Name: in vivo intracerebral stereotaxic injections for optogenetic stimulation of long-range inputs in mouse brain slices
Uploaded: 2019-09-20T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Intracerebral Stereotaxic Injections for Optogenetic Stimulation of Long-Range Inputs in Mouse Brain Slices at JoVE.com

Bertrand Mathon, Mérie Nassar, Li-Wen Huang ve Jean Simonnet'e stereotaksik enjeksiyon protokolünün önceki sürümlerinin geliştirilmesinde yardımcı olmaları için teşekkür ederiz ve Marin Manuel ve Patrice Jegouzo teknik yardım için. Bu çalışma Fransa Eğitim ve Araştırma Bakanlığı (L. R., L. S.), Centre National des Etudes Spatiales (M. B.) ve Agence Nationale de la Recherche Grant <span lang="FR" style="font-size: 11pt; line-height: 115%; font-family: Arial, sans-serif; color: rgb(41, 43, 49); background-image: initial; background-position: initial; background-size: initial; background-repeat: initial; background-attachment: initial; background-origin: initial; background-clip: initial;">ANR-18-CE92-0051-01 (D. F.) tarafından desteklendi.

Tüm prosedürler Avrupa Topluluğu Konseyi Direktifi (2010/63/EU) uyarınca gerçekleştirilmiştir ve Paris Descartes Üniversitesi etik komitesi tarafından onaylanmıştır. Deneyci, yerel yönetmeliklere uymak için prosedür için yetki almalıdır.
1. Deneyin planlanması
<ol><li>Hedef alınacak beyin bölgesini tanımlayın. Bir fare beyin atlası15yardımıyla enjeksiyon alanının stereotaksik koordinatlarını belirleyin. Sağ antero-dorsal talamik çekirde...

