Name: tailoring in vivo cytotoxicity assays to study immunodominance in tumor-specific cd8+ t cell responses
Uploaded: 2019-05-06T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses at JoVE.com

Bu çalışma Kanada Sağlık Araştırmaları Enstitüleri (CIR) tarafından desteklenmektedir MOP-130465 ve PJT-156295 SMMH için verir. JC kısmen Ontario eğitim, kolejler ve üniversiteler Bakanlığı Bilim ve teknoloji bir Queen Elizabeth II lisansüstü bursu tarafından desteklenmektedir. CEM bir Alexander Graham Bell Kanada Yüksek Lisans Bursu (Doktora) Doğal Bilimler ve Kanada Mühendislik Araştırma Konseyi (NSERC) bir alıcı oldu.

Burada açıklanan deneyler, kurumsal varlıklar tarafından onaylanan hayvan kullanım protokollerini takip eder ve kurulan Ulusal yönergelere uyulmalıdır.
1. C57BL/6 fareler T AG-ifade tümör hücreleri ile inoculation
<ol><li>4,5 g/l D-glikoz ve L-glutamin (1x) ile Dulbecco 'nun modifiye kartal Orta (dmem) ve 1 mm sodyum piruvat ve% 10 ısı-inaktive ile tamamlayıcı bazılarında SV40-dönüştürülmüş Fibrosarkom hücre hattı C57SV (veya benzer bir T AG+ yapışkan h...

