Name: isolation of lipoprotein particles from chicken egg yolk for the study of bacterial pathogen fatty acid incorporation into membrane phospholipids
Uploaded: 2019-05-15T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Lipoprotein Particles from Chicken Egg Yolk for the Study of Bacterial Pathogen Fatty Acid Incorporation into Membrane Phospholipids at JoVE.com

نشكر أعضاء مختبر هامر على تقييمهم النقدي للمخطوطة ودعمهم لهذا العمل. الدكتور أليكس هورسويل من كلية الطب بجامعة كولورادو يرجى تقديم AH1263. قدم الدكتور كريس ووترز مختبر في جامعة ولاية ميشيغان الكواشف. وقد تم دعم هذا العمل من قبل جمعية القلب الأمريكية منحة 16SDG30170026 والأموال الناشئة التي تقدمها جامعة ولاية ميشيغان.

ملاحظة: البروتوكول التالي لإثراء جزيئات LDL من صفار بيض الدجاج مشتق من موسى وآخرون 200233.
1. إعداد صفار البيض الدجاج لإثراء جزيئات LDL
<ol><li>قم بتعقيم بيضتي دجاج كبيرتين عن طريق غسل الأصداف بمحلول الإيثانول بنسبة 70% والسماح بتجفيف الهواء.</li>
	<li>قم بتعقيم فاصل البيض با?...

S. aureus يدمج الأحماض الدهنية الخارجية في الدهون الفوسفاتية غشاء27،32،43. تركيب فوسفوليبيد باستخدام الأحماض الدهنية الخارجية يتجاوز تثبيط FASII ولكن أيضا يغير الخصائص البيوفيزيائية للغشاء27،32،<sup class="x...

