Name: an in vivo estrogen deficiency mouse model for screening exogenous estrogen treatments of cardiovascular dysfunction after menopause
Uploaded: 2019-08-13T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An In Vivo Estrogen Deficiency Mouse Model for Screening Exogenous Estrogen Treatments of Cardiovascular Dysfunction After Menopause at JoVE.com

Diese Arbeit wurde von der National Natural Science Foundation of China (81202526 bis J.X.), der National Natural Science Foundation of China (81302769 bis B.S.), der Beijing Municipal Natural Science Foundation (47144226 to B.S.), der Chinesischen Postdoktorandenstiftung unterstützt. Science Foundation (20110490325 bis J.X.) und die Ph.D. Programs Foundation of Ministry of Education of China (20121106120031 bis B.S.).

Alle Tierpflege- und Versuchsprotokolle wurden vom Institutional Animal Care and Use Committee der Chinese Academy of Medical Sciences und dem Peking Union Medical College (Genehmigungsnummer: SYXK (Peking) 2013-0023) genehmigt. Der Ursprung von ApoE-/- Mäusen ist C57BL/6J9,10.
1. Bilaterale Ovariektomie über einen doppelten dorsal-lateralen Schnitt in ApoE-/- Mäuse
<ol><li>Bei der Entwöhnung (Alter 28 Tage)...