<ol>
	<li>Yewdell, J. W., Bennink, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominance+in+major+histocompatibility+complex+class+I-restricted+T+lymphocyte+responses.">Immunodominance in major histocompatibility complex class I-restricted T lymphocyte responses.</a> Annual Review of Immunology. 17, 51-88 (1999).</li><li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+in+the+immunodominance+hierarchy+in+secondary+CD8++T+cell+responses+to+influenza+A+virus:+roles+for+cross-presentation+and+lysis-independent+immunodomination.">Reversal in the immunodominance hierarchy in secondary CD8+ T cell responses to influenza A virus: roles for cross-presentation and lysis-independent immunodomination.</a> The Journal of Immunology. 173 (8), 5021-5027 (2004).</li><li>Otahal, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inefficient+cross-presentation+limits+the+CD8++T+cell+response+to+a+subdominant+tumor+antigen+epitope.">Inefficient cross-presentation limits the CD8+ T cell response to a subdominant tumor antigen epitope.</a> The Journal of Immunology. 175 (2), 700-712 (2005).</li><li>Lauron, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-priming+induces+immunodomination+in+the+presence+of+viral+MHC+class+I+inhibition.">Cross-priming induces immunodomination in the presence of viral MHC class I inhibition.</a> PLoS Pathogens. 14 (2), e1006883 (2018).</li><li>Crowe, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+antigen+presentation+regulates+the+changing+patterns+of+CD8++T+cell+immunodominance+in+primary+and+secondary+influenza+virus+infections.">Differential antigen presentation regulates the changing patterns of CD8+ T cell immunodominance in primary and secondary influenza virus infections.</a> The Journal of Experimental Medicine. 198 (3), 399-410 (2003).</li><li>Probst, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominance+of+an+antiviral+cytotoxic+T+cell+response+is+shaped+by+the+kinetics+of+viral+protein+expression.">Immunodominance of an antiviral cytotoxic T cell response is shaped by the kinetics of viral protein expression.</a> The Journal of Immunology. 171 (10), 5415-5422 (2003).</li><li>Gileadi, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+an+immunodominant+CTL+epitope+is+affected+by+proteasome+subunit+composition+and+stability+of+the+antigenic+protein.">Generation of an immunodominant CTL epitope is affected by proteasome subunit composition and stability of the antigenic protein.</a> The Journal of Immunology. 163 (11), 6045-6052 (1999).</li><li>Zanker, D., Waithman, J., Yewdell, J. W., Chen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mixed+proteasomes+function+to+increase+viral+peptide+diversity+and+broaden+antiviral+CD8++T+cell+responses.">Mixed proteasomes function to increase viral peptide diversity and broaden antiviral CD8+ T cell responses.</a> The Journal of Immunology. 191 (1), 52-59 (2013).</li><li>Deng, Y., Yewdell, J. W., Eisenlohr, L. C., Bennink, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MHC+affinity,+peptide+liberation,+T+cell+repertoire,+and+immunodominance+all+contribute+to+the+paucity+of+MHC+class+I-restricted+peptides+recognized+by+antiviral+CTL.">MHC affinity, peptide liberation, T cell repertoire, and immunodominance all contribute to the paucity of MHC class I-restricted peptides recognized by antiviral CTL.</a> The Journal of Immunology. 158 (4), 1507-1515 (1997).</li><li>Chen, W., Khilko, S., Fecondo, J., Margulies, D. H., McCluskey, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determinant+selection+of+major+histocompatibility+complex+class+I-restricted+antigenic+peptides+is+explained+by+class+I-peptide+affinity+and+is+strongly+influenced+by+nondominant+anchor+residues.">Determinant selection of major histocompatibility complex class I-restricted antigenic peptides is explained by class I-peptide affinity and is strongly influenced by nondominant anchor residues.</a> The Journal of Experimental Medicine. 180 (4), 1471-1483 (1994).</li><li>Kotturi, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naive+precursor+frequencies+and+MHC+binding+rather+than+the+degree+of+epitope+diversity+shape+CD8++T+cell+immunodominance.">Naive precursor frequencies and MHC binding rather than the degree of epitope diversity shape CD8+ T cell immunodominance.</a> The Journal of Immunology. 181 (3), 2124-2133 (2008).</li><li>Haeryfar, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Terminal+deoxynucleotidyl+transferase+establishes+and+broadens+antiviral+CD8++T+cell+immunodominance+hierarchies.">Terminal deoxynucleotidyl transferase establishes and broadens antiviral CD8+ T cell immunodominance hierarchies.</a> The Journal of Immunology. 181 (1), 649-659 (2008).</li><li>Leon-Ponte, M., Kasprzyski, T., Mannik, L. A., Haeryfar, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+immunodominance+hierarchies+of+influenza+A+virus-specific+H-2(b)-restricted+CD8++T+cells+in+the+absence+of+terminal+deoxynucleotidyl+transferase.">Altered immunodominance hierarchies of influenza A virus-specific H-2(b)-restricted CD8+ T cells in the absence of terminal deoxynucleotidyl transferase.</a> Immunological Investigations. 37 (7), 714-725 (2008).</li><li>Kedl, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cells+compete+for+access+to+antigen-bearing+antigen-presenting+cells.">T cells compete for access to antigen-bearing antigen-presenting cells.</a> The Journal of Experimental Medicine. 192 (8), 1105-1113 (2000).</li><li>Kastenmuller, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-competition+of+CD8++T+cells+shapes+the+immunodominance+hierarchy+during+boost+vaccination.">Cross-competition of CD8+ T cells shapes the immunodominance hierarchy during boost vaccination.</a> The Journal of Experimental Medicine. 204 (9), 2187-2198 (2007).</li><li>Memarnejadian, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-1+Blockade+Promotes+Epitope+Spreading+in+Anticancer+CD8(+)+T+Cell+Responses+by+Preventing+Fratricidal+Death+of+Subdominant+Clones+To+Relieve+Immunodomination.">PD-1 Blockade Promotes Epitope Spreading in Anticancer CD8(+) T Cell Responses by Preventing Fratricidal Death of Subdominant Clones To Relieve Immunodomination.</a> The Journal of Immunology. 199 (9), 3348-3359 (2017).</li><li>Haeryfar, S. M., DiPaolo, R. J., Tscharke, D. C., Bennink, J. R., Yewdell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells+suppress+CD8++T+cell+responses+induced+by+direct+priming+and+cross-priming+and+moderate+immunodominance+disparities.">Regulatory T cells suppress CD8+ T cell responses induced by direct priming and cross-priming and moderate immunodominance disparities.</a> The Journal of Immunology. 174 (6), 3344-3351 (2005).</li><li>Rytelewski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+immunodominant+antitumor+and+antiviral+CD8++T+cell+responses+by+indoleamine+2,3-dioxygenase.">Suppression of immunodominant antitumor and antiviral CD8+ T cell responses by indoleamine 2,3-dioxygenase.</a> PLoS One. 9 (2), e90439 (2014).