Name: an in vivo estrogen deficiency mouse model for screening exogenous estrogen treatments of cardiovascular dysfunction after menopause
Uploaded: 2019-08-13T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An In Vivo Estrogen Deficiency Mouse Model for Screening Exogenous Estrogen Treatments of Cardiovascular Dysfunction After Menopause at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af den nationale Natural Science Foundation i Kina (81202526 til J.X.), National Natural Science Foundation i Kina (81302769 til B.S.), Beijing Municipal Natural Science Foundation (47144226 til B.S.), den kinesiske postdoc Science Foundation (20110490325 til J.X.), og Ph.D. programmer Foundation af Undervisningsministeriet i Kina (20121106120031 til B.S.).

Alle dyrepleje-og forsøgsprotokoller blev godkendt af det kinesiske akademi for lægevidenskab og Peking Union Medical College (lov nr.: SYXK (Beijing) 2013-0023). Oprindelsen af ApoE-/- mus er C57BL/6j9,10.
1. bilateral Ovariektomi via et dobbelt dorsal-lateral incision i apoE-/- mus
<ol><li>Ved fravænning (alder 28 dage), bedøve kvindelig ApoE-/- C57BL/6j mus med Avertin (tribromoethanol; 200 mg/...

<ol>
	<li>Mozaffarian, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+Disease+and+Stroke+Statistics-2016+Update:+A+Report+From+the+American+Heart+Association.">Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. 133 (4), e38-e360 (2016).</li><li>Packard, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+health+and+disease+in+women.">Cardiovascular health and disease in women.</a> The New England Journal of Medicine. 329 (4), 247-256 (1993).</li><li>Samaan, S. A., Crawford, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+and+cardiovascular+function+after+menopause.">Estrogen and cardiovascular function after menopause.</a> Journal of the American College of Cardiology. 26 (6), 1403-1410 (1995).</li><li>Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+in+atherosclerosis.">Inflammation in atherosclerosis.</a> Nature. 420 (6917), 868-874 (2002).</li><li>Tremollieres, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+hormone+replacement+therapy+on+age-related+increase+in+carotid+artery+intima-media+thickness+in+postmenopausal+women.">Effect of hormone replacement therapy on age-related increase in carotid artery intima-media thickness in postmenopausal women.</a> Atherosclerosis. 153 (1), 81-88 (2000).</li><li>Bourassa, P. A., Milos, P. M., Gaynor, B. J., Breslow, J. L., Aiello, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+reduces+atherosclerotic+lesion+development+in+apolipoprotein+E-deficient+mice.">Estrogen reduces atherosclerotic lesion development in apolipoprotein E-deficient mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93 (3), 10022-10027 (1996).</li><li>Squadrito, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genistein+supplementation+and+estrogen+replacement+therapy+improve+endothelial+dysfunction+induced+by+ovariectomy+in+rats.">Genistein supplementation and estrogen replacement therapy improve endothelial dysfunction induced by ovariectomy in rats.</a> Cardiovascular Research. 45 (2), 454-462 (2000).</li><li>Wang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+dysfunction+and+enhanced+contractility+in+microvessels+from+ovariectomized+rats:+roles+of+oxidative+stress+and+perivascular+adipose+tissue.">Endothelial dysfunction and enhanced contractility in microvessels from ovariectomized rats: roles of oxidative stress and perivascular adipose tissue.</a> Hypertension. 63 (5), 1063-1069 (2014).</li><li>Zhang, S. H., Reddick, R. L., Piedrahita, J. A., Maeda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+Hypercholesterolemia+and+Arterial+Lesions+in+Mice+Lacking+Apolipoprotein+E.">Spontaneous Hypercholesterolemia and Arterial Lesions in Mice Lacking Apolipoprotein E.</a> Science. 258 (5081), 468-471 (1992).</li><li>Nakashima, Y., Plump, A. S., Raines, E. W., Breslow, J. L., Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ApoE-Deficient+Mice+Develop+Lesions+of+All+Phases+of+Atherosclerosis+Throughout+the+Arterial+Tree.">ApoE-Deficient Mice Develop Lesions of All Phases of Atherosclerosis Throughout the Arterial Tree.