleen shortly after localized infection with herpes simplex virus 1.</a> The Journal of Immunology. 168 (2), 834-838 (2002).</li><li>Barber, D. L., Wherry, E. J., Ahmed, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+edge:+rapid+in+vivo+killing+by+memory+CD8+T+cells.">Cutting edge: rapid in vivo killing by memory CD8 T cells.</a> The Journal of Immunology. 171 (1), 27-31 (2003).</li><li>Meilleur, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+superantigens+expand+and+activate,+rather+than+delete+or+incapacitate,+preexisting+antigen-specific+memory+CD8++T+cells.">Bacterial superantigens expand and activate, rather than delete or incapacitate, preexisting antigen-specific memory CD8+ T cells.</a> The Journal of Infectious Diseases. , (2018).</li><li>Goldszmid, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+charged+with+apoptotic+tumor+cells+induce+long-lived+protective+CD4++and+CD8++T+cell+immunity+against+B16+melanoma.">Dendritic cells charged with apoptotic tumor cells induce long-lived protective CD4+ and CD8+ T cell immunity against B16 melanoma.</a> The Journal of Immunology. 171 (11), 5940-5947 (2003).</li><li>Oberg, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+or+mismatch+of+MHC+class+I+is+sufficient+to+trigger+NK+cell-mediated+rejection+of+resting+lymphocytes+in+vivo+-+role+of+KARAP/DAP12-dependent+and+-independent+pathways.">Loss or mismatch of MHC class I is sufficient to trigger NK cell-mediated rejection of resting lymphocytes in vivo - role of KARAP/DAP12-dependent and -independent pathways.</a> European Journal of Immunology. 34 (6), 1646-1653 (2004).</li><li>Wingender, G., Krebs, P., Beutler, B., Kronenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen-specific+cytotoxicity+by+invariant+NKT+cells+in+vivo+is+CD95/CD178-dependent+and+is+correlated+with+antigenic+potency.">Antigen-specific cytotoxicity by invariant NKT cells in vivo is CD95/CD178-dependent and is correlated with antigenic potency.</a> The Journal of Immunology. 185 (5), 2721-2729 (2010).</li><li>Brinster, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+harboring+SV40+T-antigen+genes+develop+characteristic+brain+tumors.">Transgenic mice harboring SV40 T-antigen genes develop characteristic brain tumors.</a> Cell. 37 (2), 367-379 (1984).</li><li>Tatum, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T+cells+targeting+a+single+immunodominant+epitope+are+sufficient+for+elimination+of+established+SV40+T+antigen-induced+brain+tumors.">CD8+ T cells targeting a single immunodominant epitope are sufficient for elimination of established SV40 T antigen-induced brain tumors.</a> The Journal of Immunology. 181 (6), 4406-4417 (2008).</li><li>Schell, T. D., Tevethia, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+advanced+choroid+plexus+tumors+in+SV40+T+antigen+transgenic+mice+following+priming+of+donor+CD8(+)+T+lymphocytes+by+the+endogenous+tumor+antigen.">Control of advanced choroid plexus tumors in SV40 T antigen transgenic mice following priming of donor CD8(+) T lymphocytes by the endogenous tumor antigen.</a> The Journal of Immunology. 167 (12), 6947-6956 (2001).</li><li>Greenberg, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostate+cancer+in+a+transgenic+mouse.">Prostate cancer in a transgenic mouse.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92 (8), 3439-3443 (1995).</li></ol>

CFSE-based in vivo chemo tests bieden verschillende voordelen ten opzichte van traditionele doden assays zoals radioactieve chromium (51CR) release en colorimetrische lactaatdehydrogenase (LDH) release assays. Eerst, laten zij de controle van CTL functie binnen een architecturaal intact secundair lymfe orgaan toe.
Ten tweede, de specifieke doden van doelcellen in in vivo chemo tests weerspiegelt het absolute aantal van AG-specifieke TCD8, die meestal, maar niet altijd, ee...