</li><li>Maleki Vareki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+regulation+of+simultaneous+antitumor+and+alloreactive+CD8(+)+T-cell+responses+in+the+same+host+by+rapamycin.">Differential regulation of simultaneous antitumor and alloreactive CD8(+) T-cell responses in the same host by rapamycin.</a> American Journal of Transplantation. 12 (1), 233-239 (2012).</li><li>Irvine, K., Bennink, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+influencing+immunodominance+hierarchies+in+TCD8++-mediated+antiviral+responses.">Factors influencing immunodominance hierarchies in TCD8+ -mediated antiviral responses.</a> Expert Review of Clinical Immunology. 2 (1), 135-147 (2006).</li><li>Grossmann, M. E., Davila, T., Celis, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Avoiding+tolerance+against+prostatic+antigens+with+subdominant+peptide+epitopes.">Avoiding tolerance against prostatic antigens with subdominant peptide epitopes.</a> Journal of Immunotherapy. 24 (3), 237-241 (2001).</li><li>Schreiber, H., Wu, T. H., Nachman, J., Kast, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodominance+and+tumor+escape.">Immunodominance and tumor escape.</a> Seminars in Cancer Biology. 12 (1), 25-31 (2002).</li><li>Mylin, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitation+of+CD8(+)+T-lymphocyte+responses+to+multiple+epitopes+from+simian+virus+40+(SV40)+large+T+antigen+in+C57BL/6+mice+immunized+with+SV40,+SV40+T-antigen-transformed+cells,+or+vaccinia+virus+recombinants+expressing+full-length+T+antigen+or+epitope+minigenes.">Quantitation of CD8(+) T-lymphocyte responses to multiple epitopes from simian virus 40 (SV40) large T antigen in C57BL/6 mice immunized with SV40, SV40 T-antigen-transformed cells, or vaccinia virus recombinants expressing full-length T antigen or epitope minigenes.</a> Journal of Virology. 74 (15), 6922-6934 (2000).</li><li>Fu, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+endoplasmic+reticulum-targeting+signal+sequence+enhances+the+immunogenicity+of+an+immunorecessive+simian+virus+40+large+T+antigen+cytotoxic+T-lymphocyte+epitope.">An endoplasmic reticulum-targeting signal sequence enhances the immunogenicity of an immunorecessive simian virus 40 large T antigen cytotoxic T-lymphocyte epitope.</a> Journal of Virology. 72 (2), 1469-1481 (1998).</li><li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-priming+of+CD8++T+cells+by+viral+and+tumor+antigens+is+a+robust+phenomenon.">Cross-priming of CD8+ T cells by viral and tumor antigens is a robust phenomenon.</a> European Journal of Immunology. 34 (1), 194-199 (2004).</li><li>Memarnejadian, A., Meilleur, C. E., Mazzuca, D. M., Welch, I. D., Haeryfar, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Alloantibody-Mediated+Cytotoxicity+In+Vivo.">Quantification of Alloantibody-Mediated Cytotoxicity In Vivo.</a> Transplantation. 100 (5), 1041-1051 (2016).</li><li>Aichele, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide+antigen+treatment+of+naive+and+virus-immune+mice:+antigen-specific+tolerance+versus+immunopathology.">Peptide antigen treatment of naive and virus-immune mice: antigen-specific tolerance versus immunopathology.</a> Immunity. 6 (5), 519-529 (1997).</li><li>Oehen, S., Brduscha-Riem, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+naive+CTL+to+effector+and+memory+CTL:+correlation+of+effector+function+with+phenotype+and+cell+division.">Differentiation of naive CTL to effector and memory CTL: correlation of effector function with phenotype and cell division.</a> The Journal of Immunology. 161 (10), 5338-5346 (1998).</li><li>Coles, R. M., Mueller, S. N., Heath, W. R., Carbone, F. R., Brooks, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progression+of+armed+CTL+from+draining+lymph+node+to+spleen+shortly+after+localized+infection+with+herpes+simplex+virus+1.">Progression of armed CTL from draining lymph node to spleen shortly after localized infection with herpes simplex virus 1.</a> The Journal of Immunology. 168 (2), 834-838 (2002).</li><li>Barber, D. L., Wherry, E. J., Ahmed, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+edge:+rapid+in+vivo+killing+by+memory+CD8+T+cells.">Cutting edge: rapid in vivo killing by memory CD8 T cells.</a> The Journal of Immunology. 171 (1), 27-31 (2003).</li><li>Meilleur, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+superantigens+expand+and+activate,+rather+than+delete+or+incapacitate,+preexisting+antigen-specific+memory+CD8++T+cells.">Bacterial superantigens expand and activate, rather than delete or incapacitate, preexisting antigen-specific memory CD8+ T cells.</a> The Journal of Infectious Diseases. , (2018).</li><li>Goldszmid, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+charged+with+apoptotic+tumor+cells+induce+long-lived+protective+CD4++and+CD8++T+cell+immunity+against+B16+melanoma.">Dendritic cells charged with apoptotic tumor cells induce long-lived protective CD4+ and CD8+ T cell immunity against B16 melanoma.</a> The Journal of Immunology. 171 (11), 5940-5947 (2003).</li><li>Oberg, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+or+mismatch+of+MHC+class+I+is+sufficient+to+trigger+NK+cell-mediated+rejection+of+resting+lymphocytes+in+vivo+-+role+of+KARAP/DAP12-dependent+and+-independent+pathways.">Loss or mismatch of MHC class I is sufficient to trigger NK cell-mediated rejection of resting lymphocytes in vivo - role of KARAP/DAP12-dependent and -independent pathways.</a> European Journal of Immunology. 34 (6), 1646-1653 (2004).</li><li>Wingender, G., Krebs, P., Beutler, B., Kronenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen-specific+cytotoxicity+by+invariant+NKT+cells+in+vivo+is+CD95/CD178-dependent+and+is+correlated+with+antigenic+potency.">Antigen-specific cytotoxicity by invariant NKT cells in vivo is CD95/CD178-dependent and is correlated with antigenic potency.</a> The Journal of Immunology. 185 (5), 2721-2729 (2010).</li><li>Brinster, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+harboring+SV40+T-antigen+genes+develop+characteristic+brain+tumors.">Transgenic mice harboring SV40 T-antigen genes develop characteristic brain tumors.</a> Cell. 37 (2), 367-379 (1984).</li><li>Tatum, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++T+cells+targeting+a+single+immunodominant+epitope+are+sufficient+for+elimination+of+established+SV40+T+antigen-induced+brain+tumors.">CD8+ T cells targeting a single immunodominant epitope are sufficient for elimination of established SV40 T antigen-induced brain tumors.</a> The Journal of Immunology. 181 (6), 4406-4417 (2008).</li><li>Schell, T. D., Tevethia, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+advanced+choroid+plexus+tumors+in+SV40+T+antigen+transgenic+mice+following+priming+of+donor+CD8(+)+T+lymphocytes+by+the+endogenous+tumor+antigen.">Control of advanced choroid plexus tumors in SV40 T antigen transgenic mice following priming of donor CD8(+) T lymphocytes by the endogenous tumor antigen.</a> The Journal of Immunology. 167 (12), 6947-6956 (2001).</li><li>Greenberg, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostate+cancer+in+a+transgenic+mouse.">Prostate cancer in a transgenic mouse.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92 (8), 3439-3443 (1995).</li></ol>

