Name: tailoring in vivo cytotoxicity assays to study immunodominance in tumor-specific cd8+ t cell responses
Uploaded: 2019-05-06T15:00:00
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이 작품은 캐나다 건강 연구 기관 (CIHR) 보조금 130465 및 PJT-156295을 SMMH에 의해 지원 되었습니다. JC는 엘리자베스 2 세 여왕에 의해 교육, 대학 및 대학교에서 과학 기술 대학원 장학금에 의해 부분적으로 지원 됩니다. CEM은 캐나다의 자연 과학 및 공학 연구 위원회에서 알렉산더 그레이엄 벨 캐나다 대학원 장학금 (박사)의 받는 사람 (NSERC).

여기에 설명 된 실험은 제도적 기관에 의해 승인 된 동물 사용 프로토콜을 따르고 확립 된 국가 지침을 준수 합니다.
1. C57BL의 종양 세포를 발현 하는 생쥐의 접종
<ol><li>SV40 변형 섬유 육 종 세포 주 C57SV (또는 유사한 T Ag+ 부착 세포 주)를 Dulbecco의 변성 독수리 배지 (DMEM)와 4.5 g/l D 포도 당 및 L-글루타민 (1x)으로 보충 하 고 1mm의 나트륨 피 루브 산은 및 10% 열 불 활성화...

