Name: tailoring in vivo cytotoxicity assays to study immunodominance in tumor-specific cd8+ t cell responses
Uploaded: 2019-05-06T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses at JoVE.com

Эта работа была поддержана канадскими институтами медицинских исследований (CIHR) гранты СС-130465 и PJT-156295 в СММХ. Джей Си частично поддерживается стипендиатом королевы Елизаветы II по науке и технике из министерства образования, колледжей и университетов провинции Онтарио. Джем был получателем стипендии Александра Грэхема Белла (докторантура) в научно-исследовательском совете естественных наук и инженерных исследований Канады (NSERC).

Описанные здесь эксперименты следуют протоколам использования животных, утвержденным институциональными образованиями, и придерживаются установленных национальных руководящих принципов.
1. прививка C57BL/6 мышей с T AG-выражая опухолевые клетки
<ol><li>Вырастите SV40-преобра?...

<ol>
	<li>Yewdell, J. W., Bennink, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominance+in+major+histocompatibility+complex+class+I-restricted+T+lymphocyte+responses.">Immunodominance in major histocompatibility complex class I-restricted T lymphocyte responses.</a> Annual Review of Immunology. 17, 51-88 (1999).</li><li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+in+the+immunodominance+hierarchy+in+secondary+CD8++T+cell+responses+to+influenza+A+virus:+roles+for+cross-presentation+and+lysis-independent+immunodomination.">Reversal in the immunodominance hierarchy in secondary CD8+ T cell responses to influenza A virus: roles for cross-presentation and lysis-independent immunodomination.</a> The Journal of Immunology. 173 (8), 5021-5027 (2004).</li><li>Otahal, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inefficient+cross-presentation+limits+the+CD8++T+cell+response+to+a+subdominant+tumor+antigen+epitope.">Inefficient cross-presentation limits the CD8+ T cell response to a subdominant tumor antigen epitope.</a> The Journal of Immunology. 175 (2), 700-712 (2005).</li><li>Lauron, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-priming+induces+immunodomination+in+the+presence+of+viral+MHC+class+I+inhibition.">Cross-priming induces immunodomination in the presence of viral MHC class I inhibition.</a> PLoS Pathogens. 14 (2), e1006883 (2018).</li><li>Crowe, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+antigen+presentation+regulates+the+changing+patterns+of+CD8++T+cell+immunodominance+in+primary+and+secondary+influenza+virus+infections.">Differential antigen presentation regulates the changing patterns of CD8+ T cell immunodominance in primary and secondary influenza virus infections.</a> The Journal of Experimental Medicine. 198 (3), 399-410 (2003).</li><li>Probst, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominance+of+an+antiviral+cytotoxic+T+cell+response+is+shaped+by+the+kinetics+of+viral+protein+expression.">Immunodominance of an antiviral cytotoxic T cell response is shaped by the kinetics of viral protein expression.</a> The Journal of Immunology. 171 (10), 5415-5422 (2003).</li><li>Gileadi, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+an+immunodominant+CTL+epitope+is+affected+by+proteasome+subunit+composition+and+stability+of+the+antigenic+protein.">Generation of an immunodominant CTL epitope is affected by proteasome subunit composition and stability of the antigenic protein.</a> The Journal of Immunology. 163 (11), 6045-6052 (1999).</li><li>Zanker, D., Waithman, J., Yewdell, J. W., Chen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mixed+proteasomes+function+to+increase+viral+peptide+diversity+and+broaden+antiviral+CD8++T+cell+responses.">Mixed proteasomes function to increase viral peptide diversity and broaden antiviral CD8+ T cell responses.</a> The Journal of Immunology. 191 (1), 52-59 (2013).</li><li>Deng, Y., Yewdell, J. W., Eisenlohr, L. C., Bennink, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MHC+affinity,+peptide+liberation,+T+cell+repertoire,+and+immunodominance+all+contribute+to+the+paucity+of+MHC+class+I-restricted+peptides+recognized+by+antiviral+CTL.">MHC affinity, peptide liberation, T cell repertoire, and immunodominance all contribute to the paucity of MHC class I-restricted peptides recognized by antiviral CTL.</a> The Journal of Immunology. 158 (4), 1507-1515 (1997).</li><li>Chen, W., Khilko, S., Fecondo, J., Margulies, D. H., McCluskey, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determinant+selection+of+major+histocompatibility+complex+class+I-restricted+antigenic+peptides+is+explained+by+class+I-peptide+affinity+and+is+strongly+influenced+by+nondominant+anchor+residues.">Determinant selection of major histocompatibility complex class I-restricted antigenic peptides is explained by class I-peptide affinity and is strongly influenced by nondominant anchor residues.</a> The Journal of Experimental Medicine. 180 (4), 1471-1483 (1994).