Name: isolation of lipoprotein particles from chicken egg yolk for the study of bacterial pathogen fatty acid incorporation into membrane phospholipids
Uploaded: 2019-05-15T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Lipoprotein Particles from Chicken Egg Yolk for the Study of Bacterial Pathogen Fatty Acid Incorporation into Membrane Phospholipids at JoVE.com

We danken de leden van het Hammer Laboratory voor hun kritische evaluatie van het manuscript en de ondersteuning van dit werk. Dr. Alex Horswill van de Universiteit van Colorado school of Medicine vriendelijk voorzien AH1263. Dr. Chris Waters Laboratory aan de Michigan State University verstrekt reagentia. Dit werk werd gesteund door de Amerikaanse hart vereniging Grant 16SDG30170026 en start-up fondsen voorzien door Michigan State University.

Opmerking: het volgende protocol voor de verrijking van LDL-deeltjes uit kippen eierdooier is afgeleid van Moussa et al. 200233.
1. bereiding van kippenei dooier voor verrijking van LDL-deeltjes
<ol><li>Sanitize twee grote kippeneieren door de schelpen te wassen met 70% ethanol oplossing en laat drogen.</li>
	<li>Ontsmettings de Eier separator met behulp van 70% ethanol oplossing en laat de lucht drogen. Bevestig de Eier separator op de lip van een middelgroot bekergl...

S. aureus bevat exogene vetzuren in zijn membraan fosfolipiden27,32,43. Fosfolipide synthese met behulp van exogene vetzuren omzeilt fasii remming, maar verandert ook de biofysische eigenschappen van het membraan27,32,44. Hoewel de opname van exogene vetzuren in fosfolipiden van gram-positieve pathogenen goed gedocumenteerd is,...