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	<li>Yewdell, J. W., Bennink, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominance+in+major+histocompatibility+complex+class+I-restricted+T+lymphocyte+responses.">Immunodominance in major histocompatibility complex class I-restricted T lymphocyte responses.</a> Annual Review of Immunology. 17, 51-88 (1999).</li><li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+in+the+immunodominance+hierarchy+in+secondary+CD8++T+cell+responses+to+influenza+A+virus:+roles+for+cross-presentation+and+lysis-independent+immunodomination.">Reversal in the immunodominance hierarchy in secondary CD8+ T cell responses to influenza A virus: roles for cross-presentation and lysis-independent immunodomination.</a> The Journal of Immunology. 173 (8), 5021-5027 (2004).</li><li>Otahal, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inefficient+cross-presentation+limits+the+CD8++T+cell+response+to+a+subdominant+tumor+antigen+epitope.">Inefficient cross-presentation limits the CD8+ T cell response to a subdominant tumor antigen epitope.</a> The Journal of Immunology. 175 (2), 700-712 (2005).</li><li>Lauron, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-priming+induces+immunodomination+in+the+presence+of+viral+MHC+class+I+inhibition.">Cross-priming induces immunodomination in the presence of viral MHC class I inhibition.</a> PLoS Pathogens. 14 (2), e1006883 (2018).</li><li>Crowe, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+antigen+presentation+regulates+the+changing+patterns+of+CD8++T+cell+immunodominance+in+primary+and+secondary+influenza+virus+infections.">Differential antigen presentation regulates the changing patterns of CD8+ T cell immunodominance in primary and secondary influenza virus infections.</a> The Journal of Experimental Medicine. 198 (3), 399-410 (2003).</li><li>Probst, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominance+of+an+antiviral+cytotoxic+T+cell+response+is+shaped+by+the+kinetics+of+viral+protein+expression.">Immunodominance of an antiviral cytotoxic T cell response is shaped by the kinetics of viral protein expression.</a> The Journal of Immunology. 171 (10), 5415-5422 (2003).</li><li>Gileadi, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+an+immunodominant+CTL+epitope+is+affected+by+proteasome+subunit+composition+and+stability+of+the+antigenic+protein.">Generation of an immunodominant CTL epitope is affected by proteasome subunit composition and stability of the antigenic protein.</a> The Journal of Immunology. 163 (11), 6045-6052 (1999).</li><li>Zanker, D., Waithman, J., Yewdell, J. 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R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MHC+affinity,+peptide+liberation,+T+cell+repertoire,+and+immunodominance+all+contribute+to+the+paucity+of+MHC+class+I-restricted+peptides+recognized+by+antiviral+CTL.">MHC affinity, peptide liberation, T cell repertoire, and immunodominance all contribute to the paucity of MHC class I-restricted peptides recognized by antiviral CTL.</a> The Journal of Immunology. 158 (4), 1507-1515 (1997).</li><li>Chen, W., Khilko, S., Fecondo, J., Margulies, D. 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F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naive+precursor+frequencies+and+MHC+binding+rather+than+the+degree+of+epitope+diversity+shape+CD8++T+cell+immunodominance.">Naive precursor frequencies and MHC binding rather than the degree of epitope diversity shape CD8+ T cell immunodominance.</a> The Journal of Immunology. 181 (3), 2124-2133 (2008).</li><li>Haeryfar, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Terminal+deoxynucleotidyl+transferase+establishes+and+broadens+antiviral+CD8++T+cell+immunodominance+hierarchies.">Terminal deoxynucleotidyl transferase establishes and broadens antiviral CD8+ T cell immunodominance hierarchies.</a> The Journal of Immunology. 181 (1), 649-659 (2008).</li><li>Leon-Ponte, M., Kasprzyski, T., Mannik, L. A., Haeryfar, S. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cells+compete+for+access+to+antigen-bearing+antigen-presenting+cells.">T cells compete for access to antigen-bearing antigen-presenting cells.</a> The Journal of Experimental Medicine. 192 (8), 1105-1113 (2000).</li><li>Kastenmuller, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-competition+of+CD8++T+cells+shapes+the+immunodominance+hierarchy+during+boost+vaccination.">Cross-competition of CD8+ T cells shapes the immunodominance hierarchy during boost vaccination.</a> The Journal of Experimental Medicine. 204 (9), 2187-2198 (2007).</li><li>Memarnejadian, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-1+Blockade+Promotes+Epitope+Spreading+in+Anticancer+CD8(+)+T+Cell+Responses+by+Preventing+Fratricidal+Death+of+Subdominant+Clones+To+Relieve+Immunodomination.">PD-1 Blockade Promotes Epitope Spreading in Anticancer CD8(+) T Cell Responses by Preventing Fratricidal Death of Subdominant Clones To Relieve Immunodomination.</a> The Journal of Immunology. 199 (9), 3348-3359 (2017).</li><li>Haeryfar, S. M., DiPaolo, R. J., Tscharke, D. C., Bennink, J. R., Yewdell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells+suppress+CD8++T+cell+responses+induced+by+direct+priming+and+cross-priming+and+moderate+immunodominance+disparities.">Regulatory T cells suppress CD8+ T cell responses induced by direct priming and cross-priming and moderate immunodominance disparities.</a> The Journal of Immunology. 174 (6), 3344-3351 (2005).</li><li>Rytelewski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+immunodominant+antitumor+and+antiviral+CD8++T+cell+responses+by+indoleamine+2,3-dioxygenase.">Suppression of immunodominant antitumor and antiviral CD8+ T cell responses by indoleamine 2,3-dioxygenase.</a> PLoS One. 9 (2), e90439 (2014).