Conventionele CD8+ t-cellen (tCD8) spelen belangrijke onderdelen in antikanker immuun toezicht. Ze werken voornamelijk in de hoedanigheid van cytolytische T lymfocyten (Ctl's) die herkennen tumor-specifieke of-geassocieerde peptide antigenen (AGS) weergegeven binnen de gesloten spleet van de grote Histocompatibility complexe (MHC) klasse I moleculen. Volledig gewapend Ctl's gebruiken hun chemo arsenaal om kwaadaardige cellen te vernietigen. Antikanker TCD8 kan worden gedetecteerd in de circulatie of zelfs binnen primaire en gemetastaseerde massa's van vele kankerpatiënten en tumor-dragende dieren. Echter, ze zijn vaak anergic of uitgeput en niet aan kanker uit te roeien. Daarom zijn veel immunotherapeutische modaliteiten ontworpen om kanker TCD8 frequenties te verhogen en om hun functies te herstellen en te stimuleren.
De proteïnen van de tumor haven vele peptides, wat waarvan kan worden immunogeen en potentieel immunoprotective. Echter, kwantificeerbare TCD8 reacties worden uitgelokt met verschillende magnitudes tegen enkele peptiden alleen. Dit leidt tot een "immunodominance hiërarchie" onder TCD8 klonen1. Dienovereenkomstig, immunodominant (ID) TCD8 bezetten prominente hiërarchische rangen, die algemeen wordt beoordeeld door hun overvloed. In tegenstelling, TCD8 cellen waarvan t-cel receptor (TCR) is specifiek voor subdominante (SD) epitopes optreden in lagere frequenties. Wij en anderen hebben een aantal van de factoren die dicteren of vorm immunodominance in TCD8 reacties. Deze omvatten, onder andere, de wijze van AG presentatie aan naïef TCD8 (d.w.z., directe presentatie, dwars-presentatie, cross-dressing)2,3,4, het type van AG-presenterende cellen (APCs) deelnemen aanT CD8 activering5, de overvloed en stabiliteit van eiwittenAGS 6,7 en de efficiëntie en kinetiek van hun afbraak door proteasomes7,8, de relatieve selectiviteit van de vervoerder geassocieerd met AG verwerking (TAP) voor peptiden9, de affiniteit van de bevrijde peptiden voor mhc I moleculen9,10, de aanwezigheid, voorloper frequenties en TCR diversiteit van cognate tCD8 in t Cell zwembaden11,12,13, cross-concurrentie onder t-cellen voor de toegang tot APCs14,15, en de broeder capaciteit van tCD8 klonen16. Bovendien, TCD8 immunodominance is onderworpen aan immunoregulerende mechanismen bemiddeld door verschillende suppressor cel typen, zoals natuurlijk voorkomende regelgevende T (nTreg) cellen17, de cel oppervlakte co-remmende molecuul geprogrammeerd Death-1 (PD-1)16, en bepaalde intracellulaire enzymen zoals Indoleamine 2, 3-DIOXYGENASE (Ido)18 en de zoogdier doelstelling van rapamycine (mTOR)19. Het is belangrijk op te merken, echter, dat de bovenstaande factoren niet altijd volledig rekening houden met immunodominance.
Behalve de basis biologie van TCD8 immunodominance, heeft het onderzoek van dit intrigerende fenomeen belangrijke implicaties in kanker immunologie en immunotherapie. Ten eerste, een ID-status niet noodzakelijkerwijs verleent aan een bepaalde TCD8 kloon de mogelijkheid om tumor initiatie of progressie te voorkomen20. Of en hoe ID en SD TCD8 bijdragen aan antitumorale immuniteit kan afhankelijk zijn van het type en de omvang van de kwaadaardigheid en het experimentele systeem tewerkgesteld. Ten tweede wordt gedacht dat ID TCD8 klonen kan worden ' te zichtbaar ' om het immuunsysteem en dus meer vatbaar voor centrale en/of perifere tolerantiemechanismen16,21. Ten derde, heterogene tumoren kunnen bevatten neoplastische cellen die detectie te voorkomen door vele, zo niet de meeste, Ctl's door het weergeven van slechts een smal spectrum van peptide: MHC-complexen. Onder deze omstandigheden, TCD8 reacties van onvoldoende breedte zijn waarschijnlijk een dergelijke tumorcellen veroorloven een overlevingsvoordeel, dus versterkende hun uitgroei22. Het is om de bovengenoemde redenen dat vele mening immunodominance als hindernis aan succesvolle TCD8-based inenting en therapie tegen kanker.
Inenting van C57BL/6 muizen met Simian virus 40 (SV40)-omgezette cellen die uitdrukken grote tumor AG (T AG) verstrekt een krachtig preklinisch systeem om TCD8 immunodominance te bestuderen. Dit model biedt verschillende voordelen. Eerst, is peptide epitopes van dit klinisch relevante oncoprotein goed-gekenmerkt in deze muis spanning23 (lijst 1). Ten tweede, T AG epitopes, die worden genoemd sites I, II/III, IV en V, trigger TCD8 reacties die consequent zijn gerangschikt in de volgende hiërarchische volgorde: site iv > > site I ≥ site II/III > &Gt; site V. dienovereenkomstig, site IV-specifieke TCD8 Monteer de meest robuuste reactie op T AG. In tegenstelling, sites I en II/III zijn subdominante, en site V-specifieke TCD8 zijn minst overvloedig en meestal alleen detecteerbaar in het ontbreken van responsiviteit naar andere epitopes23,24. Ten derde, de T AG+ tumor Cell line gebruikt in het Protocol hierin beschreven, namelijk C57SV fibrosarcoom cellen, en die worden gebruikt in onze eerdere onderzoeken16,17,18,19 ,25,26, worden getransformeerd met subgenomische SV40 fragmenten25. Daarom zijn ze niet in staat te assembleren en release SV40 virionen die mogelijk kunnen infecteren host APCs. Bovendien zijn de C57SV cellen verstoken van klassieke costimulatoire moleculen zoals CD80 (B7-1), CD86 (B7-2), en CD137 ligand (4-1BBL)16. De bovenstaande attributen maken deze lijnen ideaal voor onderzoek van in vivo TCD8 activering via cross-priming. Cross-priming is een belangrijke weg in het induceren van TCD8 reacties, vooral die gelanceerd tegen tumorcellen van niet-hematopoietische oorsprong die niet direct Prime naïeve T-cellen25.