CFSE tabanlı in vivo sitotoksisite, radyoaktif krom (51CR) serbest bırakma ve kolorimetrik lakdamak dehidrojenaz (LDH) serbest bırakma gibi geleneksel öldürme konusunda çeşitli avantajlar sunar. İlk olarak, bir mimari olarak bozulmamış ikincil lenfoid organ içinde CTL işlevinin izlenmesi izin verir.
İkinci olarak, In vivo sitotoksisite alanında hedef hücrelerin spesifik öldürme, genellikle, ama her zaman değil, TCD8 Frekanslar dalak mevcut bir fonksiyon ...

Konvansiyonel CD8+ t hücreler (tCD8) antikanser bağışıklık gözetim önemli parçaları oynayın. Onlar öncelikle sitolitik T lenfosit kapasitesinde işlev (CTL) Bu tümör özgü veya ilişkili peptit antijenleri tanımak (AGS) büyük histokompatibilite kompleksi kapalı yarık içinde görüntülenen (MHC) sınıf ı molekülleri. Tam silahlı CTL 'Ler malign hücreleri yok etmek için sitotoksisik cephaneliği kullanır. Anticancer TCD8 dolaşımda veya birçok kanser hastalarının ve tümör taşıyan hayvanların primer ve metastatik kitlelerinde bile tespit edilebilir. Ancak, genellikle Anerjik veya yorgun ve kanser ortadan kaldırmak için başarısız. Bu nedenle, birçok immünoterapötik modaliteler antikanser TCD8 frekansları artırmak ve geri yüklemek ve işlevlerini artırmak için tasarlanmıştır.
Tümör proteinlerini birçok peptit liman, bazıları immünojenik ve potansiyel immünokoruyucu olabilir. Ancak, ölçülebilir TCD8 tepkiler sadece birkaç peptidler karşı değişen büyüklükleri ile elicited edilir. Bu TCD8 klonlar1arasında bir "immundominance hiyerarşi" oluşturur. Buna göre, immundominant (ID) TCD8 yaygın onların bolluk tarafından değerlendirilir belirgin hiyerarşik rütbe, işgal. Buna karşılık, tCD8 Cells olan t hücre reseptörü (TCR) baskın (SD) epitopları için özeldir alt frekanslarda oluşur. Biz ve diğerleri TCD8 yanıtlarında immundominance dikte veya şekil faktörleri bazı tespit ettik. Bunlar arasında, diğerleri arasında, naif TCD8 için AG sunum modu (yani, doğrudan sunum, çapraz sunum, Cross-pansuman)2,3,4, AG türü-hücre sunma (APCs) TCD8 aktivasyon5, bolluk ve protein AGS,6,7 ve verimliliği ve proteinazon7,8tarafından onların bozulması kinetiği istikrar katılan , peptitler için AG işleme (TAP) ile ilişkili ışınlayıcı göreli seçiciliği9, MHC ı molekülleri için özgürlü peptidler yakınlık9,10, varlığı, habercisi frekanslar ve TCR çeşitliliği bilat tCD8 t hücre havuzları11,12,13, APCs erişim için t hücreleri arasında çapraz rekabet14,15, ve tCD8 kardeşine karşı kapasitesi klonlar16. Buna ek olarak, TCD8 immunodominance doğal düzenleyici T (nTreg) hücreleri17, hücre yüzeyi Co-inhibitör molekül programlanmış gibi çeşitli bastırıcı hücre türleri tarafından aracılık immünoregulatory mekanizmalar tabi tutulur ölüm-1 (PD-1)16ve indoleamin 2, 3-dioxygenase (IDO)18 ve rapamyisin memeliler hedefi (mTOR)19gibi bazı hücre içi enzimler. Ancak, yukarıdaki faktörlerin her zaman tamamen immundominance için hesap olmadığını unutmayın önemlidir.
TCD8 'in temel biyolojisinin dışında, bu ilginç fenomen muayenesi kanser immünolojisinde ve immünoterapi açısından önemli etkileri vardır. İlk olarak, bir kimlik durumu mutlaka belirli bir TCD8 Clone tümör başlatma veya ilerleme20önlemek için yeteneği üzerinde görüşmek değildir. Olup olmadığını ve nasıl kimlik ve SD TCD8 antitümör bağışıklık için katkı türü ve malignite ve deneysel sistemin ölçüde bağlı olabilir. İkincisi, bu kimlik TCD8 klonlar ' çok bağışıklık sistemi ve sonuç olarak daha eğilimli merkezi ve/veya periferik tolerans mekanizmaları16,21için görünür olabilir düşünülmektedir. Üçüncü olarak, heterojenik tümörlerin çoğu değil, çoğu tarafından algılama önlemek Neoplastik hücreler içerebilir, peptid sadece dar bir spektrum görüntüleyerek CTL 'Ler: MHC kompleksleri. Bu şartlar altında, yetersiz genişlikte TCD8 tepkiler bu tür tümör hücreleri bir hayatta kalma avantajı göze muhtemeldir, böylece onların büyüme potansiyelini22. Bu yukarıdaki nedenlerden dolayı başarılı TCD8-bazlı aşılama ve kansere karşı tedaviler için bir engel olarak birçok görünüm immundominance.
Simian virüsü 40 ile C57BL/6 fareler inoculation (BAZıLARıNDA SV40)-büyük tümör AG (T AG) ifade dönüştürülmüş hücreler TCD8 immünhakimiyet çalışması için güçlü bir preklinik sistem sağlar. Bu model çeşitli avantajlar sunar. İlk olarak, bu klinik olarak alakalı ondeproteinin peptid epitopları bu fare gerinim23 ' te (Tablo 1) iyi karakterize edilir. Ikinci, T AG epitopes, hangi siteler ı, II/III, IV, ve V denir, sürekli olarak aşağıdaki hiyerarşik sırada düzenlenmiş olan TCD8 tepkiler tetik: site ıv > > site ı ≥ site II/ııı > &Gt; site V. buna göre, site IV özgü TCD8 T AG 'ye en sağlam yanıtı bağlayın. Buna karşılık, siteler ı ve II/III baskın ve site V-özgül TCD8 en az bol ve genellikle sadece diğer epitopları için yanıt yokluğunda algılanabilir23,24. Üçüncü olarak, burada açıklanan protokolde kullanılan T AG+ tümör hücresi hattı, yani C57SV Fibrosarkom hücreleri, ve önceki soruşturmalarımızda kullanılan16,17,18,19 ,25,26, subgenomic bazılarında SV40 parçaları25ile dönüştürülür. Bu nedenle, onlar montaj ve potansiyel olarak ana APU 'lar enfekte BAZıLARıNDA SV40 virions serbest edemiyor. Buna ek olarak, C57SV hücreler, CD80 (B7-1), CD86 (B7-2) ve CD137 ligand (4-1BBL)16gibi klasik costimulatory moleküllerden yoksun. Yukarıdaki nitelikler, çapraz astar yoluyla in vivo TCD8 aktivasyonunun incelenmesi için bu satırları ideal hale getirmek. Cross-astar TCD8 tepkiler inducing önemli bir yoldur, doğrudan Prime naif T hücreleri başarısız olmayan hematopoetik Orijin tümör hücrelere karşı başlatılan özellikle25.
Antitumor TCD8 frekanslar ve/veya fonksiyonlar MHC I tetramer boyama tarafından izlenebilir, efektör sitokinler için hücre içi boyama (örn., interferon [IFN]-γ) veya litik molekülleri (örneğin, perforin), enzim bağlantılı immunospot (elispot) asder ve eski Vivo sitotoksisite gösteriyor. 1990 ' larda kuruluşundan bu yana27,28, karboksflorcein succinimidyl Ester (cfse)-tabanlı in vivo öldürme deneyleri sitotoksisik yanıt değerlendirilmesi sağladı antiviral CTLS tarafından aracılı29,30 , 31, antitümör CTLS16,32, doğal katil (NK) hücreleri33, glycolipid-reaktif sabit doğal katil T (iNKT) hücreleri34, ve önceden varolan ve de Novo donör özgü alloantikorlar26. Bu nedenle, onların uygulamaları da dahil olmak üzere geniş bir okuyucuların ilgi olabilir, ancak tümör İmmunoloji ve immünoterapi, Anti-patojen bağışıklık ve önleyici ve terapötik aşı tasarımı alanlarında çalışan müfettişlere sınırlı değildir.
Tipik senaryolarda hücre aracılı sitotoksisite değerlendirmek için, ya ilgisiz bir AG veya bir bilat AG (s) görüntülemek naif splenanosit iki nüfus CFSE iki farklı doz ile etiketlenmiş, eşit sayıda karışık ve saf içine enjekte (kontrol) veya katil hücre-harsıkıcı fareler. Her hedef nüfusun varlığı/yokluğunda akış sitometri tarafından incelenir.
Hem antiviral hem de antitümör TCD8 yanıtlarında immundominance üzerinde çalışmalarımız içinde vivo öldürme testlerinde optimize edilmiş ve istihdam ettik12,16,17. Burada, diğer deneysel sistemlerde benzer araştırmalar için kolayca kabul edilebilir T AG epitopes, ID ve SD TCD8 yanıt eşzamanlı değerlendirme için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz. Ayrıca, nTreg hücre tükenmesi ve PD-1 blokajı seçici KIMLIK TCD8-ve SD tCD8-indüklenen sitotoksisite, sırasıyla artırabilir gösteren temsili sonuçlar sağlar. Sonunda, in vivo öldürme deneyleri yanı sıra bazı içsel sınırlamaları birden fazla avantajı tartışacağız.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:872px;" width="871">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">0.25% Trypsin-EDTA (1X)</td>
			<td style="width:164px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:163px;">25200-056</td>
			<td style="width:211px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ACK Lysing Buffer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:163px;">A1049201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-mouse CD25 (clone PC-61.5.3)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BE0012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-mouse PD-1 (clone RMP1-14)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BE0146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CFSE</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>C34554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM (1X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11965-092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Wisent Bioproducts</td>
			<td>080-150</td>
			<td>Heat-inactivate prior to use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GlutaMAX (100X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HEPES (1M)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15630080</td>
			<td>10 mM final concentration</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MEM Non-Essential Amino Acids Solution (100X)&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11140-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P0781</td>
			<td>Stock is 100X</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG1 (clone KLH/G1-2-2)</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>0116-01</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG1 (clone HRPN)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BE0088</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG1 (clone TNP6A7)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BP0290</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG2a (clone 2A3)</td>
			<td>Bio X Cell</td>
			<td>BP0089</td>
			<td>Isotype control</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI 1640 (1X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11875-093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Pyruvate (100 mM)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11360-070</td>
			<td>1 mM final concentration</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tailoring in vivo cytotoxicity assays to study immunodominance in tumor-specific cd8+ t cell responses

