Name: tailoring in vivo cytotoxicity assays to study immunodominance in tumor-specific cd8+ t cell responses
Uploaded: 2019-05-06T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av Canadian Institutes of Health Research (CIHR) tilskudd MOP-130465 og PJT-156295 til SMMH. JC er delvis støttet av en dronning Elizabeth II Graduate stipend i vitenskap og teknologi fra Ontario departementet for opplæring, høyskoler og universiteter. CEM var en mottaker av en Alexander Graham Bell Canada Graduate Scholarship (doktorgrads) fra Natural Sciences og engineering Research Council of Canada (NSERC).

Eksperimentene beskrevet her følger dyr bruker protokoller godkjent av institusjonelle enheter og overholdt etablerte nasjonale retningslinjer.
1. inoculation av C57BL/6 mus med T AG-uttrykke tumor celler
<ol><li>Grow den SV40-transformert fibrosarcoma cellelinje C57SV (eller en lignende T AG+ tilhenger cellelinje) i Dulbecco ' s modifisert Eagle ' s medium (DMEM) med 4,5 g/l D-glukose og L-glutamin (1x) og supplert med 1 mm natrium pyruvat og 10% varme-deaktivert Foster storfe s...

<ol>
	<li>Yewdell, J. W., Bennink, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominance+in+major+histocompatibility+complex+class+I-restricted+T+lymphocyte+responses.">Immunodominance in major histocompatibility complex class I-restricted T lymphocyte responses.</a> Annual Review of Immunology. 17, 51-88 (1999).</li><li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+in+the+immunodominance+hierarchy+in+secondary+CD8++T+cell+responses+to+influenza+A+virus:+roles+for+cross-presentation+and+lysis-independent+immunodomination.">Reversal in the immunodominance hierarchy in secondary CD8+ T cell responses to influenza A virus: roles for cross-presentation and lysis-independent immunodomination.</a> The Journal of Immunology. 173 (8), 5021-5027 (2004).</li><li>Otahal, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inefficient+cross-presentation+limits+the+CD8++T+cell+response+to+a+subdominant+tumor+antigen+epitope.">Inefficient cross-presentation limits the CD8+ T cell response to a subdominant tumor antigen epitope.</a> The Journal of Immunology. 175 (2), 700-712 (2005).</li><li>Lauron, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-priming+induces+immunodomination+in+the+presence+of+viral+MHC+class+I+inhibition.">Cross-priming induces immunodomination in the presence of viral MHC class I inhibition.</a> PLoS Pathogens. 14 (2), e1006883 (2018).</li><li>Crowe, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+antigen+presentation+regulates+the+changing+patterns+of+CD8++T+cell+immunodominance+in+primary+and+secondary+influenza+virus+infections.">Differential antigen presentation regulates the changing patterns of CD8+ T cell immunodominance in primary and secondary influenza virus infections.</a> The Journal of Experimental Medicine. 198 (3), 399-410 (2003).</li><li>Probst, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominance+of+an+antiviral+cytotoxic+T+cell+response+is+shaped+by+the+kinetics+of+viral+protein+expression.">Immunodominance of an antiviral cytotoxic T cell response is shaped by the kinetics of viral protein expression.</a> The Journal of Immunology. 171 (10), 5415-5422 (2003).</li><li>Gileadi, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+an+immunodominant+CTL+epitope+is+affected+by+proteasome+subunit+composition+and+stability+of+the+antigenic+protein.">Generation of an immunodominant CTL epitope is affected by proteasome subunit composition and stability of the antigenic protein.</a> The Journal of Immunology. 163 (11), 6045-6052 (1999).</li><li>Zanker, D., Waithman, J., Yewdell, J. W., Chen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mixed+proteasomes+function+to+increase+viral+peptide+diversity+and+broaden+antiviral+CD8++T+cell+responses.">Mixed proteasomes function to increase viral peptide diversity and broaden antiviral CD8+ T cell responses.</a> The Journal of Immunology. 191 (1), 52-59 (2013).</li><li>Deng, Y., Yewdell, J. W., Eisenlohr, L. C., Bennink, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MHC+affinity,+peptide+liberation,+T+cell+repertoire,+and+immunodominance+all+contribute+to+the+paucity+of+MHC+class+I-restricted+peptides+recognized+by+antiviral+CTL.">MHC affinity, peptide liberation, T cell repertoire, and immunodominance all contribute to the paucity of MHC class I-restricted peptides recognized by antiviral CTL.</a> The Journal of Immunology. 158 (4), 1507-1515 (1997).</li><li>Chen, W., Khilko, S., Fecondo, J., Margulies, D. H., McCluskey, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determinant+selection+of+major+histocompatibility+complex+class+I-restricted+antigenic+peptides+is+explained+by+class+I-peptide+affinity+and+is+strongly+influenced+by+nondominant+anchor+residues.">Determinant selection of major histocompatibility complex class I-restricted antigenic peptides is explained by class I-peptide affinity and is strongly influenced by nondominant anchor residues.</a> The Journal of Experimental Medicine. 180 (4), 1471-1483 (1994).