Name: isolation of lipoprotein particles from chicken egg yolk for the study of bacterial pathogen fatty acid incorporation into membrane phospholipids
Uploaded: 2019-05-15T14:30:00
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Wir danken den Mitgliedern des Hammer Labors für die kritische Bewertung des Manuskripts und die Unterstützung dieser Arbeit. Dr. Alex Horswill von der University of Colorado School of Medicine stellte freundlicherweise AH1263 zur Verfügung. Dr. Chris Waters Labor an der Michigan State University lieferte Reagenzien. Diese Arbeit wurde durch das Stipendium der American Heart Association 16SDG30170026 und Start-up-Fonds der Michigan State University unterstützt.

HINWEIS: Das folgende Protokoll zur Anreicherung von LDL-Partikeln aus Hühnereigelb stammt von Moussa et al. 200233.
1. Herstellung von Hühnereigelb zur Anreicherung von LDL-Partikeln
<ol><li>Zwei große Hühnereier durch Waschen der Schalen mit 70% Ethanollösung sanieren und lufttrocknen lassen.</li>
	<li>Den Eiabscheider mit 70% Ethanollösung desinsieren und lufttrocknen lassen. Befestigen Sie den Eiabscheider an der Lippe eines mittelgroßen Bechers.</li>
	<li>...

S. aureus integriert exogene Fettsäuren in seine Membranphospholipide27,32,43. Die Phospholipidsynthese mit exogenen Fettsäuren umgeht die FASII-Hemmung, verändert aber auch die biophysikalischen Eigenschaften der Membran27,32,44. Während die Aufnahme von exogenen Fettsäuren in Phospholipide grampositiver Erreger gut dokum...

