Name: an in vivo estrogen deficiency mouse model for screening exogenous estrogen treatments of cardiovascular dysfunction after menopause
Uploaded: 2019-08-13T14:00:00
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この研究は、中国国立自然科学財団(81202526 to J.X.)、中国国立自然科学財団(81302769からB.S.)、北京市自然科学財団(47144226からB.S.)、中国のポスドクによって支援されました。科学財団(2010490325からJ.X.まで)、中国教育省博士プログラム財団(20121106120031からB.S.)。

すべての動物のケアと実験プロトコルは、中国医学アカデミーと北京連合医科大学の機関動物ケアと使用委員会によって承認されました (許可No.: SYXK (北京) 2013-0023).apoE-/-マウスの起源はC57BL/6J9、10です。
1. apoEにおける二重後部横切開による両側眼切開術-/-マウス
<ol><li>引き取り(28歳)で、アバーチン(トリブロ?...

<ol>
	<li>Mozaffarian, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+Disease+and+Stroke+Statistics-2016+Update:+A+Report+From+the+American+Heart+Association.">Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. 133 (4), e38-e360 (2016).</li><li>Packard, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+health+and+disease+in+women.">Cardiovascular health and disease in women.</a> The New England Journal of Medicine. 329 (4), 247-256 (1993).</li><li>Samaan, S. A., Crawford, M. 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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+hormone+replacement+therapy+on+age-related+increase+in+carotid+artery+intima-media+thickness+in+postmenopausal+women.">Effect of hormone replacement therapy on age-related increase in carotid artery intima-media thickness in postmenopausal women.</a> Atherosclerosis. 153 (1), 81-88 (2000).</li><li>Bourassa, P. A., Milos, P. M., Gaynor, B. J., Breslow, J. L., Aiello, R. 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H., Reddick, R. L., Piedrahita, J. A., Maeda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+Hypercholesterolemia+and+Arterial+Lesions+in+Mice+Lacking+Apolipoprotein+E.">Spontaneous Hypercholesterolemia and Arterial Lesions in Mice Lacking Apolipoprotein E.</a> Science. 258 (5081), 468-471 (1992).</li><li>Nakashima, Y., Plump, A. S., Raines, E. W., Breslow, J. L., Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ApoE-Deficient+Mice+Develop+Lesions+of+All+Phases+of+Atherosclerosis+Throughout+the+Arterial+Tree.">ApoE-Deficient Mice Develop Lesions of All Phases of Atherosclerosis Throughout the Arterial Tree.</a> Arteriosclerosis and Thrombosis. 14 (1), 133-140 (1994).</li><li>Str&#246;m, J. O., Theodorsson, A., Ingberg, E., Isaksson, I. M., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovariectomy+and+17-estradiol+Replacement+in+Rats+and+Mice:+A+Visual+Demonstration.">Ovariectomy and 17-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration.</a> Journal of Visualized Experiments. 64 (e4013), 1-4 (2012).</li><li>Rossouw, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risks+and+benefits+of+estrogen+plus+progestin+in+healthy+postmenopausal+women:+principal+results+From+the+Women's+Health+Initiative+randomized+controlled+trial.">Risks and benefits of estrogen plus progestin in healthy postmenopausal women: principal results From the Women's Health Initiative randomized controlled trial.</a> The Journal of the American Medical Association. 288 (3), 321-333 (2002).</li><li>Kumle, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Declining+breast+cancer+incidence+and+decreased+HRT+use.">Declining breast cancer incidence and decreased HRT use.</a> Lancet. 372 (9639), 608-610 (2008).</li><li>Jager, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomized+comparison+of+triptorelin+and+tamoxifen+as+treatment+of+progressive+ovarian+cancer.">A randomized comparison of triptorelin and tamoxifen as treatment of progressive ovarian cancer.</a> Anticancer Research. 15 (6B), 2639-2642 (1995).</li><li>Bhathena, S. 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K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+inhibits+vascular+calcification+via+vascular+RANKL+system:+common+mechanism+of+osteoporosis+and+vascular+calcification.">Estrogen inhibits vascular calcification via vascular RANKL system: common mechanism of osteoporosis and vascular calcification.</a> Circulation Research. 107 (4), 466-475 (2010).</li><li>Ivanova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+some+saponins+and+phenolic+components+of+Tribulus+terrestris+and+Smilax+excelsa+as+MDR+modulators.">Screening of some saponins and phenolic components of Tribulus terrestris and Smilax excelsa as MDR modulators.