<ol>
	<li>Mozaffarian, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+Disease+and+Stroke+Statistics-2016+Update:+A+Report+From+the+American+Heart+Association.">Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. 133 (4), e38-e360 (2016).</li><li>Packard, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+health+and+disease+in+women.">Cardiovascular health and disease in women.</a> The New England Journal of Medicine. 329 (4), 247-256 (1993).</li><li>Samaan, S. A., Crawford, M. 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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+hormone+replacement+therapy+on+age-related+increase+in+carotid+artery+intima-media+thickness+in+postmenopausal+women.">Effect of hormone replacement therapy on age-related increase in carotid artery intima-media thickness in postmenopausal women.</a> Atherosclerosis. 153 (1), 81-88 (2000).</li><li>Bourassa, P. A., Milos, P. M., Gaynor, B. J., Breslow, J. L., Aiello, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+reduces+atherosclerotic+lesion+development+in+apolipoprotein+E-deficient+mice.">Estrogen reduces atherosclerotic lesion development in apolipoprotein E-deficient mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93 (3), 10022-10027 (1996).</li><li>Squadrito, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genistein+supplementation+and+estrogen+replacement+therapy+improve+endothelial+dysfunction+induced+by+ovariectomy+in+rats.">Genistein supplementation and estrogen replacement therapy improve endothelial dysfunction induced by ovariectomy in rats.</a> Cardiovascular Research. 45 (2), 454-462 (2000).</li><li>Wang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+dysfunction+and+enhanced+contractility+in+microvessels+from+ovariectomized+rats:+roles+of+oxidative+stress+and+perivascular+adipose+tissue.">Endothelial dysfunction and enhanced contractility in microvessels from ovariectomized rats: roles of oxidative stress and perivascular adipose tissue.</a> Hypertension. 63 (5), 1063-1069 (2014).</li><li>Zhang, S. H., Reddick, R. L., Piedrahita, J. A., Maeda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+Hypercholesterolemia+and+Arterial+Lesions+in+Mice+Lacking+Apolipoprotein+E.">Spontaneous Hypercholesterolemia and Arterial Lesions in Mice Lacking Apolipoprotein E.</a> Science. 258 (5081), 468-471 (1992).</li><li>Nakashima, Y., Plump, A. S., Raines, E. W., Breslow, J. L., Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ApoE-Deficient+Mice+Develop+Lesions+of+All+Phases+of+Atherosclerosis+Throughout+the+Arterial+Tree.">ApoE-Deficient Mice Develop Lesions of All Phases of Atherosclerosis Throughout the Arterial Tree.</a> Arteriosclerosis and Thrombosis. 14 (1), 133-140 (1994).</li><li>Str&#246;m, J. O., Theodorsson, A., Ingberg, E., Isaksson, I. M., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovariectomy+and+17-estradiol+Replacement+in+Rats+and+Mice:+A+Visual+Demonstration.">Ovariectomy and 17-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration.</a> Journal of Visualized Experiments. 64 (e4013), 1-4 (2012).</li><li>Rossouw, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risks+and+benefits+of+estrogen+plus+progestin+in+healthy+postmenopausal+women:+principal+results+From+the+Women's+Health+Initiative+randomized+controlled+trial.">Risks and benefits of estrogen plus progestin in healthy postmenopausal women: principal results From the Women's Health Initiative randomized controlled trial.</a> The Journal of the American Medical Association. 288 (3), 321-333 (2002).</li><li>Kumle, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Declining+breast+cancer+incidence+and+decreased+HRT+use.">Declining breast cancer incidence and decreased HRT use.</a> Lancet. 372 (9639), 608-610 (2008).</li><li>Jager, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomized+comparison+of+triptorelin+and+tamoxifen+as+treatment+of+progressive+ovarian+cancer.">A randomized comparison of triptorelin and tamoxifen as treatment of progressive ovarian cancer.</a> Anticancer Research. 15 (6B), 2639-2642 (1995).</li><li>Bhathena, S. J., Velasquez, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+role+of+dietary+phytoestrogens+in+obesity+and+diabetes.">Beneficial role of dietary phytoestrogens in obesity and diabetes.</a> The American Journal of Clinical Nutrition. 76 (6), 1191-1201 (2002).</li><li>Wang, L., Qiu, X. M., Hao, Q., Li, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-inflammatory+effects+of+a+Chinese+herbal+medicine+in+atherosclerosis+via+estrogen+receptor+beta+mediating+nitric+oxide+production+and+NF-kappaB+suppression+in+endothelial+cells.">Anti-inflammatory effects of a Chinese herbal medicine in atherosclerosis via estrogen receptor beta mediating nitric oxide production and NF-kappaB suppression in endothelial cells.</a> Cell Death and Disease. 4 (e551), 1-13 (2013).</li><li>Xiao, J., Wang, N. L., Sun, B., Cai, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+receptor+mediates+the+effects+of+pseudoprotodiocsin+on+adipogenesis+in+3T3-L1+cells.">Estrogen receptor mediates the effects of pseudoprotodiocsin on adipogenesis in 3T3-L1 cells.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 299 (1), C128-C138 (2010).