Name: tailoring in vivo cytotoxicity assays to study immunodominance in tumor-specific cd8+ t cell responses
Uploaded: 2019-05-06T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses at JoVE.com

Detta arbete stöddes av kanadensiska institut för hälso forskning (CIHR) beviljar MOP-130465 och PJT-156295 till SMMH. JC är delvis stöds av en drottning Elizabeth II Graduate stipendium i vetenskap och teknik från Ontario ministeriet för utbildning, hög skolor och universitet. CEM var mottagare av en Alexander Graham Bell Canada Graduate stipendium (doktors examen) från naturvetenskap och teknik forsknings rådet i Kanada (NSERC).

De experiment som beskrivs här följer de protokoll för djur användning som godkänts av institutionella enheter och som följs av fastställda nationella rikt linjer.
1. inokulering av C57BL/6 möss med T AG-uttryck tumör celler
<ol><li>Odla SV40-transformerade fibrosarkom cellinjen C57SV (eller en liknande T AG+ anhängare cellinjen) i Dulbecco modifierade Eagle ' s medium (DMEM) med 4,5 g/l D-glukos och L-glutamin (1x) och kompletteras med 1 mm natrium Pyruvat och 10% Värm...

<ol>
	<li>Yewdell, J. W., Bennink, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominance+in+major+histocompatibility+complex+class+I-restricted+T+lymphocyte+responses.">Immunodominance in major histocompatibility complex class I-restricted T lymphocyte responses.</a> Annual Review of Immunology. 17, 51-88 (1999).</li><li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+in+the+immunodominance+hierarchy+in+secondary+CD8++T+cell+responses+to+influenza+A+virus:+roles+for+cross-presentation+and+lysis-independent+immunodomination.">Reversal in the immunodominance hierarchy in secondary CD8+ T cell responses to influenza A virus: roles for cross-presentation and lysis-independent immunodomination.</a> The Journal of Immunology. 173 (8), 5021-5027 (2004).</li><li>Otahal, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inefficient+cross-presentation+limits+the+CD8++T+cell+response+to+a+subdominant+tumor+antigen+epitope.">Inefficient cross-presentation limits the CD8+ T cell response to a subdominant tumor antigen epitope.</a> The Journal of Immunology. 175 (2), 700-712 (2005).</li><li>Lauron, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-priming+induces+immunodomination+in+the+presence+of+viral+MHC+class+I+inhibition.">Cross-priming induces immunodomination in the presence of viral MHC class I inhibition.</a> PLoS Pathogens. 14 (2), e1006883 (2018).</li><li>Crowe, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+antigen+presentation+regulates+the+changing+patterns+of+CD8++T+cell+immunodominance+in+primary+and+secondary+influenza+virus+infections.">Differential antigen presentation regulates the changing patterns of CD8+ T cell immunodominance in primary and secondary influenza virus infections.</a> The Journal of Experimental Medicine. 198 (3), 399-410 (2003).</li><li>Probst, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominance+of+an+antiviral+cytotoxic+T+cell+response+is+shaped+by+the+kinetics+of+viral+protein+expression.">Immunodominance of an antiviral cytotoxic T cell response is shaped by the kinetics of viral protein expression.</a> The Journal of Immunology. 171 (10), 5415-5422 (2003).</li><li>Gileadi, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+an+immunodominant+CTL+epitope+is+affected+by+proteasome+subunit+composition+and+stability+of+the+antigenic+protein.">Generation of an immunodominant CTL epitope is affected by proteasome subunit composition and stability of the antigenic protein.</a> The Journal of Immunology. 163 (11), 6045-6052 (1999).</li><li>Zanker, D., Waithman, J., Yewdell, J. W., Chen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mixed+proteasomes+function+to+increase+viral+peptide+diversity+and+broaden+antiviral+CD8++T+cell+responses.">Mixed proteasomes function to increase viral peptide diversity and broaden antiviral CD8+ T cell responses.</a> The Journal of Immunology. 191 (1), 52-59 (2013).</li><li>Deng, Y., Yewdell, J. W., Eisenlohr, L. C., Bennink, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MHC+affinity,+peptide+liberation,+T+cell+repertoire,+and+immunodominance+all+contribute+to+the+paucity+of+MHC+class+I-restricted+peptides+recognized+by+antiviral+CTL.">MHC affinity, peptide liberation, T cell repertoire, and immunodominance all contribute to the paucity of MHC class I-restricted peptides recognized by antiviral CTL.</a> The Journal of Immunology. 158 (4), 1507-1515 (1997).</li><li>Chen, W., Khilko, S., Fecondo, J., Margulies, D. H., McCluskey, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determinant+selection+of+major+histocompatibility+complex+class+I-restricted+antigenic+peptides+is+explained+by+class+I-peptide+affinity+and+is+strongly+influenced+by+nondominant+anchor+residues.">Determinant selection of major histocompatibility complex class I-restricted antigenic peptides is explained by class I-peptide affinity and is strongly influenced by nondominant anchor residues.</a> The Journal of Experimental Medicine. 180 (4), 1471-1483 (1994).