</a> Arteriosclerosis and Thrombosis. 14 (1), 133-140 (1994).</li><li>Str&#246;m, J. O., Theodorsson, A., Ingberg, E., Isaksson, I. M., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovariectomy+and+17-estradiol+Replacement+in+Rats+and+Mice:+A+Visual+Demonstration.">Ovariectomy and 17-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration.</a> Journal of Visualized Experiments. 64 (e4013), 1-4 (2012).</li><li>Rossouw, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risks+and+benefits+of+estrogen+plus+progestin+in+healthy+postmenopausal+women:+principal+results+From+the+Women's+Health+Initiative+randomized+controlled+trial.">Risks and benefits of estrogen plus progestin in healthy postmenopausal women: principal results From the Women's Health Initiative randomized controlled trial.</a> The Journal of the American Medical Association. 288 (3), 321-333 (2002).</li><li>Kumle, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Declining+breast+cancer+incidence+and+decreased+HRT+use.">Declining breast cancer incidence and decreased HRT use.</a> Lancet. 372 (9639), 608-610 (2008).</li><li>Jager, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomized+comparison+of+triptorelin+and+tamoxifen+as+treatment+of+progressive+ovarian+cancer.">A randomized comparison of triptorelin and tamoxifen as treatment of progressive ovarian cancer.</a> Anticancer Research. 15 (6B), 2639-2642 (1995).</li><li>Bhathena, S. J., Velasquez, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+role+of+dietary+phytoestrogens+in+obesity+and+diabetes.">Beneficial role of dietary phytoestrogens in obesity and diabetes.</a> The American Journal of Clinical Nutrition. 76 (6), 1191-1201 (2002).</li><li>Wang, L., Qiu, X. M., Hao, Q., Li, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-inflammatory+effects+of+a+Chinese+herbal+medicine+in+atherosclerosis+via+estrogen+receptor+beta+mediating+nitric+oxide+production+and+NF-kappaB+suppression+in+endothelial+cells.">Anti-inflammatory effects of a Chinese herbal medicine in atherosclerosis via estrogen receptor beta mediating nitric oxide production and NF-kappaB suppression in endothelial cells.</a> Cell Death and Disease. 4 (e551), 1-13 (2013).</li><li>Xiao, J., Wang, N. L., Sun, B., Cai, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+receptor+mediates+the+effects+of+pseudoprotodiocsin+on+adipogenesis+in+3T3-L1+cells.">Estrogen receptor mediates the effects of pseudoprotodiocsin on adipogenesis in 3T3-L1 cells.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 299 (1), C128-C138 (2010).</li><li>Guivarc'h, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predominant+Role+of+Nuclear+Versus+Membrane+Estrogen+Receptor+alpha+in+Arterial+Protection:+Implications+for+Estrogen+Receptor+alpha+Modulation+in+Cardiovascular+Prevention/Safety.">Predominant Role of Nuclear Versus Membrane Estrogen Receptor alpha in Arterial Protection: Implications for Estrogen Receptor alpha Modulation in Cardiovascular Prevention/Safety.</a> Journal of the American Heart Association. 7 (13), 1-17 (2018).</li><li>Osako, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+inhibits+vascular+calcification+via+vascular+RANKL+system:+common+mechanism+of+osteoporosis+and+vascular+calcification.">Estrogen inhibits vascular calcification via vascular RANKL system: common mechanism of osteoporosis and vascular calcification.</a> Circulation Research. 107 (4), 466-475 (2010).</li><li>Ivanova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+some+saponins+and+phenolic+components+of+Tribulus+terrestris+and+Smilax+excelsa+as+MDR+modulators.">Screening of some saponins and phenolic components of Tribulus terrestris and Smilax excelsa as MDR modulators.</a> In vivo. 23 (4), 545-550 (2009).