</li><li>Guivarc'h, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predominant+Role+of+Nuclear+Versus+Membrane+Estrogen+Receptor+alpha+in+Arterial+Protection:+Implications+for+Estrogen+Receptor+alpha+Modulation+in+Cardiovascular+Prevention/Safety.">Predominant Role of Nuclear Versus Membrane Estrogen Receptor alpha in Arterial Protection: Implications for Estrogen Receptor alpha Modulation in Cardiovascular Prevention/Safety.</a> Journal of the American Heart Association. 7 (13), 1-17 (2018).</li><li>Osako, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+inhibits+vascular+calcification+via+vascular+RANKL+system:+common+mechanism+of+osteoporosis+and+vascular+calcification.">Estrogen inhibits vascular calcification via vascular RANKL system: common mechanism of osteoporosis and vascular calcification.</a> Circulation Research. 107 (4), 466-475 (2010).</li><li>Ivanova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+some+saponins+and+phenolic+components+of+Tribulus+terrestris+and+Smilax+excelsa+as+MDR+modulators.">Screening of some saponins and phenolic components of Tribulus terrestris and Smilax excelsa as MDR modulators.</a> In vivo. 23 (4), 545-550 (2009).</li><li>Xiao, J., Zhu, T., Yin, Y. Z., Sun, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notoginsenoside+R1,+a+unique+constituent+of+Panax+notoginseng,+blinds+proinflammatory+monocytes+to+protect+against+cardiac+hypertrophy+in+ApoE(-/-)+mice.">Notoginsenoside R1, a unique constituent of Panax notoginseng, blinds proinflammatory monocytes to protect against cardiac hypertrophy in ApoE(-/-) mice.</a> European Journal of Pharmacology. 833 (15), 441-450 (2018).</li><li>Sun, B., Xiao, J., Sun, X. B., Wu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notoginsenoside+R1+attenuates+cardiac+dysfunction+in+endotoxemic+mice:+an+insight+into+oestrogen+receptor+activation+and+PI3K/Akt+signalling.">Notoginsenoside R1 attenuates cardiac dysfunction in endotoxemic mice: an insight into oestrogen receptor activation and PI3K/Akt signalling.</a> British Journal of Pharmacology. 168 (7), 1758-1770 (2013).</li><li>Adams, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+coronary+artery+atherosclerosis+by+17-beta+estradiol+in+ovariectomized+monkeys.+Lack+of+an+effect+of+added+progesterone.">Inhibition of coronary artery atherosclerosis by 17-beta estradiol in ovariectomized monkeys. Lack of an effect of added progesterone.</a> Arteriosclerosis. 10 (6), 1051-1057 (1990).</li><li>Keaney, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=17+beta-estradiol+preserves+endothelial+vasodilator+function+and+limits+low-density+lipoprotein+oxidation+in+hypercholesterolemic+swine.">17 beta-estradiol preserves endothelial vasodilator function and limits low-density lipoprotein oxidation in hypercholesterolemic swine.</a> Circulation. 89 (5), 2251-2259 (1994).</li><li>Nakashima, Y., Plump, A. S., Raines, E. W., Breslow, J. L., Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ApoE-deficient+mice+develop+lesions+of+all+phases+of+atherosclerosis+throughout+the+arterial+tree.">ApoE-deficient mice develop lesions of all phases of atherosclerosis throughout the arterial tree.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 14 (1), 133-140 (1994).</li><li>Saleh, T. M., Cribb, A. E., Connell, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen-induced+recovery+of+autonomic+function+after+middle+cerebral+artery+occlusion+in+male+rats.">Estrogen-induced recovery of autonomic function after middle cerebral artery occlusion in male rats.</a> American Journal of Physiology- Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 281 (5), R1531-R1539 (2001).</li><li>Bingham, D., Macrae, I. M., Carswell, H. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detrimental+effects+of+17beta-oestradiol+after+permanent+middle+cerebral+artery+occlusion.">Detrimental effects of 17beta-oestradiol after permanent middle cerebral artery occlusion.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 25 (3), 414-420 (2005).</li><li>Pignoli, P., Tremoli, E., Poli, A., Oreste, P., Paoletti, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intimal+plus+medial+thickness+of+the+arterial+wall:+a+direct+measurement+with+ultrasound+imaging.">Intimal plus medial thickness of the arterial wall: a direct measurement with ultrasound imaging.</a> Circulation. 74 (6), 1399-1406 (1986).</li><li>Hodgin, J. B., Maeda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minireview:+estrogen+and+mouse+models+of+atherosclerosis.">Minireview: estrogen and mouse models of atherosclerosis.</a> Endocrinology. 143 (12), 4495-4501 (2002).</li><li>Bush, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+mortality+and+noncontraceptive+use+of+estrogen+in+women:+results+from+the+Lipid+Research+Clinics+Program+Follow-up+Study.">Cardiovascular mortality and noncontraceptive use of estrogen in women: results from the Lipid Research Clinics Program Follow-up Study.</a> Circulation. 75 (6), 1102-1109 (1987).</li><li>Marsh, M. M., Walker, V. R., Curtiss, L. K., Banka, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protection+against+atherosclerosis+by+estrogen+is+independent+of+plasma+cholesterol+levels+in+LDL+receptor-deficient+mice.">Protection against atherosclerosis by estrogen is independent of plasma cholesterol levels in LDL receptor-deficient mice.</a> Journal of Lipid Research. 40 (5), 893-900 (1999).</li></ol>