</li><li>Kotturi, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naive+precursor+frequencies+and+MHC+binding+rather+than+the+degree+of+epitope+diversity+shape+CD8++T+cell+immunodominance.">Naive precursor frequencies and MHC binding rather than the degree of epitope diversity shape CD8+ T cell immunodominance.</a> The Journal of Immunology. 181 (3), 2124-2133 (2008).</li><li>Haeryfar, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Terminal+deoxynucleotidyl+transferase+establishes+and+broadens+antiviral+CD8++T+cell+immunodominance+hierarchies.">Terminal deoxynucleotidyl transferase establishes and broadens antiviral CD8+ T cell immunodominance hierarchies.</a> The Journal of Immunology. 181 (1), 649-659 (2008).</li><li>Leon-Ponte, M., Kasprzyski, T., Mannik, L. A., Haeryfar, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+immunodominance+hierarchies+of+influenza+A+virus-specific+H-2(b)-restricted+CD8++T+cells+in+the+absence+of+terminal+deoxynucleotidyl+transferase.">Altered immunodominance hierarchies of influenza A virus-specific H-2(b)-restricted CD8+ T cells in the absence of terminal deoxynucleotidyl transferase.</a> Immunological Investigations. 37 (7), 714-725 (2008).</li><li>Kedl, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cells+compete+for+access+to+antigen-bearing+antigen-presenting+cells.">T cells compete for access to antigen-bearing antigen-presenting cells.</a> The Journal of Experimental Medicine. 192 (8), 1105-1113 (2000).</li><li>Kastenmuller, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-competition+of+CD8++T+cells+shapes+the+immunodominance+hierarchy+during+boost+vaccination.">Cross-competition of CD8+ T cells shapes the immunodominance hierarchy during boost vaccination.</a> The Journal of Experimental Medicine. 204 (9), 2187-2198 (2007).</li><li>Memarnejadian, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-1+Blockade+Promotes+Epitope+Spreading+in+Anticancer+CD8(+)+T+Cell+Responses+by+Preventing+Fratricidal+Death+of+Subdominant+Clones+To+Relieve+Immunodomination.">PD-1 Blockade Promotes Epitope Spreading in Anticancer CD8(+) T Cell Responses by Preventing Fratricidal Death of Subdominant Clones To Relieve Immunodomination.</a> The Journal of Immunology. 199 (9), 3348-3359 (2017).</li><li>Haeryfar, S. M., DiPaolo, R. J., Tscharke, D. C., Bennink, J. R., Yewdell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells+suppress+CD8++T+cell+responses+induced+by+direct+priming+and+cross-priming+and+moderate+immunodominance+disparities.">Regulatory T cells suppress CD8+ T cell responses induced by direct priming and cross-priming and moderate immunodominance disparities.</a> The Journal of Immunology. 174 (6), 3344-3351 (2005).</li><li>Rytelewski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+immunodominant+antitumor+and+antiviral+CD8++T+cell+responses+by+indoleamine+2,3-dioxygenase.">Suppression of immunodominant antitumor and antiviral CD8+ T cell responses by indoleamine 2,3-dioxygenase.</a> PLoS One. 9 (2), e90439 (2014).</li><li>Maleki Vareki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+regulation+of+simultaneous+antitumor+and+alloreactive+CD8(+)+T-cell+responses+in+the+same+host+by+rapamycin.">Differential regulation of simultaneous antitumor and alloreactive CD8(+) T-cell responses in the same host by rapamycin.</a> American Journal of Transplantation. 12 (1), 233-239 (2012).</li><li>Irvine, K., Bennink, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+influencing+immunodominance+hierarchies+in+TCD8++-mediated+antiviral+responses.">Factors influencing immunodominance hierarchies in TCD8+ -mediated antiviral responses.</a> Expert Review of Clinical Immunology. 2 (1), 135-147 (2006).</li><li>Grossmann, M. E., Davila, T., Celis, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Avoiding+tolerance+against+prostatic+antigens+with+subdominant+peptide+epitopes.">Avoiding tolerance against prostatic antigens with subdominant peptide epitopes.</a> Journal of Immunotherapy. 24 (3), 237-241 (2001).</li><li>Schreiber, H., Wu, T. H., Nachman, J., Kast, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominance+and+tumor+escape.">Immunodominance and tumor escape.</a> Seminars in Cancer Biology. 12 (1), 25-31 (2002).</li><li>Mylin, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitation+of+CD8(+)+T-lymphocyte+responses+to+multiple+epitopes+from+simian+virus+40+(SV40)+large+T+antigen+in+C57BL/6+mice+immunized+with+SV40,+SV40+T-antigen-transformed+cells,+or+vaccinia+virus+recombinants+expressing+full-length+T+antigen+or+epitope+minigenes.">Quantitation of CD8(+) T-lymphocyte responses to multiple epitopes from simian virus 40 (SV40) large T antigen in C57BL/6 mice immunized with SV40, SV40 T-antigen-transformed cells, or vaccinia virus recombinants expressing full-length T antigen or epitope minigenes.</a> Journal of Virology. 74 (15), 6922-6934 (2000).</li><li>Fu, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+endoplasmic+reticulum-targeting+signal+sequence+enhances+the+immunogenicity+of+an+immunorecessive+simian+virus+40+large+T+antigen+cytotoxic+T-lymphocyte+epitope.">An endoplasmic reticulum-targeting signal sequence enhances the immunogenicity of an immunorecessive simian virus 40 large T antigen cytotoxic T-lymphocyte epitope.