Methicillin مقاومة S. aureus (MRSA) هو السبب الرئيسي للعدوى المرتبطة بالرعاية الصحية ومقاومة المضادات الحيوية المرتبطة بها هو تحد سريري كبير1،2،3. ولذلك، فإن وضع استراتيجيات علاجية جديدة هو أولوية عالية. استراتيجية العلاج واعدة لمسببات الأمراض إيجابية الجرام هو تثبيط تخليق الأحماض الدهنية، وهو شرط لإنتاج الدهون الفوسفاتية الغشاء الذي، في S. أوريوس،ويشمل فوسفاتيديلغليسيرول (PG)، ليسل-PG، وcardiolipin4. في البكتيريا، يحدث إنتاج الأحماض الدهنية عن طريق التخليق الأحماض الدهنية الثاني المسار (FASII)5، والذي يختلف اختلافا كبيرا عن نظيره eukaryotic، مما يجعل FASII هدفا جذابا لتطوير المضادات الحيوية5،6 . مثبطات FASII تستهدف في المقام الأول FabI، وهوإنزيم مطلوب لاستطالة سلسلة الكربون الأحماض الدهنية 7. يستخدم على نطاق واسع مثبطات فابي التريكلوسان في السلع الاستهلاكية والطبية8،9. ويجري تطوير مثبطات FabI إضافية من قبل العديد من شركات الأدوية لعلاج عدوى S. aureus 10،11،12،13،14 ،15،16،17،18،19،20،21،22،23 ،24،25،26. ومع ذلك، العديد من مسببات الأمراض إيجابية غرام، بما في ذلك S. aureus،قادرة على مسح الأحماض الدهنية الخارجية لتخليق الدهون الفوسفاتية، وتجاوز تثبيط FASII27،28،29. وهكذا، يتم مناقشة الإمكانات السريرية لمثبطات FASII بسبب وجود ثغرات كبيرة في معرفتنا بمصادر الأحماض الدهنية المضيفة والآليات التي تقوم بها مسببات الأمراض باستخراج الأحماض الدهنية من المضيف27،28. لمعالجة هذه الثغرات، قمنا بتطوير طريقة تحليل الدهون غير متحيزة لرصد دمج الأحماض الدهنية الخارجية من جزيئات البروتين الدهني في فوسفوليبيدات الغشاء من S. aureus.
أثناء الإنتان ، تمثل جزيئات البروتين الدهني المضيف مصدرا محتملا للأحماض الدهنية المشتقة من المضيف داخل الأوعية الدموية ، حيث ترتبط غالبية الأحماض الدهنية المضيفة بالجسيمات30. تتكون البروتينات الدهنية من قشرة مائية تتكون من الدهون الفوسفاتية والبروتينات التي تحيط بجوهر الكاره للماء من الدهون الثلاثية واسترات الكوليسترول31. يتم إنتاج أربع فئات رئيسية من البروتينات الدهنية - الهيلوميكرون، والبروتين الدهني منخفض الكثافة، والبروتين الدهني عالي الكثافة، والبروتين الدهني منخفض الكثافة (LDL) - من قبل المضيف وتعمل كمركبات نقل للدهون، وتقديم الأحماض الدهنية والكوليسترول من وإلى الخلايا المضيفة عبر الأوعية الدموية. LDLs وفيرة في الأحماض الدهنية استيريفيد بما في ذلك الدهون الثلاثية واسترات الكوليسترول31. لقد أثبتنا في السابق أن LDLs البشرية عالية النقاء هي مصدر قابل للحياة من الأحماض الدهنية الخارجية لتخليق PG، وبالتالي توفير آلية لمثبطات FASII الالتفافية32. يمكن أن يكون تنقية LDLs البشرية صعبة من الناحية الفنية وتستغرق وقتاً طويلاً في حين أن المصادر التجارية لـ LDLs البشرية النقية مكلفة للغاية للاستخدام على أساس روتيني أو لأداء شاشات بكتيرية واسعة النطاق. لمعالجة هذه القيود، قمنا بتعديل إجراء لإثراء LDLs من صفار البيض الدجاج، وهو مصدر غني من جزيئات البروتين الدهني33. لقد استخدمنا بنجاح غير مستهدفة، عالية الدقة / قياس الطيف الكتلي الدقيق والقياس الطيفي الكتلي جنبا إلى جنب لرصد دمج الأحماض الدهنية المستمدة من LDL الإنسان في غشاء S. aureus32. على عكس الأساليب التي تم الإبلاغ عنها سابقا، يمكن لهذا النهج تحديد أيزومرات الأحماض الدهنية الفردية لكل من أنواع فوسفوليبيد المكورات العنقودية الرئيسية الثلاثة. حمض الأوليك (18:1) هو حمض دهني غير مشبع موجود داخل جميع جزيئات البروتين الدهني المضيف التي يتم دمجها بسهولة في S. aureus phospholipids29،30،32. S. aureus ليست قادرة على توليف حمض الأوليك29; ولذلك، فإن كمية حمض الأوليك المدرجة فوسفوليبيد يثبت وجود الأحماض الدهنية المشتقة من البروتين الدهني المضيف داخل غشاء المكورات العنقودية29. ويمكن تحديد هذه الأنواع الفوسفاتية من خلال أحدث طريقة قياس الطيف الكتلي الموصوفة هنا، وتقدم دقة غير مسبوقة لتكوين غشاء S. aureus المستزرعة في وجود مصدر الأحماض الدهنية فمن المرجح المواجهات أثناء العدوى.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ammonium sulfate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP212R-1</td>
			<td>&#8805;99.5% pure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture incubator</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>MaxQ 6000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrafuge</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>75-217-420</td>
			<td>Sorvall Legen XTR, rotor F14-6x250 LE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Costar assay plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3788</td>
			<td>96 well</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper</td>
			<td>Schleicher &#38; Schuell</td>
			<td>597</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large chicken egg</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Common store bought egg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate spectrophotometer</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>Epoch 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S. aureus strain AH1263</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Provided by Alex Horswill of the University of Colorado</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis tubing</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>68700</td>
			<td>7,000 MWCO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>Becton, Dickison and Company</td>
			<td>211705</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5 mm zirconium oxide beads</td>
			<td>Next Advance</td>
			<td>ZROB05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bullet Blender</td>
			<td>Next Advance</td>
			<td>BBX24B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol (LC-MS grade)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A4561</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform (reagent grade)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>MCX10559</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol (LC-MS grade)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A4611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimyristoyl phosphatidylcholine</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>850345C-25mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9830</td>
			<td>&#8805;99.5% pure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium formate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>70221-25G-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xcalibur software</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>OPTON-30801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LTQ-Orbitrap Velos mass spectrometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td>high resolution/accurate mass MS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 1260 capillary HPLC</td>
			<td>Agilent</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SpeedVac Vacuum Concentrators</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of lipoprotein particles from chicken egg yolk for the study of bacterial pathogen fatty acid incorporation into membrane phospholipids