Die hier beschriebene Methode ist ein Mausmodell, das Lipidstörungen und Arteriosklerose bei Frauen in der Wechseljahre ähnelt. Es ist gut dokumentiert, dass Östrogenmangel bei postmenopausalen Frauen die Inzidenz von vorbestehender oder anhaltender Hypercholesterinämie mit zunehmend komplexen und weit verbreiteten atherosklerostischen Läsionen verschlimmern kann1. Um den atherosklerose-anfälligen Status in der Klinik nachzuahmen, wurden apoE-mangelhafte Mäuse, eine reproduzierbare und bequ...

Epidemiologische und klinische Studien haben gezeigt, dass postmenopausale Frauen ein wesentlich höheres Risiko für Herz-Kreislauf-Erkrankungen haben als prämenopausale Frauen1,2. Hormonersatztherapie (HRT) kann das relative Risiko für Herz-Kreislauf-Erkrankungen auf 0,37-0,793reduzieren. Unter anderen Komplikationen ist Arteriosklerose, die durch Herz-Kreislauf-Erkrankungen verursacht wird, die häufigste Todesursache weltweit4. Jedoch, Labormodelle mit Östrogen-mangelhafte Mäuse präsentieren Atherosklerose anfälligen Status fehlen. Dieses Protokoll bietet ein In-vivo-Östrogen-Mangel-Maus-Modell zum Screening exogener Östrogen-Behandlungen von kardiovaskulärer Dysfunktion nach den Wechseljahren.
Frühere Studien zeigen, dass die Anwendung von OVX bei atherosklerotischen Nagetieren, die mit einer cholesterinreichen Ernährung gefüttert werden, postmenopausale Frauen nachahmen kann, die an Arterioskleroseleiden 5,6,7,8. Ein reproduzierbares und praktisches Tiermodell, das dem atherosklerotischen Zustand bei Frauen in der Wechseljahre ähnelt, ist die Grundlage der exogenen Östrogenforschung. Hier wurde ein doppelter dorsal-lateraler Schnitt der bilateralen Ovariektomie bei atherosklerose-anfälligen Apolipoprotein E Knockout (ApoE-/-) Mäusen9,10angewendet. Im Vergleich zu mittelabdominalen oder dorsalen Einschnitten ist der doppelte dorsal-laterale Schnitt eine einfachere, weniger zeitaufwändige Methode, die eine schwere Bauchhöhlenhaftung und Entzündungen vermeiden kann. Perorale Verabreichung über Haselnuss-Spread (siehe Tabelle der Materialien) ist nicht invasiv und bequem, so dass es weithin anwendbar als eine langfristige Administrationsmodus11. Slow-Release-Pellet-Implantation ist auch beliebt6. Implantate können jedoch die Inzidenz von Infektionen verschlimmern, insbesondere bei Mäusen, die OVX ausgesetzt sind. Andere nichtinvasive Verabreichungsmodi, wie oral gavage und Wasserverwaltung, haben auch viele Nachteile. Oralgavage in der Regel Stress Mäuse und kann Ösophakenverletzungen verursachen. Die Verabreichung des Hormons über Trinkwasser ist sehr vorteilhaft; die Zugabe von DMSO als Emulgator ist jedoch unvermeidlich, da exogene Östrogene in Wasser unlöslich sind. Hier haben wir uns für perorales 17-Estradiol- oder Phytoöstrogenhormonersatz mittels Haselnussaufstrich für die Langzeitverabreichung entschieden.
Kürzlich wurde die positive Wirkung von HRT auf das Herz-Kreislauf-System von postmenopausalen Frauen in Studien der Frauengesundheitsinitiative (WHI) bestritten12. Auf der einen Seite, exogenes Östrogen allein übt eine positive Wirkung auf das Herz-Kreislauf-System; auf der anderen Seite, Es kann mit Metohydroxyprogesteron Acetat kombinieren, um das Risiko von kardiovaskulären Ereignissen zu erhöhen. Ernster, HRT kann zu Brust- und Gebärmuttertumorprogression führen, und dieser Effekt hat seine Verwendung deutlich eingeschränkt13,14. Mehr Interesse wurde auf die kardiovaskuläre-schützende Wirkung von exogenen Östrogenen ohne mitotische Aktivität in Tumorzellen15,16,17konzentriert. Mehrere Studien an Menschen und Tieren deuten darauf hin, dass Phytoöstrogene mit Strukturen ähnlichdenen von Östrogenen eine vorteilhafte Rolle im Kardiovaskulären Schutz 15,18spielen können.
Die Ziele der vorliegenden Arbeit sind daher (i) der Aufbau eines In-vivo-Östrogen-Mangel-Mausmodells durch bilaterale Eialistomie über einen doppelten dorsal-lateralen Schnitt beiApoE-/- Mäusen und (ii) der Vergleich der kardiovaskulären Schutzwirkungen peroraler 17-Estradiol und Pseudoprotodioscin (PPD) über Haselnussaufstrich verabreicht. 17-Estradiol ist eine Art von exogenem Östrogen, das zu den weiblichen Sexualhormonen6,11,19gehört. PPD, ein Steroid Saponin und Phytoöstrogen aus Dioscorea Pflanzen, wurde zuvor berichtet, Anti-Tumor-Eigenschaften ausüben20.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>17&#946;-estradiol, &#62;98%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E8875-250MG</td>
			<td>Estrogen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable syringes (with 25G needles)</td>
			<td>Hunan Luzhou Huikang Development Co., Ltd</td>
			<td>0.5*19TWLB</td>
			<td>Cardiac bleeding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-cholesterol mouse diet</td>
			<td>Huafukang Bio-Technology</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1.25% cholesterol, 0% cholate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-Resolution In Vivo Micro-Imaging System</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo&#174;770</td>
			<td>Measurements of intima-media thickness and cardiac dysfunction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Methyl-2-butanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>152463-250ML</td>
			<td>Preparation of avertin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting forceps, Curved 8mm</td>
			<td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting forceps, Straight 8mm</td>
			<td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Scissors, Curved/Sharp 8mm</td>
			<td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Scissors, Straight/Sharp 8mm</td>
			<td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monofilament suture 4-0 1/2 5*12 19mm</td>
			<td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., Ltd</td>
			<td>R413</td>
			<td>Suture and ligation of the tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nut cream (Nutella)</td>
			<td>Ferrero</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Medium for peroral 17&#946;-estradiol or PPD</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiVisor optical glass binocular magnifier</td>
			<td>Dohegan Optical Company Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Assistant of identifying the tissues during ovariectomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline at pH 7.4</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>P3813</td>
			<td>Preparing 1 L saline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pro MultiLabel Microplate Reader</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>Infinite M1000</td>
			<td>Plasma TC and TG determination</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pseudoprotodioscin</td>
			<td>Shanghai Winherb Medical S &#38; T Development</td>
			<td>W-0427</td>
			<td>CAS registry no. 102115-79-7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rimadyl, 50 mg/mL</td>
			<td>Pfizer Pharma GmbH</td>
			<td>462986</td>
			<td>Postoperative analgesia after ovariectomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sesame oil</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S3547-1L</td>
			<td>Dissolving the 17&#946;-estradiol or PPD</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solcoseryl Eye-Gel</td>
			<td>Menarini, Solco Basle Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>Eye protection during anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>MCALON</td>
			<td>MCL-6STV</td>
			<td>Image of the intimal region of aorta</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Table model high speed centrifuge</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>1-14K</td>
			<td>Preparation of plasma</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors, slight Curve (14cm)</td>
			<td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors, straight Flat (14cm)</td>
			<td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue forceps, serrated, slight Curve (14cm)</td>
			<td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue forceps, serrated, straight Flat (14cm)</td>
			<td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tribromoethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T48402-5G</td>
			<td>Preparation of avertin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triglycerides (TG) assay kit</td>
			<td>Institute of Nanjing Jiancheng Biology Engineering</td>
			<td>A110-1</td>
			<td>Plasma TG determination</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Total cholesterols (TC) assay kit</td>
			<td>Institute of Nanjing Jiancheng Biology Engineering</td>
			<td>A111-1</td>
			<td>Plasma TC determination</td>
		</tr>
	</tbody>
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an in vivo estrogen deficiency mouse model for screening exogenous estrogen treatments of cardiovascular dysfunction after menopause