</a> Journal of Virology. 72 (2), 1469-1481 (1998).</li><li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-priming+of+CD8++T+cells+by+viral+and+tumor+antigens+is+a+robust+phenomenon.">Cross-priming of CD8+ T cells by viral and tumor antigens is a robust phenomenon.</a> European Journal of Immunology. 34 (1), 194-199 (2004).</li><li>Memarnejadian, A., Meilleur, C. E., Mazzuca, D. M., Welch, I. D., Haeryfar, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Alloantibody-Mediated+Cytotoxicity+In+Vivo.">Quantification of Alloantibody-Mediated Cytotoxicity In Vivo.</a> Transplantation. 100 (5), 1041-1051 (2016).</li><li>Aichele, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide+antigen+treatment+of+naive+and+virus-immune+mice:+antigen-specific+tolerance+versus+immunopathology.">Peptide antigen treatment of naive and virus-immune mice: antigen-specific tolerance versus immunopathology.</a> Immunity. 6 (5), 519-529 (1997).</li><li>Oehen, S., Brduscha-Riem, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+naive+CTL+to+effector+and+memory+CTL:+correlation+of+effector+function+with+phenotype+and+cell+division.">Differentiation of naive CTL to effector and memory CTL: correlation of effector function with phenotype and cell division.</a> The Journal of Immunology. 161 (10), 5338-5346 (1998).</li><li>Coles, R. M., Mueller, S. N., Heath, W. R., Carbone, F. R., Brooks, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progression+of+armed+CTL+from+draining+lymph+node+to+spleen+shortly+after+localized+infection+with+herpes+simplex+virus+1.">Progression of armed CTL from draining lymph node to spleen shortly after localized infection with herpes simplex virus 1.</a> The Journal of Immunology. 168 (2), 834-838 (2002).</li><li>Barber, D. L., Wherry, E. J., Ahmed, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+edge:+rapid+in+vivo+killing+by+memory+CD8+T+cells.">Cutting edge: rapid in vivo killing by memory CD8 T cells.</a> The Journal of Immunology. 171 (1), 27-31 (2003).</li><li>Meilleur, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+superantigens+expand+and+activate,+rather+than+delete+or+incapacitate,+preexisting+antigen-specific+memory+CD8++T+cells.">Bacterial superantigens expand and activate, rather than delete or incapacitate, preexisting antigen-specific memory CD8+ T cells.</a> The Journal of Infectious Diseases. , (2018).</li><li>Goldszmid, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+charged+with+apoptotic+tumor+cells+induce+long-lived+protective+CD4++and+CD8++T+cell+immunity+against+B16+melanoma.">Dendritic cells charged with apoptotic tumor cells induce long-lived protective CD4+ and CD8+ T cell immunity against B16 melanoma.</a> The Journal of Immunology. 171 (11), 5940-5947 (2003).</li><li>Oberg, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+or+mismatch+of+MHC+class+I+is+sufficient+to+trigger+NK+cell-mediated+rejection+of+resting+lymphocytes+in+vivo+-+role+of+KARAP/DAP12-dependent+and+-independent+pathways.">Loss or mismatch of MHC class I is sufficient to trigger NK cell-mediated rejection of resting lymphocytes in vivo - role of KARAP/DAP12-dependent and -independent pathways.</a> European Journal of Immunology. 34 (6), 1646-1653 (2004).</li><li>Wingender, G., Krebs, P., Beutler, B., Kronenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen-specific+cytotoxicity+by+invariant+NKT+cells+in+vivo+is+CD95/CD178-dependent+and+is+correlated+with+antigenic+potency.">Antigen-specific cytotoxicity by invariant NKT cells in vivo is CD95/CD178-dependent and is correlated with antigenic potency.</a> The Journal of Immunology. 185 (5), 2721-2729 (2010).</li><li>Brinster, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+harboring+SV40+T-antigen+genes+develop+characteristic+brain+tumors.">Transgenic mice harboring SV40 T-antigen genes develop characteristic brain tumors.</a> Cell. 37 (2), 367-379 (1984).</li><li>Tatum, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T+cells+targeting+a+single+immunodominant+epitope+are+sufficient+for+elimination+of+established+SV40+T+antigen-induced+brain+tumors.">CD8+ T cells targeting a single immunodominant epitope are sufficient for elimination of established SV40 T antigen-induced brain tumors.</a> The Journal of Immunology. 181 (6), 4406-4417 (2008).</li><li>Schell, T. D., Tevethia, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+advanced+choroid+plexus+tumors+in+SV40+T+antigen+transgenic+mice+following+priming+of+donor+CD8(+)+T+lymphocytes+by+the+endogenous+tumor+antigen.">Control of advanced choroid plexus tumors in SV40 T antigen transgenic mice following priming of donor CD8(+) T lymphocytes by the endogenous tumor antigen.</a> The Journal of Immunology. 167 (12), 6947-6956 (2001).</li><li>Greenberg, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostate+cancer+in+a+transgenic+mouse.">Prostate cancer in a transgenic mouse.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92 (8), 3439-3443 (1995).</li></ol>