</li><li>Maleki Vareki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+regulation+of+simultaneous+antitumor+and+alloreactive+CD8(+)+T-cell+responses+in+the+same+host+by+rapamycin.">Differential regulation of simultaneous antitumor and alloreactive CD8(+) T-cell responses in the same host by rapamycin.</a> American Journal of Transplantation. 12 (1), 233-239 (2012).</li><li>Irvine, K., Bennink, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+influencing+immunodominance+hierarchies+in+TCD8++-mediated+antiviral+responses.">Factors influencing immunodominance hierarchies in TCD8+ -mediated antiviral responses.</a> Expert Review of Clinical Immunology. 2 (1), 135-147 (2006).</li><li>Grossmann, M. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitation+of+CD8(+)+T-lymphocyte+responses+to+multiple+epitopes+from+simian+virus+40+(SV40)+large+T+antigen+in+C57BL/6+mice+immunized+with+SV40,+SV40+T-antigen-transformed+cells,+or+vaccinia+virus+recombinants+expressing+full-length+T+antigen+or+epitope+minigenes.">Quantitation of CD8(+) T-lymphocyte responses to multiple epitopes from simian virus 40 (SV40) large T antigen in C57BL/6 mice immunized with SV40, SV40 T-antigen-transformed cells, or vaccinia virus recombinants expressing full-length T antigen or epitope minigenes.</a> Journal of Virology. 74 (15), 6922-6934 (2000).</li><li>Fu, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+endoplasmic+reticulum-targeting+signal+sequence+enhances+the+immunogenicity+of+an+immunorecessive+simian+virus+40+large+T+antigen+cytotoxic+T-lymphocyte+epitope.">An endoplasmic reticulum-targeting signal sequence enhances the immunogenicity of an immunorecessive simian virus 40 large T antigen cytotoxic T-lymphocyte epitope.</a> Journal of Virology. 72 (2), 1469-1481 (1998).</li><li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-priming+of+CD8++T+cells+by+viral+and+tumor+antigens+is+a+robust+phenomenon.">Cross-priming of CD8+ T cells by viral and tumor antigens is a robust phenomenon.</a> European Journal of Immunology. 34 (1), 194-199 (2004).</li><li>Memarnejadian, A., Meilleur, C. E., Mazzuca, D. M., Welch, I. D., Haeryfar, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Alloantibody-Mediated+Cytotoxicity+In+Vivo.">Quantification of Alloantibody-Mediated Cytotoxicity In Vivo.</a> Transplantation. 100 (5), 1041-1051 (2016).</li><li>Aichele, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide+antigen+treatment+of+naive+and+virus-immune+mice:+antigen-specific+tolerance+versus+immunopathology.">Peptide antigen treatment of naive and virus-immune mice: antigen-specific tolerance versus immunopathology.</a> Immunity. 6 (5), 519-529 (1997).</li><li>Oehen, S., Brduscha-Riem, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+naive+CTL+to+effector+and+memory+CTL:+correlation+of+effector+function+with+phenotype+and+cell+division.">Differentiation of naive CTL to effector and memory CTL: correlation of effector function with phenotype and cell division.</a> The Journal of Immunology. 161 (10), 5338-5346 (1998).</li><li>Coles, R. 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E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+superantigens+expand+and+activate,+rather+than+delete+or+incapacitate,+preexisting+antigen-specific+memory+CD8++T+cells.">Bacterial superantigens expand and activate, rather than delete or incapacitate, preexisting antigen-specific memory CD8+ T cells.</a> The Journal of Infectious Diseases. , (2018).</li><li>Goldszmid, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+charged+with+apoptotic+tumor+cells+induce+long-lived+protective+CD4++and+CD8++T+cell+immunity+against+B16+melanoma.">Dendritic cells charged with apoptotic tumor cells induce long-lived protective CD4+ and CD8+ T cell immunity against B16 melanoma.</a> The Journal of Immunology. 171 (11), 5940-5947 (2003).</li><li>Oberg, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+or+mismatch+of+MHC+class+I+is+sufficient+to+trigger+NK+cell-mediated+rejection+of+resting+lymphocytes+in+vivo+-+role+of+KARAP/DAP12-dependent+and+-independent+pathways.">Loss or mismatch of MHC class I is sufficient to trigger NK cell-mediated rejection of resting lymphocytes in vivo - role of KARAP/DAP12-dependent and -independent pathways.</a> European Journal of Immunology. 34 (6), 1646-1653 (2004).</li><li>Wingender, G., Krebs, P., Beutler, B., Kronenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen-specific+cytotoxicity+by+invariant+NKT+cells+in+vivo+is+CD95/CD178-dependent+and+is+correlated+with+antigenic+potency.">Antigen-specific cytotoxicity by invariant NKT cells in vivo is CD95/CD178-dependent and is correlated with antigenic potency.</a> The Journal of Immunology. 185 (5), 2721-2729 (2010).</li><li>Brinster, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+harboring+SV40+T-antigen+genes+develop+characteristic+brain+tumors.">Transgenic mice harboring SV40 T-antigen genes develop characteristic brain tumors.</a> Cell. 37 (2), 367-379 (1984).</li><li>Tatum, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T+cells+targeting+a+single+immunodominant+epitope+are+sufficient+for+elimination+of+established+SV40+T+antigen-induced+brain+tumors.">CD8+ T cells targeting a single immunodominant epitope are sufficient for elimination of established SV40 T antigen-induced brain tumors.</a> The Journal of Immunology. 181 (6), 4406-4417 (2008).</li><li>Schell, T. D., Tevethia, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+advanced+choroid+plexus+tumors+in+SV40+T+antigen+transgenic+mice+following+priming+of+donor+CD8(+)+T+lymphocytes+by+the+endogenous+tumor+antigen.">Control of advanced choroid plexus tumors in SV40 T antigen transgenic mice following priming of donor CD8(+) T lymphocytes by the endogenous tumor antigen.</a> The Journal of Immunology. 167 (12), 6947-6956 (2001).</li><li>Greenberg, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostate+cancer+in+a+transgenic+mouse.">Prostate cancer in a transgenic mouse.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92 (8), 3439-3443 (1995).</li></ol>