Postmenopausale Frauen haben ein höheres Risiko, an Herz-Kreislauf-Erkrankungen zu erkranken als prämenopausale Frauen. Weibliche Mäuse ovariectomisiert (OVX) bei Entwöhnung Sanierung atherosklerotische Läsionen in der Aorta im Vergleich zu weiblichen Mäusen mit intakter Eierstockfunktion. Es fehlen jedoch Labormodelle mit Östrogen-mäusen mit arteriosklerose-anfälligem Status. Dieses Defizit ist entscheidend, weil klinischer Östrogenmangel bei Frauen in der Wechseljahre die Inzidenz von vorbestehenden oder anhaltenden Lipidstörungen und Arteriosklerose verschlimmern kann. In dieser Studie stellen wir ein In-vivo-Östrogen-defizitier-defizitierte Mausmodell durch bilaterale Ovariektomie über einen doppelten dorsal-lateralen Schnitt bei Apolipoprotein E (apoE)-/- Mäusen fest. Anschließend vergleichen wir die Wirkungen von 17-Estradiol und Pseudoprotodioscin (PPD) (ein Phytoöstrogen), das peroral über Haselnussaufstrich verabreicht wird. Wir stellen fest, dass PPD zwar einen gewissen Effekt auf die Reduzierung des Endkörpergewichts und des Plasma-TG bei OVX-ApoE-/- Mäusen ausübt, aber antiatherosklerotische und kardiale Schutzfähigkeiten hat, die mit seinem 17-Estradiol-Pendant vergleichbar sind. PPD ist ein Phytoöstrogen, das berichtet wurde, Anti-Tumor-Eigenschaften auszuüben. Daher ist die vorgeschlagene Methode für das Screening von Phytoöstrogenen über perorale Verabreichung geeignet, um die traditionelle Hormonersatztherapie bei postmenopausalen Frauen zu ersetzen, von der berichtet wurde, dass sie potenziell schädliche tumorigenetische fassungsvermögen. Perorale Verabreichung über Haselnuss-Spread ist nicht-invasiv, so dass es weithin anwendbar auf viele Patienten. Dieser Artikel enthält schrittweise Demonstrationen der bilateralen Ovariektomie über den doppelten dorsal-lateralen Schnitt bei ApoE-/- Mäusen und peroralem 17-Estradiol- oder Phytoöstrogenhormonersatz über Haselnuss-Spread. Plasmalipid- und Herz-Kreislauf-Funktionsanalysen mittels Echokardiographie folgen.