المكورات العنقودية أوريوس وغيرها من مسببات الأمراض إيجابية الجرام دمج الأحماض الدهنية من البيئة في فوسفوليبيدات الغشاء. خلال العدوى ، توجد غالبية الأحماض الدهنية الخارجية داخل جزيئات البروتين الدهني المضيف. ولا يزال عدم اليقين قائما فيما يتعلق بخزانات الأحماض الدهنية المضيفة والآليات التي تستخرج بها البكتيريا الأحماض الدهنية من جزيئات البروتين الدهني. في هذا العمل، ونحن نصف بروتوكولات لإثراء البروتين الدهني منخفض الكثافة (LDL) جزيئات من صفار البيض الدجاج وتحديد ما إذا كانت LDLs بمثابة خزانات الأحماض الدهنية لS. aureus. هذا الأسلوب يستغل تحليل الدهون غير متحيزة وLDLs الدجاج، وهو نموذج فعال واقتصادي لاستكشاف التفاعلات بين LDLs والبكتيريا. يتم إجراء تحليل S. aureus التكامل من الأحماض الدهنية الخارجية من LDLs باستخدام عالية الدقة / قياس الطيف الكتلي الدقيق والقياس الطيفي الكتلي جنبا إلى جنب، مما يتيح توصيف تكوين الأحماض الدهنية للبكتيريا غشاء وتحديد غير متحيزة من تركيبات جديدة من الأحماض الدهنية التي تنشأ في الدهون الغشاء البكتيري عند التعرض لLDLs. تقدم هذه التقنيات المتقدمة لقياس الطيف الكتلي منظورًا لا مثيل له لدمج الأحماض الدهنية الدهنية من خلال الكشف عن الأحماض الدهنية الخارجية المحددة المدمجة في الدهون الفوسفاتية. الطرق المبينة هنا قابلة للتكيف مع دراسة مسببات الأمراض البكتيرية الأخرى والمصادر البديلة للأحماض الدهنية المعقدة.

ويتضح بروتوكول إثراء LDL من صفار البيض الدجاج في الشكل 1. تبدأ هذه العملية بتخفيف صفار البيض الكامل مع المالحة وفصل المواد الصلبة صفار البيض المشار إليها كحبيبات منالكسر القابل للذوبان أو البلازما التي تحتوي على LDLs (الشكل 1)33. ي?...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Lipoprotein Particles from Chicken Egg Yolk for the Study of Bacterial Pathogen Fatty Acid Incorporation into Membrane Phospholipids at JoVE.com

Isolation of Lipoprotein Particles from Chicken Egg Yolk for the Study of Bacterial Pathogen Fatty Acid Incorporation into Membrane Phospholipids

عزل جزيئات البروتين الدهني من صفار بيض الدجاج لدراسة دمج الأحماض الدهنية المسببة للأمراض البكتيرية في الدهون الفوسفاتية الغشاء

توفر هذه الطريقة إطارا لدراسة دمج الأحماض الدهنية الخارجية من المصادر المضيفة المعقدة في الأغشية البكتيرية ، وخاصة المكوراتالعنقودية العضوية . ولتحقيق ذلك، يتم وصف بروتوكولات لإثراء جزيئات البروتين الدهني من صفار بيض الدجاج وتوصيف الأحماض الدهنية اللاحقة للفوسفوليبيدات البكتيرية باستخدام قياس الطيف الكتلي.

Staphylococcus aureus and other Gram-positive pathogens incorporate fatty acids from the environment into membrane phospholipids. During infection, the ...