</a> In vivo. 23 (4), 545-550 (2009).</li><li>Xiao, J., Zhu, T., Yin, Y. Z., Sun, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notoginsenoside+R1,+a+unique+constituent+of+Panax+notoginseng,+blinds+proinflammatory+monocytes+to+protect+against+cardiac+hypertrophy+in+ApoE(-/-)+mice.">Notoginsenoside R1, a unique constituent of Panax notoginseng, blinds proinflammatory monocytes to protect against cardiac hypertrophy in ApoE(-/-) mice.</a> European Journal of Pharmacology. 833 (15), 441-450 (2018).</li><li>Sun, B., Xiao, J., Sun, X. B., Wu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notoginsenoside+R1+attenuates+cardiac+dysfunction+in+endotoxemic+mice:+an+insight+into+oestrogen+receptor+activation+and+PI3K/Akt+signalling.">Notoginsenoside R1 attenuates cardiac dysfunction in endotoxemic mice: an insight into oestrogen receptor activation and PI3K/Akt signalling.</a> British Journal of Pharmacology. 168 (7), 1758-1770 (2013).</li><li>Adams, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+coronary+artery+atherosclerosis+by+17-beta+estradiol+in+ovariectomized+monkeys.+Lack+of+an+effect+of+added+progesterone.">Inhibition of coronary artery atherosclerosis by 17-beta estradiol in ovariectomized monkeys. Lack of an effect of added progesterone.</a> Arteriosclerosis. 10 (6), 1051-1057 (1990).</li><li>Keaney, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=17+beta-estradiol+preserves+endothelial+vasodilator+function+and+limits+low-density+lipoprotein+oxidation+in+hypercholesterolemic+swine.">17 beta-estradiol preserves endothelial vasodilator function and limits low-density lipoprotein oxidation in hypercholesterolemic swine.</a> Circulation. 89 (5), 2251-2259 (1994).</li><li>Nakashima, Y., Plump, A. S., Raines, E. W., Breslow, J. L., Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ApoE-deficient+mice+develop+lesions+of+all+phases+of+atherosclerosis+throughout+the+arterial+tree.">ApoE-deficient mice develop lesions of all phases of atherosclerosis throughout the arterial tree.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 14 (1), 133-140 (1994).</li><li>Saleh, T. M., Cribb, A. E., Connell, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen-induced+recovery+of+autonomic+function+after+middle+cerebral+artery+occlusion+in+male+rats.">Estrogen-induced recovery of autonomic function after middle cerebral artery occlusion in male rats.</a> American Journal of Physiology- Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 281 (5), R1531-R1539 (2001).</li><li>Bingham, D., Macrae, I. M., Carswell, H. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detrimental+effects+of+17beta-oestradiol+after+permanent+middle+cerebral+artery+occlusion.">Detrimental effects of 17beta-oestradiol after permanent middle cerebral artery occlusion.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 25 (3), 414-420 (2005).</li><li>Pignoli, P., Tremoli, E., Poli, A., Oreste, P., Paoletti, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intimal+plus+medial+thickness+of+the+arterial+wall:+a+direct+measurement+with+ultrasound+imaging.">Intimal plus medial thickness of the arterial wall: a direct measurement with ultrasound imaging.</a> Circulation. 74 (6), 1399-1406 (1986).</li><li>Hodgin, J. B., Maeda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minireview:+estrogen+and+mouse+models+of+atherosclerosis.">Minireview: estrogen and mouse models of atherosclerosis.</a> Endocrinology. 143 (12), 4495-4501 (2002).</li><li>Bush, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+mortality+and+noncontraceptive+use+of+estrogen+in+women:+results+from+the+Lipid+Research+Clinics+Program+Follow-up+Study.">Cardiovascular mortality and noncontraceptive use of estrogen in women: results from the Lipid Research Clinics Program Follow-up Study.</a> Circulation. 75 (6), 1102-1109 (1987).</li><li>Marsh, M. M., Walker, V. R., Curtiss, L. K., Banka, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protection+against+atherosclerosis+by+estrogen+is+independent+of+plasma+cholesterol+levels+in+LDL+receptor-deficient+mice.">Protection against atherosclerosis by estrogen is independent of plasma cholesterol levels in LDL receptor-deficient mice.</a> Journal of Lipid Research. 40 (5), 893-900 (1999).</li></ol>