Antitumorale TCD8 frequenties en/of functies kunnen worden gecontroleerd door MHC I Tetramer kleuring, intracellulaire kleuring voor de werking cytokines (bijv. interferon [IFN]-γ) of lytische moleculen (bijv. perforin), enzym-gebonden Immunospot (ELISPOT) assays en ex vivo chemo tests. Sinds hun oprichting in de jaren 199027,28, carboxyfluorescein succinimidyl Ester (CFSE)-gebaseerd in vivo doden tests hebben ingeschakeld evaluatie van chemo reacties bemiddeld door antivirale ctl's29,30 , 31, antitumorale ctl's16,32, Natural Killer (NK) cellen33, glycolipide-reactieve invariante Natural killer T (iNKT) cellen34, en reeds bestaande en de Novo donor-specifieke alloantibodies26. Daarom kunnen hun toepassingen van belang zijn voor een breed lezerspubliek, met inbegrip van maar niet beperkt tot onderzoekers die werkzaam zijn op het gebied van tumor immunologie en immunotherapie, anti-pathogeen immuniteit, en preventieve en therapeutische vaccin ontwerp.
Om de cel-gemedieerde chemo behandeling in typische scenario's te beoordelen, twee populaties van naïeve splenocyten die ofwel een irrelevante AG of een cognate AG (s) worden aangeduid met twee verschillende doses van CFSE, gemengd in gelijke aantallen en geïnjecteerd in naïeve (controle) of moordenaar Cell-harboring muizen. De aanwezigheid/afwezigheid van elke doelpopulatie wordt vervolgens onderzocht door stromings Cytometry.
We hebben geoptimaliseerd en werkzaam in vivo doden assays in onze studies over immunodominance in zowel antivirale en antitumorale TCD8 reacties12,16,17. Hier bieden wij een gedetailleerd protocol voor de gelijktijdige beoordeling van ID en SD TCD8 reacties op t AG epitopes, die gemakkelijk kan worden vastgesteld voor soortgelijke onderzoeken in andere experimentele systemen. We bieden ook representatieve resultaten waaruit blijkt dat nTreg cel uitputting en PD-1 blokkade kan selectief verbeteren ID TCD8-en SD tCD8-geïnduceerde chemo, respectievelijk. Aan het eind zullen we bespreken meerdere voordelen van in vivo doden assays, alsmede enkele van hun inherente beperkingen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:872px;" width="871">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">0.25% Trypsin-EDTA (1X)</td>
			<td style="width:164px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:163px;">25200-056</td>
			<td style="width:211px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ACK Lysing Buffer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:163px;">A1049201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-mouse CD25 (clone PC-61.5.3)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BE0012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-mouse PD-1 (clone RMP1-14)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BE0146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CFSE</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>C34554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM (1X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11965-092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Wisent Bioproducts</td>
			<td>080-150</td>
			<td>Heat-inactivate prior to use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GlutaMAX (100X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HEPES (1M)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15630080</td>
			<td>10 mM final concentration</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MEM Non-Essential Amino Acids Solution (100X)&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11140-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P0781</td>
			<td>Stock is 100X</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG1 (clone KLH/G1-2-2)</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>0116-01</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG1 (clone HRPN)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BE0088</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG1 (clone TNP6A7)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BP0290</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG2a (clone 2A3)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BP0089</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI 1640 (1X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11875-093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Pyruvate (100 mM)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11360-070</td>
			<td>1 mM final concentration</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tailoring in vivo cytotoxicity assays to study immunodominance in tumor-specific cd8+ t cell responses