<ol>
	<li>Goodridge, J. P., Taube, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+between+the+postsubiculum+and+anterior+thalamus+in+the+generation+of+head+direction+cell+activity.">Interaction between the postsubiculum and anterior thalamus in the generation of head direction cell activity.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 17 (23), 9315-9330 (1997).</li><li>Winter, S. S., Clark, B. J., Taube, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+navigation.+Disruption+of+the+head+direction+cell+network+impairs+the+parahippocampal+grid+cell+signal.">Spatial navigation. Disruption of the head direction cell network impairs the parahippocampal grid cell signal.</a> Science. 347 (6224), 870-874 (2015).</li><li>Fan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+decrease+of+excitability+in+rat+hippocampal+neurons+through+increases+in+I(h).">Activity-dependent decrease of excitability in rat hippocampal neurons through increases in I(h).</a> Nature Neuroscience. 8 (11), 1542-1551 (2005).</li><li>Takahashi, H., Magee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathway+Interactions+and+Synaptic+Plasticity+in+the+Dendritic+Tuft+Regions+of+CA1+Pyramidal+Neurons.">Pathway Interactions and Synaptic Plasticity in the Dendritic Tuft Regions of CA1 Pyramidal Neurons.</a> Neuron. 62 (1), 102-111 (2009).</li><li>Dolleman-van der Weel, M. J., Lopes da Silva, F. H., Witter, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+nucleus+reuniens+and+entorhinal+cortex+projections+in+hippocampal+field+CA1+of+the+rat.">Interaction of nucleus reuniens and entorhinal cortex projections in hippocampal field CA1 of the rat.</a> Brain Structure &amp; Function. 222 (5), 2421-2438 (2017).</li><li>Callaway, E. M., Yuste, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulating+neurons+with+light.">Stimulating neurons with light.</a> Current Opinion in Neurobiology. 12 (5), 587-592 (2002).</li><li>Fino, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RuBi-Glutamate:+Two-Photon+and+Visible-Light+Photoactivation+of+Neurons+and+Dendritic+spines.">RuBi-Glutamate: Two-Photon and Visible-Light Photoactivation of Neurons and Dendritic spines.</a> Frontiers in Neural Circuits. 3, 2 (2009).</li><li>Mao, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-range+neuronal+circuits+underlying+the+interaction+between+sensory+and+motor+cortex.">Long-range neuronal circuits underlying the interaction between sensory and motor cortex.</a> Neuron. 72 (1), 111-123 (2011).</li><li>Zhang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+interrogation+of+neural+circuits:+technology+for+probing+mammalian+brain+structures.">Optogenetic interrogation of neural circuits: technology for probing mammalian brain structures.</a> Nature Protocols. 5 (3), 439-456 (2010).</li><li>Simonnet, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity+dependent+feedback+inhibition+may+maintain+head+direction+signals+in+mouse+presubiculum.">Activity dependent feedback inhibition may maintain head direction signals in mouse presubiculum.</a> Nature Communications. 8, 16032 (2017).</li><li>Nassar, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterior+Thalamic+Excitation+and+Feedforward+Inhibition+of+Presubicular+Neurons+Projecting+to+Medial+Entorhinal+Cortex.">Anterior Thalamic Excitation and Feedforward Inhibition of Presubicular Neurons Projecting to Medial Entorhinal Cortex.</a> Journal of Neuroscience. 38 (28), 6411-6425 (2018).</li><li>Fricker, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pyramidal+cells+of+rodent+presubiculum+express+a+tetrodotoxin-insensitive+Na++current.">Pyramidal cells of rodent presubiculum express a tetrodotoxin-insensitive Na+ current.</a> The Journal of Physiology. 587, 4249-4264 (2009).</li><li>Simonnet, J., Eug&#232;ne, E., Cohen, I., Miles, R., Fricker, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+neuroanatomy+of+rat+presubiculum.">Cellular neuroanatomy of rat presubiculum.</a> The European Journal of Neuroscience. 37 (4), 583-597 (2013).</li><li>Simonnet, J., Fricker, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+components+and+circuitry+of+the+presubiculum+and+its+functional+role+in+the+head+direction+system.">Cellular components and circuitry of the presubiculum and its functional role in the head direction system.</a> Cell and Tissue Research. 373 (3), 541-556 (2018).</li><li>Paxinos, G., Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2013).</li><li>Huang, L. -. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laminar+Localization+and+Projection-Specific+Properties+of+Presubicular+Neurons+Targeting+the+Lateral+Mammillary+Nucleus,+Thalamus,+or+Medial+Entorhinal+Cortex.">Laminar Localization and Projection-Specific Properties of Presubicular Neurons Targeting the Lateral Mammillary Nucleus, Thalamus, or Medial Entorhinal Cortex.</a> eNeuro. 4 (2), (2017).</li><li>Cruikshank, S. J., Urabe, H., Nurmikko, A. V., Connors, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathway-specific+feedforward+circuits+between+thalamus+and+neocortex+revealed+by+selective+optical+stimulation+of+axons.">Pathway-specific feedforward circuits between thalamus and neocortex revealed by selective optical stimulation of axons.</a> Neuron. 65 (2), 230-245 (2010).</li><li>Gonzalez-Sulser, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABAergic+Projections+from+the+Medial+Septum+Selectively+Inhibit+Interneurons+in+the+Medial+Entorhinal+Cortex.">GABAergic Projections from the Medial Septum Selectively Inhibit Interneurons in the Medial Entorhinal Cortex.</a> Journal of Neuroscience. 34 (50), 16739-16743 (2014).</li><li>Mathon, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increasing+the+effectiveness+of+intracerebral+injections+in+adult+and+neonatal+mice:+a+neurosurgical+point+of+view.">Increasing the effectiveness of intracerebral injections in adult and neonatal mice: a neurosurgical point of view.</a> Neuroscience Bulletin. 31 (6), 685-696 (2015).</li><li>Nassar, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity+and+overlap+of+parvalbumin+and+somatostatin+expressing+interneurons+in+mouse+presubiculum.">Diversity and overlap of parvalbumin and somatostatin expressing interneurons in mouse presubiculum.</a> Frontiers in Neural Circuits. 9, 20 (2015).</li><li>Klapoetke, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Independent+optical+excitation+of+distinct+neural+populations.">Independent optical excitation of distinct neural populations.</a> Nature Methods. 11 (3), 338-346 (2014).</li><li>Hass, C. A., Glickfeld, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-fidelity+optical+excitation+of+cortico-cortical+projections+at+physiological+frequencies.">High-fidelity optical excitation of cortico-cortical projections at physiological frequencies.</a> Journal of Neurophysiology. 116 (5), 2056-2066 (2016).</li></ol>

Tanımlanmış bir beyin bölgesinde ışığa duyarlı opsinler ifade etmek için in vivo viral enjeksiyon uzun menzilli fonksiyonel bağlantı10optogenetik analizi için bir seçim yöntemidir,11,17,18. Stereotaksik enjeksiyonlar tam olarak beynin belirli bir alanı hedef imkanı sunuyoruz. Floresan bir muhabir ile bir opsin coexpression uygun başarılı ifade ve kesin enjeksiyon sitenin ona...