</li><li>Xiao, J., Zhu, T., Yin, Y. Z., Sun, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notoginsenoside+R1,+a+unique+constituent+of+Panax+notoginseng,+blinds+proinflammatory+monocytes+to+protect+against+cardiac+hypertrophy+in+ApoE(-/-)+mice.">Notoginsenoside R1, a unique constituent of Panax notoginseng, blinds proinflammatory monocytes to protect against cardiac hypertrophy in ApoE(-/-) mice.</a> European Journal of Pharmacology. 833 (15), 441-450 (2018).</li><li>Sun, B., Xiao, J., Sun, X. B., Wu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notoginsenoside+R1+attenuates+cardiac+dysfunction+in+endotoxemic+mice:+an+insight+into+oestrogen+receptor+activation+and+PI3K/Akt+signalling.">Notoginsenoside R1 attenuates cardiac dysfunction in endotoxemic mice: an insight into oestrogen receptor activation and PI3K/Akt signalling.</a> British Journal of Pharmacology. 168 (7), 1758-1770 (2013).</li><li>Adams, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+coronary+artery+atherosclerosis+by+17-beta+estradiol+in+ovariectomized+monkeys.+Lack+of+an+effect+of+added+progesterone.">Inhibition of coronary artery atherosclerosis by 17-beta estradiol in ovariectomized monkeys. Lack of an effect of added progesterone.</a> Arteriosclerosis. 10 (6), 1051-1057 (1990).</li><li>Keaney, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=17+beta-estradiol+preserves+endothelial+vasodilator+function+and+limits+low-density+lipoprotein+oxidation+in+hypercholesterolemic+swine.">17 beta-estradiol preserves endothelial vasodilator function and limits low-density lipoprotein oxidation in hypercholesterolemic swine.</a> Circulation. 89 (5), 2251-2259 (1994).</li><li>Nakashima, Y., Plump, A. S., Raines, E. W., Breslow, J. L., Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ApoE-deficient+mice+develop+lesions+of+all+phases+of+atherosclerosis+throughout+the+arterial+tree.">ApoE-deficient mice develop lesions of all phases of atherosclerosis throughout the arterial tree.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 14 (1), 133-140 (1994).</li><li>Saleh, T. M., Cribb, A. E., Connell, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen-induced+recovery+of+autonomic+function+after+middle+cerebral+artery+occlusion+in+male+rats.">Estrogen-induced recovery of autonomic function after middle cerebral artery occlusion in male rats.</a> American Journal of Physiology- Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 281 (5), R1531-R1539 (2001).</li><li>Bingham, D., Macrae, I. M., Carswell, H. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detrimental+effects+of+17beta-oestradiol+after+permanent+middle+cerebral+artery+occlusion.">Detrimental effects of 17beta-oestradiol after permanent middle cerebral artery occlusion.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 25 (3), 414-420 (2005).</li><li>Pignoli, P., Tremoli, E., Poli, A., Oreste, P., Paoletti, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intimal+plus+medial+thickness+of+the+arterial+wall:+a+direct+measurement+with+ultrasound+imaging.">Intimal plus medial thickness of the arterial wall: a direct measurement with ultrasound imaging.</a> Circulation. 74 (6), 1399-1406 (1986).</li><li>Hodgin, J. B., Maeda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minireview:+estrogen+and+mouse+models+of+atherosclerosis.">Minireview: estrogen and mouse models of atherosclerosis.</a> Endocrinology. 143 (12), 4495-4501 (2002).</li><li>Bush, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+mortality+and+noncontraceptive+use+of+estrogen+in+women:+results+from+the+Lipid+Research+Clinics+Program+Follow-up+Study.">Cardiovascular mortality and noncontraceptive use of estrogen in women: results from the Lipid Research Clinics Program Follow-up Study.</a> Circulation. 75 (6), 1102-1109 (1987).</li><li>Marsh, M. M., Walker, V. R., Curtiss, L. K., Banka, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protection+against+atherosclerosis+by+estrogen+is+independent+of+plasma+cholesterol+levels+in+LDL+receptor-deficient+mice.">Protection against atherosclerosis by estrogen is independent of plasma cholesterol levels in LDL receptor-deficient mice.</a> Journal of Lipid Research. 40 (5), 893-900 (1999).</li></ol>