يوفر هذا البروتوكول إطارًا لدراسة دمج الأحماض الدهنية الخارجية من المصادر المضيفة المعقدة في الأغشية البكتيرية ، ولا سيما المكورات العنقودية. يستخدم البروتوكول تحليل الدهون غير المتحيزة وجزيئات البروتين الدهني المعزولة من صفار بيض الدجاج كمصدر اقتصادي للأحماض الدهنية المعقدة لتحديد دمج الأحماض الدهنية في الدهون البكتيرية. تصف تقنيات قياس الطيف الشامل هنا تقديم منظور لا مثيل له من الأحماض الدهنية من الدهون المكورات العنقودية aureus ، ولكن يمكن تكييفها لدراسة الأغشية البكتيرية الأخرى.عند تنفيذ هذا البروتوكول، يجب توخي الحذر أن كل خطوة تجزئة لتحديد والاحتفاظ بالكسر الذي يحتوي على LDL. إزالة كبريتات الأمونيا من جزء البلازما أمر بالغ الأهمية لتطبيقات المصب LDLs. توفير مساحة واسعة في أنابيب وتغيير المياه حسب الحاجة للسماح غسيل الكلى الفعال.للبدء، وغسل اثنين صفار البيض مرتين مع 30 ملليلتر من الفوسفات المعقم المخزنة المالحة لإزالة الألبومين المتبقية. ثقب غشاء vitelline مع تلميح الماصات العقيمة واستنزاف محتويات الغشاء في أنبوب مخروطي معقم. إضافة ما يقرب من 24 إلى 30 ملليلتر أو 17 محلول كلوريد الصوديوم الضرس في رقم هيدروفلوري سبعة إلى صفار البيض ويخلط بقوة.ثم ضع الأنبوب على شاكر هزاز لخلط في أربع درجات مئوية لمدة 60 دقيقة. الطرد المركزي البيض صفار تخفيف في 10 درجة مئوية في 10، 000 مرات ز لمدة 45 دقيقة. نقل جزء البلازما الفائقة إلى أنبوب مخروطي معقم 50 ملليلتر، تاركاً وراءه الكسر الحبيبي.وطاردة مركزية مرة أخرى أولاً، اخلطي كسر البلازما مع 40 حجم كتلة في المئة كبريتات الأمونيوم على شاكر هزاز أو جهاز مماثل عند أربع درجات مئوية لمدة 60 دقيقة. بعد ضبط درجة PH، الطرد المركزي كسر البلازما في أربع درجات مئوية و 10، 000 الوقت ز لمدة 45 دقيقة.إزالة الجزء الأصفر شبه سوليد العلوي إلى سبعة كيلودالون المسام حجم أنابيب غسيل الكلى. توفير ما لا يقل عن 25٪ من الغرفة الإضافية في الأنابيب للسماح لها أن تنتفخ. ضع أنابيب غسيل الكلى في ثلاثة لترات من الماء فائق البور لـ dialyze بين عشية وضحاها عند ثلاث درجات مئوية لإزالة كبريتات الأمونيوم.بعد غسيل الكلى، الطرد المركزي الحل في أربع درجات مئوية كما هو موضح سابقا. إزالة بعناية العلوي، نصف الكسر الأصفر إلى أنبوب معقمة وتخزينها في أربع درجات مئوية. بعد حضانة بين عشية وضحاها من الثقافة، ونقل 500 ميكرولترات إلى اثنين من قارورة 250 ملليلتر معقم حيرة تحتوي على 49.5 ملليلتر من 1٪ مرق tryptone.احتضان لمدة أربع ساعات تقريبا في 37 درجة مئوية مع اهتزاز للوصول إلى مرحلة منتصف طويلة. نقل 100 ملليلتر من الثقافة في 25 ملليلتر زيادات إلى أربعة معقمة 50 ملليلتر أنابيب الطرد المركزي وأجهزة الطرد المركزي الأربعة أنابيب في 10، 000 مرات ز إلى بيليه الخلايا. إزالة افرنح وإعادة تعليق كل بيليه الخلية في 750 ميكرولترات من 1٪ مرق tryptone.الجمع بين أربعة 750 microliter تعليق الخلية في أنبوب واحد 15 ملليلتر. و aliquot 350 ميكرولترات من تعليق الخلية إلى ستة أنابيب أجهزة الطرد المركزي 1.5 ملليلتر معقمة. استخدام ماصة لإضافة 30 ميكرولترات من LDLs في أنبوب جهاز الطرد المركزي 1.5 ملليلتر لتحقيق التركيز النهائي المطلوب من 5٪ واحتضان في 37 درجة مئوية مع اهتزاز لمدة أربع ساعات.أجهزة الطرد المركزي الثقافات في أربع درجات مئوية في 16،000 مرات ز لمدة دقيقتين. وإعادة تعليق الكريات الخلية في 330 ميكرولترات من المالحة المعقمة الفوسفات المخزنة على الغسيل. كرر هذا غسل مرة أخرى.سجل وزن الكريات الستة من الخلايا الرطبة عن طريق طرح وزن الأنبوب الفارغ. المفاجئة تجميد الكريات الخلية على الجليد الجاف. أولا إضافة مغرفة واحدة من 5 ملليمتر حبات أكسيد الزركونيوم على رأس كل بيليه الخلية.إضافة 740 ميكرولترات من 75٪ HPLC الصف الميثانول مبردة إلى ناقص 80 درجة مئوية مباشرة في كل أنبوب. ثم إضافة اثنين microliters من 50 dimyristoyl ميكرومولر فوسفاتيديل كولين كمعيار داخلي. ضع العينة التي تحتوي على أنابيب أجهزة طرد مركزي 1.5 ملليلتر في منفذ متاح على مزج نسيج الخلاط الرصاص.التجانس العينات على سرعة منخفضة. وضع اثنين إلى ثلاثة لمدة ثلاث دقائق. فحص العينات بصرياً بحثاً عن التجانس.