Beyin bölgeleri arasındaki bağlantıyı tanımlamak nöral devreleri anlamak için gereklidir. Klasik anatomik izleme yöntemleri bölgelerarası bağlantının kurulmasına olanak sağlarken, lezyon çalışmaları bilgi akışının hiyerarşik organizasyonunu anlamaya yardımcı olur. Örneğin, uzamsal oryantasyon ve baş yön sinyali için beyin devreleri, talamustan presubiculuma kadar olan bilginin yön akışını içerir. Bu antero-dorsal talamik çekirdeklerin lezyon çalışmaları ile gösterilmiştir (ADN) downstream dorsal presubiculum baş yön sinyalini bozan, yanı sıra parahipokampal ızgara hücre sinyali1,2.
Beyin bölgeleri arasındaki fonksiyonel bağlantı hücresel ve hücre altı düzeyde kurmak daha zordur. Hipokampus, son derece organize anatomi dilim hazırlanmasında elektrik simülasyonu kullanarak yola özgü sinaptik bağlantıları araştırmak için izin verir. CA1'in stratum radyatumuna yerleştirilen stimülasyon elektrotları özellikle CA33'tenSchaffer teminat girdisini uyarmak için kullanılabilir. CA1'in stratum lacunosum molekülerine yerleştirilen uyarıcı elektrotlar, CA14,5'eperforant yol girişini aktive edecektir. Elektriksel stimülasyon akson terminallerinden nörotransmitter salınımı aktive; ancak, stimülasyon bölgesine yakın somata ile nöronlar aktive yanı sıra geçiş aksonları. Bu nedenle, neokortekste olduğu gibi, farklı orijin bölgelerinden liflerin hedef yapıda iç içe geçtiğinde, tanımlanmış beyin bölgelerinden gelen afferentlerin incelenmesinde sınırlı kullanım söz konusudur.
Nöronlar da ışık ile uyarılabilir. Optik yöntemler kafesli glutamat fotoaktivasyonu içerir, hangi bir kombine edilebilir- veya iki foton lazer tarama. Birden fazla yakın aralıklı siteler ardışık olarak uyarılabilir, doku hiçbir mekanik hasar ile6. Bu başarıyla sinaptik reseptörleri harita yanı sıra bireysel nöronlaretkinleştirmekiçin kullanılmıştır 7 . Glutamat uncaging yerel devre analizi için kullanılabilir iken, uzun menzilli girişlerin özel aktivasyonu için izin vermez.
Nöronal devrelerde uzun menzilli bağlantının araştırılması için tercih edilen bir yöntem virüs aracılı kanalrhodopsin ekspresyonu kullanımıdır. Burada açıklandığı gibi in vivo stereotaksik enjeksiyonlar kullanılarak, ışık kapılı iyon kanallarının ifadesi hedeflenebilir ve mekansal olarak istenilen beyin bölgesi ile sınırlı olabilir. Bu şekilde, kanaloidpsinler bir bölgeden hedefine uyarıcı veya inhibitör bağlantı haritalama için etkilidir. Transfected akson terminalleri bir beyin dilimi hazırlık ışık ile uyarılabilir, ve yama-kelepçe kayıtları bir okuma olarak beyindeki belirli devre bileşenlerinin işlevleri ve güçlü lerinin incelenmesine izin8. Optogenetik yaklaşım bir virüsün stereotaksik enjeksiyonu ile birlikte benzeri görülmemiş özgüllük ve genetik kontrol sunuyor9. Ayrıca ışık ile uyarıcı hem yüksek zamansal ve mekansal hassasiyet10,11sağlar.
Presubiculum hipokampus geçiş altı katmanlı kortikal yapı ve para-hipokampal oluşumu12,13. ADN11'den önemli sinaptik giriş alır, aynı zamanda diğer birçok kortikal ve subkortikal bölgeden14. Bu nedenle, bir presubiküler dilim içinde talamik aksonlar terminallerinin seçici stimülasyon elektriksel stimülasyon veya glutamat uncaging ile mümkün değildir. Bu protokolde açıklanan yöntem, ışık kapılı kanalları ifade eden viral vektörlerin hassas stereotaksik enjeksiyonları kullanılarak beyin bölgeleri (ADN ve presubiculum) arasındaki fonksiyonel bağlantıyı belirleme yöntemleridir. Ayrıca açıklanan kendi hedef bölgede nöronlar projektör aksonların terminalleri fotostimülasyon, beyin dilimi hazırlanmasında post-sinaptik nöronların tüm hücre yama-kelepçe kayıtları ile birleştiğinde.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:927px;" width="927">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">0.5 mm bur&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:136px;">724962</td>
			<td style="width:365px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">10 &#181;L Hamilton syringe</td>
			<td style="width:183px;">Hamilton</td>
			<td style="width:136px;">1701 RN - 7653-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">10X PBS solution</td>
			<td style="width:183px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:136px;">AM9624</td>
			<td>&#160;text</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">36% PFA</td>
			<td style="width:183px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:136px;">F8775</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">470 nm LED&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Cairn Research</td>
			<td style="width:136px;">P1105/470/LED&#160; DC/59022m</td>
			<td style="width:365px;">use with matched excitation filter 470/40x&#160; and emission filter for GFP&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">AAV5.Syn.Chronos-GFP.WPRE.bGH</td>
			<td>Penn Vector Core</td>
			<td>AV-5-PV3446</td>
			<td>lot V6026R, qTiter GC/ml 4.912e12, ddTiter GC/ml 2.456e13&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">All chemicals</td>
			<td style="width:183px;">Sigma</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Bath temperature controler</td>
			<td style="width:183px;">Luigs &#38; Neumann</td>
			<td style="width:136px;">SM7</td>
			<td>Set at 34&#176;C&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">beveled metal needle</td>
			<td style="width:183px;">Hamilton</td>
			<td style="width:136px;">7803-05</td>
			<td>33 gauge, 13mm, point style 4-20&#176;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Big scissors</td>
			<td style="width:183px;">Dahle Allround</td>
			<td style="width:136px;">50038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Biocytin</td>
			<td style="width:183px;">Sigma</td>
			<td style="width:136px;">B4261</td>
			<td>final 1-3 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Borosilicate Capillaries</td>
			<td style="width:183px;">Havard Apparatus</td>
			<td style="width:136px;">GC150-10</td>
			<td>1.5 mm outer, 0.86 inner diameter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Brown Flaming electrode puller</td>
			<td style="width:183px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:136px;">P-87</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">BupH Phosphate Buffered Saline pack</td>
			<td style="width:183px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:136px;">28372</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">butterfly needle for perfusion</td>
			<td style="width:183px;">Braun&#160;</td>
			<td style="width:136px;">Venofix A</td>
			<td>24G</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">CCD Camera</td>
			<td style="width:183px;">Andor&#160;</td>
			<td style="width:136px;">DL-604M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Confocal Microscope</td>
			<td style="width:183px;">Zeiss</td>
			<td style="width:136px;">LSM710</td>
			<td>20X</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">curved forceps</td>
			<td style="width:183px;">FST&#160;</td>
			<td style="width:136px;">11011-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">CY5 configuration (confocal)</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:365px;">Helium-Neon 633nm (5,0 mW) laser; Mirror: MBS 488/561/633&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:243px;">CY5 configuration (epifluo)</td>
			<td style="width:183px;">Nikon/Chroma</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:365px;">Fluorescent light (Intensilight); Excitation filter: BP645/30; Dichroic mirror: 89100 BS ; Emission filter: BP705/72</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">DAPI</td>
			<td style="width:183px;">Sigma</td>
			<td style="width:136px;">D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:243px;">DAPI configuration (epifluo)</td>
			<td style="width:183px;">Nikon/Chroma</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:365px;">Fluorescent light (Intensilight); Cube: Semrock Set DAPI-5060C-000-ZERO (Excitation: BP 377/50; Mirror: BS 409; Emission: BP 447/60)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Digidata 1440A</td>
			<td style="width:183px;">Axon Instruments</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Digital handheld optical meter</td>
			<td style="width:183px;">ThorLabs</td>
			<td style="width:136px;">PM100D</td>