CFSE 기반 생체 내 세포 독성 분석은 방사성 크롬 (51Cr) 방출 및 비 색 젖 산 염 탈 수소 효소 (LDH) 방출 분석 등의 전통적인 살해 분석에 비해 여러 가지 장점을 제공 한다. 첫째, 그들은 구조적으로 손상 되지 않은 보조 림프 기관 내에서 CTL 기능의 모니터링을 허용 한다.
둘째, 생체 내 세포 독성 분석에서 표적 세포의 특이 적 살해는 Ag 특이 적 TCD8의 절대적인 수...

종래의 CD8+ t 세포 (tCD8)는 항 암 면역 감시에서 중요 한 부분을 재생 한다. 그들은 주요 조직 적합성 복합체 (MHC) 클래스 I 분자의 폐쇄 갈라진 틈 내에 표시 되는 종양 특이 적 또는 관련 펩타이드 항 원 (Ags)를 인식 하는 세포 용 균 T 림프 구 (CTLs)의 용량에서 주로 작용 한다. 완전히 무장 한 CTLs는 악성 세포를 파괴 하기 위해 세포 독성 무기를 활용 합니다. 항 암 제 TCD8 는 많은 암 환자 및 종양 방위 동물의 순환 또는 내부에도 1 차 및 전이성 덩어리에서 검출 될 수 있습니다. 그러나, 그들은 수시로 anergic 또는 고갈 되 고 암을 근절 하는 것을 실패 합니다. 따라서, 많은 면역 요법 양식은 항 암 TCD8 주파수를 증가 하 고 복원 하 고 그들의 기능을 향상 하도록 설계 되었습니다.
종양 단백질 항구 많은 펩 티 드, 그 중 일부는 면역 원 성 및 잠재적으로 면역 보호 될 수 있다. 그러나 측정 가능한 TCD8 응답은 몇 개의 펩타이드에 대해서만 다양 한 크기가 나타내어 됩니다. 이것은 TCD8 클론1사이에서 "면역 체계 계층 구조"를 생성 합니다. 따라서, 면역 지배적 (ID) TCD8 는 일반적으로 그들의 풍부에 의해 판단 되는 저명한 계층 계급을 점유 한다. 대조적으로 t 세포 수용 체 (TCR)가 하위 지배적 인 (SD)에 피토 프에 특이 적으로CD8 세포는 낮은 주파수에서 발생 한다. 우리와 다른 사람들은 TCD8 응답에서 면역 우위를 지시 하거나 형성 하는 몇몇 요인을 확인 했습니다. 여기에는 다른 것 들 사이에 ag 프레젠테이션CD8 (즉, 직접 발표, 교차 프레젠테이션, 크로스 드레싱)의 형태는 ag 제시 셀 (apcs)의 유형 TCD8 활성화5에 참여 하 여, 단백질 태그의 풍부 함과 안정성은6,7 및 프로 테오 게놈에의 한 그들의열화의 효율성 및 동역학, 펩 티 드에 대 한 Ag 처리 (TAP)와 관련 된 수송 체의 상대적인 선택도9, MHC I 분자9,10의 존재, 전 구체 주파수 및 TCR 다이버시티에 대 한 해방 된 펩타이드의 친화도 t 세포 풀 들에서의 동족 tCD8 ,12,13, apcs14,15에 대 한 액세스를 위한 t 세포 들 간의 교차 경쟁 및 tCD8 의 frt 살 균 용량 클론16. 또한, TCD8 면역 우세는 자연적으로 발생 하는 규제 t (nTreg) 세포 (17)와 같은 여러 억제 세포 유형에 의해 매개 된 면역 조절 메커니즘을 실시 하 여, 세포 표면 공동 억제 성 분자 프로그램 데스-1(PD-1)16및 본 라파 마이 신 (dioxygenase)의 내 인도 아민과 같은 특정 세포내 효소 들 (이도18 ) 및 포유류 표적. 그러나 위의 요인이 항상 완전 하 게 면역 우위를 차지 하는 것은 아니라는 점에 유의 해야 합니다.
TCD8 면역 지배의 기본 생물학 외에,이 흥미로운 현상의 검사는 암 면역학 및 면역 요법에서 중요 한 연루가 있습니다. 첫째로, ID 상태는 종양 개시 또는 진행 성20을 방지 하는 능력을 주어진 TCD8 클론에 반드시 부여 하지 않는다. ID 및 SD TCD8 이 항 암 면역에 기여 하는 지 여부 및 방법은 악성 종양 및 실험 시스템의 유형 및 정도에 따라 좌우 될 수 있다. 둘째, ID TCD8 클론은 면역 시스템에 ' 너무 눈에 띄지 ' 않을 수 있으며 결과적으로 중앙 및/또는 주변 기기 허용 메커니즘16,21에 더 취약 하다 고 생각 됩니다. 셋째, heterogeneic 종양은 좁은 스펙트럼의 펩 티 드만을 표시 하 여 대부분의 CTLs에 의해 검출을 피하는 신생 플라스틱 세포를 포함 할 수 있다: MHC 복합체. 이러한 상황에서, 불충분 한 폭의 TCD8 반응은 그러한 종양 세포가 생존 우위를 가질 가능성이 있으므로, 그들의 성장 (22)을 증강 시킨다. 상기 이유는 많은 사람들이 암에 대항하 여 성공적인 TCD8기반의 백신 접종 및 치료법에 대 한 장애물로 서 면역 지배력을 확인 하는 것 이다.
Simian 바이러스 40 (SV40)를 사용한 C57BL/6 마우스의 접종은 큰 종양 Ag (T Ag)를 발현 하는 형질 전환 세포는 TCD8 면역 우세를 연구 하는 강력한 전 임상 시스템을 제공 한다. 이 모델은 여러 가지 이점을 제공 합니다. 먼저, 임상적으로 관련 된 발암 단백질의 펩타이드에 피토 프는이 마우스 균 주 ( 표 1)에서 잘 특성화 되어 있다. 둘째, 사이트 I, II/III, IV 및 V 라고 불리는 T Ag에 피토 프는 다음과 같은 계층적 순서로 일관 되 게 배열 되는 TCD8 응답을 트리거합니다. 사이트 iv > > 사이트 i ≥ 사이트 II/III > &Gt; 사이트 v. 따라서 사이트 IV 특정 TCD8 T Ag에 가장 강력한 응답을 탑재 합니다. 대조적으로, 사이트 I 및 II/III는 하위 지배적 이며, 사이트 V-특이 적 TCD8 는 다른에 피토 프 (23)에 대 한 반응성이 없는 경우에만 일반적으로 검출 가능 하다. 셋째, 본 원에 기술 된 프로토콜에 활용 되는 T Ag+ 종양 세포 주는, 즉 C57SV 섬유 육 종 세포 및 우리의 이전 조사에서 사용 된 것 들16,17,19 25,26, 부 게놈 SV40 단편25로 형질 전환 된다. 따라서 호스트 APCs를 잠재적으로 감염 시킬 수 있는 SV40 비리 온을 조립 하 고 해제할 수 없습니다. 또한, C57SV 세포는 CD80), CD86 및 CD137 리간드 (41~1BBL)와 같은 고전적 자극 분자 들이 결여 되어 있다. 위의 특성은 교차 프라이 밍을 통해 생체 내 TCD8 활성화의 검사에 이상적이 라인을 합니다. 교차 프라이 밍은 TCD8 반응을 유도 하는 주요 통로 이며, 특히 비 조 혈 기원의 종양 세포에 대해 개시 된 것은 직접적으로 순진한 t 세포 (25)를 프라임 하지 못한다.