إذا كانت كتل الخلايا مرئية، فتابع تجانس في الخلاط النقطي بزيادات دقيقة. أضف التالي 270 ميكرولترات من الكلوروفورم لكل عينة في غطاء أبخرة كيميائية. دوامة العينات بقوة لمدة 30 دقيقة.أجهزة الطرد المركزي العينات في جهاز طرد مركزي على مقاعد البدلاء لمدة تصل إلى 30 دقيقة على الأقل 2،000 مرات ز. في غطاء محرك السيارة الدخان الكيميائية، وجمع نابيرات أحادية الطور ونقلها إلى أنبوب اختبار جديد مع تجنب بعناية بيليه البروتين في الجزء السفلي من أنبوب الاستخراج. نقل مستخلصات الدهون المخففة التي تم إعدادها مسبقًا إلى قارورة اختزال تلقائي مناسبة.للتحليل القائم على حقن التدفق، ضع قارورة الختم التلقائي في ampler التي يتم التحكم فيها بدرجة حرارة لنظام HPLC القادر على تطبيقات تدفق الشعيرات الدموية. إعداد نظام HPLC وفقا للمخطوطة. يتم إدخال الـ eluent من خط نقل HPLC إلى مطياف الكتلة من خلال مصدر التأين الكهربائي المجهز بإبرة معدنية منخفضة التدفق 34 مقياس.في برنامج التحكم في أداة Thermo Tune Plus ، قم بتعيين جهد التأين إلى 4000 فولت وغاز غغام إلى خمسة. وبالمثل، قم بتعيين درجة حرارة الشعيرية إلى 150 درجة مئوية وعدسة S إلى 50٪ انقر فوق زر الفحص، وفي قائمة المحلل، حدد FTMS. تعيين حقل النطاق الشامل إلى عادي وفي حقل الدقة، حدد 100, 000.تأكد من تعيين نوع المسح الضوئي إلى كامل. تحت قائمة نطاقات المسح الضوئي، أدخل 200 في حقل الكتلة الأولى وأدخل 2000 في حقل الكتلة الأخيرة. بعد زيادة تحديد دقة الكتلة الملاحظة، متوسط الإشارة عبر ذروة واسعة في الكروماتوغرافية الأيونية الإجمالية.انقر بزر الماوس الأيمن فوق رمز thumbtack في نافذة عرض الطيف الشامل وحدد قائمة طيف العرض. من نفس القائمة، حدد خيارات العرض ثم كل مربع تبديل قمم في قائمة العرض. انقر فوق الزر "موافق" لإغلاق نافذة العرض.انقر بزر الماوس الأيمن فوق رمز thumbtack في إطار عرض الطيف الشامل مرة أخرى وحدد كتلة الحافظة التصدير بالضبط. قم بلصق خلية البيانات المصدرة A1 من ورقة العمل الأولى في جدول بيانات Excel الجديد ثم تابعها وفقًا للمخطوطة. لتنفيذ دقيقة تحديد الدهون على أساس الكتلة، افتح برنامج LIMSA.من القائمة الرئيسية، حدد قائمة الذروة ضمن قائمة نوع الطيف. حدد الوضع الإيجابي أو الوضع السلبي ليتوافق مع القطبية التي تم فيها الحصول على بيانات قياس الطيف الكتلي. في ذروة العرض الكامل في نصف أقصى وأكثر من نافذة ض، أدخل نافذة البحث الجماعي المطلوب لإيجاد الذروة.في هذا البروتوكول، تم إثراء محتوى LDL من جزء البلازما عن طريق هطول الأمطار من 30 إلى 40 كيلودالون بيتا ليفيتينس. وجود عصابات البروتين في 140, 80, 65, 60, و 15 كيلودالون يرتبط مع apoproteins من LDLs. العلاج مع التريكلوسان يمنع نمو المكورات الآريوس في المتوسطة الدهنية خالية من الأحماض.في حين أن المكمل الثقافات مع البلازما صفار البيض ومصادر الأحماض الدهنية الخارجية يتغلب على تثبيط النمو الناجم عن التريكلوسان. وبالمثل، مكملات الثقافات المعالجة بالتريكلوسان مع صفار البيض المخصب LDL يعيد النمو. علاوة على ذلك، إضافة من البيض LDLs صفار يدعم نمو الأحماض الدهنية S.aureus تتميز سابقا، أوكستروف.تم قياس محتوى الأحماض الدهنية قبل في 1٪ مرق tryptone أو صفار بيض الدجاج LDL عن طريق توظيف حقن تدفق عالية الدقة قياس الطيف الشامل دقيقة. تم العثور على كميات ضئيلة من الأحماض الدهنية الحرة. المتعامدة جزئية أقل المربعات تحليل discriminant من غشاء غشاء غشاء المكورات العنقودية وفيرة phospholipids أظهرت فصل الطبقة واضحة, مع تكوين الأحماض الدهنية من غير المعالجة والدجاج البيض صفار LDL الظروف المعالجة.إن إثراء LDLs من صفار بيض الدجاج يوفر مصدرًا غير مكلف للأحماض الدهنية المعقدة للتحقيق في التفاعلات بين مسببات الأمراض البكتيرية وبروتينات الدهون المضيفة. الكلوروفورم والميثانول المستخدمة في إعداد مستخلصات الدهون خطرة. يرجى التأكد من استخدام هذه الكواشف في غطاء الدخان الكيميائي وتحتوي على جميع تيارات النفايات.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Bacterial Inner-membrane Display for Screening a Library of Antibody Fragments