</li><li>Kotturi, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naive+precursor+frequencies+and+MHC+binding+rather+than+the+degree+of+epitope+diversity+shape+CD8++T+cell+immunodominance.">Naive precursor frequencies and MHC binding rather than the degree of epitope diversity shape CD8+ T cell immunodominance.</a> The Journal of Immunology. 181 (3), 2124-2133 (2008).</li><li>Haeryfar, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Terminal+deoxynucleotidyl+transferase+establishes+and+broadens+antiviral+CD8++T+cell+immunodominance+hierarchies.">Terminal deoxynucleotidyl transferase establishes and broadens antiviral CD8+ T cell immunodominance hierarchies.</a> The Journal of Immunology. 181 (1), 649-659 (2008).</li><li>Leon-Ponte, M., Kasprzyski, T., Mannik, L. A., Haeryfar, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+immunodominance+hierarchies+of+influenza+A+virus-specific+H-2(b)-restricted+CD8++T+cells+in+the+absence+of+terminal+deoxynucleotidyl+transferase.">Altered immunodominance hierarchies of influenza A virus-specific H-2(b)-restricted CD8+ T cells in the absence of terminal deoxynucleotidyl transferase.</a> Immunological Investigations. 37 (7), 714-725 (2008).</li><li>Kedl, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cells+compete+for+access+to+antigen-bearing+antigen-presenting+cells.">T cells compete for access to antigen-bearing antigen-presenting cells.</a> The Journal of Experimental Medicine. 192 (8), 1105-1113 (2000).</li><li>Kastenmuller, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-competition+of+CD8++T+cells+shapes+the+immunodominance+hierarchy+during+boost+vaccination.">Cross-competition of CD8+ T cells shapes the immunodominance hierarchy during boost vaccination.</a> The Journal of Experimental Medicine. 204 (9), 2187-2198 (2007).</li><li>Memarnejadian, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-1+Blockade+Promotes+Epitope+Spreading+in+Anticancer+CD8(+)+T+Cell+Responses+by+Preventing+Fratricidal+Death+of+Subdominant+Clones+To+Relieve+Immunodomination.">PD-1 Blockade Promotes Epitope Spreading in Anticancer CD8(+) T Cell Responses by Preventing Fratricidal Death of Subdominant Clones To Relieve Immunodomination.</a> The Journal of Immunology. 199 (9), 3348-3359 (2017).</li><li>Haeryfar, S. M., DiPaolo, R. J., Tscharke, D. C., Bennink, J. R., Yewdell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells+suppress+CD8++T+cell+responses+induced+by+direct+priming+and+cross-priming+and+moderate+immunodominance+disparities.">Regulatory T cells suppress CD8+ T cell responses induced by direct priming and cross-priming and moderate immunodominance disparities.</a> The Journal of Immunology. 174 (6), 3344-3351 (2005).</li><li>Rytelewski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+immunodominant+antitumor+and+antiviral+CD8++T+cell+responses+by+indoleamine+2,3-dioxygenase.">Suppression of immunodominant antitumor and antiviral CD8+ T cell responses by indoleamine 2,3-dioxygenase.</a> PLoS One. 9 (2), e90439 (2014).</li><li>Maleki Vareki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+regulation+of+simultaneous+antitumor+and+alloreactive+CD8(+)+T-cell+responses+in+the+same+host+by+rapamycin.">Differential regulation of simultaneous antitumor and alloreactive CD8(+) T-cell responses in the same host by rapamycin.</a> American Journal of Transplantation. 12 (1), 233-239 (2012).</li><li>Irvine, K., Bennink, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+influencing+immunodominance+hierarchies+in+TCD8++-mediated+antiviral+responses.">Factors influencing immunodominance hierarchies in TCD8+ -mediated antiviral responses.</a> Expert Review of Clinical Immunology. 2 (1), 135-147 (2006).</li><li>Grossmann, M. E., Davila, T., Celis, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Avoiding+tolerance+against+prostatic+antigens+with+subdominant+peptide+epitopes.">Avoiding tolerance against prostatic antigens with subdominant peptide epitopes.</a> Journal of Immunotherapy. 24 (3), 237-241 (2001).</li><li>Schreiber, H., Wu, T. H., Nachman, J., Kast, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominance+and+tumor+escape.">Immunodominance and tumor escape.</a> Seminars in Cancer Biology. 12 (1), 25-31 (2002).</li><li>Mylin, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitation+of+CD8(+)+T-lymphocyte+responses+to+multiple+epitopes+from+simian+virus+40+(SV40)+large+T+antigen+in+C57BL/6+mice+immunized+with+SV40,+SV40+T-antigen-transformed+cells,+or+vaccinia+virus+recombinants+expressing+full-length+T+antigen+or+epitope+minigenes.">Quantitation of CD8(+) T-lymphocyte responses to multiple epitopes from simian virus 40 (SV40) large T antigen in C57BL/6 mice immunized with SV40, SV40 T-antigen-transformed cells, or vaccinia virus recombinants expressing full-length T antigen or epitope minigenes.</a> Journal of Virology. 74 (15), 6922-6934 (2000).</li><li>Fu, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+endoplasmic+reticulum-targeting+signal+sequence+enhances+the+immunogenicity+of+an+immunorecessive+simian+virus+40+large+T+antigen+cytotoxic+T-lymphocyte+epitope.">An endoplasmic reticulum-targeting signal sequence enhances the immunogenicity of an immunorecessive simian virus 40 large T antigen cytotoxic T-lymphocyte epitope.