</li><li>Kotturi, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naive+precursor+frequencies+and+MHC+binding+rather+than+the+degree+of+epitope+diversity+shape+CD8++T+cell+immunodominance.">Naive precursor frequencies and MHC binding rather than the degree of epitope diversity shape CD8+ T cell immunodominance.</a> The Journal of Immunology. 181 (3), 2124-2133 (2008).</li><li>Haeryfar, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Terminal+deoxynucleotidyl+transferase+establishes+and+broadens+antiviral+CD8++T+cell+immunodominance+hierarchies.">Terminal deoxynucleotidyl transferase establishes and broadens antiviral CD8+ T cell immunodominance hierarchies.</a> The Journal of Immunology. 181 (1), 649-659 (2008).</li><li>Leon-Ponte, M., Kasprzyski, T., Mannik, L. A., Haeryfar, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+immunodominance+hierarchies+of+influenza+A+virus-specific+H-2(b)-restricted+CD8++T+cells+in+the+absence+of+terminal+deoxynucleotidyl+transferase.">Altered immunodominance hierarchies of influenza A virus-specific H-2(b)-restricted CD8+ T cells in the absence of terminal deoxynucleotidyl transferase.</a> Immunological Investigations. 37 (7), 714-725 (2008).</li><li>Kedl, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cells+compete+for+access+to+antigen-bearing+antigen-presenting+cells.">T cells compete for access to antigen-bearing antigen-presenting cells.</a> The Journal of Experimental Medicine. 192 (8), 1105-1113 (2000).</li><li>Kastenmuller, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-competition+of+CD8++T+cells+shapes+the+immunodominance+hierarchy+during+boost+vaccination.">Cross-competition of CD8+ T cells shapes the immunodominance hierarchy during boost vaccination.</a> The Journal of Experimental Medicine. 204 (9), 2187-2198 (2007).</li><li>Memarnejadian, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-1+Blockade+Promotes+Epitope+Spreading+in+Anticancer+CD8(+)+T+Cell+Responses+by+Preventing+Fratricidal+Death+of+Subdominant+Clones+To+Relieve+Immunodomination.">PD-1 Blockade Promotes Epitope Spreading in Anticancer CD8(+) T Cell Responses by Preventing Fratricidal Death of Subdominant Clones To Relieve Immunodomination.</a> The Journal of Immunology. 199 (9), 3348-3359 (2017).</li><li>Haeryfar, S. M., DiPaolo, R. J., Tscharke, D. C., Bennink, J. R., Yewdell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells+suppress+CD8++T+cell+responses+induced+by+direct+priming+and+cross-priming+and+moderate+immunodominance+disparities.">Regulatory T cells suppress CD8+ T cell responses induced by direct priming and cross-priming and moderate immunodominance disparities.</a> The Journal of Immunology. 174 (6), 3344-3351 (2005).</li><li>Rytelewski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+immunodominant+antitumor+and+antiviral+CD8++T+cell+responses+by+indoleamine+2,3-dioxygenase.">Suppression of immunodominant antitumor and antiviral CD8+ T cell responses by indoleamine 2,3-dioxygenase.</a> PLoS One. 9 (2), e90439 (2014).</li><li>Maleki Vareki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+regulation+of+simultaneous+antitumor+and+alloreactive+CD8(+)+T-cell+responses+in+the+same+host+by+rapamycin.">Differential regulation of simultaneous antitumor and alloreactive CD8(+) T-cell responses in the same host by rapamycin.</a> American Journal of Transplantation. 12 (1), 233-239 (2012).</li><li>Irvine, K., Bennink, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+influencing+immunodominance+hierarchies+in+TCD8++-mediated+antiviral+responses.">Factors influencing immunodominance hierarchies in TCD8+ -mediated antiviral responses.</a> Expert Review of Clinical Immunology. 2 (1), 135-147 (2006).</li><li>Grossmann, M. E., Davila, T., Celis, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Avoiding+tolerance+against+prostatic+antigens+with+subdominant+peptide+epitopes.">Avoiding tolerance against prostatic antigens with subdominant peptide epitopes.</a> Journal of Immunotherapy. 24 (3), 237-241 (2001).</li><li>Schreiber, H., Wu, T. H., Nachman, J., Kast, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominance+and+tumor+escape.">Immunodominance and tumor escape.</a> Seminars in Cancer Biology. 12 (1), 25-31 (2002).</li><li>Mylin, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitation+of+CD8(+)+T-lymphocyte+responses+to+multiple+epitopes+from+simian+virus+40+(SV40)+large+T+antigen+in+C57BL/6+mice+immunized+with+SV40,+SV40+T-antigen-transformed+cells,+or+vaccinia+virus+recombinants+expressing+full-length+T+antigen+or+epitope+minigenes.">Quantitation of CD8(+) T-lymphocyte responses to multiple epitopes from simian virus 40 (SV40) large T antigen in C57BL/6 mice immunized with SV40, SV40 T-antigen-transformed cells, or vaccinia virus recombinants expressing full-length T antigen or epitope minigenes.</a> Journal of Virology. 74 (15), 6922-6934 (2000).</li><li>Fu, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+endoplasmic+reticulum-targeting+signal+sequence+enhances+the+immunogenicity+of+an+immunorecessive+simian+virus+40+large+T+antigen+cytotoxic+T-lymphocyte+epitope.">An endoplasmic reticulum-targeting signal sequence enhances the immunogenicity of an immunorecessive simian virus 40 large T antigen cytotoxic T-lymphocyte epitope.