Den beskrevne metode er en musemodel, der ligner lipid-forstyrrelser og åreforkalkning set hos menopausale kvinder. Det er veldokumenteret, at østrogenmangel hos postmenopausale kvinder kan forværre forekomsten af præ-eksisterende eller igangværende hyperkolesterolæmi med progressivt komplekse og udbredte atherosclerostiske læsioner1. For at efterligne den atherosclerosis-tilbøjelige status i klinikken, ApoE-mangelfuld mus, en reproducerbar og bekvem kilde til dyr, som til at studere ather...

Epidemiologiske og kliniske undersøgelser har vist, at postmenopausale kvinder har en betydeligt større risiko for hjerte-kar-sygdomme end præmenopausale kvinder1,2. Hormonsubstitutionsterapi (HRT) kan reducere den relative risiko for Kardiovaskulær sygdom til 0,37-0.793. Blandt andre komplikationer, åreforkalkning forårsaget af hjerte-kar-sygdomme er den førende dødsårsag verdensomspændende4. Men, laboratorie modeller, der involverer østrogen-mangelfuld mus præsenterer åreforkalkning udsat status mangler. Denne protokol giver en in vivo østrogenmangel musemodel til screening eksogene østrogen behandlinger af hjerte-kar-dysfunktion efter overgangsalderen.
Tidligere undersøgelser viser, at anvendelsen af ovx i aterosklerotisk gnavere fodret en høj-kolesterol diæt kan efterligne postmenopausale kvinder, der lider af åreforkalkning5,6,7,8. En reproducerbar og bekvem dyremodel, der ligner den aterosklerotiske tilstand hos menopausale kvinder, er grundlaget for eksogen østrogen forskning. Her, en dobbelt dorsal-lateral indsnit af bilateral ovariektomi blev anvendt i atherosclerosis-tilbøjelige apolipoprotein E knockout (ApoE-/-) mus9,10. Sammenlignet med midterste abdominal eller dorsale indsnit, dobbelt dorsale-lateral indsnit er en lettere, mindre tidskrævende metode, der kan undgå alvorlige bughulen vedhæftning og inflammation. Peroral administration via hasselnødde spredning (Se tabel over materialer) er ikke-invasiv og praktisk, hvilket gør det almindeligt anvendelig som en langsigtet administration mode11. Langsom frigivelse pellet implantation er også populære6. Implantaterne kandog forværre forekomsten af infektion, især i mus, som er udsat for OVX. Andre ikke-invasive administration tilstande, såsom oral sonde og vand administration, også har mange ulemper. Oral sonde typisk stress mus og kan forårsage Esophageal skade. Administration af hormonet via drikkevand er meget gavnligt; Men, tilsætning af DMSO som en emulgator er uundgåelig som eksogene østrogener er uopløselige i vand. Her valgte vi udskiltes 17β-estradiol eller phytoøstrogen hormon udskiftning via hasselnød spredning til langvarig administration.
For nylig, den gavnlige virkning af HRT på det kardiovaskulære system af postmenopausale kvinder er blevet anfægtet i women's Health Initiative (WHI) forsøg12. På den ene side, udefrakommende østrogen alene udøver en gavnlig virkning på det kardiovaskulære system; på den anden side kan det kombineres med metohydroxyprogesteron acetat for at øge risikoen for kardiovaskulære hændelser. Mere alvorligt, HRT kan føre til bryst-og uterin tumorprogression, og denne effekt har markant begrænset sin brug13,14. Mere interesse har været fokuseret på de kardiovaskulære-beskyttende virkninger af eksogene østrogener mangler mitotisk aktivitet i tumorceller15,16,17. Flere undersøgelser i mennesker og dyr tyder på, at phytoøstrogener med strukturer svarende til østrogener kan spille en gavnlig rolle i hjerte-kar-beskyttelse15,18.
Således er formålet med det nuværende arbejde (i) at opbygge en in vivo østrogenmangel musemodel ved bilateral ovariektomi via en dobbelt dorsal-lateral indsnit i ApoE-/- mus og (II) at sammenligne de kardiovaskulære beskyttende virkninger af peroralt administreret 17β-estradiol og pseudoprotodioscin (PPD) via hasselnødde spredning. 17β-estradiol er en slags eksogene østrogen, der tilhører kvindelige seksuelle hormoner6,11,19. PPD, en steroid saponin og phytoøstrogen fra Dioscorea planter, er tidligere blevet rapporteret at udøve anti-tumor egenskaber20.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>17&#946;-estradiol, &#62;98%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E8875-250MG</td>
			<td>Estrogen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable syringes (with 25G needles)</td>
			<td>Hunan Luzhou Huikang Development Co., Ltd</td>
			<td>0.5*19TWLB</td>
			<td>Cardiac bleeding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-cholesterol mouse diet</td>
			<td>Huafukang Bio-Technology</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1.25% cholesterol, 0% cholate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-Resolution In Vivo Micro-Imaging System</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo&#174;770</td>
			<td>Measurements of intima-media thickness and cardiac dysfunction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Methyl-2-butanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>152463-250ML</td>
			<td>Preparation of avertin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting forceps, Curved 8mm</td>
			<td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting forceps, Straight 8mm</td>
			<td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Scissors, Curved/Sharp 8mm</td>
			<td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Scissors, Straight/Sharp 8mm</td>
			<td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monofilament suture 4-0 1/2 5*12 19mm</td>
			<td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., Ltd</td>
			<td>R413</td>
			<td>Suture and ligation of the tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nut cream (Nutella)</td>
			<td>Ferrero</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Medium for peroral 17&#946;-estradiol or PPD</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiVisor optical glass binocular magnifier</td>
			<td>Dohegan Optical Company Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Assistant of identifying the tissues during ovariectomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline at pH 7.4</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>P3813</td>
			<td>Preparing 1 L saline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pro MultiLabel Microplate Reader</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>Infinite M1000</td>
			<td>Plasma TC and TG determination</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pseudoprotodioscin</td>
			<td>Shanghai Winherb Medical S &#38; T Development</td>
			<td>W-0427</td>
			<td>CAS registry no. 102115-79-7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rimadyl, 50 mg/mL</td>
			<td>Pfizer Pharma GmbH</td>
			<td>462986</td>
			<td>Postoperative analgesia after ovariectomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sesame oil</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S3547-1L</td>
			<td>Dissolving the 17&#946;-estradiol or PPD</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solcoseryl Eye-Gel</td>
			<td>Menarini, Solco Basle Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>Eye protection during anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>MCALON</td>
			<td>MCL-6STV</td>
			<td>Image of the intimal region of aorta</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Table model high speed centrifuge</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>1-14K</td>
			<td>Preparation of plasma</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors, slight Curve (14cm)</td>
			<td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors, straight Flat (14cm)</td>
			<td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue forceps, serrated, slight Curve (14cm)</td>
			<td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue forceps, serrated, straight Flat (14cm)</td>
			<td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tribromoethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T48402-5G</td>
			<td>Preparation of avertin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triglycerides (TG) assay kit</td>
			<td>Institute of Nanjing Jiancheng Biology Engineering</td>
			<td>A110-1</td>
			<td>Plasma TG determination</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Total cholesterols (TC) assay kit</td>
			<td>Institute of Nanjing Jiancheng Biology Engineering</td>
			<td>A111-1</td>
			<td>Plasma TC determination</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in vivo estrogen deficiency mouse model for screening exogenous estrogen treatments of cardiovascular dysfunction after menopause