</a> Journal of Virology. 72 (2), 1469-1481 (1998).</li><li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-priming+of+CD8++T+cells+by+viral+and+tumor+antigens+is+a+robust+phenomenon.">Cross-priming of CD8+ T cells by viral and tumor antigens is a robust phenomenon.</a> European Journal of Immunology. 34 (1), 194-199 (2004).</li><li>Memarnejadian, A., Meilleur, C. E., Mazzuca, D. M., Welch, I. D., Haeryfar, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Alloantibody-Mediated+Cytotoxicity+In+Vivo.">Quantification of Alloantibody-Mediated Cytotoxicity In Vivo.</a> Transplantation. 100 (5), 1041-1051 (2016).</li><li>Aichele, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide+antigen+treatment+of+naive+and+virus-immune+mice:+antigen-specific+tolerance+versus+immunopathology.">Peptide antigen treatment of naive and virus-immune mice: antigen-specific tolerance versus immunopathology.</a> Immunity. 6 (5), 519-529 (1997).</li><li>Oehen, S., Brduscha-Riem, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+naive+CTL+to+effector+and+memory+CTL:+correlation+of+effector+function+with+phenotype+and+cell+division.">Differentiation of naive CTL to effector and memory CTL: correlation of effector function with phenotype and cell division.</a> The Journal of Immunology. 161 (10), 5338-5346 (1998).</li><li>Coles, R. M., Mueller, S. N., Heath, W. R., Carbone, F. R., Brooks, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progression+of+armed+CTL+from+draining+lymph+node+to+spleen+shortly+after+localized+infection+with+herpes+simplex+virus+1.">Progression of armed CTL from draining lymph node to spleen shortly after localized infection with herpes simplex virus 1.</a> The Journal of Immunology. 168 (2), 834-838 (2002).</li><li>Barber, D. L., Wherry, E. J., Ahmed, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+edge:+rapid+in+vivo+killing+by+memory+CD8+T+cells.">Cutting edge: rapid in vivo killing by memory CD8 T cells.</a> The Journal of Immunology. 171 (1), 27-31 (2003).</li><li>Meilleur, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+superantigens+expand+and+activate,+rather+than+delete+or+incapacitate,+preexisting+antigen-specific+memory+CD8++T+cells.">Bacterial superantigens expand and activate, rather than delete or incapacitate, preexisting antigen-specific memory CD8+ T cells.</a> The Journal of Infectious Diseases. , (2018).</li><li>Goldszmid, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+charged+with+apoptotic+tumor+cells+induce+long-lived+protective+CD4++and+CD8++T+cell+immunity+against+B16+melanoma.">Dendritic cells charged with apoptotic tumor cells induce long-lived protective CD4+ and CD8+ T cell immunity against B16 melanoma.</a> The Journal of Immunology. 171 (11), 5940-5947 (2003).</li><li>Oberg, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+or+mismatch+of+MHC+class+I+is+sufficient+to+trigger+NK+cell-mediated+rejection+of+resting+lymphocytes+in+vivo+-+role+of+KARAP/DAP12-dependent+and+-independent+pathways.">Loss or mismatch of MHC class I is sufficient to trigger NK cell-mediated rejection of resting lymphocytes in vivo - role of KARAP/DAP12-dependent and -independent pathways.</a> European Journal of Immunology. 34 (6), 1646-1653 (2004).</li><li>Wingender, G., Krebs, P., Beutler, B., Kronenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen-specific+cytotoxicity+by+invariant+NKT+cells+in+vivo+is+CD95/CD178-dependent+and+is+correlated+with+antigenic+potency.">Antigen-specific cytotoxicity by invariant NKT cells in vivo is CD95/CD178-dependent and is correlated with antigenic potency.</a> The Journal of Immunology. 185 (5), 2721-2729 (2010).</li><li>Brinster, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+harboring+SV40+T-antigen+genes+develop+characteristic+brain+tumors.">Transgenic mice harboring SV40 T-antigen genes develop characteristic brain tumors.</a> Cell. 37 (2), 367-379 (1984).</li><li>Tatum, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T+cells+targeting+a+single+immunodominant+epitope+are+sufficient+for+elimination+of+established+SV40+T+antigen-induced+brain+tumors.">CD8+ T cells targeting a single immunodominant epitope are sufficient for elimination of established SV40 T antigen-induced brain tumors.</a> The Journal of Immunology. 181 (6), 4406-4417 (2008).</li><li>Schell, T. D., Tevethia, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+advanced+choroid+plexus+tumors+in+SV40+T+antigen+transgenic+mice+following+priming+of+donor+CD8(+)+T+lymphocytes+by+the+endogenous+tumor+antigen.">Control of advanced choroid plexus tumors in SV40 T antigen transgenic mice following priming of donor CD8(+) T lymphocytes by the endogenous tumor antigen.</a> The Journal of Immunology. 167 (12), 6947-6956 (2001).</li><li>Greenberg, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostate+cancer+in+a+transgenic+mouse.">Prostate cancer in a transgenic mouse.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92 (8), 3439-3443 (1995).</li></ol>