Ein typisches experimentelles Behandlungsschema, wie es in dieser Studie verwendet wird, ist in Abbildung 1dargestellt. Bei der Entwöhnung (Alter 28 Tage) wurden weibliche ApoE-/- C57BL/6J-Mäuse mit Avertin anästhesiert (Tribromoethanol; 200 mg/kg; intraperitoneal). Mäuse wurden bilateral OVX oder Schein durch einen 1 cm dorsalen Schnitt operiert. Eine Woche nach bilateralem OVX wurden die Mäuse 12 Wochen lang mit einer cholesterinreichen Ern?...

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An In Vivo Estrogen Deficiency Mouse Model for Screening Exogenous Estrogen Treatments of Cardiovascular Dysfunction After Menopause

Klinisch, Östrogenmangel bei Frauen in der Wechseljahre kann die Inzidenz von Lipidstörungen und Arteriosklerose verschlimmern. Wir etablierten ein In-vivo-Östrogen-Mangelmodell durch bilaterale Ovariektomie über einen doppelten dorsal-lateralen Schnitt bei ApoE-/- Mäusen. Das Mausmodell ist für das Screening exogener Östrogenbehandlungen von kardiovaskulärer Dysfunktion nach den Wechseljahren anwendbar.

Ein In Vivo Östrogen-Mangel-Maus-Modell zum Screening exogener Östrogen-Behandlungen von Kardiovaskulärer Dysfunktion nach den Wechseljahren

Postmenopausal women are at greater risk of developing cardiovascular diseases than premenopausal women. Female mice ovariectomized (OVX) at weaning ...