CFSE-baserade in vivo cytotoxicitet analyser erbjuder flera fördelar jämfört med traditionella dödande analyser såsom radioaktivt krom (51CR) Release och kolorimetrisk laktatdehydrogenas (LDH) frisättning analyser. Först, de tillåter övervakning av CTL-funktionen inom en arkitektoniskt intakt sekundära lymfoida organ.
För det andra, det specifika dödandet av mål celler i in vivo cytotoxicitet analyser återspeglar det absoluta antalet AG-specifika TCD8, som v...

Konventionella CD8+ t-celler (tCD8) spela viktiga delar i cancer immun övervakning. De fungerar främst i kapaciteten hos cytolytiska T-lymfocyter (CTL) som erkänner tumörspecifika eller-associerade peptid antigener (AGS) visas inom den slutna spalten av större histocompatibility complex (MHC) klass I molekyler. Fullt beväpnade CTL använder sin cytotoxiska arsenal för att förstöra maligna celler. Mot cancer TCD8 kan upptäckas i cirkulationen eller ens inne primära och metastaserande massor av många cancer patienter och tumör-bärande djur. Emellertid, de är ofta anergic eller utmattad och Miss lyckas med att utrota cancer. Därför, många immunterapeutiska metoder är utformade för att öka cancer TCD8 frekvenser och för att återställa och öka deras funktioner.
Tumör proteiner hamn många peptider, av vilka några kan vara immunogena och potentiellt immunoprotective. Emellertid, kvantifierbara TCD8 svar framkallas med varierande magnituder mot endast några peptider. Detta skapar en "immunodominans hierarki" bland TCD8 kloner1. Följaktligen, immundominerande (ID) TCD8 ockupera framstående hierarkiska leden, som ofta bedöms av deras överflöd. I kontrast, tCD8 celler vars t cell receptor (TCR) är specifik för Subdominant (SD) epitoper förekommer i lägre frekvenser. Vi och andra har identifierat några av de faktorer som dikterar eller forma immunodominans i TCD8 svar. Dessainkluderar bland annat läge AG presentation till naiva TCD8 (dvs., direkt presentation, cross-presentation, cross-dressing)2,3,4, den typ av AG-presenterande celler (APCS) deltar i TCD8 aktivering5, överflöd och stabilitet av protein AGS6,7 och effektivitet och kinetik av deras nedbrytning av proteasomer7,8, den relativ selektivitet av transportör i samband med AG Processing (TAP) för peptider9, affinitet av befriade peptider för MHC i molekyler9,10, närvaron, föregångare frekvenser och TCR mångfald av besläktat tCD8 i t-cellspooler11,12,13, cross-konkurrens mellan T-celler för till gång till APCS14,15, och brödra kapacitet av TCD8 kloner16. Dessutom är TCD8 immunodominans utsätts för immunoregulatoriska mekanismer medieras av flera suppressor cell typer såsom naturligt förekommande regulatoriska T (nTreg) celler17, cellytan co-hämmande molekyl programmerad död-1 (PD-1)16, och vissa intracellulära enzymer såsom indoleamin 2, 3-dioxygenas (Ido)18 och däggdjurs målet för Rapamycin (mTOR)19. Det är dock viktigt att notera att ovanstående faktorer inte alltid fullt ut står för immunodominans.
Bortsett från den grundläggande biologi av TCD8 immunodominans, undersökning av denna spännande fenomen har viktiga konsekvenser i cancer immunologi och immun terapi. Först, en ID-status inte nödvändigt vis ge en given TCD8 klon förmågan att förhindra tumör initiering eller progression20. Om och hur ID och SD TCD8 bidra till antitumöreffekt immunitet kan vara beroende av vilken typ och omfattningen av malignitet och det experimentella systemet används. För det andra, det är tänkt att ID TCD8 kloner kan vara "alltför synlig" till immun försvaret och därmed mer benägna att centrala och/eller perifera tolerans mekanismer16,21. Tredje, heterogena tumörer kan innehålla neoplastiska celler som undviker upptäckt av många, om inte de flesta, CTL genom att visa endast ett smalt spektrum av peptid: MHC komplex. Under dessa omständigheter, TCD8 svar av otillräcklig bredd är sannolikt att ge sådana tumör celler en överlevnad fördel, vilket potentierar deras utväxt22. Det är av ovanstående skäl som många ser immunodominans som ett hinder för framgångs rik TCD8-baserad vaccination och terapier mot cancer.
Inympning av C57BL/6 möss med Simian virus 40 (SV40)-omvandlas celler som uttrycker stora tumör AG (T AG) ger ett kraftfullt prekliniska system för att studera TCD8 immunodominans. Denna modell erbjuder flera fördelar. Först, peptid epitoper av denna kliniskt relevanta onkoprotein är väl kännetecknas i denna mus stam23 (tabell 1). För det andra, T AG epitopes, som kallas platser I, II/III, IV, och V, utlösa TCD8 svar som konsekvent arrangeras i följande hierarkiska ordning: plats iv > > plats i ≥ plats II/iii > &Gt; plats V. Följaktligen, plats IV-specifika TCD8 montera den mest robusta responsen på T AG. I motsats, platser i och II/III är Subdominant, och plats V-specifika TCD8 är minst riklig och oftast bara upptäckas i avsaknad av lyhördhet för andra epitoper23,24. Tredje, T AG+ tumör cellinjen används i protokollet som beskrivs häri, nämligen C57SV fibrosarkom celler, och de som används i våra tidigare undersökningar16,17,18,19 ,25,26, transformeras med subgenomic SV40 fragment25. Därför, de är oförmögna att montera och släppa SV40 virioner som potentiellt kan infektera värd APCs. Dessutom, C57SV celler saknar klassiska stimulatoriska molekyler som CD80 (B7-1), CD86 (B7-2), och CD137 ligand (4-1bbl)16. Ovanstående attribut gör dessa linjer idealiska för undersökning av in vivo TCD8 aktivering via Cross-priming. Cross-priming är en viktig väg att framkalla TCD8 svar, särskilt de som inletts mot tumör celler av icke-hematopoetiska ursprung som inte direkt Prime naiva t-celler25.
Antitumöreffekt TCD8 frekvenser och/eller funktioner kan övervakas av MHC jag propylentetramer färgning, intracellulär färgning för effektor cytokiner (t. ex., interferon [IFN]-γ) eller lytiska molekyler (t. ex. perforin), enzymlänkade Immunospot (ELISpot) analyser och ex -analyser av cytotoxicitet. Sedan starten på 1990-talet27,28, carboxyfluorescein succinimidylester (cfse)-baserade in vivo dödande analyser har möjliggjort utvärdering av cytotoxiska svar medierade av antiviral ctls29,30 , 31, antitumöreffekt ctls16,32, Natural Killer (nk) celler33, glykolipid-reaktivt invariant naturliga mördare T (inkt) celler34, och redan existerande och de Novo givar-specifika alloantikroppar26. Därför kan deras ansökningar vara av intresse för en bred läsekrets, inklusive men inte begränsat till utredare som arbetar inom områdena tumör immunologi och immunoterapi, anti-patogen immunitet, och förebyggande och terapeutiska vaccin design.
För att bedöma Cell-medierad cytotoxicitet i typiska scenarier, två populationer av naiva splenocyter som uppvisar antingen en irrelevant AG eller en besläktat AG (s) är märkta med två olika doser av cfse, blandat i lika många och injiceras i naiva (kontroll) eller mördare cell-hysa möss. Närvaron/frånvaron av varje mål population unders öks sedan genom flödescytometri.
Vi har optimerat och använt in vivo dödande analyser i våra studier om immunodominans i både antivirala och antitumöreffekt TCD8 svar12,16,17. Här ger vi ett detaljerat protokoll för samtidig bedömning av ID och SD TCD8 svar på T AG epitopes, som lätt kan antas för liknande undersökningar i andra experimentella system. Vi ger också representativa resultat som visar att nTreg cell utarmning och PD-1 blockad kan selektivt förbättra ID TCD8-och SD TCD8-inducerad cytotoxicitet, respektive. I slutet kommer vi att diskutera flera fördelar med in vivo dödande analyser samt några av deras inneboende begränsningar.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:872px;" width="871">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">0.25% Trypsin-EDTA (1X)</td>
			<td style="width:164px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:163px;">25200-056</td>
			<td style="width:211px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ACK Lysing Buffer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:163px;">A1049201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-mouse CD25 (clone PC-61.5.3)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BE0012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-mouse PD-1 (clone RMP1-14)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BE0146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CFSE</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>C34554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM (1X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11965-092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Wisent Bioproducts</td>
			<td>080-150</td>
			<td>Heat-inactivate prior to use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GlutaMAX (100X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HEPES (1M)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15630080</td>
			<td>10 mM final concentration</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MEM Non-Essential Amino Acids Solution (100X)&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11140-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P0781</td>
			<td>Stock is 100X</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG1 (clone KLH/G1-2-2)</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>0116-01</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG1 (clone HRPN)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BE0088</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG1 (clone TNP6A7)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BP0290</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG2a (clone 2A3)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BP0089</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI 1640 (1X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11875-093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Pyruvate (100 mM)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11360-070</td>
			<td>1 mM final concentration</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tailoring in vivo cytotoxicity assays to study immunodominance in tumor-specific cd8+ t cell responses