			<td>Parametered on 475 nm</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Double egde stainless steel razor blades</td>
			<td style="width:183px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:136px;">72000</td>
			<td>Use half of the blade in the slicer</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Dual Fluorescent Protein Flashlight</td>
			<td style="width:183px;">Nightsea</td>
			<td style="width:136px;">DFP-1</td>
			<td style="width:365px;">excitation, 440-460 nm; emission filter on glasses, 500 nm longpass.</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:243px;">EGTA</td>
			<td style="width:183px;">Sigma</td>
			<td style="width:136px;">E4368</td>
			<td>final 0,2 mM</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:243px;">Epifluorescence Microscope</td>
			<td style="width:183px;">Nikon</td>
			<td style="width:136px;">Eclipse TE-2000E</td>
			<td>10 or 20X</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:243px;">Filter paper</td>
			<td style="width:183px;">Whatman</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Fluoro-Ruby 10%</td>
			<td style="width:183px;">Millipore</td>
			<td style="width:136px;">AG335</td>
			<td>disolve 10 mg in 100 &#181;l of distilled water ; inject 150 to 300 nl</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:243px;">GFP configuration (epifluo)</td>
			<td style="width:183px;">Nikon/Chroma</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:365px;">Fluorescent light (Intensilight); Cube: Filter Set Nikon B-2E/C FITC (Excitation: BP 465-495; Mirror: BS 505; Emission: BP 515-555)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Heatingplate</td>
			<td style="width:183px;">Physitemp</td>
			<td style="width:136px;">HP4M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Heparin choay 5000 U.I./ml</td>
			<td style="width:183px;">Sanofi</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td>5 ml vial</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">HEPES</td>
			<td style="width:183px;">Sigma</td>
			<td style="width:136px;">H3375</td>
			<td>final 10 mM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">High speed rotary micromotor kit</td>
			<td style="width:183px;">Foredom</td>
			<td style="width:136px;">K.1070</td>
			<td>maximum drill speed 38,000 rpm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Internal solution compounds :</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Isolated Pulse Stimulator</td>
			<td style="width:183px;">A-M Systems</td>
			<td style="width:136px;">2100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">KCl</td>
			<td style="width:183px;">Sigma</td>
			<td style="width:136px;">P4504</td>
			<td>final 1,2 mM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Ketamine 1000</td>
			<td style="width:183px;">Virbac</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Ketofen 10%</td>
			<td style="width:183px;">Merial</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td>100 mg/ml : dilute 1 &#181;l in 1ml total (0,1%)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Laocaine (lidocaine)</td>
			<td style="width:183px;">MSD</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td>16,22 mg/ml : dilute 1 ml in 4 ml total (around 4%)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">LED hi power spot for surgery</td>
			<td>Photonic (via Phymep)</td>
			<td style="width:136px;">10044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:243px;">LED Power Supply</td>
			<td style="width:183px;">Cairn Research</td>
			<td style="width:136px;">OptoLED Light Source</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Manipulators</td>
			<td style="width:183px;">Luigs &#38; Neumann</td>
			<td style="width:136px;">SM-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Mg-ATP 2H20</td>
			<td style="width:183px;">Sigma</td>
			<td style="width:136px;">A9187</td>
			<td>final 4 mM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">MgCl2</td>
			<td style="width:183px;">Sigma</td>
			<td style="width:136px;">63069</td>
			<td>final 2 mM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Micro temperature controler</td>
			<td>Physitemp</td>
			<td style="width:136px;">MTC-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Milk powder</td>
			<td style="width:183px;">Carnation</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">MultiClamp 700B</td>
			<td style="width:183px;">Axon Instruments</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Na Phosphocreatine</td>
			<td style="width:183px;">Sigma</td>
			<td style="width:136px;">P7936</td>
			<td>final 10 mM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Na3-GTP 2H20</td>
			<td style="width:183px;">Sigma</td>
			<td style="width:136px;">G9002</td>
			<td>final 0.4 mM</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:243px;">needle holder/hemostat</td>
			<td style="width:183px;">FST</td>
			<td style="width:136px;">13005-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">pClamp acquisition software</td>
			<td style="width:183px;">Axon Instruments</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Peristaltic pump</td>
			<td style="width:183px;">Gilson</td>
			<td style="width:136px;">Minipuls 3</td>
			<td>14-16 on the display for 2-3 ml/min&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Potassium gluconate (K-gluconate)</td>
			<td style="width:183px;">Sigma</td>
			<td style="width:136px;">G4500</td>
			<td>Final 135 mM</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">ProLong Gold antifade mounting medium</td>
			<td style="width:183px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:136px;">P36390</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Rompun 2% (xylazine)</td>
			<td style="width:183px;">Bayer</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">small scissors</td>
			<td style="width:183px;">FST</td>
			<td style="width:136px;">14060-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Sodium chloride 0.9%&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Virbac</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td>dilute 8.5 mL in 10 ml total</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stereomicroscope VISISCOPE SZT</td>
			<td style="width:183px;">VWR</td>
			<td style="width:136px;">630-1584</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stereotaxic frame with digital display</td>
			<td style="width:183px;">Kopf</td>
			<td style="width:136px;">Model 940</td>
			<td>Small animal stereotaxic instrument</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Streptavidin-Cy3 conjugate</td>
			<td style="width:183px;">Life technologies&#160;</td>
			<td style="width:136px;">434315</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Streptavidin-Cy5 conjugate</td>
			<td style="width:183px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:136px;">S32357</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Superglue3 Loctite</td>
			<td style="width:183px;">Dutscher</td>
			<td style="width:136px;">999227</td>
			<td>1g tube</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Suture filament Ethilon II 4-0 polyamid</td>
			<td style="width:183px;">Ethicon</td>
			<td style="width:136px;">F3210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Syringe pump</td>
			<td style="width:183px;">kdScientific</td>
			<td>Legato 130 - 788130</td>
			<td>Use Infuse and Withdraw modes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Tissue slicer</td>
			<td style="width:183px;">Leica</td>
			<td style="width:136px;">VT1200S</td>
			<td>speed 0.07, amplitude 1.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">tubing</td>
			<td style="width:183px;">Gilson</td>
			<td style="width:136px;">F117942, F117946</td>
			<td>Yellow/Black, Purple/Black</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">upright microscope</td>
			<td style="width:183px;">Olympus</td>
			<td style="width:136px;">BX51W1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Versi-dry bench absorbant paper</td>
			<td style="width:183px;">Nalgene</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo intracerebral stereotaxic injections for optogenetic stimulation of long-range inputs in mouse brain slices