</a> Journal of Virology. 72 (2), 1469-1481 (1998).</li><li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-priming+of+CD8++T+cells+by+viral+and+tumor+antigens+is+a+robust+phenomenon.">Cross-priming of CD8+ T cells by viral and tumor antigens is a robust phenomenon.</a> European Journal of Immunology. 34 (1), 194-199 (2004).</li><li>Memarnejadian, A., Meilleur, C. E., Mazzuca, D. M., Welch, I. D., Haeryfar, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Alloantibody-Mediated+Cytotoxicity+In+Vivo.">Quantification of Alloantibody-Mediated Cytotoxicity In Vivo.</a> Transplantation. 100 (5), 1041-1051 (2016).</li><li>Aichele, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide+antigen+treatment+of+naive+and+virus-immune+mice:+antigen-specific+tolerance+versus+immunopathology.">Peptide antigen treatment of naive and virus-immune mice: antigen-specific tolerance versus immunopathology.</a> Immunity. 6 (5), 519-529 (1997).</li><li>Oehen, S., Brduscha-Riem, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+naive+CTL+to+effector+and+memory+CTL:+correlation+of+effector+function+with+phenotype+and+cell+division.">Differentiation of naive CTL to effector and memory CTL: correlation of effector function with phenotype and cell division.</a> The Journal of Immunology. 161 (10), 5338-5346 (1998).</li><li>Coles, R. M., Mueller, S. N., Heath, W. R., Carbone, F. R., Brooks, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progression+of+armed+CTL+from+draining+lymph+node+to+spleen+shortly+after+localized+infection+with+herpes+simplex+virus+1.">Progression of armed CTL from draining lymph node to spleen shortly after localized infection with herpes simplex virus 1.</a> The Journal of Immunology. 168 (2), 834-838 (2002).</li><li>Barber, D. L., Wherry, E. J., Ahmed, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+edge:+rapid+in+vivo+killing+by+memory+CD8+T+cells.">Cutting edge: rapid in vivo killing by memory CD8 T cells.</a> The Journal of Immunology. 171 (1), 27-31 (2003).</li><li>Meilleur, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+superantigens+expand+and+activate,+rather+than+delete+or+incapacitate,+preexisting+antigen-specific+memory+CD8++T+cells.">Bacterial superantigens expand and activate, rather than delete or incapacitate, preexisting antigen-specific memory CD8+ T cells.</a> The Journal of Infectious Diseases. , (2018).</li><li>Goldszmid, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+charged+with+apoptotic+tumor+cells+induce+long-lived+protective+CD4++and+CD8++T+cell+immunity+against+B16+melanoma.">Dendritic cells charged with apoptotic tumor cells induce long-lived protective CD4+ and CD8+ T cell immunity against B16 melanoma.</a> The Journal of Immunology. 171 (11), 5940-5947 (2003).</li><li>Oberg, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+or+mismatch+of+MHC+class+I+is+sufficient+to+trigger+NK+cell-mediated+rejection+of+resting+lymphocytes+in+vivo+-+role+of+KARAP/DAP12-dependent+and+-independent+pathways.">Loss or mismatch of MHC class I is sufficient to trigger NK cell-mediated rejection of resting lymphocytes in vivo - role of KARAP/DAP12-dependent and -independent pathways.</a> European Journal of Immunology. 34 (6), 1646-1653 (2004).</li><li>Wingender, G., Krebs, P., Beutler, B., Kronenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen-specific+cytotoxicity+by+invariant+NKT+cells+in+vivo+is+CD95/CD178-dependent+and+is+correlated+with+antigenic+potency.">Antigen-specific cytotoxicity by invariant NKT cells in vivo is CD95/CD178-dependent and is correlated with antigenic potency.</a> The Journal of Immunology. 185 (5), 2721-2729 (2010).</li><li>Brinster, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+harboring+SV40+T-antigen+genes+develop+characteristic+brain+tumors.">Transgenic mice harboring SV40 T-antigen genes develop characteristic brain tumors.</a> Cell. 37 (2), 367-379 (1984).</li><li>Tatum, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T+cells+targeting+a+single+immunodominant+epitope+are+sufficient+for+elimination+of+established+SV40+T+antigen-induced+brain+tumors.">CD8+ T cells targeting a single immunodominant epitope are sufficient for elimination of established SV40 T antigen-induced brain tumors.</a> The Journal of Immunology. 181 (6), 4406-4417 (2008).</li><li>Schell, T. D., Tevethia, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+advanced+choroid+plexus+tumors+in+SV40+T+antigen+transgenic+mice+following+priming+of+donor+CD8(+)+T+lymphocytes+by+the+endogenous+tumor+antigen.">Control of advanced choroid plexus tumors in SV40 T antigen transgenic mice following priming of donor CD8(+) T lymphocytes by the endogenous tumor antigen.</a> The Journal of Immunology. 167 (12), 6947-6956 (2001).</li><li>Greenberg, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostate+cancer+in+a+transgenic+mouse.">Prostate cancer in a transgenic mouse.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92 (8), 3439-3443 (1995).</li></ol>