항 종양 TCD8 주파수 및/또는 기능은 MHC I 정방 염색에 의해 모니터링 될 수 있고, 이펙터 사이토카인에 대 한 세포내 염색 (예를 들어, 인터페론 [IFN) 또는 용 리 분자 (예: 천공), 효소 결합 면역 스팟 (elispot) 분석 및 ex 생체 내 세포 독성 분석. 1990 년대에 개시 된 이래, carboxyfluorescein 교제 에스테 르 (cfse) 기반 생체 살해 분석 법은 항 바이러스 ctls에 의해 매개 된 세포 독성 반응의 평가를 가능 하 게 하였다29,30 , 31, 항 암 ctls16,32천연 킬러 (NK) 세포33, 당 지질 반응성 불변 천연 킬러 t(nkt) 세포34및 기존 및 드 노 보 공여 특이 적 alloantibodies 체26. 따라서, 그들의 애플리케이션은 종양 면역학 및 면역 요법, 항 병원 체 내성, 및 예방 및 치료 백신 설계 분야에서 일 하는 조사자를 포함 하지만이에 국한 되지 않는 넓은 독자에 게 관심을 가질 수 있다.
전형적인 시나리오에서 세포 매개 세포 독성을 평가 하기 위해, 무관 한 Ag 또는 동족 Ag (들)를 표시 하는 순진한 비장 세포의 2 개의 인구는 CFSE의 2 개의 다른 복용량으로, 동등한 숫자로 혼합 되 고 순진한 (통제) 또는 살인자에 주입 됩니다 셀-하 보링 마우스. 각 대상 모집단의 유무는 유 세포 분석기에 의해 검사 됩니다.
우리는 항 바이러스 및 항 종양 TCD8 반응에서 면역 우세에 대 한 우리의 연구에서 생체 사 멸 분석에 최적화 되 고 사용 되었습니다. 여기에서, 우리는 다른 실험 시스템에서 유사한 조사를 위해 쉽게 채택 될 수 있는 T Ag에 피토 프에 대 한 ID 및 SD TCD8 응답의 동시 평가를 위한 상세한 프로토콜을 제공 합니다. 또한 nTreg 세포 고갈 및 PD-1 봉쇄는 선택적으로 ID TCD8-및 SD tCD8유도 된 세포 독성을 향상 시킬 수 있음을 입증 하는 대표적인 결과를 제공 한다. 결국, 우리는 그들의 본질적인 한계의 일부 뿐만 아니라 생체 살해 분석의 여러 장점을 논의 할 것 이다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:872px;" width="871">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">0.25% Trypsin-EDTA (1X)</td>
			<td style="width:164px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:163px;">25200-056</td>
			<td style="width:211px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ACK Lysing Buffer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:163px;">A1049201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-mouse CD25 (clone PC-61.5.3)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BE0012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-mouse PD-1 (clone RMP1-14)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BE0146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CFSE</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>C34554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM (1X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11965-092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Wisent Bioproducts</td>
			<td>080-150</td>
			<td>Heat-inactivate prior to use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GlutaMAX (100X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HEPES (1M)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15630080</td>
			<td>10 mM final concentration</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MEM Non-Essential Amino Acids Solution (100X)&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11140-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P0781</td>
			<td>Stock is 100X</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG1 (clone KLH/G1-2-2)</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>0116-01</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG1 (clone HRPN)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BE0088</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG1 (clone TNP6A7)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BP0290</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG2a (clone 2A3)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BP0089</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI 1640 (1X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11875-093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Pyruvate (100 mM)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11360-070</td>
			<td>1 mM final concentration</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tailoring in vivo cytotoxicity assays to study immunodominance in tumor-specific cd8+ t cell responses