Hücre tipi spesifik sinaptik bağlantı bilgisi, beyin çapındaki nöronal devreleri anlamak için çok önemli bir ön koşuldur. Uzun menzilli bağlantıların fonksiyonel incelemesi, tanımlanan uzak girdilerin spesifik uyarılmasıyla birlikte tek nöronların hedefli kayıtlarını gerektirir. Bu genellikle geleneksel ve elektriksel stimülasyon teknikleri ile elde etmek zordur, yukarı beyin bölgelerinde yakınsama aksonhedef bölgede iç içe olabilir, çünkü. Işığa duyarlı iyon kanallarının virüs aracılı ekspresyonu için belirli bir beyin bölgesinin stereotaksik hedeflemesi, o bölgeden gelen aksonun ışıkla seçici olarak uyarılmasını sağlar. İntraserebral stereotaksik enjeksiyonlar beyin deki diğer subkortikal veya kortikal alanlara ek olarak, anterior talamik çekirdekleri gibi iyi delimited yapılarda kullanılabilir.
Burada açıklanan fare beyninde channelrhodopsin ifade viral vektörlerin hassas stereotaksik enjeksiyon için teknikler bir dizi, beyin dilimi hazırlanmasında akson terminalleri fotostimülasyon takip. Bu protokoller basit ve yaygın olarak uygulanabilir. Postsynaptically bağlı nöron dan tam hücre yama kıskaç kaydı ile birlikte, aksonların fotostimülasyon fonksiyonel sinaptik bağlantıların tespiti sağlar, farmakolojik karakterizasyon, ve güçlerinin değerlendirilmesi. Buna ek olarak, kaydedilen nöronun biyositin dolgu postinaptik nöronun post-hok morfolojik belirlenmesi için kullanılabilir.