CFSE-basert in vivo cytotoksisitet analyser tilbyr flere fordeler i forhold til tradisjonelle draps analyser som radioaktivt krom (51CR) Release og fargemetrisk melkesyre DEHYDROGENASE (LDH) Utgivelses analyser. Først tillater de overvåking av CTL funksjon i en arkitektonisk intakt sekundære lymfoide organ.
For det andre gjenspeiler den spesifikke drapet på målcellene i in vivo cytotoksisitet analysene det absolutte antallet AG-spesifikke TCD8, som vanligvis er, men ...

Konvensjonelle CD8+ t celler (TCD8) spille viktige deler i anticancer uimottakelig overvåking. De primært fungere i egenskap av cytolytisk T-lymfocytter (CTLer) som anerkjenner tumor spesifikke eller-assosiert peptid antigener (AGS) vises innenfor den lukkede kløft av store histocompatibility kompleks (MHC) klasse I molekyler. Fullt bevæpnet CTLer utnytte sine cytotoksisk Arsenal å ødelegge ondartede celler. Anticancer TCD8 kan påvises i sirkulasjon eller til og med innenfor primære og metastatisk masser av mange kreftpasienter og tumor-bærende dyr. Men de er ofte anergic eller utmattet og ikke klarer å utrydde kreft. Derfor er mange immunotherapeutic modaliteter utformet for å øke anticancer TCD8 frekvenser og å gjenopprette og øke deres funksjoner.
Tumor proteiner havn mange peptider, hvorav noen kan være immunogenic og potensielt immunoprotective. Men målbare TCD8 svar er elicited med varierende magnitudes mot noen peptider bare. Dette skaper en "immunodominance hierarki" blant TCD8 kloner1. Følgelig immunodominant (ID) TCD8 okkupere fremtredende hierarkiske rekkene, som vanligvis bedømmes av deres overflod. TCD8 celler som t celle RESEPTOR (TCR) er spesifikk for SUBDOMINANT (SD) epitopes forekomme i lavere frekvenser. Vi og andre har identifisert noen av faktorene som dikterer eller former immunodominance i TCD8 svar. Disse inkluderer blant annet modus for AG presentasjon til naiv TCD8 (dvs. direktepresentasjon, kryss-presentasjon, cross-dressing)2,3,4, den type Ag-presentere celler (APCs) deltakelse i TCD8 aktivisering5, overflod og stabilitet av protein AGS og effektivitet og Kinetics av deres degradering av proteasomes7,8, den relativ selektivitet av transporter assosiert med AG Processing (trykk) for peptider9, affinitet av frigjort peptider for MHC i molekyler9,10, tilstedeværelse, forløper frekvenser og TCR mangfold av beslektet tCD8 i T celle Pools11,12,13, kryss-konkurranse blant T celler for tilgang til APCs14,15, og fratricidal kapasitet på TCD8 kloner16. I tillegg er TCD8 immunodominance utsatt for immunoregulatory mekanismer formidlet av flere Suppressor celletyper som naturlig forekommende regulatoriske T (nTreg) celler17, cellen overflaten co-hemmende molekyl programmert Death-1 (PD-1)16, og visse intracellulære enzymer som indoleamine 2, 3-DIOXYGENASE (Ido)18 og pattedyr målet for Rapamycin (mTOR)19. Det er imidlertid viktig å merke seg at de ovennevnte faktorene ikke alltid fullt ut står for immunodominance.
Bortsett fra den grunnleggende biologi av TCD8 immunodominance, undersøkelse av dette spennende fenomenet har viktige implikasjoner i kreft immunologi og immunterapi. Først en ID-status ikke nødvendigvis konferere på en gitt TCD8 klone evnen til å forebygge tumor initiering eller progresjon20. Hvorvidt og hvordan ID og SD TCD8 bidra til antitumor immunitet kan være avhengig av type og omfanget av kreft og det eksperimentelle systemet ansatt. For det andre er det antatt at ID TCD8 kloner kan være "for synlig" for immunsystemet og følgelig mer utsatt for sentrale og/eller perifere toleranse mekanismer16,21. Tredje, heterogeneic svulster kan inneholde neoplastic celler som unngår påvisning av mange, om ikke de fleste, CTLer ved å vise bare et smalt spektrum av peptid: MHC komplekser. Under disse omstendighetene, TCD8 svar av utilstrekkelig bredde er sannsynlig å ha råd til slike tumorceller en overlevelse fordel, og dermed poten sine utvekst22. Det er for de ovennevnte grunnene til at mange ser immunodominance som et hinder for vellykket TCD8-basert vaksinasjon og behandling mot kreft.
Inoculation av C57BL/6 mus med Simian virus 40 (SV40)-transformert celler som uttrykker store tumor AG (T AG) gir et kraftig prekliniske system for å studere TCD8 immunodominance. Denne modellen tilbyr flere fordeler. For det første er peptid-epitopes av denne klinisk relevante oncoprotein godt karakterisert i denne muse belastningen23 (tabell 1). For det andre, T AG epitopes, som kalles områder I, II/III, IV og V, utløser TCD8 svar som er konsekvent arrangert i følgende hierarkisk rekkefølge: site IV > > området jeg ≥ site II/III > &Gt; område V. Følgelig, område IV-spesifikke TCD8 Monter den mest robuste responsen til T AG. I kontrast, nettsteder I og II/III er subdominant, og nettstedet V-spesifikke TCD8 er minst rikelig og vanligvis bare oppdages i fravær av respons til andre epitopes23,24. Tredje, T AG+ tumor cellelinje benyttet i protokollen beskrevet her, nemlig C57SV fibrosarcoma celler, og de som brukes i våre tidligere undersøkelser16,17,18,19 ,25,26, blir forvandlet med subgenomic SV40 fragmenter25. Derfor er de ikke i stand til å montere og frigi SV40 virions som potensielt kan infisere verten APCs. I tillegg C57SV celler er blottet for klassiske costimulatory molekyler som CD80 (B7-1), CD86 (B7-2), og CD137 ligand (4-1BBL)16. Attributtene ovenfor gjør disse linjene ideelle for undersøkelse av in vivo TCD8 aktivering via kryss-grunning. Cross-priming er en viktig vei i inducing TCD8 svar, spesielt de lansert mot tumorceller av ikke-blodkreft opprinnelse som ikke direkte Prime naiv T-celler25.
Antitumor TCD8 frekvenser og/eller funksjoner kan OVERVÅKES av MHC jeg tetramer farging, intracellulære farging for effektor cytokiner (f. eks, INTERFERON [IFN]-γ) eller lytisk molekyler (f. eks, perforin), enzym-knyttet Immunospot (ELISpot) analyser og ex vivo cytotoksisitet analyser. Siden oppstarten i 1990-årene27,28, carboxyfluorescein succinimidyl Ester (CFSE)-basert in vivo drap analysene har aktivert evaluering av cytotoksisk svar formidlet av antiviral CTLer29,30 , 31, antitumor CTLer16,32, Natural Killer (NK) celler33, glycolipid-reaktiv invariant Natural killer T (iNKT) celler34, og eksisterende og de Novo donor-spesifikke alloantibodies26. Derfor kan deres programmer være av interesse for et bredt lesekretsen, inkludert men ikke begrenset til etterforskere som arbeider i de områdene av tumor immunologi og immunterapi, anti-patogen immunitet, og forebyggende og terapeutiske vaksine design.
For å vurdere celle-mediert cytotoksisitet i typiske scenarier, to populasjoner av naive splenocytes som viser enten en irrelevant AG eller en beslektet AG (s) er merket med to forskjellige doser av CFSE, blandet i like tall og injisert i naiv (kontroll) eller killer celle-harboring mus. Tilstedeværelsen/fraværet av hver mål populasjon undersøkes deretter av strømnings flowcytometri.
Vi har optimalisert og ansatt i vivo Killing analyser i våre studier på immunodominance i både antivirale og antitumor TCD8 svar12,16,17. Her gir vi en detaljert protokoll for samtidig vurdering av ID og SD TCD8 svar til T AG epitopes, som lett kan vedtas for lignende undersøkelser i andre eksperimentelle systemer. Vi gir også representative resultater som viser at nTreg celle tømming og PD-1 blokade kan selektivt forbedre ID TCD8-og SD tCD8-indusert cytotoksisitet, henholdsvis. På slutten, vil vi diskutere flere fordeler med in vivo drap analyser samt noen av deres iboende begrensninger.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:872px;" width="871">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">0.25% Trypsin-EDTA (1X)</td>
			<td style="width:164px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:163px;">25200-056</td>
			<td style="width:211px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ACK Lysing Buffer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:163px;">A1049201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-mouse CD25 (clone PC-61.5.3)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BE0012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-mouse PD-1 (clone RMP1-14)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BE0146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CFSE</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>C34554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM (1X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11965-092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Wisent Bioproducts</td>
			<td>080-150</td>
			<td>Heat-inactivate prior to use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GlutaMAX (100X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HEPES (1M)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15630080</td>
			<td>10 mM final concentration</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MEM Non-Essential Amino Acids Solution (100X)&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11140-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P0781</td>
			<td>Stock is 100X</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG1 (clone KLH/G1-2-2)</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>0116-01</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG1 (clone HRPN)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BE0088</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG1 (clone TNP6A7)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BP0290</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG2a (clone 2A3)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BP0089</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI 1640 (1X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11875-093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Pyruvate (100 mM)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11360-070</td>
			<td>1 mM final concentration</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tailoring in vivo cytotoxicity assays to study immunodominance in tumor-specific cd8+ t cell responses