Methicillaire-resistente S. aureus (MRSA) is de belangrijkste oorzaak van de gezondheidszorg-geassocieerde infectie en de bijbehorende antibioticaresistentie is een aanzienlijke klinische uitdaging1,2,3. Daarom is de ontwikkeling van nieuwe therapeutische strategieën een hoge prioriteit. Een veelbelovende behandelingsstrategie voor gram-positieve pathogenen is remming van de vetzuur synthese, een vereiste voor membraan fosfolipide productie die, in S. aureus, omvat dunlaag GLYCEROL (PG), lysyl-PG, en cardiolipine4. Bij bacteriën, vetzuur productie vindt plaats via de vetzuur synthese II Pathway (fasii)5, die aanzienlijk verschilt van de eukaryotische tegenhanger, waardoor fasii een aantrekkelijk doelwit voor de ontwikkeling van antibiotica5,6 . FASII remmers richten voornamelijk op FabI, een enzym vereist voor vetzuur koolstofketen rek7. De Fabi-remmer triclosan wordt in grote lijnen gebruikt in consumenten-en medische goederen8,9. Er worden extra Fabi-remmers ontwikkeld door verschillende farmaceutische bedrijven voor de behandeling van S. aureus -infectie10,11,12,13,14 ,15,16,17,18,19,20,21,22,23 ,24,25,26. Echter, veel gram-positieve pathogenen, waaronder S. aureus, zijn geschikt voor het opruimen van exogene vetzuren voor fosfolipide synthese, omzeilen van fasii remming27,28,29. Zo wordt het klinische potentieel van fasii remmers besproken als gevolg van aanzienlijke lacunes in onze kennis van de bronnen van gastheer vetzuren en de mechanismen waarmee pathogenen vetzuren uit de gastheer27,28extract. Om deze lacunes aan te pakken, ontwikkelden we een onbevooroordeelde lipidomische analysemethode om de opname van exogene vetzuren uit lipoproteïne deeltjes in membraan fosfolipiden van S. aureuste monitoren.
Tijdens sepsis, gastheer lipoproteïne deeltjes vertegenwoordigen een potentiële bron van gastheer-afgeleide vetzuren binnen de vasculatuur, als een meerderheid van de gastheer vetzuren worden geassocieerd met de deeltjes30. Lipoproteïnen bestaan uit een hydrofiele schil bestaande uit fosfolipiden en eiwitten die een hydrofobe kern van triglyceriden en cholesterol esters31omsluiten. Vier belangrijke klassen van lipoproteins-chylomicron, zeer lage dichtheid lipoproteïne, high-density lipoproteïne, en low-density lipoproteïne (LDL) — worden geproduceerd door de gastheer en de functie als lipide vervoer voertuigen, leveren van vetzuren en cholesterol van en naar cellen hosten via de vasculatuur. LDLs zijn overvloedig in veresterd vetzuur, met inbegrip van triglyceriden en cholesterol esters31. We hebben eerder aangetoond dat zeer gezuiverde menselijke Ldl's een levensvatbare bron van exogene vetzuren voor PG-synthese zijn, waardoor een mechanisme wordt geboden voor de bypass van de FASII-remmer32. Zuiverende menselijke Ldl's kunnen technisch uitdagend en tijdrovend zijn, terwijl commerciële bronnen van gezuiverde menselijke Ldl's buitensporig duur zijn om routinematig te gebruiken of grootschalige bacteriële schermen uit te voeren. Om deze beperkingen aan te pakken, hebben we een procedure voor de verrijking van LDLs van kip eierdooier, een rijke bron van lipoproteïne deeltjes33gewijzigd. We hebben met succes ongerichte, hoge-resolutie/nauwkeurige massaspectrometrie en tandem massaspectrometrie gebruikt om de opname van menselijke LDL-afgeleide vetzuren in het membraan van S. aureus32te monitoren. In tegenstelling tot eerder gemelde methoden, deze aanpak kan kwantificeren individuele vetzuur-isomeren voor elk van de drie belangrijkste Staphylococcus fosfolipide typen. Oliezuur (18:1) is een onverzadigd vetzuur aanwezig in alle gastheer lipoproteïne deeltjes die gemakkelijk is opgenomen in S. aureus fosfolipiden29,30,32. S. aureus is niet geschikt voor oliezuur synthese29; Daarom, de hoeveelheid fosfolipide-opgenomen oliezuur stelt de aanwezigheid van gastheer lipoprotein-afgeleide vetzuren binnen de Staphylococcus membraan29. Deze fosfolipide soorten kunnen worden geïdentificeerd door de State-of-the-art massaspectrometrie methode hier beschreven, het aanbieden van een ongekende resolutie van de membraan samenstelling van S. aureus gekweekt in de aanwezigheid van een vetzuur bron het waarschijnlijk ontmoetingen tijdens infectie.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ammonium sulfate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP212R-1</td>
			<td>&#8805;99.5% pure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture incubator</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>MaxQ 6000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrafuge</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>75-217-420</td>
			<td>Sorvall Legen XTR, rotor F14-6x250 LE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Costar assay plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3788</td>
			<td>96 well</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper</td>
			<td>Schleicher &#38; Schuell</td>
			<td>597</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large chicken egg</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Common store bought egg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate spectrophotometer</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>Epoch 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S. aureus strain AH1263</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Provided by Alex Horswill of the University of Colorado</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis tubing</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>68700</td>
			<td>7,000 MWCO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>Becton, Dickison and Company</td>
			<td>211705</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5 mm zirconium oxide beads</td>
			<td>Next Advance</td>
			<td>ZROB05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bullet Blender</td>
			<td>Next Advance</td>
			<td>BBX24B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol (LC-MS grade)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A4561</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform (reagent grade)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>MCX10559</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol (LC-MS grade)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A4611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimyristoyl phosphatidylcholine</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>850345C-25mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9830</td>
			<td>&#8805;99.5% pure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium formate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>70221-25G-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xcalibur software</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>OPTON-30801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LTQ-Orbitrap Velos mass spectrometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td>high resolution/accurate mass MS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 1260 capillary HPLC</td>
			<td>Agilent</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SpeedVac Vacuum Concentrators</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of lipoprotein particles from chicken egg yolk for the study of bacterial pathogen fatty acid incorporation into membrane phospholipids