Postmenopausale kvinder har større risiko for at udvikle hjerte-kar-sygdomme end præmenopausale kvinder. Hunmus ovariectomized (OVX) ved fravænning display øget aterosklerotiske læsioner i aorta sammenlignet med kvindelige mus med intakt ovariefunktion. Men, laboratorie modeller, der involverer østrogen-mangelfuld mus med atherosclerosis-tilbøjelige status mangler. Dette underskud er afgørende, fordi klinisk østrogenmangel hos menopausale kvinder kan forværre forekomsten af præ-eksisterende eller igangværende lipid forstyrrelser og åreforkalkning. I denne undersøgelse, vi etablere en in vivo østrogen-mangelfuld musemodel ved bilateral ovariektomi via en dobbelt dorsal-lateral indsnit i apolipoprotein E (ApoE)-/- mus. Vi sammenligner derefter virkningerne af 17β-estradiol og pseudoprotodioscin (PPD) (en phytoøstrogen) peroralt administreret via hasselnødde spredning. Vi finder, at selv om PPD udøver en vis effekt på at reducere den endelige kropsvægt og plasma TG i OVX apoE-/- mus, det har anti-aterosklerotisk og hjerte-beskyttende kapaciteter sammenlignelig med sin 17β-estradiol modstykke. PPD er en phytoøstrogen, der er blevet rapporteret til at udøve anti-tumor egenskaber. Den foreslåede metode er således anvendelig til screening af phytoøstrogener via udskiltes administration til erstatning for traditionel hormonsubstitutionsbehandling hos postmenopausale kvinder, som er blevet rapporteret at have potentielt skadelige tumorigenetiske Kapacitet. Peroral administration via hasselnødde spredning er ikke-invasiv, hvilket gør det almindeligt gældende for mange patienter. Denne artikel indeholder trin-for-trin demonstrationer af bilateral ovariektomi via dobbelt dorsal-lateral indsnit i ApoE-/- mus og udskiltes 17β-estradiol eller phytoøstrogen hormon udskiftning via hasselnød spredning. Plasma-lipid og kardiovaskulære funktionsanalyser ved hjælp af ekkokardiografi følger.