Carboxyfluorescein succinimidyl Ester (CFSE)-basert in vivo cytotoksisitet analyser muliggjøre sensitiv og nøyaktig kvantifisering av CD8+ cytolytisk T-LYMFOCYTTER (CTL) respons elicited mot tumor-og patogen-avledede peptider. De tilbyr flere fordeler fremfor tradisjonelle draps analyser. Først tillater de overvåking av CTL-mediert cytotoksisitet innen arkitektonisk intakt sekundære lymfoide organer, vanligvis i milten. For det andre tillater de for mekanistisk studier under priming, effektor og tilbakekalling faser av CTL svar. For det tredje gir de nyttige plattformer for vaksine/legemiddel effekt testing i en virkelig in vivo-innstilling. Her gir vi en optimalisert protokoll for undersøkelse av samtidig CTL svar mot mer enn ett peptid epitope av en modell tumor antigen (AG), nemlig Simian virus 40 (SV40)-kodet store T AG (T AG). Som de fleste andre klinisk relevante tumor proteiner, havner T AG mange potensielt immunogenic peptider. Imidlertid induserer bare fire slike peptider gjenkjennelige svar på CTL i C57BL/6 mus. Disse svarene er konsekvent arrangert i en hierarkisk rekkefølge basert på deres størrelse, som danner grunnlaget for TCD8 "immunodominance" i denne kraftige systemet. Følgelig er det meste av T AG-spesifikke TCD8 Response fokusert mot en enkelt immunodominant epitope mens de tre andre epitopes er anerkjent og reagert på bare svakt. Immunodominance kompromisser bredden av antitumor TCD8 svar og er, som sådan, anses av mange som et hinder for vellykket vaksinasjon mot kreft. Derfor er det viktig å forstå de cellulære og molekylære faktorene og mekanismene som dikterer eller former TCD8 immunodominance. Protokollen vi beskriver her er skreddersydd til etterforskningen av dette fenomenet i T AG immunisering modellen, men kan lett endres og utvides til lignende studier i andre tumor modeller. Vi gir eksempler på hvordan effekten av eksperimentelle immunotherapeutic intervensjoner kan måles ved hjelp in vivo cytotoksisitet analyser.