Staphylococcus aureus en andere gram-positieve pathogenen bevatten vetzuren uit het milieu in membraan fosfolipiden. Tijdens infectie, de meerderheid van exogene vetzuren aanwezig zijn binnen gastheer lipoproteïne deeltjes. Onzekerheid blijft over de reservoirs van gastheer vetzuren en de mechanismen waarmee bacteriën vetzuren uit de lipoproteïne deeltjes halen. In dit werk beschrijven we protocollen voor de verrijking van low-density lipoproteïne (LDL) deeltjes uit kippen eierdooier en bepalen of ldls dienen als vetzuur reservoirs voor S. aureus. Deze methode exploiteert onbevooroordeelde lipidomische analyse en kip LDLs, een effectief en economisch model voor het onderzoek van interacties tussen LDLs en bacteriën. De analyse van S. aureus integratie van exogene vetzuren uit ldls wordt uitgevoerd met behulp van hoge-resolutie/nauwkeurige massaspectrometrie en tandem massaspectrometrie, waardoor de karakterisering van de vetzuur samenstelling van de bacteriële membraan en onbevooroordeelde identificatie van nieuwe combinaties van vetzuren die ontstaan in bacteriële membraan lipiden bij blootstelling aan LDLs. Deze geavanceerde massaspectrometrie technieken bieden een ongeëvenaard perspectief op de opname van vetzuren door het onthullen van de specifieke exogene vetzuren die in de fosfolipiden zijn opgenomen. De hier beschreven methoden zijn aanpasbaar aan de studie van andere bacteriële pathogenen en alternatieve bronnen van complexe vetzuren.

Het protocol voor de verrijking van LDL van kippenei dooier wordt geïllustreerd in Figuur 1. Dit proces begint met het verdunen van hele eidooier met een zoutoplossing en het scheiden van de eierdooiers die korrels worden genoemd uit de oplosbare of plasma fractie die de Ldl's bevat (Figuur 1)33. Het LDL-gehalte van de plasma fractie wordt verder verrijkt door precipitatie van de ~ 30-40 kDa β-livetinen ...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Lipoprotein Particles from Chicken Egg Yolk for the Study of Bacterial Pathogen Fatty Acid Incorporation into Membrane Phospholipids at JoVE.com

Isolation of Lipoprotein Particles from Chicken Egg Yolk for the Study of Bacterial Pathogen Fatty Acid Incorporation into Membrane Phospholipids

Isolatie van lipoproteïne deeltjes uit kippenei dooier voor de studie van bacteriële pathogeen vetzuur opname in membraan fosfolipiden

Deze methode biedt een kader voor het bestuderen van de opname van exogene vetzuren uit complexe gastheer bronnen in bacteriële membranen, met name Staphylococcus aureus. Om dit te bereiken, protocollen voor de verrijking van lipoproteïne deeltjes uit kip eierdooier en daaropvolgende vetzuur profilering van bacteriële fosfolipiden met behulp van massaspectrometrie worden beschreven.

Staphylococcus aureus and other Gram-positive pathogens incorporate fatty acids from the environment into membrane phospholipids. During infection, the ...