Carboxyfluorescein succinimidylester (cfse)-baserade in vivo cytotoxicitet analyser möjliggöra känslig och noggrann kvantitation av CD8+ cytolytisk T lymfocyt(CTL) svar framkallas mot tumör-och patogen-härledda peptider. De erbjuder flera fördelar jämfört med traditionella dödande analyser. Först, de tillåter övervakning av CTL-medierad cytotoxicitet inom arkitektoniskt intakt sekundära lymfoida organ, typiskt i mjälte. För det andra, de tillåter mekanistiska studier under priming, effektor och återkalla faser av CTL svar. För det tredje, de ger användbara plattformar för vaccin/läkemedels effekt testning i en verkligt in vivo-inställning. Här ger vi ett optimerat protokoll för undersökning av samtidiga CTL svar mot mer än en peptid epitop av en modell tumör antigen (AG), nämligen, Simian virus 40 (SV40)-kodade stora T AG (T AG). Liksom de flesta andra kliniskt relevanta tumör proteiner, T AG hamnar många potentiellt immunogena peptider. Emellertid, endast fyra sådana peptider inducera detekterbara CTL svar i C57BL/6 möss. Dessa svar är genomgående ordnade i en hierarkisk ordning baserat på deras storlek, som utgör grunden för TCD8 "immunodominans" i detta kraftfulla system. Följaktligen är merparten av t AG-specifika tCD8 svar fokuserat mot en enda immundominerande epitop medan de andra tre epitoper erkänns och svarade endast svagt. Immunodominans äventyrar bredden av antitumöreffekt TCD8 svar och är, som sådan, anses av många som ett hinder för framgångs rik vaccination mot cancer. Därför, det är viktigt att förstå de cellulära och molekyl ära faktorer och mekanismer som dikterar eller formar TCD8 immunodominans. Det protokoll vi beskriver här är skräddarsytt för utredning av detta fenomen i T AG immunisering modell, men kan lätt modifieras och utvidgas till liknande studier i andra tumör modeller. Vi ger exempel på hur effekten av experimentella immunterapeutiska interventioner kan mätas med in vivo cytotoxicitetsanalyser.