Carboxyfluorescein succinimidyl Ester (CFSE)-gebaseerde in vivo chemo tests kunnen gevoelige en nauwkeurige kwantificatie van CD8+ cytolytische T LYMFOCYTEN (CTL) reacties uitgelokt tegen tumor-en pathogeen-afgeleide peptiden. Zij bieden verscheidene voordelen over traditionele het doden analyses aan. Eerst, toestaan zij de controle van CTL-gemedieerde chemo in architecturaal intacte secundaire lymfeorganen, typisch in de milt. Ten tweede, ze zorgen voor mechanistische studies tijdens de priming, de effect-en Recall fasen van CTL Responses. Ten derde, ze bieden nuttige platforms voor vaccin/drug effectiviteit testen in een echt in vivo setting. Hier bieden wij een geoptimaliseerd protocol voor het onderzoek van gelijktijdige CTL reacties tegen meer dan een peptide epitope van een model tumor antigen (AG), namelijk Simian virus 40 (SV40)-gecodeerde grote T AG (T AG). Net als de meeste andere klinisch relevante tumor eiwitten, T AG havens veel potentieel immunogeen peptiden. Echter, slechts vier van deze peptiden induceren detecteerbare CTL reacties in C57BL/6 muizen. Deze antwoorden worden constant gerangschikt in een hiërarchische orde die op hun omvang wordt gebaseerd, die de basis voor TCD8 "immunodominance" in dit krachtige systeem vormt. Dienovereenkomstig, het grootste deel van de T AG-specifieke TCD8 reactie is gericht tegen een enkele immunodominant epitope terwijl de andere drie epitopes worden erkend en gereageerd op slechts zwak. Immunodominance compromissen de breedte van antitumorale TCD8 reacties en is als zodanig, door velen beschouwd als een belemmering voor een succesvolle vaccinatie tegen kanker. Daarom is het belangrijk om te begrijpen van de cellulaire en moleculaire factoren en mechanismen die dicteren of vorm TCD8 immunodominance. Het protocol beschrijven we hier is afgestemd op het onderzoek van dit fenomeen in de T AG immunisatie model, maar kan gemakkelijk worden gewijzigd en uitgebreid tot soortgelijke studies in andere tumor modellen. Wij bieden voorbeelden van hoe de impact van experimentele immunotherapeutische interventies kan worden gemeten met behulp van in vivo chemotherapie analyses.