Dit protocol biedt een kader voor het bestuderen van de integratie van exogene vetzuren uit complexe gastheerbronnen in bacteriële membranen, met name staphylococcus aureus. Het protocol maakt gebruik van onpartijdige lipidomische analyse en lipoproteïne deeltjes geïsoleerd van kip eidooiers als een economische bron van complexe vetzuren te kwantificeren vetzuur integratie in bacteriële lipiden. De massaspectrometrie technieken hier beschrijven bieden een ongeëvenaard perspectief van het vetzuur profiel van staphylococcus aureus lipiden, maar kan worden aangepast aan andere bacteriële membranen te bestuderen.Bij het uitvoeren van dit protocol moet ervoor worden gezorgd dat elke fractionatiestap de LDL-bevattende fractie identificeert en behoudt. Verwijdering van het ammoniaksulfaat uit de plasmafractie is van cruciaal belang voor downstreamtoepassingen van de MOL's. Geef voldoende ruimte in de slang en verander het water indien nodig om effectieve dialyse mogelijk te maken.Om te beginnen was twee eidooiers twee keer met 30 milliliter steriele fosfaat gebufferde zoutoplossing om resterende albumine te verwijderen. Doorboort het vitelline membraan met een steriele pipetpunt en giet de inhoud van het membraan af in een steriele conische centrifugebuis van 50 milliliter. Voeg ongeveer 24 tot 30 milliliter of 17 molaire natriumchlorideoplossing bij pH zeven toe aan de eigeel en meng krachtig.Plaats vervolgens de buis op een schommelende shaker om 60 minuten op vier graden Celsius te mengen. Centrifugeer de eidooier verdunning bij 10 graden Celsius bij 10.000 keer g gedurende 45 minuten. Breng de supernatant plasmafractie over in een steriele conische buis van 50 milliliter, waardoor de gepelde korrelvormige fractie achterblijft.En weer centrifugeren. Meng eerst de plasmafractie met 40 massavolume procent ammoniumsulfaat op een schommelende shaker of vergelijkbaar apparaat bij vier graden Celsius gedurende 60 minuten. Na het aanpassen van de pH, centrifugeren de plasma fractie op vier graden Celsius en 10,000 tijd g voor een duur van 45 minuten.Verwijder de bovenste halfvaste gele fractie in zeven kilodalton porie grootte dialyse buizen. Zorg voor een minimum van 25% van de extra ruimte in de slang om het te laten zwellen. Plaats de dialysebuis in drie liter ultrazuiver water om 's nachts op drie graden Celsius te dialyseren om het ammoniumsulfaat te verwijderen.Na dialyse, centrifugeren de oplossing op vier graden Celsius zoals eerder beschreven. Verwijder voorzichtig de bovenste, halfvaste gele fractie tot een steriele buis en bewaar op vier graden Celsius. Na nachtelijke incubatie van de cultuur, breng 500 microliters in twee steriele 250 milliliter verbijsterde kolven met 49,5 milliliter van 1%tryptone bouillon.Incubeer voor ongeveer vier uur bij 37 graden Celsius met schudden om halverwege de lange fase te bereiken. Breng 100 milliliter cultuur in stappen van 25 milliliter naar vier steriele 50 milliliter centrifugebuizen en centrifugeer de vier buizen op 10.000 keer g om de cellen te pelleteren. Verwijder de supernatant en opnieuw opschorten elke cel pellet in 750 microliter van 1%tryptone bouillon.Combineer de vier 750 microliter celsuspensies tot één buis van 15 milliliter. En aliquot 350 microliters van de cel suspensie in zes steriele 1,5 milliliter centrifuge buizen. Gebruik een pipet om 30 microliter ldls toe te voegen in de 1,5 milliliter centrifuge buis om een gewenste uiteindelijke concentratie van 5%En incubaat bij 37 graden Celsius te bereiken met schudden gedurende vier uur.Centrifuge de culturen op vier graden Celsius op 16.000 keer g voor een duur van twee minuten. En schort de celpellets opnieuw op in 330 microliter steriele fosfaatgefferde zoutoplossing om te wassen. Herhaal deze was nog een keer.Nota van het gewicht van de zes natte celpellets door het gewicht van de lege buis af te trekken. Snap bevriezen van de cel pellets op droog ijs. Voeg eerst een schep van 5 millimeter zirkoniumoxide kralen op de top van elke cel pellet.Voeg 740 microliters van 75%HPLC-kwaliteit methanol direct gekoeld tot min 80 graden Celsius toe in elke buis. Voeg vervolgens twee microliters van 50 micromolar dimyristoyl fosphatidylcholine toe als interne standaard. Plaats het monster met 1,5 milliliter centrifugebuizen in een beschikbare poort op een bullet blender weefsel homogenizer.Homogeniseer de monsters op lage snelheid. Zet