Målet med experimentet vars resultat avbildas i figur 1 var att avgöra om förekomst och funktioner av nTreg celler forma eller ändra immunodominans hierarkin av t AG-specifika tCD8. C57BL/6 möss injicerades i.p. med PBS eller med 0,5 mg av en anti-CD25 mAb (klon PC-61.5.3 [PC61]) fyra dagar innan de fick 2 x 107 C57SV tumör celler i.p. I separata experiment, en råtta IgG1 isotyp kontroll användes i stället för PBS. Framgångs rik nTreg cell utarmning av PC61 b...

Watch this Scientific Journal Video about Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses at JoVE.com

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Skräddarsy in vivo cytotoxicitet assays att studera Immunodominans i Tumörspecifika CD8+ T cell svar

Vi beskriver här en flödescytometri-baserad in vivo dödande analys som möjliggör undersökning av immunodominans i cytotoxiska T-lymfocyter (CTL) svar på en modell tumör antigen. Vi ger exempel på hur denna eleganta analys kan vara anställd för mekanistiska studier och för läkemedels effekt testning.

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)-based in vivo cytotoxicity assays enable sensitive and accurate quantitation of CD8+ cytolytic T lymphocyte ...

Denna analys kan användas för att kvantifiera T-cell-medierad cytotoxicitet mot två distinkta peptid epitopes av tumör antigener samtidigt. In vivo-naturen hos denna analys möjliggör att cytotoxisk funktion hos T-celler mäts inom den intakta arkitekturen hos ett sekundärt lymfoidt organ. Dessutom är dödandet observerat en korrekt återspegling av det absoluta antalet T-celler, och inte bara deras frekvenser, vilket kan vara missvisande.Denna analys möjliggör undersökning av cytotoxiska T-cell svar på immunodominant och sub-dominerande tumör antigener. Det ger därför värdefull information när du designar ett vaccin, samt immunterapeutiska protokoll för cancer. Vårt protokoll har skräddarsytts för att studera CD8 T-cellsvar.Emellertid, Det kan ändras för att mäta cytotoxicitet framkallas av andra mördarcelltyper, såsom NK-celler och medfödda-liknande T-lymfocyter. Denna analys kräver erfarenhet av aseptisk teknik, musvävnadshantering, målcell prep, samt expertis i svansven injektioner. Man måste förvärva denna kompetens som innan du försöker in vivo dödande assay.När T-antigen-positiva vidhäftande tumör cellinje har blivit helt konfluent eller något överkonflent, försiktigt skölja monolayer med steril, varm PBS, och lossa tumörcellerna med 0,25%trypsin EDTA i en biosäkerhet skåp. Knacka flera gånger på sidorna av odlingskolven för att frigöra de återstående vidhäftande cellerna, och stoppa reaktionen efter cirka fem minuter med tillsats av fem milliliter DMEM-medium. Pipettera celllösningen några gånger innan cellupphängningen filtreras genom en 70-mikrometer-pore cellsil till ett koniskt rör på 50 milliliter.Samla cellerna genom centrifugeringen, och resuspend pelleten i 10 milliliter av steril, kall PBS för den första av tre tvättar under samma förhållanden. Efter den tredje tvätten, resuspend cellerna på en fyra gånger 10 till de sju cellerna per milliliter av steril PBS koncentration, och injicera 500 microliters av T-antigen-positiva tumör cell suspension intraperitoneally i varje sex-till-12-veckors gamla C57 Black 6 mus mottagare. För mål splenocyte förberedelse, placera den avlivade givaren musen i utsatt läge, och spraya djuret med 70%etanol.Använda sterila tång och sax, lyft huden och göra en liten ventrala mittlinjen snitt. Skär huden på ett tvärliknande sätt för att exponera peritoneum, och använda tåten för att dra upp peritoneum i ett tält-liknande sätt, utan att fånga någon av de inre organen. Skär upp bukhinnan för att exponera bukhinnan hålighet, och försiktigt överföra mjälten till en 15-milliliter Dounce vävnad slipmaskin som innehåller fem milliliter steril PBS.Använd kolven för att applicera manuellt tryck tills den spleniska vävnaden avleder till en röd homogen cellupphängning, och överför homogenatet till ett 15-milliliterrör. Samla upp suspensionen genom centrifugeringen, och resuspend pelleten i fyra milliliter av ammoniumklorid kalium lysin buffert för att eliminera erytrocyterna. Efter fyra minuter, stoppa processen med åtta milliliter komplett medium, och filtrera cellen suspensionen genom en 70-mikrometer-pore cell sil i en ny 50-milliliter rör.Separera de vita blodkropparna från den röda blodkroppar skräp genom centrifugeringen, och resuspend pelleten i 12 milliliter av komplett medium. Sedan dela splenocyte suspensionen i tre lika fyra-milliliter alikvoter. För