Målet med eksperimentet som resultatene er avbildet i figur 1 var å fastslå om tilstedeværelsen og funksjonene til nTreg celler form eller endre immunodominance hierarki av t AG-spesifikke tCD8. C57BL/6 mus ble injisert IP med PBS eller med 0,5 mg en anti-CD25 mAb (klone PC-61.5.3 [PC61]) fire dager før de fikk 2 x 107 C57SV tumorceller IP I separate eksperimenter, en rotte IgG1 isotype kontroll ble brukt i stedet for PBS. Vellykket nTreg celle tømming av PC61 ble...

Watch this Scientific Journal Video about Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses at JoVE.com

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Skreddersy in vivo cytotoksisitet analyser for å studere Immunodominance i tumor spesifikke CD8+ T celle svar

Vi beskriver her en flyt flowcytometri-basert in vivo drap analysen som muliggjør undersøkelse av immunodominance i cytotoksisk T-lymfocytter (CTL) svar på en modell svulst antigen. Vi gir eksempler på hvordan denne elegante analysen kan være ansatt for mekanistisk studier og for narkotika effektivitet testing.

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)-based in vivo cytotoxicity assays enable sensitive and accurate quantitation of CD8+ cytolytic T lymphocyte ...

Denne analysen kan brukes til å kvantifisere T-cellemediert cytotoksisitet mot to forskjellige peptid epitoper av tumorantigener samtidig. In vivo-arten av denne analysen gjør det mulig for cytotoksisk funksjon av T-celler som skal måles innenfor den intakte arkitekturen til et sekundært lymfoid organ. I tillegg er drapet observert en nøyaktig refleksjon av det absolutte antallet T-celler, og ikke bare deres frekvenser, noe som kan være misvisende.Denne analysen muliggjør undersøkelse av cytotoksiske T-celleresponser på immunodominant og subdominerende tumorantigener. Det gir derfor verdifull informasjon når du designer en vaksine, samt immunterapeutiske protokoller for kreft. Vår protokoll er skreddersydd for å studere CD8 T celleresponser.Det kan imidlertid endres for å måle cytotoksisitet fremkalt av andre killer celletyper, som NK-celler og medfødte T-lymfocytter. Denne analysen krever erfaring i aseptisk teknikk, mus vev håndtering, mål celle prep, samt kompetanse i halen vene injeksjoner. Man må skaffe seg denne ferdigheten sett før du prøver in vivo drepe analysen.Når T-antigenpositiv tilhenger tumorcellelinjen har blitt helt sammenføyd eller litt over-confluent, skyll forsiktig monolayeren med steril, varm PBS og løsne tumorcellene med 0,25% trypsin EDTA i et biosikkerhetsskap. Trykk på sidene av kulturkolben flere ganger for å frigjøre de gjenværende tilhengercellene, og stopp reaksjonen etter omtrent fem minutter med tilsetning av fem milliliter DMEM-medium. Pipette celleløsningen noen ganger før du filtrerer cellesuspensjonen gjennom en 70-mikrometer-pore cellesil i et 50-milliliter konisk rør.Samle cellene ved sentrifugering, og resuspend pellet i 10 milliliter sterile, kalde PBS for den første av tre vasker under samme forhold. Etter den tredje vasken, resuspend cellene på en fire ganger 10 til de syv cellene per milliliter steril PBS konsentrasjon, og injisere 500 mikroliter av T-antigen-positiv tumor celle suspensjon intraperitoneally i hver seks til 12 uker gamle C57 Black 6 mus mottaker. For målsplenocyttforberedelse, plasser den eutaniserte donormusen i utsatt stilling, og spray dyret med 70% etanol.Ved hjelp av sterile tang og saks, løft huden og lag et lite ventralt midtlinjet snitt. Skjær huden på en krysslignende måte for å eksponere bukhinnen, og bruk tangen til å trekke opp bukhinnen på en teltlignende måte, uten å fange noen av de indre organene. Klipp opp bukhinnen for å utsette bukhulen, og overfør forsiktig milten til en 15-milliliter Dounce vevsliper som inneholder fem milliliter steril PBS.Bruk stempelet til å bruke manuelt trykk til miltvevet forsvinner til en rød homogen cellefjæring, og overfør homogenatet til et 15-milliliter rør. Samle suspensjon ved sentrifugering, og resuspend pellet i fire milliliter ammoniumklorid kalium lysin buffer for å eliminere erytrocytter. Etter fire minutter, stopp prosessen med åtte milliliter komplett medium, og filtrer cellesuspensjonen gjennom en 70-mikrometer-pore cellesil i et nytt 50-milliliter rør.Skill de hvite blodlegemene fra røde blodlegemer ved sentrifugering, og resuspend pellet i 12 milliliter av komplett medium. Deretter dele miltyte suspensjon i tre like fire milliliter aliquots. For peptid koding av målet splenocytter, puls