En typisk eksperimentel behandlingsordning, som anvendes i denne undersøgelse, er illustreret i figur 1. Ved fravænning (alder 28 dage), kvindelige apoE-/- C57BL/6j mus blev bedøvet withavertin (tribromoethanol; 200 mg/kg; intraperitoneally). Mus var bilateralt OVX eller Sham drives gennem en 1 cm dorsale incision. En uge efter bilateral OVX blev musene fodret med et højt kolesterolindhold (1,25% kolesterol, 0% cholat) i 12 uger. 17β-estradiol...

Watch this Scientific Journal Video about An In Vivo Estrogen Deficiency Mouse Model for Screening Exogenous Estrogen Treatments of Cardiovascular Dysfunction After Menopause at JoVE.com

An In Vivo Estrogen Deficiency Mouse Model for Screening Exogenous Estrogen Treatments of Cardiovascular Dysfunction After Menopause

Klinisk, østrogenmangel hos menopausale kvinder kan forværre forekomsten af lipid forstyrrelser og åreforkalkning. Vi etablerede en in vivo østrogenmangel model ved bilateral ovariektomi via en dobbelt dorsal-lateral indsnit i ApoE-/- mus. Musemodellen er anvendelig til screening eksogene østrogen behandlinger af hjerte-kar-dysfunktion efter overgangsalderen.

En in vivo østrogenmangel muse model til screening eksogene østrogen behandlinger af hjerte-kar-dysfunktion efter overgangsalderen

Postmenopausal women are at greater risk of developing cardiovascular diseases than premenopausal women. Female mice ovariectomized (OVX) at weaning ...