Carboxyflorcein succinimidil Ester (cfse)-based In vivo sitotoksisite, tümör-ve patojen türevi peptidler karşı elde edilen CD8+ sitolitik T lenfosit (CTL) yanıtlarının hassas ve doğru kantitasyon sağlar. Onlar geleneksel öldürme assays üzerinde çeşitli avantajlar sunuyoruz. İlk olarak, genellikle dalak içinde, mimari olarak bozulmamış ikincil lenfoid organlar içinde CTL aracılı sitotoksisitenin izlenmesi için izin verir. İkinci olarak, CTL yanıtlarının priming, efektör ve Recall aşamalarında mekanik çalışmalar yapılmasına izin verir. Üçüncü olarak, onlar gerçekten in vivo ayarı aşı/ilaç etkinliği test için yararlı platformlar sağlar. Burada, bir model tümör antijen (AG), yani, Simian virüs 40 (bazılarında SV40) kodlanmış büyük t AG (t AG) birden fazla peptit epitopu karşı eşlik eden CTL yanıtlarını incelenmesi için optimize edilmiş bir protokol sağlar. Diğer çoğu klinik olarak ilgili tümör proteinleri gibi, T AG birçok potansiyel immünojenik peptidler barındırmaz. Ancak, sadece dört böyle peptitler C57BL/6 fareler algılanabilir CTL tepkiler neden. Bu tepkiler tutarlı bir hiyerarşik sırada kendi büyüklüğü dayalı olarak düzenlenmiş, bu güçlü sistemde TCD8 "immundominance" için temel oluşturur. Buna göre, t AG 'ye özgü tCD8 yanıt toplu tek bir immundominant epitopu karşı odaklanmıştır, diğer üç epitopları tanınır ve sadece zayıf yanıt. İmmundominance antitümör TCD8 yanıt genişliği ödün ve olduğu gibi, kansere karşı başarılı aşılama için bir engel olarak birçok tarafından kabul edilir. Bu nedenle, TCD8 immundominance dikte veya şekillendiren hücresel ve moleküler faktörler ve mekanizmalar anlamak önemlidir. Biz burada tarif protokol T AG immünizasyon modelinde bu fenomen soruşturma için uyarlanmış, ancak kolayca değiştirilebilir ve diğer tümör modellerinde benzer çalışmalara uzatılabilir. Deneysel immünoterapötik müdahalelerin, in vivo sitotoksisite ile ölçülmesi hakkında örnekler sunmaktayız.