Burada sunulan prosedür, anterograd adeno ilişkili virüsün stereotaksik enjeksiyonu ile talamus (ADN) antero-dorsal çekirdeğinde GFP'ye kaynaşmış mavi ışığa duyarlı channelrhopsin (Chronos) ifade etmek için kullanılmıştır. Stereotaksik koordinatlar fare beyin atlasına göre belirlendi ve 200 nL floresan izleyici floro-yakut enjekte edilerek test edildi. Hayvan enjeksiyondan 10 dakika sonra kurban edildi ve beyin bir gecede çıkarıldı ve sabitlendi. Koronal beyin bölümleri doğru yerleştirilmiş ...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Intracerebral Stereotaxic Injections for Optogenetic Stimulation of Long-Range Inputs in Mouse Brain Slices at JoVE.com

In Vivo Intracerebral Stereotaxic Injections for Optogenetic Stimulation of Long-Range Inputs in Mouse Brain Slices

Bu protokol, ex vivo beyin dilimlerinde optogenetik stimülasyonlar kullanarak uzak beyin bölgelerinden gelen uzun menzilli girdilerin hücre tipi spesifik fonksiyonel bağlantısını belirlemek için bir dizi yöntemi açıklamaktadır.

Fare Beyin Dilimlerinde Uzun Menzilli Girdilerin Optogenetik Stimülasyonu için Vivo İntraserebral Stereotaksik Enjeksiyonlarda

Knowledge of cell-type specific synaptic connectivity is a crucial prerequisite for understanding brain-wide neuronal circuits. The functional ...