CFSE основе в естественных условиях цитотоксичности анализы предлагают несколько преимуществ по сравнению с традиционными убийства анализов, таких как радиоактивный хром (51CR) релиз и цветаметрическое лактата дегидрогеназы (LDH) релиз-тестов. Во-первых, они позволяют мониторинг фун?...

Обычные CD8+ t-клетки (tCD8) играют важную роль в противоопухолевой иммунной слежке. Они в первую очередь функции в качестве цитолитических т-лимфоцитов (Ктлс), которые признают опухоль конкретных или связанных пептидных антигенов (АГС) отображается в закрытой расщелины основных комплекса гистосовместимости (MHC) класса я молекул. Полностью вооруженные КСТ использовать их цитотоксический арсенал для уничтожения злокачественных клеток. Противоопухолевые TCD8 могут быть обнаружены в обращении или даже внутри первичных и метастатических масс многих онкологических больных и опухолевых подшипников животных. Однако, они часто нергические или исчерпаны, и не в состоянии искоренить рак. Таким образом, многие иммунотерапевтические методы призваны увеличить противораковые TCD8 частоты и восстановить и повысить их функции.
Опухолевые белки питают многие пептиды, некоторые из которых могут быть иммуногенными и потенциально иммунопротекторными. Тем не менее, количественные ответы TCD8 выявляют с различной магнитудой против немногих пептидов только. Это создает «иерархию иммунодоминирования» среди TCD8 клонов1. Соответственно, иммунодоминант (ID) TCD8 занимают видные иерархические ряды, о которых часто судят по их обилию. В противоположность этому, TCD8 клетки, чьи т-клеточный рецептор (TCR) специфическая для субдоминантных (SD) эпитопов встречаются в нижних частотах. Мы и другие определили некоторые из факторов, которые диктуют или формируют иммунодоминирование в ответах TCD8 . К ним относятся, среди прочего, режим AG презентации наивно TCD8 (например, прямая презентация, кросс-презентация, кросс-одевания)2,3,4, тип AG-представляя клетки (БТР) участие в TCD8 активации5, обилие и устойчивость белка АГС6,7 и эффективность и кинетика их деградации протеасом7,8, Относительная избирательность транспортера, связанного с обработкой AG (TAP) для пептидов9, близость освобожденных пептидов для молекул MHC I9,10, наличие, частоты прекурсоров и TCR разнообразие родственный tCD8 в бассейнах t Cell11,12,13, кросс-конкурс среди т-клеток для доступа к БТР14,15, и братоубийственной емкость tCD8 клонов16. Кроме того, TCD8 иммунодоминирование подвергается иммунорегуляторные механизмы опосредовано несколько типов клеток супрессоров, таких как естественные нормативные т (ntreg) клетки17, клеточной поверхности Co-тормозящий молекулы запрограммированы смерть-1 (PD-1)16, и некоторые внутриклеточные ферменты, такие как индолеамин 2, 3-диоксигеназы (Идо)18 и млекопитающих, цель рапамицина (mTOR)19. Важно отметить, однако, что вышеуказанные факторы не всегда в полной мере учитывают иммунодоминирование.
Помимо базовой биологии TCD8 иммунодоминирования, изучение этого интригующего явления имеет важные последствия в иммунологии и иммунотерапии рака. Во-первых, статус ID не обязательно наделяют данный клон TCD8 способностью предотвращать начало опухоли или прогрессирование20. Ли и как ID и SD TCD8 способствовать противоопухолевого иммунитета может зависеть от типа и степени злокачественности и экспериментальной системы, используемой. Во-вторых, считается, что ID TCD8 клоны могут быть "слишком заметны" для иммунной системы и, следовательно, более склонны к Центральной и/или периферийные механизмы толерантности16,21. В-третьих, гетерогенетические опухоли могут содержать неопластические клетки, которые избегают обнаружения многими, если не большинством, кцл, показывая только узкий спектр пептидов: комплексы MHC. В этих условиях, TCD8 ответы недостаточной ширины, вероятно, позволить такие опухолевые клетки выживания преимущество, тем самым потенцируя их рост22. Именно по вышеуказанным причинам многие рассматривают иммунодоминирование как препятствие для успешной вакцинации на основе TCD8и терапии против рака.
Прививка C57BL/6 мышей с симианом вирусом 40 (SV40)-преобразованные клетки, которые выражают большую опухоль AG (T AG) обеспечивает мощную доклинические системы для изучения TCD8 иммунодоминирование. Эта модель предлагает несколько преимуществ. Во-первых, пептидные эпитопы этого клинически соответствующего онкопротеина хорошо характеризуются в этом штаммом мыши23 (Таблица 1). Во-вторых, T AG эпитопов, которые называются сайты I, II/III, IV, и V, вызвать TCD8 ответы, которые последовательно расположены в следующем иерархическом порядке: сайт IV > > сайте я II/iii > &Gt; сайт V. соответственно, сайт IV-специфическая TCD8 установите наиболее надежный ответ на T AG. В отличие от, сайты I и II/III являются субдоминантными, и сайт V-специфических TCD8 являются наименее обильными и, как правило, только обнаруживаемые в отсутствие реагирования на другие эпитопы23,24. В-третьих, т AG+ клетка опухолевых клеток, используемых в протоколе описано здесь, а именно C57SV клетки фибросаркома, и те, которые используются в наших предыдущих исследованиях16,17,18,19 ,25,26, преобразуются с субгеномной SV40 фрагментами25. Таким образом, они не в состоянии собрать и выпустить SV40 вирионов, которые потенциально могут заразить хост БТР. Кроме того, C57SV клетки лишены классических кокосмитирующих молекул, таких как CD80 (B7-1), CD86 (B7-2) и CD137 лиганда (4-1bbl.)16. Приведенные выше атрибуты делают эти линии идеально подходит для изучения в естественных условиях TCD8 активации через кросс грунтовки. Кросс-грунтовка является одним из основных путей в вызывая TCD8 ответы, особенно те, запущен против опухолевых клеток, не гемопоэтических происхождения, которые не могут непосредственно премьер-наивные т-клетки25.
Противоопухолевые TCD8 частоты и/или функции могут контролироваться MHC я теттрамер окрашивания, внутриклеточного окрашивания для эффекторных цитокинов (например, интерферон [IFN]-γ) или литические молекул (например, перфорин), фермент связанных иммуносопот (ELISpot) анализы и ex естественных цитотоксичности анализов. С момента своего создания в 1990-е годы27,28, carboxyфлуорессеин Эстер (CFSE)-основанный в естественных условиях убийства анализы позволили оценки цитотоксических реакций, опосредованных противовирусные кцл29,30 , 31, противоопухолевые ЦС16,32, естественных киллеров (НК) клетки33, гликолипид-реактивный ининт естественных убийца т (inkt) клетки34, и ранее и де Ново доноров конкретных аллоантител26. Таким образом, их приложения могут быть интересны широкому кругу читателей, в том числе, но не ограничиваясь исследователями, работающими в области иммунологии и иммунотерапии опухолей, анти-патогенного иммунитета, а так же превентивной и терапевтической разработки вакцин.
Для оценки клеточного опосредованного цитотоксичности в типичных сценариях, две популяции наивных сселезоцитов, которые отображают либо несущественный AG или родственный AG (s), помечены двумя различными дозами CFSE, смешанные в равных количествах и впрыснуты в наивные (контроль) или убийца клеток-укрывательство мышей. Присутствие/отсутствие каждой целевой популяции затем рассматривается потоком цитометрии.
Мы оптимизированы и использованы в естественных условиях убийства анализов в наших исследованиях на иммунодоминирование в обоих противовирусных и противоопухолевые TCD8 ответы12,16,17. Здесь мы предоставляем подробный протокол для одновременной оценки ID и SD TCD8 ответы на t AG эпитопов, которые могут быть легко приняты для аналогичных исследований в других экспериментальных систем. Мы также предоставляем репрезентативные результаты, доказывая, что истощение ячейки nTreg и блокада PD-1 могут выборочно усилить ID TCD8-и SD tCD8-индуцированной цитотоксичности, соответственно. В конце концов, мы обсудим несколько преимуществ в естественных условиях убийства анализов, а также некоторые из их неотъемлемых ограничений.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:872px;" width="871">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">0.25% Trypsin-EDTA (1X)</td>
			<td style="width:164px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:163px;">25200-056</td>
			<td style="width:211px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ACK Lysing Buffer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:163px;">A1049201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-mouse CD25 (clone PC-61.5.3)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BE0012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-mouse PD-1 (clone RMP1-14)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BE0146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CFSE</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>C34554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM (1X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11965-092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Wisent Bioproducts</td>
			<td>080-150</td>
			<td>Heat-inactivate prior to use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GlutaMAX (100X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HEPES (1M)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15630080</td>
			<td>10 mM final concentration</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MEM Non-Essential Amino Acids Solution (100X)&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11140-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P0781</td>
			<td>Stock is 100X</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG1 (clone KLH/G1-2-2)</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>0116-01</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG1 (clone HRPN)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BE0088</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG1 (clone TNP6A7)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BP0290</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG2a (clone 2A3)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BP0089</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI 1640 (1X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11875-093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Pyruvate (100 mM)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11360-070</td>
			<td>1 mM final concentration</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tailoring in vivo cytotoxicity assays to study immunodominance in tumor-specific cd8+ t cell responses