Sonuçları Şekil 1 ' de tasvir edilen denemenin amacı, nTreg hücrelerinin varlığı ve fonksiyonları, t AG 'ye özgü tCD8'nin immundominance hiyerarşisini şekillendirip değiştirmeyeceğini belirlemektir. C57BL/6 fareler PBS ile ya da 0,5 mg bir anti-CD25 MAB (klon PC-61.5.3 [PC61]) dört gün önce 2 x 107 C57SV tümör hücreleri ı.x Ayrı deneylerde PBS yerine bir sıçan IgG1 izotype kontrolü kullanılmıştır. PC61 tarafından başarılı nTreg hücre ...

Watch this Scientific Journal Video about Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses at JoVE.com

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Tümör-spesifik CD8+ T hücre tepkiler Immunodominance çalışması Için In vivo sitotoksisite assays terzilik

Burada, sitotoksisik T lenfosit (CTL) yanıt olarak bir model tümör antijeni için immundominance muayene sağlayan bir akış sitometri tabanlı in vivo öldürme tahlil tarif. Biz bu zarif tahlil mekanik çalışmalar için ve ilaç etkinliği test için istihdam olabilir nasıl örnekler sunuyoruz.

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)-based in vivo cytotoxicity assays enable sensitive and accurate quantitation of CD8+ cytolytic T lymphocyte ...