peptid som kodifierar av uppsätta som målspjälcyt, pulserar en splenocyte aliquot med en micromolar av irrelevant peptid, en aliquot med en micromolar av plats I peptide, och en aliquot med en micromolar av plats IV peptid för en timme på 37 grader celsiust och 5%koldioxid.I slutet av inkubationen, avlägsna överskottspeptid genom centrifugation och tvätta de peptid-pulsade splenocyterna två gånger i 12 milliliter steril, kall PBS per tvätt per rör. Efter den andra tvätten, resuspend cellerna i fyra milliliter av färska, sterila PBS per rör. Lägg till 025, 0,25, och två-mikromolar CFSE i den irrelevanta, Site I, och Site IV peptid-pulsed splenocyte suspensioner respektive.Placera rören på 37 grader Celsius i 15 minuter med manuell inversion en gång var femte minut. I slutet av inkubationen, tillsätt tre milliliter värme-inaktiverade fetala nötkreatur serum till varje rör för att stoppa CFSE reaktion och föra den slutliga volymen i varje rör upp till 15 milliliter med PBS. Samla sedan de färgämnesmärkta cellerna genom centrifugering för två tvättar i 12 milliliter färsk, steril PBS per tvätt.För att bekräfta en adekvat CFSE-märkning av målspjältincyterna, resuspend pelleten i tre milliliter pbs och blanda med mild virvelning. Överför 10 mikroliter från varje CFSE-märkt cellupphängning till en individuell fem-milliliter rund botten polystyren fluorescens-aktiverad cellsortering, eller FACS-röret, som innehåller PBS, och ladda röret på en flödescytometer utrustad med en 488-nanometerlaser. I flödet cytometer programvara, skapa en lymfocyt gate baserat på framåt scatter och sidan scatter egenskaper av cellerna innan förvärva 5, 000 händelser som faller inom lymfocyt porten i Fluorescens 1 kanal.Inom den överordnade CFSE-positiva populationen, rita ytterligare histogram grindar för att identifiera CFSE-låg, CFSE-mellanliggande, och CFSE-hög subpopulationer. Bekräfta sedan ett lika stort eller ett nästan lika stort händelsenummer inom de tre portarna för de andra två rören av märkta celler. För injektion av målcellerna, först försiktigt virvel källrören och pool de tre CFSE-märkta cell suspensioner i ett nytt rör på lika förhållanden.Fylla på tubinnehållet med steril PBS, och samla in cellerna genom centrifugeringen för räkning. Justera sedan volymen till en en gång 10 till de sju blandade målceller per 200 mikroliter PBS per mottagarkoncentration, och injicera 200 mikrolitervolymer av cellupphängningen i svansvenen hos varje mottagare C57 Black 6-mus. Två eller fyra timmar efter injektionen, ta bort och bearbeta mjälten av varje mottagare djur som visats, och återanvända de isolerade vita blodkropparna i tre milliliter PBS per mjälte.Överför ungefär en gång 10 till de sju cellerna från varje bearbetad mjälte till ett rent FACS-rör, och kör omedelbart cellerna på flödescytometern som visats för att gate cfse-låg, mellanliggande och hög mål cell populationer. Sedan förvärva totalt 2, 000 CFSE-låg händelser i Fluorescence 1 kanal, och beräkna den specifika lys av varje cognate mål cellpopulation enligt formeln som beskrivs i texten. I detta representativa experiment bekräftades framgången för utarmningen av naturligt förekommande reglerande T-celler i möss som injiceras med anti-CD25 monoklonal antikropp av flödescytometri.Som väntat var nästan lika toppar som motsvarar kontroll- och konjakinmålscellerna detekterbara hos naiva möss. Däremot var Site-IV-visar målceller nästan helt frånvarande i T-antigen-primade möss, oavsett deras tidigare behandling med anti-CD25 monoklonal antikropp eller PBS. Intressant, naturligt förekommande T reg cell utarmning av anti-CD25 monoklonala antikroppar utökas in vivo cytotoxiska T-lymfocyt-medierad lys av Site-I-pulsed målceller.I denna andra representativa undersökning, programmerade död 1 blockad förstärkt sub-dominerande CD8-positiva T cell platser en och två-slash-tre-specifika svar, vilket tyder på att störa programmerad död 1/programmerad död ligand 1 interaktioner kan inducera epitope-spridning i anti-cancer CD8-positiva T-cell svar. Det är viktigt när du märker dina donatorceller med CFSE, se till att dina koncentrationer är exakta. Annars kan detta resultera i överlappande histogramtoppar, som gör dina nödvändiga beräkningar och datatolkning svårt, om inte omöjligt.Det kommer att vara viktigt att optimera in vivo cytotoxicitet analyser att kvantifiera effektor funktioner framkallas av olika killer celltyper som känner igen peptid och icke-peptid antigener i samma värd.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