Carboxyфлуоресьин Эстер (CFSE)-основанная в естественных условиях цитотоксичности исследования позволяют чувствительной и точной квантации CD8+ цитолитических т-лимфоцитов (CTL) ответы вызвали против опухоли и патогена производные пептиды. Они предлагают несколько преимуществ по сравнению с традиционными убийства анализов. Во-первых, они позволяют мониторинг CTL-опосредованной цитотоксичности в архитектурно нетронутыми вторичных лимфоидных органов, как правило, в селезенке. Во-вторых, они позволяют механистические исследования во время грунтовки, эффекторных и вспомнить фазы ответов CTL. В-третьих, они обеспечивают полезные платформы для вакцины/тестирования эффективности лекарственных средств в истинно в естественных условиях. Здесь мы предоставляем оптимизированный протокол для изучения сопутствующих CTL ответов против более чем одного пептидного эпитопа модели опухолевого антигена (AG), а именно, вируса обезьян 40 (SV40)-закодированного большого T AG (T AG). Как и большинство других клинически значимых опухолевых белков, T AG таит много потенциально иммуногенных пептидов. Однако, только 4 таких пептидов вызывают обнаруживаемые реакции CTL в мышах C57BL/6. Эти ответы последовательно расположены в иерархическом порядке, основанном на их величине, которая является основой для TCD8 "иммунодоминирования" в этой мощной системе. Соответственно, основная часть T AG-специфическая реакция TCD8 сосредоточена против одного иммунодоминантного эпитопа, в то время как остальные три эпитопов признаются и реагируют только слабо. Иммунодоминирование ставит под угрозу широту антиопухолевого TCD8 ответы и, как таковой, по мнению многих, как препятствие для успешной вакцинации против рака. Таким образом, важно понимать клеточные и молекулярные факторы и механизмы, которые диктуют или формируют TCD8 иммунодоминирование. Протокол, который мы описываем здесь, адаптирован к исследованию этого феномена в модели иммунизации T AG, но может быть легко модифицирован и распространен на аналогичные исследования в других моделях опухолей. Мы предлагаем примеры того, как воздействие экспериментальных иммунотерапевтических вмешательств может быть измерено с использованием в естественных условиях цитотоксичности анализов.