Bu tsay aynı anda tümör antijenlerinin iki farklı peptit epitoplarına karşı T-hücre aracılı sitotoksisite ölçmek için kullanılabilir. Bu tişin in vivo doğası t-hücrelerinin sitotoksik fonksiyonu ikincil bir lenfoid organın bozulmamış mimarisi içinde ölçülebilir sağlar. Buna ek olarak, gözlenen öldürme T-hücrelerinin mutlak sayısının doğru bir yansıması, ve yanıltıcı olabilir sadece onların frekansları, .Bu tetki, immündominant ve sub-dominant tümör antijenlerine sitotoksik T hücre yanıtlarının incelenmesini sağlar. Bu nedenle bir aşı tasarlarken değerli bilgiler sağlar, yanı sıra kanser için immünoterapötik protokoller. Protokolümüz CD8 T hücre yanıtlarını incelemek için özel olarak tasarlanmıştır.Ancak, nk hücreleri ve doğuştan t lenfositler gibi diğer katil hücre tipleri tarafından ortaya sitotoksisite ölçmek için değiştirilebilir. Bu töz aseptik tekniği, fare doku işleme, hedef hücre hazırlık, yanı sıra kuyruk ven enjeksiyonları uzmanlık deneyimi gerektirir. Bir in vivo öldürme tsay denemeden önce bu beceri seti elde etmek gerekir.Bir kez T-antijen-pozitif yapışık tümör hücre hattı tamamen uyumlu veya biraz aşırı confluent haline gelmiştir, hafifçe steril ile monolayer durulayın, sıcak PBS, ve bir biyogüvenlik kabinede% 0.25 tripsin EDTA ile tümör hücreleri ayırmak. Kalan yapışık hücreleri serbest bırakmak için kültür şişesinin kenarlarına birkaç kez dokunun ve beş mililitre DMEM ortamı nın eklenmesiyle yaklaşık beş dakika sonra reaksiyonu durdurun. Pipet hücre çözeltisi hücre çözeltisi 50 mililitrelik konik tüp içine 70 mikrometre-gözenek hücre süzgeci ile hücre süspansiyon filtreleme den önce birkaç kez.Santrifüj ile hücreleri toplamak ve aynı koşullar altında üç yıkar ilk steril, soğuk PBS 10 mililitre pelet resuspend. Üçüncü yıkamadan sonra, steril PBS konsantrasyonunun mililitre başına yedi hücreye dört kez 10 hücreleri yeniden askıya, ve her altı-12 haftalık C57 Siyah 6 fare alıcıiçine t-antijen-pozitif tümör hücresi süspansiyon intraperitoneally 500 mikrolitre enjekte. Hedef splenosit hazırlama için, ötanazi donör fareyi yatkın konuma getirin ve hayvanı %70 etanol püskürtün.Steril forseps ve makas kullanarak, cildi kaldırın ve küçük bir ventral orta hat kesi yapmak. Periton ortaya çıkarmak için çapraz bir şekilde deri kesin ve herhangi bir iç organları yakalamadan, bir çadır gibi bir şekilde periton çekmek için çerofma kullanın. Periton boşluğuortaya çıkarmak için periton açık kesin ve hafifçe steril PBS beş mililitre içeren 15 mililitrelik Dounce doku öğütücü için dalak aktarın.Dalak dokusu kırmızı homojen hücre süspansiyon içine dağılır kadar manuel basınç uygulamak için piston kullanın, ve 15 mililitrelik bir tüp içine homojen transfer. Santrifüj ile süspansiyon toplamak ve eritrositleri ortadan kaldırmak için amonyum klorür potasyum lizin tampon dört mililitre pelet resuspend. Dört dakika sonra, tam orta sekiz mililitre ile işlemi durdurmak ve yeni bir 50 mililitrelik tüp içine 70 mikrometre-gözenek hücre süzgeç imizle hücre süspansiyon filtre.Santrifüj ile kırmızı kan hücresi enkaz beyaz kan hücreleri ayırın ve tam orta 12 mililitre pelet resuspend. Sonra splenosit süspansiyon üç eşit dört mililitre aliquots bölün. Hedef splenositlerin peptid kodlaması için, alakasız peptid bir mikromolar ile nabız bir splenosit aliquot, Site I peptid bir mikromolar ile bir aliquot, ve 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksit bir saat için Site IV peptid bir mikromolar ile bir aliquot.Kuluçka sonunda, santrifüj ile aşırı peptid kaldırmak ve steril 12 mililitre iki kez peptid-pulsed splenosityıkamak, tüp başına yıkama başına soğuk PBS. İkinci yıkamadan sonra, tüp başına taze, steril PBS dört mililitre hücreleri yeniden askıya. Alakasız, Site I ve Site IV peptid darbeli splenosit süspansiyonları sırasıyla içine 025, 0,25 ve iki mikromolar CFSE ekleyin.Tüpleri her beş dakikada bir manuel ters çevirme ile 15 dakika boyunca 37 derecede yerleştirin. Kuluçka sonunda, CFSE reaksiyonunu durdurmak ve pbs ile 15 mililitreye kadar her tüpte son hacmi getirmek için her tüpe üç mililitre ısı-inaktive fetal sığır serumu ekleyin. Daha sonra yıkama başına taze, steril PBS 12 mililitre iki yıkar için santrifüj tarafından boya etiketli hücreleri toplamak.Hedef splenositlerin yeterli CFSE etiketini onaylamak için, pBS'nin üç mililitresinde peleti yeniden askıya alın ve nazik girdaplarla karıştırın. Her CFSE etiketli hücre süspansiyonundan 10 mikrolitreyi tek bir beş mililitrelik yuvarlak alt polistiren floresan aktif hücre sıralamasına veya PBS içeren FACS tüpüne aktarın ve tüpü 488 nanometre lazerle donatılmış bir akış sitometresine yükleyin. Akış sitometre yazılımında, Flüoresans 1 kanalında lenfosit kapısı içine düşen 5,000 olay elde etmeden önce hücrelerin ileri dağılım ve yan dağılım özelliklerine dayalı bir lenfosit kapısı oluşturun.Üst CFSE-pozitif popülasyon içinde, CFSE-düşük, CFSE-orta ve CFSE-yüksek alt popülasyonları tanımlamak için ek histogram kapıları çizin. Ardından, etiketli hücrelerin diğer iki tüpü için üç kapı içinde eşit veya neredeyse eşit olay numarasını onaylayın. Hedef hücrelerin enjeksiyonu için, ilk olarak kaynak tüplerini yavaşça girdaplayın ve üç CFSE etiketli hücre süspansiyonlarını eşit oranlarda yeni bir tüpe yerleştirin.Steril PBS ile tüp içeriğini toplayın ve saymak için santrifüj ile hücreleri toplamak. Daha sonra sesi alıcı konsantrasyonu başına 200 mikrolitre PBS başına yedi karışık hedef hücreye 10 kez ayarlayın ve her alıcıc57 Black 6 farenin kuyruk damarına hücre süspansiyonunun 200 mikrolitre lik hacimlerini enjekte edin. Enjeksiyondan iki ya da dört saat sonra, her alıcı hayvanın dalağını gösterildiği gibi çıkarın ve işlenin ve dalak başına üç mililitre PBS'de izole edilmiş beyaz kan hücrelerini yeniden askıya alın.Her işlenmiş dalaktan temiz bir FACS tüpüne yaklaşık bir kez 10 hücre aktarın ve CFSE-düşük, orta ve yüksek hedef hücre popülasyonlarına geçit vermek için gösterildiği gibi akış sitometresindeki hücreleri hemen çalıştırın. Daha sonra Floresan 1 kanalında toplam 2.000 CFSE-düşük olay elde edin ve metinde ayrıntılı formüle göre her cognate hedef hücre popülasyonunun spesifik lysis'ini hesaplayın. Bu temsili deneyde, anti-CD25 monoklonal antikor enjekte farelerde doğal olarak oluşan düzenleyici T-hücrelerinin tükenmesinin başarısı akış sitometrisi ile doğrulandı.Beklendiği gibi, kontrol ve biliş hedef hücrelerine karşılık gelen neredeyse eşit zirveler naif farelerde tespit edildi. Buna karşılık, Site-IV-görüntüleme hedef hücreleri neredeyse tamamen T-antijen-astarlı farelerde yoktu, ne olursa olsun anti-CD25 monoklonal antikor veya PBS ile önceki tedavi. İlginçtir, anti-CD25 monoklonal antikor tarafından doğal olarak meydana gelen T reg hücre tükenmesi site-I-darbeli hedef hücrelerin in vivo sitotoksik T-lenfosit aracılı lysis artırılmış.Bu ikinci temsili araştırmada, programlanmış ölüm 1 abluka gelişmiş alt-dominant CD8-pozitif T hücre siteleri bir ve iki-slash-üç-spesifik yanıtlar, programlanmış ölüm 1/programlı ölüm ligand 1 etkileşimleri ile müdahale anti-kanser CD8-pozitif T hücre yanıtlarında epitop-yayılma neden olabileceğini düşündürmektedir. Donör hücrelerinizi CFSE ile etiketlerken çok önemlidir, konsantrasyonlarınızın kesin olduğundan emin olun. Aksi takdirde bu, gerekli hesaplamalarınızı ve veri yorumunuzu imkansız olmasa da zorlaştıran histogram zirvelerinin çakışmasıyla sonuçlanabilir.Aynı konakta peptit ve peptit olmayan antijenleri tanıyan farklı öldürücü hücre tipleri tarafından ortaya çıkan efektör fonksiyonları ölçmek için in vivo sitotoksisite tahlillerini optimize etmek önemli olacaktır.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