Het doel van het experiment waarvan de resultaten zijn afgebeeld in Figuur 1 was om te bepalen of de aanwezigheid en functies van nTreg cellen vorm of wijzigen van de immunodominance hiërarchie van t AG-specifieke tCD8. C57BL/6 muizen werden geïnjecteerd i.p. met PBS of met 0,5 mg van een anti-CD25 mAb (Clone PC-61.5.3 [PC61]) vier dagen voordat ze ontvangen 2 x 107 C57SV tumorcellen i.p. In afzonderlijke experimenten, werd een rat IgG1 Isotype controle gebruikt in pl...

Watch this Scientific Journal Video about Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses at JoVE.com

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Maatwerk in vivo chemo tests om Immunodominance in tumor-specifieke CD8+ T Cell responsen te bestuderen

We beschrijven hier een flow Cytometry-based in vivo doden assay die het mogelijk maakt onderzoek van immunodominance in chemo T lymfocyten (CTL) Reacties op een model tumor antigeen. Wij bieden voorbeelden van hoe deze elegante assay kan worden gebruikt voor mechanistische studies en voor de effectiviteit van geneesmiddelen testen.

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)-based in vivo cytotoxicity assays enable sensitive and accurate quantitation of CD8+ cytolytic T lymphocyte ...

Deze test kan worden gebruikt om T-cel-gemedieerde cytotoxiciteit kwantificeren tegen twee verschillende peptide epitopen van tumor antigenen tegelijkertijd. De in vivo aard van deze test maakt het mogelijk om cytotoxische functie van T-cellen te meten binnen de intacte architectuur van een secundair lymfeorgaan. Bovendien is het waargenomen doden een nauwkeurige weerspiegeling van het absolute aantal T-cellen, en niet alleen hun frequenties, wat misleidend kan zijn.Deze test maakt het onderzoek van cytotoxische T-celreacties op immunodominante en sub-dominante tumorantigenen mogelijk. Het biedt daarom waardevolle informatie bij het ontwerpen van een vaccin, evenals immunotherapeutische protocollen voor kanker. Ons protocol is afgestemd op het bestuderen van CD8 T-celreacties.Het kan echter worden aangepast om cytotoxiciteit te meten die wordt opgewekt door andere typen killerceltypen, zoals NK-cellen en aangeboren T-lymfocyten. Deze test vereist ervaring in aseptische techniek, muisweefsel behandeling, doel cel prep, evenals expertise in staart ader injecties. Men moet deze vaardigheden te verwerven voordat een poging tot de in vivo doden test.Zodra de T-antigeen-positieve aanhangende tumorcellijn volledig confluent of iets over-confluent is geworden, spoel de monolaag voorzichtig met steriele, warme PBS en maak de tumorcellen los met 0,25% trypsine EDTA in een bioveiligheidskast. Tik meerdere keren op de zijkanten van de kweekkolf om de resterende aanhangende cellen vrij te geven en stop de reactie na ongeveer vijf minuten met de toevoeging van vijf milliliter DMEM-medium. Pipette de cel oplossing een paar keer voor het filteren van de cel suspensie door middel van een 70-micrometer-porie cel zeef in een 50-milliliter conische buis.Verzamel de cellen door centrifugatie, en resuspend de pellet in 10 milliliter steriele, koude PBS voor de eerste van drie wasbeurten onder dezelfde omstandigheden. Na de derde wasbeurt, resuspend de cellen op een vier keer 10 tot de zeven cellen per milliliter van steriele PBS concentratie, en injecteren 500 microliters van de T-antigeen-positieve tumorcel suspensie intraperitoneally in elke zes-tot-12-week-oude C57 Black 6 muis ontvanger. Voor doelsplenocyten voorbereiding, plaats de geëuthanaseerde donormuis in de gevoelige positie, en spray het dier met 70%ethanol.Met behulp van steriele tangen en scharen, til de huid en maak een kleine ventrale middellijn incisie. Snijd de huid op een cross-achtige manier om het buikvlies bloot te leggen, en gebruik de tangen om het buikvlies op een tent-achtige manier op te trekken, zonder een van de inwendige organen te vangen. Snijd het buikvlies open om de buikholte bloot te leggen en breng de milt voorzichtig over naar een Dounce-weefselmolen van 15 milliliter met vijf milliliter steriele PBS.Gebruik de zuiger om handmatige druk uit te oefenen totdat het miltweefsel verdwijnt in een rode homogene celsuspensie en breng het homogenaat over in een buis van 15 milliliter. Verzamel de suspensie door centrifugatie, en resuspend de pellet in vier milliliters van ammoniumchloride kalium lysine buffer om de erytrocyten te elimineren. Na vier minuten, stop het proces met acht milliliter van volledig medium, en filter de cel suspensie door een 70-micrometer-porie cel zeef in een nieuwe 50-milliliter buis.Scheid de witte bloedcellen van de rode bloedcel puin door centrifugatie, en resuspend de pellet in 12 milliliter van compleet medium. Dan splits de splenocyte schorsing in drie gelijke vier-milliliter aliquots. Voor peptide codering van het doel splenocyten, puls een splenocyte aliquot met