Цель эксперимента, результаты которого изображены на рисунке 1 , заключалась в определении того, является ли наличие и функции клеток nTreg формировать или изменять иерархию Иммунодоминирования t AG-специфическая тCD8. C57BL/6 мышей вводили IP с PBS или с 0,5 mg Anti-CD25 mAb (клон PC-61.5...

Watch this Scientific Journal Video about Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses at JoVE.com

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Портняжное в естественных условиях цитотоксичности исследования для изучения Иммунодоминирования в опухоль конкретных CD8+ т ячейки ответы

Мы описываем здесь поток цитометрия основе в естественных условиях убийства анализ, который позволяет изучение иммунодоминирования в цитотоксических т-лимфоцитов (CTL) ответы на модели опухолевого антигена. Мы предоставляем примеры того, как этот элегантный анализ может быть использован для механистических исследований и для тестирования эффективности лекарственных препаратов.

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)-based in vivo cytotoxicity assays enable sensitive and accurate quantitation of CD8+ cytolytic T lymphocyte ...

Этот анализ может быть использован для количественной оценки цитотоксичности Т-клеток против двух различных пептидных эпитопов опухолевых антигенов одновременно. Виво характер этого анализа позволяет цитотоксической функции Т-клеток, которые будут измеряться в нетронутой архитектуры вторичного лимфоидного органа. Кроме того, наблюдаемое убийство является точным отражением абсолютного числа Т-клеток, а не только их частот, что может вводить в заблуждение.Этот анализ позволяет изучат цитотоксические Т-клеточные реакции на иммунодоминантные и субдоминантные опухолевые антигены. Поэтому он предоставляет ценную информацию, когда вы проектируете вакцину, а также иммунотерапевтические протоколы для рака. Наш протокол был разработан для изучения ответов на CD8 T-клеток.Тем не менее, он может быть изменен для измерения цитотоксичности, вызываемой другими типами клеток-убийц, таких как НК-клетки и врожденные Т-лимфоциты. Этот анализ требует опыта в асептической технике, обработки тканей мыши, подготовки целевых клеток, а также опыта в инъекциях хвостовых вен. Нужно приобрести этот набор навыков, прежде чем пытаться in vivo убийство анализа.После того, как Т-антиген-положительный адепт линии опухолевых клеток стал полностью слияние или слегка более-слияние, осторожно промыть монослой с стерильной, теплой PBS, и отделить опухолевые клетки с 0,25%трипсина ЭДТА в биобезопасности кабинета. Нажмите на стороны культуры колбу несколько раз, чтобы освободить оставшиеся клетки адепта, и остановить реакцию примерно через пять минут с добавлением пяти миллилитров DMEM среды. Pipette клеточный раствор несколько раз, прежде чем фильтровать подвеску клетки через 70-микрометровый ситечко клеток в 50-миллилитровую коническую трубку.Соберите клетки путем центрифугации, и повторно поместить гранулы в 10 миллилитров стерильных, холодных PBS для первого из трех моет в тех же условиях. После третьего мытья, повторного введения клеток в четыре раза от 10 до семи клеток на миллилитр стерильной концентрации PBS, и вводить 500 микролитров Т-антиген-положительной опухолевой клетки подвески интраперитонально в каждом шесть-к-12-недельный C57 Черный 6 мыши получателя. Для подготовки целевых спеноцитов поместите усыпляемую донорскую мышь в положение, подверженное риску, и распылите животное 70%этанолом.Используя стерильные типсы и ножницы, поднимите кожу и сделайте небольшой брюшной разрез средней линии. Вырезать кожу в кросс-как мода подвергать брюшной полости, и использовать типсы, чтобы подтянуть брюшной полости в палатке, как мода, не ловя любой из внутренних органов. Разрежьте брюшной полости, чтобы разоблачить брюшной полости, и осторожно перенести селезенку на 15-миллилитровый ткани Dounce шлифовальный станок, содержащий пять миллилитров стерильных PBS.Используйте поршень, чтобы применить ручное давление, пока splenic ткани рассеивается в красной однородной подвески клеток, и передачи однородности в 15-миллилитровую трубку. Соберите суспензию центрифугации, и повторно гранулы в четырех миллилитров хлорида аммония хлорид калия лизин буфер для устранения эритроцитов. Через четыре минуты, остановить процесс с восемью миллилитров полной среды, и фильтровать подвеску клетки через 70-микрометр-поры клеток ситечко в новую 50-миллилитровую трубку.Отделить белые кровяные тельца от красных кровяных клеток мусора центрифугации, и повторно гранулы в 12 миллилитров полной среды. Затем разделите суспензию спеноцитов на три равных четырехми миллилитровых алицита. Для пептидного кодирования целевых спеноцитов пульс один splenocyte aliquot с одним микромоляном нерелевантного пептида, один aliquot с одним микромоляном пептида сайта I, и один aliquot с одним микромоляном пептида сайта IV в течение одного часа при 37 градусах Цельсия и 5%углекислом газе.