العرض الداخلية غشاء البكتيريا لفحص مكتبة من الأجسام المضادة شظايا

Antibodies engineered for intracellular function must not only have affinity for their target antigen, but must also be soluble and correctly folded in ...

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

تحديد الأحماض الدهنية في<em&gt; العصوية الشمعية</em

The Bacillus species contain branched chain and unsaturated fatty acids (FAs) with diverse positions of the methyl branch (iso or anteiso) and of the ...

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

باستخدام سقالة الليبوزومات لإعادة تفاعلات البروتين البروتين، الدهون القريب<em&gt; في المختبر</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

Fatty Acid 13C Isotopologue Profiling Provides Insight into Trophic Carbon Transfer and Lipid Metabolism of Invertebrate Consumers

Fatty Acid 13C Isotopologue Profiling Provides Insight into Trophic Carbon Transfer and Lipid Metabolism of Invertebrate Consumers

13ج الأحماض الدهنية إيسوتوبولوجوي التنميط يوفر نظرة ثاقبة نقل الكربون التغذوية والايض الدهني للمستهلكين اللافقاريات

Fatty acids (FAs) are useful biomarkers in food web ecology because they are typically assimilated as a complete molecule and transferred into consumer ...

Rapid Isolation of the Mitoribosome from HEK Cells

عزل ميتوريبوسومي من الخلايا HEK السريع

The human mitochondria possess a dedicated set of ribosomes (mitoribosomes) that translate 13 essential protein components of the oxidative ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

تحليل الطيفي تقلب Fluorescence من تفاعلات البروتين البروتين في الخلية جهات الاتصال

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

Single Liposome Measurements for the Study of Proton-Pumping Membrane Enzymes Using Electrochemistry and Fluorescent Microscopy

قياسات الحويصلية واحد للدراسة لضخ البروتون غشاء الإنزيمات تستخدم كهربية ومجهر فلوري

Proton-pumping enzymes of electron transfer chains couple redox reactions to proton translocation across the membrane, creating a proton-motive force used ...

Enrichment of Native Lipoprotein Particles with microRNA and Subsequent Determination of Their Absolute/Relative microRNA Content and Their Cellular Transfer Rate

إثراء جزيئات البروتين الدهني الأصلي مع ميكرورنا والتحديد اللاحق لمحتوياتها المطلقة/النسبية ميكرورنا ومعدل نقلها الخلوي

Lipoprotein particles are predominately transporters of lipids and cholesterol in the bloodstream. Furthermore, they contain small amounts of strands of ...

PeptiQuick, a One-Step Incorporation of Membrane Proteins into Biotinylated Peptidiscs for Streamlined Protein Binding Assays

PeptiQuick ، خطوه واحده لدمج البروتينات الغشائية في أقراص البيتيلات الحيوية لاختبارات ربط البروتين الانسيابية

Membrane proteins, including transporters, channels, and receptors, constitute nearly one-fourth of the cellular proteome and over half of current drug ...