een micromolar van irrelevant peptide, een aliquot met een micromolar van Site I peptide, en een aliquot met een micromolar van Site IV peptide voor een uur op 37 graden Celsius en 5% kooldioxide.Verwijder aan het einde van de incubatie het overtollige peptide door centrifugatie en was de peptide-gepulseerde splenocyten twee keer in 12 milliliter steriele, koude PBS per wasbeurt per buis. Na de tweede wasbeurt, resuspend de cellen in vier milliliter verse, steriele PBS per buis. Voeg respectievelijk 025, 0,25 en twee micromolar CFSE toe aan de irrelevante, Site I en Site IV peptide-gepulseerde splenocyte suspensies.Plaats de buizen op 37 graden Celsius gedurende 15 minuten met handmatige inversie eens in de vijf minuten. Voeg aan het einde van de incubatie drie milliliter warmte-geïnactiveerd foetaal runderserum toe aan elke buis om de CFSE-reactie te stoppen en breng het eindvolume in elke buis tot 15 milliliter met PBS. Verzamel vervolgens de cellen met het kleurstofmerk door middel van centrifugatie voor twee wasbeurten in 12 milliliter verse, steriele PBS per wasbeurt.Om een adequate CFSE-etikettering van de doelsplenocyten te bevestigen, wordt de pellet opnieuw opgetrokken in drie milliliter PBS en meng met zachte vortexing. Breng 10 microliter van elke CFSE-gelabelde celsuspensie over in een individuele vijf milliliter ronde bodem polystyrees fluorescentie-geactiveerde celsormeer, of FACS-buis, met PBS, en laad de buis op een stroomcytometer die is uitgerust met een laser van 488 nanometer. In de flow cytometer software, maak een lymfocyten poort op basis van de voorwaartse verstrooiing en side scatter eigenschappen van de cellen voor het verwerven van 5,000 gebeurtenissen die binnen de lymfocyten poort in de Fluorescentie 1 kanaal.Binnen de moeder-CFSE-positieve populatie, trekken extra histogram poorten om de CFSE-laag, CFSE-intermediair, en CFSE-hoge subpopulaties te identificeren. Bevestig vervolgens een gelijk of een bijna gelijk gebeurtenisnummer binnen de drie poorten voor de andere twee buizen van gelabelde cellen. Voor de injectie van de doelcellen, eerst voorzichtig vortex de bron buizen en bundel de drie CFSE-gelabelde cel suspensies in een nieuwe buis met gelijke verhoudingen.Top de buis inhoud met steriele PBS, en het verzamelen van de cellen door centrifugatie voor het tellen. Pas vervolgens het volume aan op een één keer 10 aan de zeven gemengde doelcellen per 200 microliter PBS per ontvangerconcentratie, en injecteer 200 microlitervolumes van de celsuspensie in de staartader van elke ontvangende C57 Black 6-muis. Twee of vier uur na de injectie, verwijderen en verwerken van de milt van elk ontvangend dier zoals aangetoond, en resuspend de geïsoleerde witte bloedcellen in drie milliliter PBS per milt.Breng ongeveer een keer 10 naar de zeven cellen van elke verwerkte milt in een schone FACS buis, en onmiddellijk lopen de cellen op de stroom cytometer zoals aangetoond aan de CFSE-lage, intermediaire en hoge doelcel populaties poort. Verwerf vervolgens een totaal van 2.000 CFSE-lage voorvallen in het Fluorescentie 1-kanaal en bereken de specifieke lysis van elke cognate doelcelpopulatie volgens de formule die in de tekst wordt beschreven. In dit representatieve experiment werd het succes van de uitputting van natuurlijk voorkomende regulerende T-cellen in muizen geïnjecteerd met anti-CD25 monoklonale antilichaam zaamheid bevestigd door stromingscytometrie.Zoals verwacht waren bijna gelijke pieken die overeenkomen met de controle en cognate doelcellen detecteerbaar bij naïeve muizen. Site-IV-displaying doelcellen waren daarentegen bijna volledig afwezig bij T-antigeen-geprimede muizen, ongeacht hun voorafgaande behandeling met anti-CD25 monoklonale antilichaam of PBS. Interessant is dat natuurlijk voorkomende T reg-celuitputting door anti-CD25 monoklonale antilichaam uitgebreid in vivo cytotoxische T-lymfocyten-gemedieerde lysis van Site-I-gepulseerde doelcellen.In dit tweede representatieve onderzoek, geprogrammeerde dood 1 blokkade versterkt sub-dominante CD8-positieve T-cel sites een en twee-slash-drie-specifieke reacties, wat suggereert dat interfereren met geprogrammeerde dood 1 / geprogrammeerde dood ligand en 1 interacties kunnen leiden tot epitoop-verspreiding in anti-kanker CD8-positieve T-cel reacties. Het is van cruciaal belang bij het labelen van uw donorcellen met CFSE, zorg ervoor dat uw concentraties nauwkeurig zijn. Anders kan dit leiden tot overlappende histogrampieken, waardoor uw vereiste berekeningen en gegevensinterpretatie moeilijk, zo niet onmogelijk zijn.Het zal belangrijk zijn om in vivo cytotoxiciteitstesten te optimaliseren om effectorfuncties te kwantificeren die door verschillende moordenaarceltypes worden opgewekt die peptide en niet-peptideanten in de zelfde gastheer erkennen.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