ここで説明する方法論は、閉経期の女性に見られる脂質破壊およびアテローム性動脈硬化症に似たマウスモデルである。閉経後の女性におけるエストロゲン欠乏は、徐々に複雑で広範囲に広がるアテローム性動脈硬化病変1を伴う既存または進行中の高コレステロール血症の発生率を悪化させることができることが十分に文書化されている。診療所におけるアテローム性動脈...

疫学的および臨床的研究は、閉経後の女性が閉経前の女性よりも心血管疾患のリスクがかなり高いことを示しています 1,2.ホルモン補充療法(HRT)は、心血管疾患の相対的なリスクを0.37-0.793に減らすことができます。他の合併症の中で、心血管疾患によって引き起こされるアテローム性動脈硬化症は、世界的な死亡原因の主要な原因である4.しかし、アテローム性動脈硬化を起こしやすい状態を示すエストロゲン欠損マウスを含む実験室モデルは欠けている。このプロトコルは、閉経後の心血管機能障害の外因性エストロゲン治療をスクリーニングするための生体内エストロゲン欠乏マウスモデルを提供する。
以前の研究は、高コレステロール食を与えたアテローム硬化性げっ歯類におけるOVXの適用は、アテローム性動脈硬化症5、6、7、8に苦しむ閉経後の女性を模倣できることを示している。閉経期の女性のアテローム硬化状態に似た再現性と便利な動物モデルは、外因性エストロゲン研究の基礎です。ここで、アテローム性動脈硬化症を起こしやすいアポリポプロテインEノックアウト(apoE-/-)マウス9、10に両側側切開の二重後側切開を適用した。中腹部または背部切開と比較して、二重背部横切開は、重度の腹腔の接着および炎症を避けることができるより簡単で、より少ない時間のかかる方法である。ヘーゼルナッツスプレッドを介した経口投与(材料の表を参照)は非侵襲的で便利であり、長期投与モード11として広く適用可能である。スローリリースペレット注入も人気6.しかし、インプラントは、特にOVXを受けたマウスにおける感染の発生率を悪化させる可能性がある。経口ガバゲージや水投与などの他の非侵襲的投与モードにも多くの欠点がある。経口ゲージは、典型的にはマウスにストレスを与え、経口損傷を引き起こす可能性がある。飲料水を介してホルモンを投与することは非常に有益です。しかし、外因性エストロゲンが水中に不溶性であるため、乳化剤としてのDMSOの添加は避けられません。ここでは、長期投与のためのヘーゼルナッツスプレッドを介したペラル17βエストラジオールまたはフィトエストロゲンホルモン置換を選択した。
最近、閉経後女性の心血管系に対するHRTの有益な効果は、女性の健康イニシアチブ(WHI)試験12で争われている。一方で, 外因性エストロゲン単独で心血管系に有益な効果を発揮;一方、それは心血管イベントのリスクを高めるために酢酸メトヒドロキシプロゲステロンと組み合わせることができます。より深刻に、HRTは乳房および子宮腫瘍の進行につながる可能性があり、この効果は著しくその使用を制限している13,14.腫瘍細胞15、16、17における有人活性を欠く外因性エストロゲンの心血管保護効果に、より多くの関心が集まっている。ヒトおよび動物における複数の研究は、エストロゲンと同様の構造を有する植物エストロゲンが心血管保護15,18において有益な役割を果たすことができることを示唆している。
したがって、本研究の目的は、(i)apoE-/-マウスおよび(ii)の心血管保護効果を比較するために、二重後体横切開を介して両側眼球切開による生体内エストロゲン欠乏マウスモデルを構築する(i)。ヘーゼルナッツスプレッドを介して17β-エストラジオールおよび擬似プロトジオシン(PPD)を投与した。17β-エストラジオールは、女性の性ホルモン6、11、19に属する外因性エストロゲンの一種である。PPDは、ジオスコア植物由来のステロイドサポニンおよびフィトエストロゲンであり、以前に抗腫瘍特性20を発揮することが報告されている。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>17&#946;-estradiol, &#62;98%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E8875-250MG</td>
			<td>Estrogen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable syringes (with 25G needles)</td>
			<td>Hunan Luzhou Huikang Development Co., Ltd</td>
			<td>0.5*19TWLB</td>
			<td>Cardiac bleeding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-cholesterol mouse diet</td>
			<td>Huafukang Bio-Technology</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1.25% cholesterol, 0% cholate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-Resolution In Vivo Micro-Imaging System</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo&#174;770</td>
			<td>Measurements of intima-media thickness and cardiac dysfunction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Methyl-2-butanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>152463-250ML</td>
			<td>Preparation of avertin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting forceps, Curved 8mm</td>
			<td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting forceps, Straight 8mm</td>
			<td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Scissors, Curved/Sharp 8mm</td>
			<td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting Scissors, Straight/Sharp 8mm</td>
			<td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monofilament suture 4-0 1/2 5*12 19mm</td>
			<td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., Ltd</td>