Retroviral Transduction av T-cell receptorer i Mus T-celler

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Competitive Homing Assays to Study Gut-tropic T Cell Migration

Konkurrenskraftiga Homing Analyser för att studien Gut-tropism T cell migration

In order to exert their function lymphocytes need to leave the blood and migrate into different tissues in the body. Lymphocyte adhesion to endothelial ...

Quantitative High-throughput Single-cell Cytotoxicity Assay For T Cells

Kvantitativ hög kapacitet encelliga cytotoxicitetsanalys för T-celler

Cancer immunotherapy can harness the specificity of  immune response to target and eliminate tumors. Adoptive cell therapy (ACT)  based on the adoptive ...

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

Användning av fluorescerande Target matriser för bedömning av T-cellssvar<em&gt; In vivo</em

The ability to monitor T cell responses in vivo is important for the development of our understanding of the immune response and the design of ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Transplantation av Tail Hud att Studera Allogen CD4 T-cellsvar hos möss

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Whole-animal Imaging and Flow Cytometric Techniques for Analysis of Antigen-specific CD8+ T Cell Responses after Nanoparticle Vaccination

Hel-djur Imaging och Flödescytometrisk Tekniker för analys av antigen-specifika CD8 + T-cellssvar efter Nanoparticle Vaccination

Traditional vaccine adjuvants, such as alum, elicit suboptimal CD8+ T cell responses. To address this major challenge in vaccine development, various ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolering av Salmonella typhimurium-innehållande Phagosomes från makrofager

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

Ett sug Blister protokoll att studera mänsklig T-cell Recall Svaren In Vivo

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Karakterisering av Thymus-beroende och oberoende av Thymus immunglobulin isotypen Svaren hos möss använder Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

Optimized Interferon-gamma ELISpot Assay to Measure T Cell Responses in the Guinea Pig Model after Vaccination

Optimerad Interferon-gamma ELISpot Assay till åtgärd T-Cell svar i Guinea Pig modellen efter Vaccination

The guinea pig has played a pivotal role as a relevant small animal model in the development of vaccines for infectious diseases such as tuberculosis, ...