Retrovirale Transductie van T-cel-receptoren in Mouse T-cellen

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Competitive Homing Assays to Study Gut-tropic T Cell Migration

Concurrerende Homing Testen om de Gut-tropische T-cel-migratie Study

In order to exert their function lymphocytes need to leave the blood and migrate into different tissues in the body. Lymphocyte adhesion to endothelial ...

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon Systeem Wijziging van primaire menselijke T-cellen

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

Quantitative High-throughput Single-cell Cytotoxicity Assay For T Cells

Quantitative High-throughput Eencellige cytotoxiciteit T cellen

Cancer immunotherapy can harness the specificity of  immune response to target and eliminate tumors. Adoptive cell therapy (ACT)  based on the adoptive ...

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

Het gebruik van TL-Target Arrays voor het beoordelen van de T-cel responsen<em&gt; In vivo</em

The ability to monitor T cell responses in vivo is important for the development of our understanding of the immune response and the design of ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Transplantatie van Tail Skin aan allogene CD4 T-cel responsen bij muizen

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Whole-animal Imaging and Flow Cytometric Techniques for Analysis of Antigen-specific CD8+ T Cell Responses after Nanoparticle Vaccination

Whole-dierlijke Imaging en Flowcytometrische technieken voor analyse van antigeen-specifieke CD8 + T cel reacties na Nanoparticle Vaccinatie

Traditional vaccine adjuvants, such as alum, elicit suboptimal CD8+ T cell responses. To address this major challenge in vaccine development, various ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolatie van Salmonella typhimurium-met Phagosomes van Macrophages

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

Een zuig Blister-Protocol om menselijke T-cel Recall reacties In Vivo te studeren

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Karakterisering van zwezerik-afhankelijke en Thymus-onafhankelijke Immunoglobulin Isotype reacties in muizen met behulp van Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...