Laboratoriemodeller involverer østrogen mangelfuld mus præsentere en åreforkalkning pons data mangler. Denne procedure er især nyttigt for screening udefrakommende østrogen behandlinger af hjerte-kar-dysfunktion efter overgangsalderen. Den største fordel ved denne teknik er, at ovariektomi uden dobbelt dorsolateral snit er en lettere, mindre tidskrævende metode, der undgår svær bughulen vedhæftning og betændelse.Demonstration af proceduren vil være Yue-Zhang Yin, en kandidat studerende fra mit laboratorium. For at udføre en bilateral ovariektomi i APOE knockout mus, først bekræfte en manglende reaktion på pedalen refleks og placere dyret i den udsatte position på en varmepude. Påfør salve til dyrets øjne og dække dyret med en kirurgisk drapere.Lav en en-centimeter snit lateral til midterlinjen, og en centimeter lateral til costal ribben, og bruge kraftforladt til stumpt dissekere det subkutane væv. Ved hjælp af dissekere beskyttelsesbriller, identificere den hvide fedtvæv i bughulen. Brug mikro saks og mikro kraftbefængt, foretage en 0,5-til en centimeter snit gennem fascia, indtil bughulen er nået, og bruge mikro kraftbefængdere til forsigtigt at trække den hvide fedtvæv.En lyserød, morbærformet æggest. Brug en monofilament sutur til at ligte 0,5-til en-centimeter proksimale beholder og livmoder horn, og bruge mikro saks til at høste æggestokken. Returnere de resterende væv til bughulen, og bruge individuelle monofilamenter suturer til separat lukke muskel og hud lag.Derefter høste æggestokken på den kontralaterale side af dyret, som netop vist, og lad musen til at komme sig på en varmepude med overvågning, indtil fuld recumbency. En gang om ugen, fra ugen før til 12 uger efter operationen, måle kropsvægten af hver fingeret og forsøgsdyr på en balance. For plasma total kolesterol og triglycerid måling, i uge 12, forberede ventrale brystet område med 70% ethanol, og indsætte en 25-gauge nål i højre hjertekammer.Aspirere langsomt, indtil der strømmer en milliliter blod ind i sprøjten, og prøven udtages til et 1,5 milliliteropsamlingsrør med ti mikroliter på 0,5 molar EDTA. Inverter røret flere gange grundigt for at blande EDTA i blodet, og straks placere røret på is. Inden for 30 minutter efter indsamling, centrifuge prøven i 20 minutter ved 400 gange G og fire grader Celsius.Opsamm forsigtigt plasmasupernatanten til opbevaring ved minus 80 grader Celsius. For at isolere aortaen fastgøres en 25-gauge nål til en 50 millilitersprøjt fyldt med PBS i uge 12, og nålen sættes i forsøgsdyrets venstre hjertekammer. Skær det rigtige atrium for at undgå højt tryk fra perfusionen, og perfuse hjertevævet på en 05 til 08 milliliter PBS per minut flow.Absorber perfusionsvæsken med laboratorievæv og brug saks og kraftbecene til at fjerne ribben og lunger. Åbn bughulen for at fjerne de indre organer, for et bedre overblik over aorta. Tag fat i hjertet med mikrotænger for at tillade adskillelse af aorta dorsalt, fra rygsøjlen, indtil iliaca bifurcation.Derefter fastgør hjertet og aorta i 48 timer i 4% paraformaldehyd, før vævsprøven opbevares i saltvand ved stuetemperatur eller to til otte grader Celsius i et par timer. Efter tolv uger af et højt kolesteroltal kost, ovariectomized mus demonstrere en bemærkelsesværdig stigning i plasma samlede kolesterol og triglycerid koncentrationer. Ovariectomiserede mus, pr. mundtligt administreret med 17-beta-østrogene, eller PPD via hasselnød spredning, udviser betydeligt lavere plasma samlede kolesterol koncentrationer end sham-opererede mus.Plasma triglycerid niveauer falde i ovariectomized mus, per mundtligt administreres med 17-beta oestradiol, men ikke med PPD. Mens en tendens til en øget kropsvægt er observeret i ovariectomized mus, sammenlignet med sham-opererede mus, ingen væsentlige ændringer i kropsvægt er observeret samlet, mellem de fire grupper af dyr. Den maksimale plak af den opstigende aorta øges i ovariectomiserede mus sammenlignet med alle andre grupper, sammenholdt med et samlet fald i hjertefunktionen, observeret hos disse dyr.Endvidere er den gennemsnitlige procentdel af aortalæsionsområdet, i forhold til hele aortaområdet, signifikant forøget i ovariectomiserede mus. Som forventet er tilstedeværelsen af disse læsioner nedsat med 17-beta-oestradiol eller PPD behandling. Den største risiko for ovariektomi operation er ureteral ligation, hvilket resulterer i en høj dødelighed.Også huske at skære dybt i nærheden af nyrearterie grene, for at undgå aorta skader.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Automated Acoustic Dispensing for the Serial Dilution of Peptide Agonists in Potency Determination Assays