Fare T-hücrelerinin, T-hücre reseptörleri retroviral İletimi

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Competitive Homing Assays to Study Gut-tropic T Cell Migration

Gut-tropik T Hücre Göç Eğitim Rekabetçi Homing Tahliller

In order to exert their function lymphocytes need to leave the blood and migrate into different tissues in the body. Lymphocyte adhesion to endothelial ...

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

Primer insan T hücrelerinin piggyBac Transposon Sistem Modifikasyon

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

Quantitative High-throughput Single-cell Cytotoxicity Assay For T Cells

T Hücreleri İçin Kantitatif Yüksek throughput Tek hücreli Sitotoksisite Testi

Cancer immunotherapy can harness the specificity of  immune response to target and eliminate tumors. Adoptive cell therapy (ACT)  based on the adoptive ...

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

T hücre yanıtlarının Değerlendirme Floresan hedef Dizilerin Kullanımı<em&gt; In vivo</em

The ability to monitor T cell responses in vivo is important for the development of our understanding of the immune response and the design of ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Farelerde allojenik CD4 + T hücre Cevapları Eğitim için Kuyruk Cilt Nakli

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Whole-animal Imaging and Flow Cytometric Techniques for Analysis of Antigen-specific CD8+ T Cell Responses after Nanoparticle Vaccination

Nanopartikül Aşılama sonrası analizi antijene özgü CD8 + T hücresi tepkileri için tüm hayvan Görüntüleme ve Akış Sitometrisi Teknikleri

Traditional vaccine adjuvants, such as alum, elicit suboptimal CD8+ T cell responses. To address this major challenge in vaccine development, various ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Salmonella typhimuriumyalıtım-makrofajlar üzerinden Phagosomes içeren

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

İnsan T-hücre hatırlama yanıt Vivo içinde çalışmaya emme Blister iletişim kuralı

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Timus bağlı ve timus bağımsız immünglobulin izotip yanıt Immunosorbent Assay enzim bağlı kullanarak farelerde karakterizasyonu

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...