en splenocyte aliquot med en mikromus av irrelevant peptid, en aliquot med en mikromus av Site I peptid, og en aliquot med en mikromuskel av Site IV peptid i en time ved 37 grader Celsius og 5% karbondioksid.På slutten av inkubasjonen fjerner du overflødig peptid ved sentrifugering og vasker peptidpulserte miltytter to ganger i 12 milliliter sterile, kalde PBS per vask per rør. Etter den andre vasken, resuspend cellene i fire milliliter av friske, sterile PBS per rør. Legg til 025, 0,25 og to mikromolar CFSE i henholdsvis irrelevante, site I og site IV peptid-pulserende splenocyttsuspensjoner.Plasser rørene på 37 grader Celsius i 15 minutter med manuell inversjon en gang hvert femte minutt. På slutten av inkubasjonen, tilsett tre milliliter varmeinaktivert fosterbovinserum til hvert rør for å stoppe CFSE-reaksjonen og bringe det endelige volumet i hvert rør opptil 15 milliliter med PBS. Deretter samler du de fargemerkede cellene ved sentrifugering for to vasker i 12 milliliter frisk, steril PBS per vask.For å bekrefte en tilstrekkelig CFSE merking av målet milthet, gjenbruk pellet i tre milliliter PBS og bland med mild vortexing. Overfør 10 mikroliter fra hver CFSE-merkede cellefjæring til en individuell fem milliliter rund bunn polystyren fluorescensaktivert cellesortering, eller FACS-rør, som inneholder PBS, og last røret på et strømningscytometer utstyrt med en 488-nanometer laser. I strømmen cytometer programvare, lage en lymfocytt gate basert på fremover scatter og side scatter egenskaper av cellene før du anskaffer 5000 hendelser som faller innenfor lymfocytt gate i Fluorescence 1 kanal.Innenfor den overordnede CFSE-positive befolkningen trekker du flere histogrammeporter for å identifisere CFSE-lav, CFSE-mellomliggende og CFSE-høye underpopulasjoner. Bekreft deretter et likt eller et nesten likt hendelsesnummer innenfor de tre portene for de to andre rørene av merkede celler. For injeksjon av målcellene, først forsiktig virvle kilderørene og pool de tre CFSE-merkede celle suspensjoner i et nytt rør i like forhold.Fylle opp rørinnholdet med steril PBS, og samle cellene ved sentrifugering for telling. Juster deretter volumet til en gang 10 til de syv blandede målcellene per 200 mikroliter PBS per mottakerkonsentrasjon, og injiser 200 mikrolitervolumer av cellesuspensjonen i halevenen til hver mottaker C57 Black 6-mus. To eller fire timer etter injeksjonen, fjerne og behandle milten av hver mottaker dyr som demonstrert, og gjenbruke isolerte hvite blodlegemer i tre milliliter PBS per milt.Overfør omtrent en ganger 10 til de syv cellene fra hver bearbeidet milt til et rent FACS-rør, og kjør umiddelbart cellene på strømningssytometeret som vist å gate CFSE-lav, middels og høy målcellepopulasjoner. Deretter får du totalt 2000 CFSE-lave hendelser i Fluorescence 1-kanalen, og beregner den spesifikke lysisen til hver kognatemålcellepopulasjon i henhold til formelen som er beskrevet i teksten. I dette representative eksperimentet ble suksessen til uttømmingen av naturlig forekommende regulatoriske T-celler hos mus injisert med anti-CD25 monoklonalt antistoff bekreftet av strømningscytometri.Som forventet var nesten like topper som tilsvarer kontroll- og kognatmålcellene påviselige hos naive mus. I motsetning var site-IV-visende målceller nesten helt fraværende hos T-antigen-primede mus, uavhengig av tidligere behandling med anti-CD25 monoklonalt antistoff eller PBS. Interessant, naturlig forekommende T reg celle uttømming av anti-CD25 monoklonalt antistoff forsterket in vivo cytotoksisk T-lymfocytt-mediert lysis av Site-I-pulserende målceller.I denne andre representative undersøkelsen, programmert død 1 blokade forbedret sub-dominerende CD8-positive T celle nettsteder en og to-slash-tre-spesifikke svar, noe som tyder på at forstyrrende død 1/programmert død ligand 1 interaksjoner kan indusere epitop-spredning i anti-kreft CD8-positive T celle svar. Det er viktig når du merker donorcellene dine med CFSE, sørg for at konsentrasjonene dine er nøyaktige. Ellers kan dette føre til overlappende histogrammetopper, noe som gjør dine nødvendige beregninger og datatolkning vanskelig, om ikke umulig.Det vil være viktig å optimalisere in vivo cytotoksisitetsanalyser for å kvantifisere effekteller funksjoner fremkalt av ulike killer celletyper som gjenkjenner peptid og ikke-peptid antigener i samme vert.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Competitive Homing Assays to Study Gut-tropic T Cell Migration