Automatiseret Akustisk Udlevering til seriel fortynding af peptid agonister i Potens Bestemmelse assays

As with small molecule drug discovery, screening for peptide agonists requires the serial dilution of peptides to produce concentration-response curves. ...

Preparation and In Vivo Use of an Activity-based Probe for N-acylethanolamine Acid Amidase

Preparation and In Vivo Use of an Activity-based Probe for N-acylethanolamine Acid Amidase

Forberedelse og<em&gt; In vivo</em&gt; Anvendelse af en aktivitetsbaseret Probe til<em&gt; N</em&gt; -acylethanolamine Acid-amidase

Activity-based protein profiling (ABPP) is a method for the identification of an enzyme of interest in a complex proteome through the use of a chemical ...

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Hjernemembran Fraktionering: An<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Tilnærmelse til vurdering af subsynaptisk protein lokalisering

Assessing the synaptic protein composition and function constitutes an important challenge in neuroscience. However, it is not easy to evaluate ...

Dynamic Proteomic and miRNA Analysis of Polysomes from Isolated Mouse Heart After Langendorff Perfusion

Dynamisk proteom og miRNA analyse af Polysomes fra isolerede mus hjertet efter Langendorff Perfusion

Studies in dynamic changes in protein translation require specialized methods. Here we examined changes in newly-synthesized proteins in response to ...

Measuring and Interpreting Oxygen Consumption Rates in Whole Fly Head Segments

Måling og fortolke ilt forbrug satser helt flyve hoved segmenter

Regulated metabolic activity is essential for the normal functioning of living cells. Indeed, altered metabolic activity is causally linked with the ...

Kinase Inhibitor Screening In Self-assembled Human Protein Microarrays

Kinasehæmmer screening i selv monterede humane protein mikrosystemer

The screening of kinase inhibitors is crucial for better understanding properties of a drug and for the identification of potentially new targets with ...

Screening for Thermotoga maritima Membrane-Bound Pyrophosphatase Inhibitors

Screening for Thermotoga maritima Membrane-Bound Pyrophosphatase Inhibitors

Screening for Thermotoga Maritima membranbundne Pyrofosfatasehæmmere

Membrane-bound pyrophosphatases (mPPases) are dimeric enzymes that occur in bacteria, archaea, plants, and protist parasites. These proteins cleave ...

Visualization of Estrogen Receptors in Colons of Mice with TNBS-Induced Crohn's Disease using Immunofluorescence

Visualisering af østrogenreceptorer i koloner af mus med TNBS-induceret Crohns sygdom ved hjælp af immunofluorescens

Crohn&#39;s disease is the most diagnosed type of inflammatory bowel disease. Chronic inflammation developing in the intestine leads to peristalsis ...

Screening for Phytoestrogens using a Cell-based Estrogen Receptor  &#946; Reporter Assay

Screening for Phytoestrogens using a Cell-based Estrogen Receptor  ÃƒÅ½Ã‚Â² Reporter Assay

Screening for fytoøstrogener ved hjælp af en cellebaseret østrogenreceptor β Reporter Assay

Plants are a source of food for many animals, and&#160;they can produce thousands of chemicals. Some of these compounds affect physiological processes in ...

Transplantation of Neonatal Mouse Cardiac Macrophages into Adult Mice

Transplantation af neonatale mus hjertemakrofager i voksne mus

In an injured neonatal myocardium, macrophages facilitate cardiomyocyte proliferation and angiogenesis and promote heart regeneration. The present study ...