Carboxyfluorescein 교제 에스테 르 (CFSE) 기반 생체 내 세포 독성 분석은 종양 및 병원 균 유래 펩타이드에 대 한 나타내어 CD8+ 세포 용 분해 T 림프 구 (CTL) 반응의 민감하고 정확한 정량화를 가능 하 게 합니다. 그들은 전통적인 살인 분석에 비해 몇 가지 장점을 제공 합니다. 첫째로, 이들은 구조적으로 손상 되지 않는 이차 림프 기관 내에서, 전형적으로 비장 내에서 CTL-매개 된 세포 독성의 모니터링을 허용 한다. 둘째, CTL 반응의 프라이 밍, 이펙터 및 리콜 단계 중에 기계화 연구를 허용 합니다. 셋째, 진정한 생체 내 설정에서 백신/약물 효능 시험을 위한 유용한 플랫폼을 제공 합니다. 여기서, 우리는 모델 종양의 항 원 (Ag)의 하나 이상의 펩 티 드에 피토 프에 대하여 수반 되는 CTL 반응의 검사를 위한 최적화 된 프로토콜을 제공 하며, 즉, simian 바이러스 40 (SV40)-인코딩된 대형 T Ag (T Ag). 대부분의 다른 임상적으로 관련 된 종양 단백질과 마찬가지로, T Ag는 많은 잠재적 면역 원 성 펩 티 드를 항구. 그러나, 4 개의 이러한 펩타이드만이 C57BL/6 마우스에서 검출 가능한 CTL 반응을 유도 한다. 이러한 반응은이 강력한 시스템에서 TCD8 "면역 지배"의 기초를 형성 하는 그들의 크기에 기초 하 여 계층적 순서로 일관 되 게 배열 된다. 따라서, T Ag-특이 적 tCD8 응답의 벌크는 하나의 면역 지배적에 피토 프에 대해 초점을 맞추고 다른 3 개의에 피토 프가 인식 되 고 단지 약하게에 반응 한다. 면역 우세는 항 종양 TCD8 응답의 넓이를 타협 하 고, 그 처럼, 암을 위한 성공적인 예방 접종에 대 한 장애물로 많은 것으로 고려 됩니다. 따라서 TCD8 면역 우위를 지시 하거나 형성 하는 세포 및 분자 요인과 메커니즘을 이해 하는 것이 중요 하다. 여기서 설명 하는 프로토콜은 T Ag 면역 모델에서 이러한 현상에 대 한 조사에 맞춤화 되어 있지만 다른 종양 모델에서 유사한 연구로 쉽게 수정 및 확장 될 수 있습니다. 우리는 생체 내 세포 독성 분석 법을 사용 하 여 실험 면역 요법 개입의 영향을 측정할 수 있는 방법의 예를 제공 합니다.