			<td>R413</td>
			<td>Suture and ligation of the tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nut cream (Nutella)</td>
			<td>Ferrero</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Medium for peroral 17&#946;-estradiol or PPD</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiVisor optical glass binocular magnifier</td>
			<td>Dohegan Optical Company Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Assistant of identifying the tissues during ovariectomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline at pH 7.4</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>P3813</td>
			<td>Preparing 1 L saline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pro MultiLabel Microplate Reader</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>Infinite M1000</td>
			<td>Plasma TC and TG determination</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pseudoprotodioscin</td>
			<td>Shanghai Winherb Medical S &#38; T Development</td>
			<td>W-0427</td>
			<td>CAS registry no. 102115-79-7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rimadyl, 50 mg/mL</td>
			<td>Pfizer Pharma GmbH</td>
			<td>462986</td>
			<td>Postoperative analgesia after ovariectomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sesame oil</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S3547-1L</td>
			<td>Dissolving the 17&#946;-estradiol or PPD</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solcoseryl Eye-Gel</td>
			<td>Menarini, Solco Basle Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>Eye protection during anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>MCALON</td>
			<td>MCL-6STV</td>
			<td>Image of the intimal region of aorta</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Table model high speed centrifuge</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>1-14K</td>
			<td>Preparation of plasma</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors, slight Curve (14cm)</td>
			<td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors, straight Flat (14cm)</td>
			<td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue forceps, serrated, slight Curve (14cm)</td>
			<td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue forceps, serrated, straight Flat (14cm)</td>
			<td>Kanghua Medical Equipment Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>Surgical tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tribromoethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T48402-5G</td>
			<td>Preparation of avertin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triglycerides (TG) assay kit</td>
			<td>Institute of Nanjing Jiancheng Biology Engineering</td>
			<td>A110-1</td>
			<td>Plasma TG determination</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Total cholesterols (TC) assay kit</td>
			<td>Institute of Nanjing Jiancheng Biology Engineering</td>
			<td>A111-1</td>
			<td>Plasma TC determination</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in vivo estrogen deficiency mouse model for screening exogenous estrogen treatments of cardiovascular dysfunction after menopause