In order to exert their function lymphocytes need to leave the blood and migrate into different tissues in the body. Lymphocyte adhesion to endothelial ...

Quantitative High-throughput Single-cell Cytotoxicity Assay For T Cells

Kvantitativ Høy gjennomstrømming encellede Cytotoksisitet analysen for T celler

Cancer immunotherapy can harness the specificity of  immune response to target and eliminate tumors. Adoptive cell therapy (ACT)  based on the adoptive ...

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

Bruk av Fluorescent måloppstill for Vurdering av Cell Responses T<em&gt; In vivo</em

The ability to monitor T cell responses in vivo is important for the development of our understanding of the immune response and the design of ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Transplantasjon av Tail Skin Study Cell Responses Allogen CD4 T i Mus

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Whole-animal Imaging and Flow Cytometric Techniques for Analysis of Antigen-specific CD8+ T Cell Responses after Nanoparticle Vaccination

Hel-dyr Imaging og strømningscytometriske Teknikker for analyse av Antigen-spesifikke CD8 + T celle responser etter Nanopartikkel Vaksinasjon

Traditional vaccine adjuvants, such as alum, elicit suboptimal CD8+ T cell responses. To address this major challenge in vaccine development, various ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolasjon av Salmonella typhimurium-som inneholder Phagosomes fra makrofager

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

En suge blemme protokoll å studere Human T-celle tilbakekalling svar i Vivo

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Karakteristikk av Thymus avhengig og uavhengig av Thymus immunglobulin Isotype svar i mus med enzym knyttet Immunosorbent analysen

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

Optimized Interferon-gamma ELISpot Assay to Measure T Cell Responses in the Guinea Pig Model after Vaccination

Optimalisert Interferon-gamma ELISpot analysen mål T celle tiltak i Guinea Gris modellen etter vaksinering

The guinea pig has played a pivotal role as a relevant small animal model in the development of vaccines for infectious diseases such as tuberculosis, ...