В конце инкубации, удалить избыток пептида центрифугации и мыть пептид-импульсных спеноцитов два раза в 12 миллилитров стерильных, холодных PBS на стирку на трубку. После второй стирки, повторного перерасхода клеток в четыре миллилитров свежих, стерильных PBS на трубку. Добавьте 025, 0,25 и двухмикролограммовые CFSE в нерелевантные, Site I и Site IV пептид-импульсные подвески спеноцитов соответственно.Поместите трубки при 37 градусах по Цельсию в течение 15 минут с ручной инверсией один раз в пять минут. В конце инкубации добавьте три миллилитров тепловой инактивированной сыворотки крупного рогатого скота в каждую трубку, чтобы остановить реакцию CFSE и довести окончательный объем в каждой трубке до 15 миллилитров с PBS. Затем соберите красителя помечены клетки центрифугации в течение двух моет в 12 миллилитров свежих, стерильных PBS за стирку.Чтобы подтвердить адекватную маркировку CFSE целевых спеноцитов, повторно поместите гранулы в трех миллилитров PBS и смешайте с нежным вихрем. Передача 10 микролитров от каждого CFSE помечены клеточной подвески в отдельных пятими миллилитров круглый нижний полистирол флуоресценции активированной сортировки клеток, или FACS трубки, содержащей PBS, и загрузить трубку на поток цитометра оснащен 488-нанометровый лазер. В программном обеспечении цитометра потока создайте ворота лимфоцитов на основе впередового рассеяния и боковых свойств рассеяния клеток, прежде чем приобрести 5 000 событий, попадающих в ворота лимфоцитов в канале Fluorescence 1.В родительской CFSE-позитивной популяции, привлечь дополнительные ворота гистограммы для выявления CFSE-низкий, CFSE-промежуточных и CFSE-высоких субпопуляций. Затем подтвердите равное или почти равное число событий в пределах трех ворот для двух других труб помеченных ячеек. Для инъекции целевых клеток сначала аккуратно вихрем исходные трубки и объединить три CFSE помеченных клеточных суспензий в новую трубку при равных соотношениях.Пополнить содержимое трубки стерильным PBS, и собирать клетки центрифугации для подсчета. Затем отрегулируйте громкость в один раз от 10 до семи смешанных целевых ячеек на 200 микролитров PBS на концентрацию получателя и ввилите 200 микролитровых объемов клеточной подвески в хвостовую вену каждого получателя C57 Black 6 мыши. Через два или четыре часа после инъекции, удалить и обработать селезенку каждого животного-реципиента, как попродемонстрировано, и повторно изолированных белых кровяных клеток в три миллилитров PBS на селезенку.Передача примерно один раз 10 к семи клеткам из каждой обработанной селезенки в чистую трубку FACS, и сразу же запустить клетки на цитометре потока, как попродемонстрировано ворот CFSE-низких, промежуточных и высоких целевых популяций клеток. Затем приобрети в общей сложности 2 000 событий CFSE-низких в канале Fluorescence 1 и вычислите конкретный лиз каждой целевой популяции cognate в соответствии с формулой, подробно описанной в тексте. В этом репрезентативном эксперименте успех истощения естественных регуляторных Т-клеток у мышей, вводимых анти-CD25 моноклональным антителом, был подтвержден цитометрией потока.Как и ожидалось, почти равные пики, соответствующие клеткам-мишеням контроля и cognate, были обнаружены у наивных мышей. В отличие от сайта-IV-отображения целевых клеток почти полностью отсутствуют в Т-антиген-премьер мышей, независимо от их предварительного лечения анти-CD25 моноклональных антител или PBS. Интересно, что естественное истощение клеток T reg анти-CD25 моноклональным антителом, увеличенным в виво цитотоксическим Т-лимфоцит-опосредованном лизе site-I-pulsed целевых клеток.В этом втором репрезентативном расследовании, запрограммированной смерти 1 блокады расширения суб-доминирующей CD8-положительных Т-клеток сайтов один и два-слэш-три конкретных ответов, предполагая, что вмешательство в запрограммированной смерти 1 / запрограммированной смерти лиганд 1 взаимодействия могут вызвать эпитоп распространения в борьбе с раком CD8-положительных Т-клеток ответов. Очень важно, когда маркировка донорских клеток с CFSE, убедитесь, что ваши концентрации являются точными. В противном случае это может привести к перекрытию пиков гистограммы, что затрудняет, если не невозможно, необходимые расчеты и интерпретацию данных.Важно оптимизировать анализы цитотоксии in vivo для количественной оценки функций эффектора, вызываемых различными типами клеток-убийц, которые распознают пептидные и нестиптийные антигены в одном и том же хозяине.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