그 결과가 도 1 에 묘사 된 실험의 목표는 nTreg 세포의 존재 및 기능이 t Ag 특이 적 tCD8의 면역 우세 계층 구조를 형성 하거나 변화 하는지 여부를 확인 하는 것 이었다. C57BL/6 마우스를 PBS 또는 0.5 mg의 안티 CD25 mAb (클론 PC 61.5.3 [PC61]) 4 일 전에 주사 한 후 그들은 2 x 107 C57SV 종양 세포를 받았다 i.p. 별도의 실험에서, 쥐 IgG1이 소 타입 제어는 PBS 대신에 사용 되었?...

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Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

종양 특이 CD8+ T 세포 반응에서 면역 우세를 연구 하기 위한 생체 내 세포 독성 분석 법

여기에서는 종양 항 원에 대 한 세포 독성 T 림프 구 (CTL) 반응에서 면역 우세의 검사를 가능 하 게 하는 유 세포 분석 기반의 생체 사 멸 분석 법을 설명 한다. 이 우아한 분석을 기계 론 적 연구와 약물 효능 테스트에 사용 하는 방법의 예를 제공 합니다.

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)-based in vivo cytotoxicity assays enable sensitive and accurate quantitation of CD8+ cytolytic T lymphocyte ...

이 분석체는 종양 항원의 두 가지 뚜렷한 펩티드 전형에 대해 T 세포 매개 세포 독성을 동시에 정량화하기 위해 사용될 수 있다. 이 분석의 생체 내 특성은 T 세포의 세포 독성 기능을 이차 림프구 기관의 그대로 아키텍처 내에서 측정할 수 있게 합니다. 또한, 관찰 된 살인은 T 세포의 절대 수의 정확한 반영이며, 단지 그들의 주파수뿐만 아니라 오해의 소지가있을 수 있습니다.이 분석은 면역 지배적이고 하위 지배적인 종양 항원에 세포 독성 T 세포 반응의 검사를 가능하게 합니다. 따라서 백신을 설계할 때 귀중한 정보와 암용 면역 치료 프로토콜을 제공합니다. 당사의 프로토콜은 CD8 T 세포 반응을 연구하도록 조정되었습니다.그러나, NK 세포 및 선천성 같은 T 림프구와 같은 다른 킬러 세포 유형에 의해 유도된 세포 독성을 측정하도록 수정될 수 있다. 이 분석법은 무균 기술, 마우스 조직 처리, 표적 세포 준비뿐만 아니라 꼬리 정맥 주사에 대한 전문 지식에 대한 경험이 필요합니다. 하나는 생체 내 살인 분석기를 시도하기 전에 이 기술 세트를 획득해야합니다.T-항원 양성 부착 종양 세포주가 완전히 컨서우리 또는 약간 과도하게 수렴되면, 살균, 따뜻한 PBS로 단층을 부드럽게 헹구고, 생체 안전 캐비닛에서 0.25%의 트립신 EDTA로 종양 세포를 분리한다. 배양물의 측면을 여러 번 탭하여 나머지 부착 세포를 방출하고 DMEM 배지의 5밀리리터를 첨가하여 약 5분 후에 반응을 중지한다. 70마이크로미터-모공 세포 여과기를 통해 셀 서스펜션을 50밀리리터 원유형 튜브로 필터링하기 전에 셀 용액을 몇 번 피펫합니다.원심분리에 의해 세포를 수집하고, 동일한 조건하에서 세 개의 세개의 세차재의 첫 번째에 대한 멸균, 감기 PBS의 10 밀리리터에서 펠릿을 재중단한다. 세 번째 세척 후, 멸균 PBS 농도의 밀리리터 당 7개의 세포에 4회 10번으로 세포를 재보중단하고, T-항원 양성 종양 세포 현탁액의 500마이크로리터를 각 6-12주 된 C57 Black 6 마우스 수신자에게 내회음부한다. 대상 비장 제제의 경우 안락사 된 기증자 마우스를 경향이있는 위치에 놓고 동물을 70 %에탄올로 분사하십시오.멸균 집게와 가위를 사용하여 피부를 들어 올리고 작은 복부 중간 선 절개를합니다. 피부와 같은 방식으로 피부를 잘라 내어 회중을 노출시키고, 집게를 사용하여 내부 장기를 잡지 않고 텐트와 같은 방식으로 회대를 끌어 올수 있습니다. 복막 구멍을 열어 복막 구멍을 노출시키고 비장을 멸균 PBS 5 밀리리터를 포함하는 15 밀리리터 Dounce 조직 분쇄기로 부드럽게 옮겨냅니다.플런저를 사용하여 비장 조직이 적색 균질 세포 현탁액으로 방출될 때까지 수동 압력을 적용하고 동종을 15 밀리리터 튜브로 옮긴다. 원심분리에 의해 현탁액을 수집하고, 적혈구를 제거하기 위해 염화 칼륨 분해 칼륨 버퍼의 4 밀리리터에서 펠릿을 다시 분리합니다. 4분 후, 완전한 배지의 8밀리리터로 공정을 중단하고, 70마이크로미터-모공 세포 여과기를 통해 새로운 50밀리리터 튜브로 세포 현탁액을 걸러냅니다.백혈구를 적혈구 파편으로부터 원심분리하여 분리하고, 완전한 배지의 12 밀리리터에서 펠릿을 재보펜한다. 그런 다음 비장 분리액을 3개의 동일한 4밀리리터 알리쿼트로 분할합니다. 표적 비장 세포의 펩티드 코딩을 위해, 1개의 비장 구균 알리코와 무관펩티드의 1개의 마이크로몰라, 1개의 마이크로몰라를 가진 1개의 알리코트, 그리고 사이트 IV 펩티드의 1개의 마이크로몰라를 37°C와 5%의 이산화탄소에서 1시간 동안 1개의 알리쿼트를 가진 펄스.인큐베이션의 끝에서, 원심분리에 의해 과잉 펩티드를 제거하고 튜브 당 세척당 12 밀리리터, 차가운 PBS에서 펩티드 펄스 비백구를 두 번 세척한다. 두 번째 세척 후 튜브 당 신선하고 멸균 된 PBS의 4 밀리리터로 세포를 다시 중단하십시오. 각각 025, 0.25 및 2마이크로몰러 CFSE를 무관, 사이트 I 및 Site IV 펩티드 펄스 비장 염현에 추가합니다.5분마다 한 번씩 수동 반전으로 15분간 튜브를 섭씨 37도에 놓습니다. 인큐베이션의 끝에서, CFSE 반응을 중지하고 PBS와 각 튜브에 최종 볼륨을 가지고 각 튜브에 열 비활성화 태아 소 혈청의 세 밀리리터를 추가합니다. 그런 다음 세척당 신선하고 멸균된 PBS의 12 밀리리터에서 2개의 세척에 대해 원심분리에 의해 염료 표지 세포를 수집합니다.대상 비장 세포의 적절한 CFSE 라벨링을 확인하려면 PBS의 3 밀리리터로 펠릿을 다시 중단하고 부드러운 소용돌이와 혼합하십시오. 각 CFSE 표지된 세포 현탁액에서 10마이크로리터를 개별 5밀리리터 라운드 바닥 폴리스티렌 형광 활성화 셀 분류 또는 FACS 튜브로 전송하고 PBS를 함유하고 488나노미터 레이저가 장착된 유동 사이토미터에 튜브를 로드합니다. 유동 세포계 소프트웨어에서, 형광 1 채널의 림프구 게이트 내에 떨어지는 5, 000 이벤트를 획득하기 전에 세포의 전방 분산 및 측면 산란 특성에 기초하여 림프구 게이트를 생성한다.부모 CFSE 양성 인구 내에서 CFSE-로우, CFSE-중간 체및 CFSE 높은 하위 모집단을 식별하기 위해 추가 히스토그램 게이트를 그립니다. 그런 다음 표지된 세포의 다른 두 튜브에 대해 세 개의 게이트 내에서 동일하거나 거의 동등한 이벤트 번호를 확인합니다. 표적 세포의 주입을 위해, 먼저 소스 튜브를 부드럽게 소용돌이시키고 3개의 CFSE 표지된 세포 현탁액을 동일한 비율로 새로운 튜브로 풀링합니다.멸균 PBS로 튜브 함량을 위로하고 계산을 위한 원심분리에 의해 세포를 수집합니다. 그런 다음 수신자 농도당 PBS의 200 마이크로리터당 7개의 혼합 표적 세포에 10배씩 부피를 조정하고, 각 수신자 C57 Black 6 마우스의 꼬리 정맥에 세포 현탁액의 200 마이크로리터 부피를 주입한다. 주사 후 2~4시간 후에 각 수용인 동물의 비장을 제거하고 처리하며 비장당 PBS의 3밀리리터에서 격리된 백혈구를 재중단한다.각 처리된 비장에서 7개의 세포로 약 10번을 깨끗한 FACS 튜브로 옮기고, CFSE-low, 중간 및 높은 표적 세포 집단을 게이트하는 것으로 입증된 바와 같이 흐름 사이토미터상 세포를 즉시 실행한다. 그런 다음 형광 1 채널에서 총 2, 000 CFSE-로우 이벤트를 획득하고 텍스트에 상세한 수식에 따라 각 코그네이트 표적 세포 집단의 특정 용액을 계산합니다. 본 대표적인 실험에서, 항CD25 단클론 항체를 주입한 마우스에서 자연적으로 발생하는 규제 T세포의 고갈의 성공은 유동 세포측정에 의해 확인되었다.예상대로, 대조군 및 코그네이트 표적 세포에 대응하는 거의 동등한 피크는 순진한 마우스에서 검출되었다. 대조적으로, 사이트-IV 표시 표적 세포는 항 CD25 단클론 항체 또는 PBS를 가진 그들의 이전 처리에 관계없이 T-항원 프라이밍 마우스에서 거의 완전히 결석했습니다. 흥미롭게도, 자연발생적인 T 레지 세포 고갈은 부위-I 펄스 표적 세포의 생체 내 세포 독성 T-림프구 매개 용액으로 증강된 항 CD25 단클론 항체에 의한 고갈.이 두 번째 대표적인 조사에서, 프로그램된 죽음 1 봉쇄는 서브 지배적인 CD8 양성 T 세포 사이트 1개 및 2-슬래시-3특이적 반응을 강화하여, 프로그램된 죽음 리간드 1 상호작용에 간섭하는 것이 항암 CD8 양성 T 세포 반응에서 에피토프 확산을 유도할 수 있음을 시사한다. CFSE로 기증자 세포를 라벨링할 때 농도가 정확한지 확인하는 것이 중요합니다. 그렇지 않으면 히스토그램 피크가 겹쳐서 필요한 계산과 데이터 해석이 불가능하지는 않더라도 어려울 수 있습니다.동일한 숙주에서 펩타이드 및 비펩티드 항원을 인식하는 다른 킬러 세포 유형에 의해 유도된 이펙터 기능을 정량화하기 위해 생체 내 세포 독성 작용체에서 최적화하는 것이 중요합니다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