twee tot drie voor drie minuten. Inspecteer de monsters visueel op homogeniteit.Als klonten cellen zichtbaar zijn, u de homogenisatie in de bullet blender in stappen van twee minuten voortzetten. Voeg vervolgens 270 microliter chloroform toe aan elk monster in een chemische rookkap. Vortex de monsters krachtig gedurende 30 minuten.Centrifugeren de monsters in een bench-top centrifuge voor maximaal 30 minuten ten minste 2.000 keer g. In de chemische rookkap, verzamel de monofasische supernatant en breng het naar een nieuwe reageerbuis terwijl voorzichtig het vermijden van de eiwitpellet aan de onderkant van de extractiebuis. Breng de verdunde lipid extracten eerder bereid naar een geschikte autosampler flacon.Voor flow injection-gebaseerde analyse, plaats de autosampler flacons in een temperatuur-gecontroleerde autosampler van een HPLC-systeem dat in staat is capillaire stroom toepassingen. Stel het HPLC-systeem in volgens het manuscript. Het eluent wordt geïntroduceerd van de HPLC-transferlijn naar de massaspectrometer via een elektrospray-ionisatiebron die is uitgerust met een low-flow 34-meter metalen naald.Stel in de Thermo Tune Plus instrumentcontrolesoftware de ionisatiespanning in op 4.000 volt en schedegas op vijf. Stel ook de capillaire temperatuur in op 150 graden Celsius en de S-lens op 50%Klik op de scanknop definiëren en selecteer FTMS in het analysemenu. Stel het veld massabereik in op normaal en selecteer 100,000 in het begin van het resolutieveld.Zorg ervoor dat het scantype op vol is ingesteld. Voer onder het menu scanbereiken 200 in het eerste massaveld in en voer 2.000 in het laatste massaveld in. Na het verder definiëren van waargenomen massanauwkeurigheid, gemiddeld het signaal over de brede piek in het totale ionenchromatogram.Klik met de rechtermuisknop op het miniatuurpictogram in het weergavevenster voor het massaspectrum en selecteer de weergavespectrumlijst. Selecteer in hetzelfde menu weergaveopties en schakel vervolgens alle pieken in het weergavemenu in. Klik op de knop oke om het weergavevenster te sluiten.Klik opnieuw op het miniatuurpictogram in het weergavevenster van het massaspectrum en selecteer de exacte massa van het klembord exporteren. Plak de geëxporteerde gegevenscel A1 van het eerste werkblad in de nieuwe Excel-spreadsheet en ga verder volgens het manuscript. Open de LIMSA-software om nauwkeurige massagebaseerde lipide-identificaties uit te voeren.Selecteer in het hoofdmenu de pieklijst onder het menu van het spectrumtype. Selecteer de positieve modus of de negatieve modus om te corresponderen met de polariteit waarin de massaspectrometriegegevens zijn verkregen. Voer in de piekvolle breedte op de helft van het maximum en over het z-venster het gewenste massazoekvenster in voor piekbevinding.In dit protocol werd het LDL-gehalte van de plasmafractie verder verrijkt door neerslag van de 30 tot 40 kilodalton bèta levitins. De aanwezigheid van eiwitbanden op 140, 80, 65, 60 en 15 kilodaltons correleren met de apoproteïnen van LDLs. Behandeling met triclosan remt de groei van staph aureus in vetzuurvrij medium.Terwijl het aanvullen van culturen met eigeel plasma als exogene vetzuurbronnen overwint triclosan-geïnduceerde groeiremming. Evenzo, suppletie van triclosan-behandelde culturen met verrijkte eigeel LDL herstelt de groei. Verder ondersteunt toevoeging van eigeel LDLs de groei van een eerder gekarakteriseerd S.aureus vetzuur, auxotroph.Pre-vetzuur gehalte werd gemeten in 1%tryptone bouillon of kip eidooier LDL door gebruik te maken van flow injectie hoge resolutie nauwkeurige massaspectrometrie. Minimale hoeveelheden gratis vetzuur werden gevonden. Orthogonale gedeeltelijke minst vierkanten discriminante analyse van overvloedige staph aureus membraan fosfolipiden aangetoond duidelijke klasse scheiding, met een vetzuur samenstelling van onbehandelde en kip eidooier LDL behandelde voorwaarden.Verrijking van LDLs van kippeneeldooier biedt een goedkope bron van complexe vetzuren voor het onderzoeken van de interacties tussen bacteriële pathogenen en gastheer lipoproteïnen. Chloroform en methanol gebruikt bij de bereiding van lipide extracten zijn gevaarlijk. Zorg ervoor dat u deze reagentia in een chemische rookkap gebruikt en alle afvalstromen bevat.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Bacterial Inner-membrane Display for Screening a Library of Antibody Fragments