Labormodelle mit Östrogen-Mangel Mäusen, die eine Arteriosklerose Pons Daten präsentieren fehlen. Dieses Verfahren ist besonders hilfreich für das Screening exogener Östrogen-Behandlungen von herzkarherzischer Dysfunktion nach den Wechseljahren. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass die Ovariektomie ohne doppelten dorsolateralen Schnitt eine einfachere, weniger zeitaufwändige Methode ist, die schwere Bauchhöhlenhaftung und Entzündungen vermeidet.Demonstriert wird das Verfahren von Yue-Zhang Yin, einem Doktoranden aus meinem Labor. Um eine bilaterale Ovariektomie bei APOE-Knockout-Mäusen durchzuführen, bestätigen Sie zunächst eine mangelnde Reaktion auf den Pedalreflex und legen Sie das Tier in die anfällige Position auf einem Heizkissen. Tragen Sie Salbe auf die Augen des Tieres auf und bedecken Sie das Tier mit einem chirurgischen Vorhang.Machen Sie einen ein Zentimeter Schnitt seitlich zur Mittellinie und einen Zentimeter seitlich zu den Costalrippen, und verwenden Sie Zangen, um das subkutane Gewebe unverblümt zu sezieren. Identifizieren Sie mit einer SezierenderBrille das weiße Fettgewebe in der Bauchhöhle. Mit Mikroschere und Mikrozange, machen Sie einen 0,5-zu-ein-Zentimeter-Schnitt durch die Faszie, bis die Bauchhöhle erreicht ist, und verwenden Sie die Mikrozange, um das weiße Fettgewebe sanft zurückzuziehen.Ein rosa, maulbeerförmiger Eierstock, eingewickelt in Fettgewebe, sollte in der Bauchhöhle beobachtet werden. Verwenden Sie eine Monofilament-Nähte, um das 0,5- bis ein Zentimeter große proximale Gefäß und Das Gebärmutterhorn zu ligieren, und verwenden Sie die Mikroschere, um den Eierstock zu ernten. Bringen Sie das restliche Gewebe in die Bauchhöhle zurück und verwenden Sie einzelne Monofilament-Nähte, um die Muskel- und Hautschichten getrennt zu schließen.Dann ernten Sie den Eierstock auf der kontralateralen Seite des Tieres, wie gerade gezeigt, und lassen Sie die Maus auf einem Heizkissen mit Überwachung zu erholen, bis volle Recumbency. Einmal pro Woche, von der Woche vor bis 12 Wochen nach der Operation, messen Sie das Körpergewicht jedes Schein- und Versuchstiers auf einem Gleichgewicht. Für die Plasma-Gesamtcholesterin- und Triglyceridmessung bereiten Sie in Woche 12 den ventralen Brustbereich mit 70% Ethanol vor und legen Sie eine 25-Spur-Nadel in den rechten Ventrikel ein.Langsam aspirieren, bis ein Milliliter Blut in die Spritze fließt, und geben Sie die Probe in ein 1,5-Milliliter-Sammelrohr mit zehn Mikrolitern 0,5 Molaren EDTA. Invertieren Sie die Röhre mehrmals gründlich, um die EDTA in das Blut zu mischen, und legen Sie die Röhre sofort auf Eis. Innerhalb von 30 Minuten nach der Sammlung zentrieren Sie die Probe für 20 Minuten bei 400 mal G und vier Grad Celsius.Sammeln Sie den Plasmaüberstand vorsichtig für die Lagerung bei minus 80 Grad Celsius. Um die Aorta zu isolieren, befestigen Sie in Woche 12 eine 25-Spur-Nadel an einer mit PBS gefüllten 50-Milliliter-Spritze und legen Sie die Nadel in den linken Ventrikel des Versuchstiers ein. Schneiden Sie das rechte Atrium, um einen hohen Druck aus der Perfusion zu vermeiden, und durchdringen Sie das Herzgewebe mit einem PBS pro Minute Durchfluss von 05 bis 08 Millilitern.Absorbieren Sie die Perfusionsflüssigkeit mit Laborgewebe und verwenden Sie Scheren und Zangen, um die Rippen und Lungen zu entfernen. Öffnen Sie die Bauchhöhle, um die inneren Organe zu entfernen, für eine bessere Sicht auf die Aorta. Greifen Sie das Herz mit Mikrozange, um die Trennung der Aorta dorsal, von der Wirbelsäule, bis zur iliac Bifurkation zu ermöglichen.Dann fixieren Sie das Herz und die Aorta für 48 Stunden in 4% Paraformaldehyd, bevor Sie die Gewebeprobe bei Raumtemperatur oder bei zwei bis acht Grad Celsius für ein paar Stunden in Derinline lagern. Nach zwölf Wochen einer cholesterinreichen Ernährung zeigen ovariectomisierte Mäuse einen bemerkenswerten Anstieg der Plasma-Gesamtcholesterin- und Triglyceridkonzentrationen. Ovariectomisierte Mäuse, pro oral verabreicht mit 17-Beta-Östradiol, oder PPD über Haselnuss-Spread, weisen signifikant niedrigere Plasma-Gesamtcholesterinkonzentrationen auf als scheinbetriebene Mäuse.Plasmatriglyceridspiegel verringern sich bei eialisierten Mäusen, pro oral verabreicht mit 17-Beta-Östradiol, jedoch nicht mit PPD. Während bei eialisierten Mäusen eine Tendenz zu einem erhöhten Körpergewicht beobachtet wird, werden im Vergleich zu scheinbetriebenen Mäusen insgesamt keine signifikanten Veränderungen des Körpergewichts zwischen den vier Tiergruppen beobachtet. Die maximale Plaque der aufsteigenden Aorta ist bei ovarieztomisierten Mäusen erhöht, im Vergleich zu allen anderen Gruppen, in Verbindung mit einer allgemeinen Abnahme der Herzfunktion, die bei diesen Tieren beobachtet wurde.Darüber hinaus ist der durchschnittliche Prozentsatz der Aortenläsionsfläche im Verhältnis zum gesamten Aortenbereich bei eialisierenden Mäusen signifikant erhöht. Wie erwartet, wird das Vorhandensein dieser Läsionen mit 17-Beta-Östradiol, oder PPD-Behandlung verringert. Das Hauptrisiko für die Ovariektomie-Operation ist die Ureteralligation, die zu einer hohen Sterblichkeit führt.Denken Sie auch daran, tief in der Nähe der Nierenarterie Zweige zu schneiden, um Aortenschäden zu vermeiden.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Automated Acoustic Dispensing for the Serial Dilution of Peptide Agonists in Potency Determination Assays