Bu yöntemin amacı, uzak beyin bölgelerinden gelen uzun menzilli girdilerin fonksiyonel bağlantısını beyin dilimlerinde fotostimülasyon kullanarak belirlemektir. Işığa duyarlı iyon kanallarının çeşitli aracılı ekspresyonu için belirli bir beyin bölgesinin stereotaksik hedeflemesi, o bölgeden gelen aksonun ışıkla seçici uyarılmasını sağlar. Prosedürü gösteren Louis Richevaux, benim grup bir doktora öğrencisi olacaktır.Ameliyattan önce, hayvanın ayak parmak çimdikiyle iyi anons edilebiyi doğrulayın. Yavaşça nefes kolaylaştırmak için dilini çekin. Sonra, kafatası nın saçlarını tıraş edin.Yerel anestezi için baş deri altına 20 mikrolitre lidokain hidroklorür enjekte edin ve beş dakika bekleyin. Kafatasını ortaya çıkarmak için kafa derisini kes. Sonra, stereotaksik bir çerçeve içinde hayvan yerleştirin.Kulak çubukları yerleştirin ve kemiklerin üzerinde hafifçe kulaklara rostral onları dinlenme ve kafatası iyi erişim oluşturmak için deri aşağı çekin. Kulak çubuklarını sıkın ve burun parçasını töşeyin. Boy ayarlı bir destek kullanarak hayvanın vücudunu yatay olarak ve baş seviyesinde koruyun.Fizyolojik sıcaklıkta tutmak için hayvanın altına bir ısıtma yastığı yerleştirin. Daha sonra yumuşak doku kaldırmak için bir pamuk lu bez ile% 0.9 sodyum klorür uygulayarak kafatası temizleyin. Kafatasını, bregma lambda erişiminin tesviye edilebilmiş olması için ayarlayın.Daha sonra, posterior ve medial koordinatlarına göre kafatasındaki enjeksiyon bölgesini bulun ve enjeksiyon iğnesini üzerine yerleştirin. Kafatasını tek kullanımlık bir iğneyle işaretle. Daha sonra, dört santimetre yukarı enjeksiyon iğnesi taşıyın.0,5 milimetrelik çapak kullanarak, maksimum hızın yarısı işareti üzerinde bir milimetre çapında kraniyotomi oluşturun. Herhangi bir kanama oluşursa bir doku ile swab. Sonra, tamamen bir pompa ile çıkararak depolama için Hamilton şırınga bulunan su boşaltın.Sadece iğne suyla dolu. Buza enjekte edilecek viral çözeltiyi eritin, sonra, kısa bir süre buzdan çıkarın ve mikropipetle çözeltinin 700 nanolitresini elde edin. Sonra, parafin filminin bir parçasına bir damla yatır.Parafin filmini kraniyotominin üstüne yerleştirin. Anteroposterior ve lateral pozisyon değiştirmeden viral çözelti damla iğne Dalma. Daha sonra, parafin film viral çözelti yaklaşık 500 nanolitre ile şırınga doldurmak için pompanın geri çekme işlevini kullanın.Bu işlemi stereoskop altında gerçekleştirin, düşüşün kayboluşünü izleyin ve hava yıkmayın. Şırınganın doğru doldurulduğundan emin olun. Küçük bir sıvı damlasını çıkarmak için pistonun aşağısına inerek fırlatma sistemini test edin.Daha sonra, seçilen derinliğe beyne iğne ekleyin. Enjeksiyon için çalıştır düğmesine basın. Sonra, yavaş yavaş 3-5 dakika içinde iğne çekin.Tıkanmasını önlemek için iğneyi hemen temiz distile suda birkaç kez doldurarak yıkayın. Daha sonra, stereotaksik çerçeve hayvan çıkarın. Sütür deri ve 2-1-1 standart cerrahi düğüm ile bağlı üç veya dört dikiş olun.Beyin ayıklamak için, boyundan buruna deri üzerinde bir kesim yapmak, sonra makas ile kafatasından son omur bölüm. Deri geri çekin ve kaudal yönden orta hat boyunca kafatası kesti. Parietal kemiği ve frontal kemiğin kaudal kısmını dikkatlice çıkarın.Beyin ve kranial zemin arasına yerleştirerek küçük bir yuvarlak spatula ile beyin ayıklayın, koku ampul bölümleme, optik sinir, ve diğer kranial sinirler ve beyincik. Beyni yavaşça buz gibi kesme solüsyonuna batırın. Daha sonra, bir filtre kağıdına beyin transferi ve yavaşça kortikal yüzeykuru.Yatay beyin dilimlerini kesmek için beyin korteksini, kaudal tarafı bıçakla bakacak şekilde bir vibratomun numune tutucusuna yapıştırın. Daha sonra, kesme odasını buz gibi oksijenli kesme çözeltisi ile doldurun, böylece beyin tamamen batırılmış olur. Bölüm 300 mikrometre kalınlığında, bir milimetre genliğinde saniyede 07 milimetre hızda vibratom ile dilimler.Bu aşamada, floresan el feneri ve ilgili filtre gözlükleri kullanarak talamusta chronos-GFP ifadesini kısaca kontrol etmek önerilir. Tüm hücreli yama-kıskaç kaydı nı gerçekleştirmek için, hipokampal kompleksi içeren bir beyin dilimini yavaşça kayıt odasına aktarın. Kayıt odasını dakikada 2-3 mililitre karbogen ile kabardırılmış 34 santigrat derece ACSF ile sürekli olarak perfit.4X büyütmede mavi LED aydınlatma ile ilgi bölgesindeki akson terminallerinde Chronos-GFP ifadesini kısaca inceleyin. 63X daldırma hedefine değiştirin ve odağı ayarlayın. Chronos-GFP ifade aksonları kontrol edin ve yama kaydı için bir piramidal nöron seçin.Daha sonra, potasyum glukonat bazlı iç çözelti ile bir pipet doldurun. Baş sahnede pipet tutucuya monte edin. Hücreyi voltaj kıskacı konfigürasyonunda yama.Tanımlanan nörona yaklaşın ve pipet ucunu soma üzerine hassas bir şekilde bastırın. Pozitif basınç membran yüzeyinde bir gamze üretmelidir. Sonra, bir gigoom mühür oluşturmak için basınç bırakın.Mühürlendikten sonra, tutma gerilimini eksi 65 milivolta ayarlayın. Negatif basınç keskin bir darbe ile membran break. Tüm hücreli akım kelepçe modunda nöronun hiperpolarize ve depolarize akım basamaklarına tepkilerini kaydedin.Chronos ifade afferent liflerin 475 nanometre LED tüm alan stimülasyonu akım veya voltaj kıskaç postsinaptik yanıtları kayıt. 20 hertz iki milisaniye lik süre on uyarım trenler ile uyarın. Hiperpolarizasyon ve depolarize akım basamaklarına yanıt olarak üçüncü tabakadaki presubiküler nöronların aktivitesi tüm hücre yama-kıskaç konfigürasyonunda kaydedildi.Chronos-GFP'yi ifade eden ADN akson terminallerinin uyarılması, mevcut klemp modunda presubiküler tabakadaki üç ana hücrede uyarıcı post-sinaptik potansiyeller ortaya çıkar. Işık yoğunluğuna bağlı olarak, EPS eylem potansiyel eşiğine ulaşabilir. Gerilim kıskacı modunda sinaptik sonrası yanıtlar da gözlendi, uyarıcı post-sinaptik akımlar ortaya çıkarıldı.Burada gösterilen bir tabaka üç piramidal nöron bir epifloresan mikroskop ile görüntülenmiş DAPI boyama ile presubiküler yüzeysel tabakalarda Chronos-GFP ifade talamik aksonlarla çevrilidir. Ve bu görüntü konfokal mikroskopla daha yüksek bir büyütmede çekildi. Bir floresan izleyici ile pilot deneyler yaparken eksen boyunca bregma dikkatli tesviye stereotaksik enjeksiyon hassasiyetini artırmak için çok önemlidir.Bu yordam aynı zamanda iki farklı dalga boylarına duyarlı iki generatif sahne enjekte ederek farklı alanlardan yakınsama projeksiyonları araştırmak için kullanılabilir. Bu tekniğin geliştirilmesi, hücre tipine özgü bir şekilde uzak beyin bölgeleri arasında kesin anatomik ve fonksiyonel devre analizine olanak sağlamıştır.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