Bacteriële Inner-membraan Display voor het screenen van een bibliotheek van antilichaamfragmenten

Antibodies engineered for intracellular function must not only have affinity for their target antigen, but must also be soluble and correctly folded in ...

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identificatie van vetzuren in<em&gt; Bacillus cereus</em

The Bacillus species contain branched chain and unsaturated fatty acids (FAs) with diverse positions of the methyl branch (iso or anteiso) and of the ...

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Gebruik Steiger Liposomen lipide-proximale eiwit-eiwit interacties reconstitueren<em&gt; In Vitro</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

Fatty Acid 13C Isotopologue Profiling Provides Insight into Trophic Carbon Transfer and Lipid Metabolism of Invertebrate Consumers

Fatty Acid 13C Isotopologue Profiling Provides Insight into Trophic Carbon Transfer and Lipid Metabolism of Invertebrate Consumers

Profilering van vetzuur 13C Isotopologue geeft inzicht in de trofische Carbon overdracht en lipide metabolisme van ongewervelde consumenten

Fatty acids (FAs) are useful biomarkers in food web ecology because they are typically assimilated as a complete molecule and transferred into consumer ...

Rapid Isolation of the Mitoribosome from HEK Cells

Snelle isolatie van de Mitoribosome van HEK cellen

The human mitochondria possess a dedicated set of ribosomes (mitoribosomes) that translate 13 essential protein components of the oxidative ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

Een fluorescentie schommelingen spectroscopie Assay voor eiwit-eiwitinteractie op cel contacten

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

Single Liposome Measurements for the Study of Proton-Pumping Membrane Enzymes Using Electrochemistry and Fluorescent Microscopy

Enkele liposoom metingen voor de studie van Proton-pompende membraan enzymen met behulp van de elektrochemie en Fluorescent microscopie

Proton-pumping enzymes of electron transfer chains couple redox reactions to proton translocation across the membrane, creating a proton-motive force used ...

Enrichment of Native Lipoprotein Particles with microRNA and Subsequent Determination of Their Absolute/Relative microRNA Content and Their Cellular Transfer Rate

Verrijking van native lipoprotein deeltjes met microRNA en daaropvolgende bepaling van hun absolute/relatieve microRNA inhoud en hun cellulaire overdrachtssnelheid

Lipoprotein particles are predominately transporters of lipids and cholesterol in the bloodstream. Furthermore, they contain small amounts of strands of ...

PeptiQuick, a One-Step Incorporation of Membrane Proteins into Biotinylated Peptidiscs for Streamlined Protein Binding Assays

PeptiQuick, een in één stap incorporatie van membraan eiwitten in Biotinylated Peptidiscs voor gestroomlijnde eiwit binding assays

Membrane proteins, including transporters, channels, and receptors, constitute nearly one-fourth of the cellular proteome and over half of current drug ...