Ретровирусные трансдукция Т-клеточных рецепторов в мышь Т-клеток

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Competitive Homing Assays to Study Gut-tropic T Cell Migration

Конкурентные Homing Анализы по изучению тропических Гут-Т-клеток миграции

In order to exert their function lymphocytes need to leave the blood and migrate into different tissues in the body. Lymphocyte adhesion to endothelial ...

Quantitative High-throughput Single-cell Cytotoxicity Assay For T Cells

Количественные высокой пропускной Single-клеточной цитотоксичности анализа для Т-клеток

Cancer immunotherapy can harness the specificity of  immune response to target and eliminate tumors. Adoptive cell therapy (ACT)  based on the adoptive ...

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

Использование флуоресцентных целевых массивов для оценки Т-клеточные ответы<em&gt; В естественных условиях</em

The ability to monitor T cell responses in vivo is important for the development of our understanding of the immune response and the design of ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Трансплантация кожи хвоста изучать Аллогенная лимфоцитов CD4 ответов у мышей

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Whole-animal Imaging and Flow Cytometric Techniques for Analysis of Antigen-specific CD8+ T Cell Responses after Nanoparticle Vaccination

Всего животного визуализации и проточной цитометрии методы анализа антиген-специфических CD8 + Т-клеточные ответы после вакцинации наночастиц

Traditional vaccine adjuvants, such as alum, elicit suboptimal CD8+ T cell responses. To address this major challenge in vaccine development, various ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Изоляция Salmonella typhimurium-содержащих Phagosomes от макрофагов

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

Всасывания блистер протокол для изучения человеческий Т-клеточный вспомнить ответы в естественных условиях

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Характеристика тимус зависимых и тимус независимые иммуноглобулина изотипа ответов в мышей, используя энзим соединенный Assay иммуносорбента

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

Optimized Interferon-gamma ELISpot Assay to Measure T Cell Responses in the Guinea Pig Model after Vaccination

Оптимизированный интерферона гамма ELISpot Assay мера Т-клеток ответов в модели морской свинки после вакцинации

The guinea pig has played a pivotal role as a relevant small animal model in the development of vaccines for infectious diseases such as tuberculosis, ...