Kronik Yetişkin doğmuş Koku Nöronlar Seçici Viral İletimi In vivo Optogenetic Uyarım

Local interneurons are continuously regenerated in the olfactory bulb of adult rodents1-3. In this process, called adult neurogenesis, neural stem cells ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Ultrasonik Kan-beyin bariyeri bozulması ve Manganez kontrastlı MRG kullanma İşlevsel beyin görüntüleme

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Fiber-optic Implantation for Chronic Optogenetic Stimulation of Brain Tissue

Beyin Dokusu Kronik Optogenetic uyarılması için Fiber-optik İmplantasyon

Elucidating patterns of neuronal connectivity has been a challenge for both clinical and basic neuroscience. Electrophysiology has been the gold standard ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

Fare Akut Beyin Dilimleri Neuroblast Göç vivo Doğum Sonrası Elektroporasyonla ve Time-lapse Görüntüleme

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

Kemirgen Santral Sinir Sistemi vivo optogenetic Stimülasyon içinde

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution ...

Optogenetic Stimulation of the Auditory Nerve

İşitsel Sinir optogenetic uyarılması

Direct electrical stimulation of spiral ganglion neurons (SGNs) by cochlear implants (CIs) enables open speech comprehension in the majority of implanted ...

Ex Vivo Optogenetic Dissection of Fear Circuits in Brain Slices

Ex Vivo Optogenetic Dissection of Fear Circuits in Brain Slices

Beyin Dilimleri Korku Devre Ex Vivo optogenetic Diseksiyon

Optogenetic approaches are now widely used to study the function of neural populations and circuits by combining targeted expression of light-activated ...

Stereotaxic Surgery for Genetic Manipulation in Striatal Cells of Neonatal Mouse Brains

Yenidoğan fare beyin Striatal hücrelerdeki genetik manipülasyon için stereotaksik cerrahi

Many genes are expressed in embryonic brains, and some of them are continuously expressed in the brain after birth. For such persistently expressed genes, ...

Assessment of Long-term Depression Induction in Adult Cerebellar Slices

Erişkin Serebellar Dilimlerde Uzun Süreli Depresyon İndüksiyonunun Değerlendirilmesi

Synaptic plasticity provides a mechanism for learning and memory. For cerebellar motor learning, long-term depression (LTD) of synaptic transmissions from ...

Ballistic Labeling of Pyramidal Neurons in Brain Slices and in Primary Cell Culture

Beyin Dilimlerinde ve Birincil Hücre Kültüründe Piramidal Nöronların Balistik Etiketlemesi

It has been reported that the size and shape of dendritic spines is related to their structural plasticity. To identify the morphological structure of ...