Automatische Acoustic Verzicht für die serielle Verdünnung von Peptid-Agonisten im Potency Bestimmung Assays

As with small molecule drug discovery, screening for peptide agonists requires the serial dilution of peptides to produce concentration-response curves. ...

Forschung

Biochemie

Preparation and In Vivo Use of an Activity-based Probe for N-acylethanolamine Acid Amidase

Preparation and In Vivo Use of an Activity-based Probe for N-acylethanolamine Acid Amidase

Vorbereitung und<em&gt; In Vivo</em&gt; Die Verwendung eines aktivitätsbasierte Sonde für<em&gt; N</em&gt; -acylethanolamine Säure Amidase

Activity-based protein profiling (ABPP) is a method for the identification of an enzyme of interest in a complex proteome through the use of a chemical ...

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Gehirn Membran Fraktionierung: An<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Ansatz zur Bewertung der Subsynaptischen Protein-Lokalisierung

Assessing the synaptic protein composition and function constitutes an important challenge in neuroscience. However, it is not easy to evaluate ...

Dynamic Proteomic and miRNA Analysis of Polysomes from Isolated Mouse Heart After Langendorff Perfusion

Dynamische Proteomic und MiRNA Analyse des Polysomes von isolierten Maus Herz nach Langendorff Perfusion

Studies in dynamic changes in protein translation require specialized methods. Here we examined changes in newly-synthesized proteins in response to ...

Measuring and Interpreting Oxygen Consumption Rates in Whole Fly Head Segments

Messung und Interpretation von Sauerstoff-Verbrauch im ganzen fliegen Kopf Segmente

Regulated metabolic activity is essential for the normal functioning of living cells. Indeed, altered metabolic activity is causally linked with the ...

Kinase Inhibitor Screening In Self-assembled Human Protein Microarrays

Kinase-Inhibitor-Screening in selbstmontierten humanen Protein-Mikroarrays

The screening of kinase inhibitors is crucial for better understanding properties of a drug and for the identification of potentially new targets with ...

Screening for Thermotoga maritima Membrane-Bound Pyrophosphatase Inhibitors

Screening for Thermotoga maritima Membrane-Bound Pyrophosphatase Inhibitors

Screening auf Thermotoga maritima Membrane-Bound Pyrophosphatase Inhibitoren

Membrane-bound pyrophosphatases (mPPases) are dimeric enzymes that occur in bacteria, archaea, plants, and protist parasites. These proteins cleave ...

Visualization of Estrogen Receptors in Colons of Mice with TNBS-Induced Crohn's Disease using Immunofluorescence

Visualisierung von Östrogenrezeptoren bei Mäusen mit TNBS-induzierter Morbus Crohn mit Immunfluoreszenz

Crohn&#39;s disease is the most diagnosed type of inflammatory bowel disease. Chronic inflammation developing in the intestine leads to peristalsis ...

Screening for Phytoestrogens using a Cell-based Estrogen Receptor  &#946; Reporter Assay

Screening for Phytoestrogens using a Cell-based Estrogen Receptor  ÃƒÅ½Ã‚Â² Reporter Assay

Screening auf Phytoöstrogene mit einem Zell-basierten Östrogen-Rezeptor β Reporter Assay

Plants are a source of food for many animals, and&#160;they can produce thousands of chemicals. Some of these compounds affect physiological processes in ...

Transplantation of Neonatal Mouse Cardiac Macrophages into Adult Mice

Transplantation von neonatalen Maus-Herzmakrophagen in erwachsene Mäuse

In an injured neonatal myocardium, macrophages facilitate cardiomyocyte proliferation and angiogenesis and promote heart regeneration. The present study ...