閉経後の女性は閉経前の女性よりも心血管疾患を発症するリスクが高い。卵巣摘出時の雌マウスは卵巣摘出術(OVX)で、無傷の卵巣機能を有する雌マウスと比較して大動脈におけるアテローム硬化性病変を増加させた。しかし、アテローム性動脈硬化症を起こしやすいエストロゲン欠損マウスを含む実験室モデルは欠けている。この赤字は、閉経期の女性の臨床的なエストロゲン欠乏は、既存または進行中の脂質破壊およびアテローム性動脈硬化症の発生率を悪化させる可能性があるため、重要である。本研究では、アポリポタンパク質E(apoE)-/-マウスにおける二重後体横切開による両側眼欠切による生体内エストロゲン欠損マウスモデルを確立する。次に、ヘーゼルナッツスプレッドを介して経口投与した17β-エストラジオールとシュードプロトジオスチン(PPD)(フィトエストロゲン)の効果を比較する。我々は、PPDがOVX apoE-/-マウスの最終的な体重および血漿TGを減少させる上で何らかの効果を発揮するが、その17β-エストラジオールに匹敵する抗アテローム硬化および心臓保護能力を有することを見出した。PPDは、抗腫瘍特性を発揮することが報告されているフィトエストロゲンである。したがって、提案された方法は、閉経後の女性における伝統的なホルモン補充療法に代わるペラル投与を介して植物エストロゲンをスクリーニングするために適用可能であり、これは潜在的に有害な腫瘍遺伝学を有することが報告されている。容量。ヘーゼルナッツスプレッドを介した経口投与は非侵襲的であり、多くの患者に広く適用可能である。この記事には、ヘーゼルナッツスプレッドを介したapoE-/-マウスおよび前腔17βエストラジオールまたはフィトエストロゲンホルモン置換における二重後側切開による両側眼耳切開のステップバイステップのデモンストレーションが含まれています。心エコー検査を用いて血漿脂質と心血管機能解析を行う。

本研究で用いられる典型的な実験的処置スキームを図1に示す。引き取り(28日目)において、雌のapoE-/-C57BL/6Jマウスをアバーチン(トリブロモエタノール;200mg/kg;精米内)で麻酔した。マウスは、1cmの後部切開を介して両側OVXまたはシャムを操作した。両側OVXの1週間後、マウスに高コレステロール食(1.25%コレステロール、0%のコレート)を12週間...

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An In Vivo Estrogen Deficiency Mouse Model for Screening Exogenous Estrogen Treatments of Cardiovascular Dysfunction After Menopause

臨床的には、閉経期の女性のエストロゲン欠乏は脂質破壊およびアテローム性動脈硬化症の発生率を悪化させる可能性がある。apoE-/-マウスの二重後体横切開を介した両側眼欠法による生体内エストロゲン欠乏モデルを確立した。マウスモデルは閉経後の心血管機能障害の外因性エストロゲン治療のスクリーニングに適用可能である。

閉経後の心血管機能障害の外因性エストロゲン治療をスクリーニングするためのインビボエストロゲン欠乏マウスモデル

Postmenopausal women are at greater risk of developing cardiovascular diseases than premenopausal women. Female mice ovariectomized (OVX) at weaning ...