마우스 T - 세포에서 T - 세포 수용체의 Retroviral 전달

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

연구

면역학 및 감염병학

Competitive Homing Assays to Study Gut-tropic T Cell Migration

굿 - 트로픽 T 세포의 마이 그 레이션을 공부 경쟁력 호밍 Assays

In order to exert their function lymphocytes need to leave the blood and migrate into different tissues in the body. Lymphocyte adhesion to endothelial ...

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

기본 인간 T 세포 piggyBac Transposon 시스템 변경

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

Quantitative High-throughput Single-cell Cytotoxicity Assay For T Cells

T 세포 양적 높은 처리량 단일 세포 세포 독성 분석

Cancer immunotherapy can harness the specificity of  immune response to target and eliminate tumors. Adoptive cell therapy (ACT)  based on the adoptive ...

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

T 세포 반응의 평가를위한 형광 대상 배열의 사용<em&gt; 생체 내</em

The ability to monitor T cell responses in vivo is important for the development of our understanding of the immune response and the design of ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

마우스에 동종 CD4 T 세포 반응을 연구하기 위해 테일 피부 이식

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Whole-animal Imaging and Flow Cytometric Techniques for Analysis of Antigen-specific CD8+ T Cell Responses after Nanoparticle Vaccination

나노 입자 백신 접종 후 분석 항원 특이 CD8 + T 세포 반응에 대한 전체 동물 이미징 및 유세포 기술

Traditional vaccine adjuvants, such as alum, elicit suboptimal CD8+ T cell responses. To address this major challenge in vaccine development, various ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

살 모 넬 라 typhimurium의 절연-대 식 세포에서 Phagosomes를 포함 하

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

인간 T 세포 회수 응답에서 Vivo에서 공부 하는 흡입 물집 프로토콜

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Thymus 종속 및 독립 Thymus 면역 글로불린 Isotype 반응 효소 연결 된 Immunosorbent 분석 결과 사용 하 여 마우스의 특성

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...