動脈硬化ポンデータを提示するエストロゲン欠損マウスを含む実験室モデルが欠けている。この手順は、閉経後の心血管機能障害の外因性エストロゲン治療をスクリーニングするのに特に有用である。この技術の主な利点は、二重のドーソララル切開を伴わない卵巣切除術は、重度の腹腔接着および炎症を回避する、より簡単で時間のかかる方法である。この手順のデモンストレーションは、私の研究室の大学院生であるYue-Zhang Yinです。APOEノックアウトマウスで両側卵巣切除術を行うために、まずペダル反射に対する応答の欠如を確認し、動物を加熱パッドの上に起こりやすい位置に置く。動物の目に軟膏を塗布し、外科用ドレープで動物を覆います。1センチの切開を正中線に、そして1センチメートルを肋骨に横に切り込み、鉗子を使って皮下組織をぶっきらぼうに解剖する。ゴーグルを解剖して、腹腔内の白い脂肪組織を同定する。マイクロハサミとマイクロ鉗子を使用して、腹腔に達するまで筋膜を通して0.5〜1センチメートルの切開を行い、マイクロ鉗子を使用して白い脂肪組織を穏やかに引き込みます。脂肪組織に包まれたピンクの桑形の卵巣は、腹腔内で観察されるべきである。モノフィラメント縫合糸を使用して、0.5〜1センチメートルの近位容器と子宮ホーンをリゲートし、マイクロハサミを使用して卵巣を収穫します。残りの組織を腹腔に戻し、個々のモノフィラメント縫合糸を使用して、筋肉と皮膚層を別々に閉じる。その後、ちょうど実証したように、動物の反対側の卵巣を収穫し、マウスが完全な再発するまで、監視と加熱パッド上で回復することができます。週に1回、手術前の週から12週間後に、各シャムと実験動物の体重をバランスで測定する。血漿総コレステロールおよびトリグリセリド測定の場合、第12週に、70%エタノールで腹側胸部領域を調製し、右心室に25ゲージの針を挿入する。ゆっくりと吸引し、1ミリリットルの血液が注射器に流れ込むまで、0.5モルEDTAの10マイクロリットルを含む1.5ミリリットルの採取管にサンプルを分配する。チューブを数回完全に反転してEDTAを血液中に混ぜ、すぐにチューブを氷の上に置きます。採取から30分以内に、G400倍と摂氏4度で20分間サンプルを遠心分離します。マイナス80°Cで保存するために慎重にプラズマ上清を収集します。大大通りを分離するには、第12週に、PBSで満たされた50ミリリットルの注射器に25ゲージの針を取り付け、実験動物の左心室に針を挿入する。右心房を切って灌流からの高圧を避け、毎分の流速で05〜08ミリリットルのPBSで心臓組織を浸透させる。ラボ組織で灌流液を吸収し、はさみと鉗子を使用して肋骨と肺を取り除きます。腹腔を開いて内臓を取り除き、大動脈をよりよく見る。心臓をマイクロ鉗子で捉え、背部大通り、背骨から腸骨の分岐まで分離できるようにします。その後、4%パラホルムアルデヒドで48時間心臓と大オルタを固定し、組織サンプルを室温または2〜8°Cで数時間保存します。高コレステロール食の12週間後、卵巣核化マウスは、血漿総コレステロールおよびトリグリセリド濃度の顕著な増加を示す。卵巣切開マウスは、17-βエストラジオールで経口投与された、またはヘーゼルナッツスプレッドを介してPPDに投与され、シャム作動マウスよりも有意に低い血漿総コレステロール濃度を示す。血漿トリグリセリドレベルは、卵巣化マウスにおいて減少し、17-βエストラジオールで経口投与されるが、PPDでは投与しない。卵巣摘出マウスでは体重増加の傾向が認められるが、シャム作動マウスと比較して、4群の動物間では体重に有意な変化は認められない。上昇大オルタの最大プラークは、卵巣切除マウスにおいて増加し、他のすべての群と比較して、心機能の全体的な低下と併せて、これらの動物において観察される。また、大動脈病変領域の平均割合は、大動脈領域全体に対して、卵巣切除マウスにおいて有意に増加する。予想通り、これらの病変の存在は17-βoestradiol、またはPPD治療によって減少する。卵巣切り出し手術の主なリスクは尿管結紮であり、その結果、高い死亡率が生じる。また、大動脈損傷を避けるために、腎動脈枝の近くに深く切断することを忘れないでください。

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Automated Acoustic Dispensing for the Serial Dilution of Peptide Agonists in Potency Determination Assays

効力決意アッセイにおけるペプチドアゴニストの連続希釈のために調剤自動アコースティック

As with small molecule drug discovery, screening for peptide agonists requires the serial dilution of peptides to produce concentration-response curves. ...

Preparation and In Vivo Use of an Activity-based Probe for N-acylethanolamine Acid Amidase

Preparation and In Vivo Use of an Activity-based Probe for N-acylethanolamine Acid Amidase

調製と<em&gt;インビボ</em&gt;アクティビティベースのプローブの使用のために<em&gt; N</em&gt; -acylethanolamine酸アミダーゼ

Activity-based protein profiling (ABPP) is a method for the identification of an enzyme of interest in a complex proteome through the use of a chemical ...

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

脳膜分画：<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Subsynaptic Protein Localizationを評価するアプローチ

Assessing the synaptic protein composition and function constitutes an important challenge in neuroscience. However, it is not easy to evaluate ...

Dynamic Proteomic and miRNA Analysis of Polysomes from Isolated Mouse Heart After Langendorff Perfusion

動的プロテオミクスおよび miRNA 蛍光灌流後分離されたマウス心臓ポリソームの分析

Studies in dynamic changes in protein translation require specialized methods. Here we examined changes in newly-synthesized proteins in response to ...

Measuring and Interpreting Oxygen Consumption Rates in Whole Fly Head Segments

測定と酸素消費量全体の解釈飛ぶ頭セグメント

Regulated metabolic activity is essential for the normal functioning of living cells. Indeed, altered metabolic activity is causally linked with the ...

Kinase Inhibitor Screening In Self-assembled Human Protein Microarrays

自己組み立てヒトタンパク質マイクロアレイにおけるキナーゼ阻害剤スクリーニング

The screening of kinase inhibitors is crucial for better understanding properties of a drug and for the identification of potentially new targets with ...

Screening for Thermotoga maritima Membrane-Bound Pyrophosphatase Inhibitors

Screening for Thermotoga maritima Membrane-Bound Pyrophosphatase Inhibitors

サーモトガ・マリティマ・メンブレン結合ピロホスファターゼ阻害剤のスクリーニング

Membrane-bound pyrophosphatases (mPPases) are dimeric enzymes that occur in bacteria, archaea, plants, and protist parasites. These proteins cleave ...

Visualization of Estrogen Receptors in Colons of Mice with TNBS-Induced Crohn's Disease using Immunofluorescence

免疫蛍光を用いたTNBS誘発クローン病を用いたマウスの結腸におけるエストロゲン受容体の可視化

Crohn&#39;s disease is the most diagnosed type of inflammatory bowel disease. Chronic inflammation developing in the intestine leads to peristalsis ...

Screening for Phytoestrogens using a Cell-based Estrogen Receptor  &#946; Reporter Assay

Screening for Phytoestrogens using a Cell-based Estrogen Receptor  ÃƒÅ½Ã‚Â² Reporter Assay

レポーターアッセイによる細胞ベースのエストロゲン受容体β使用したフィトエストロゲンのスクリーニング

Plants are a source of food for many animals, and&#160;they can produce thousands of chemicals. Some of these compounds affect physiological processes in ...

Transplantation of Neonatal Mouse Cardiac Macrophages into Adult Mice

成体マウスへの新生児マウス心臓マクロファージ移植

In an injured neonatal myocardium, macrophages facilitate cardiomyocyte proliferation and angiogenesis and promote heart regeneration. The present study ...