Methicillin-resistente S. aureus (MRSA) ist die Hauptursache für gesundheitsbezogene Infektionen und die damit verbundene Antibiotikaresistenz ist eine erhebliche klinische Herausforderung1,2,3. Daher hat die Entwicklung neuartiger therapeutischer Strategien einen hohen Stellenwert. Eine vielversprechende Behandlungsstrategie für Gram-positive Krankheitserreger ist die Hemmung der Fettsäuresynthese, eine Anforderung für die Membranphospholipid-Produktion, die in S. aureusPhosphatidylglycerol (PG), Lysyl-PG und Cardiolipin4umfasst. Bei Bakterien erfolgt die Fettsäureproduktion über den Fettsäuresynthese-II-Signalweg (FASII) 5 ,dersich erheblich vom eukaryotischen Pendant unterscheidet, was FASII zu einem attraktiven Ziel für die Antibiotikaentwicklung macht5,6 . FASII-Inhibitoren zielen in erster Linie auf FabI ab, ein Enzym, das für die Ausdehnung der Fettsäure-Kohlenstoff-Kettendehnung7benötigt wird. Der FabI-Hemmer Triclosan wird in Konsumgütern und medizinischen Produkten weit verbreitet8,9. Weitere FabI-Inhibitoren werden von mehreren Pharmaunternehmen zur Behandlung der S. aureus-Infektionentwickelt 10,11,12,13,14 ,15,16,17,18,19,20,21,22,23 ,24,25,26. Jedoch, viele Gram-positive Krankheitserreger, einschließlich S. aureus, sind in der Lage, exogene Fettsäuren für die Phospholipid-Synthese zu fangen, unter Umgehung FASII Hemmung27,28,29. So wird das klinische Potenzial von FASII-Hemmern diskutiert, da wir über die Quellen von Wirtsfettsäuren und die Mechanismen, mit denen Krankheitserreger Fettsäuren aus dem Wirt extrahieren, erhebliche Lücken haben27,28. Um diese Lücken zu schließen, entwickelten wir eine unvoreingenommene lipidomische Analysemethode, um die Einbindung exogener Fettsäure aus Lipoproteinpartikeln in Membranphospholipide von S. aureuszu überwachen.
Während der Sepsis stellen Wirtslipoproteinpartikel eine potenzielle Quelle von wirtabgeleiteten Fettsäuren innerhalb der Vaskulatur dar, da ein Großteil der Wirtsfettsäuren mit den Partikeln30assoziiert ist. Lipoproteine bestehen aus einer hydrophilen Schale, die aus Phospholipiden und Proteinen besteht, die einen hydrophoben Kern von Triglyceriden und Cholesterinestern umschließen31. Vier Hauptklassen von Lipoproteinen - Chylomicron, Lipoprotein mit sehr geringer Dichte, Lipoprotein mit hoher Dichte und Lipoprotein mit geringer Dichte (LDL) – werden vom Wirt hergestellt und fungieren als Lipidtransportfahrzeuge, die Fettsäuren und Cholesterin von und zu Wirtszellen über die Vaskulatur. LDLs sind reichlich in veresterter Fettsäure einschließlich Triglyceriden und Cholesterinester31. Wir haben bereits gezeigt, dass hochgereinigte menschliche LDLs eine lebensfähige Quelle von exogenen Fettsäuren für die PG-Synthese sind und somit einen Mechanismus für den FASII-Inhibitorbypass32bieten. Die Reinigung menschlicher LDLs kann technisch anspruchsvoll und zeitaufwändig sein, während kommerzielle Quellen gereinigter menschlicher LDLs unerschwinglich teuer sind, um sie routinemäßig zu verwenden oder großangelegte bakterielle Bildschirme durchzuführen. Um diese Einschränkungen zu beheben, haben wir ein Verfahren zur Anreicherung von LDLs aus Hühnereigelb, einer reichen Quelle von Lipoproteinpartikeln33, modifiziert. Wir haben erfolgreich ungezielte, hochauflösende/genaue Massenspektrometrie und Tandem-Massenspektrometrie eingesetzt, um die Einbindung menschlicher LDL-Fettsäuren in die Membran von S. aureus32zu überwachen. Im Gegensatz zu zuvor berichteten Methoden kann dieser Ansatz einzelne Fettsäure-Isomere für jeden der drei wichtigsten Staphylokokken-Phospholipid-Typen quantifizieren. Ölsäure (18:1) ist eine ungesättigte Fettsäure in allen Wirts-Lipoproteinpartikeln, die leicht in S. aureus phospholipide29,30,32eingearbeitet werden kann. S. aureus ist nicht in der Lage, Ölsäure-Synthese29; Daher stellt die Menge der phospholipidhaltigen Ölsäure das Vorhandensein von wirtlipoproteinabgeleiteten Fettsäuren in der Staphylokokkenmembran29fest. Diese Phospholipid-Arten können durch die hier beschriebene hochmoderne Massenspektrometriemethode identifiziert werden, die eine beispiellose Auflösung der Membranzusammensetzung von S. aureus bietet, die in Gegenwart einer Fettsäurequelle kultiviert wird, die wahrscheinlich Begegnungen während der Infektion.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ammonium sulfate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP212R-1</td>
			<td>&#8805;99.5% pure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture incubator</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>MaxQ 6000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrafuge</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>75-217-420</td>
			<td>Sorvall Legen XTR, rotor F14-6x250 LE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Costar assay plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3788</td>
			<td>96 well</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper</td>
			<td>Schleicher &#38; Schuell</td>
			<td>597</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large chicken egg</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Common store bought egg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate spectrophotometer</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>Epoch 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S. aureus strain AH1263</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Provided by Alex Horswill of the University of Colorado</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis tubing</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>68700</td>
			<td>7,000 MWCO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>Becton, Dickison and Company</td>
			<td>211705</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5 mm zirconium oxide beads</td>
			<td>Next Advance</td>
			<td>ZROB05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bullet Blender</td>
			<td>Next Advance</td>
			<td>BBX24B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol (LC-MS grade)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A4561</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform (reagent grade)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>MCX10559</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol (LC-MS grade)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A4611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimyristoyl phosphatidylcholine</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>850345C-25mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9830</td>
			<td>&#8805;99.5% pure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium formate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>70221-25G-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xcalibur software</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>OPTON-30801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LTQ-Orbitrap Velos mass spectrometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td>high resolution/accurate mass MS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 1260 capillary HPLC</td>
			<td>Agilent</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SpeedVac Vacuum Concentrators</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of lipoprotein particles from chicken egg yolk for the study of bacterial pathogen fatty acid incorporation into membrane phospholipids

Staphylococcus aureus und andere grampositive Erreger integrieren Fettsäuren aus der Umwelt in Membranphospholipide. Während der Infektion sind die meisten exogenen Fettsäuren in Wirtslipoproteinpartikeln vorhanden. Ungewissheit bleibt hinsichtlich der Reservoirs von Wirtsfettsäuren und der Mechanismen, durch die Bakterien Fettsäuren aus den Lipoproteinpartikeln extrahieren. In dieser Arbeit beschreiben wir Protokolle zur Anreicherung von Lipoproteinpartikeln mit geringer Dichte (LDL) aus Hühnereigelb und bestimmen, ob LDLs als Fettsäurereservoirs für S. aureusdienen. Diese Methode nutzt unvoreingenommene lipidomische Analysen und Hähnchen-LDLs, ein effektives und wirtschaftliches Modell für die Erforschung von Wechselwirkungen zwischen LDLs und Bakterien. Die Analyse der Integration von exogenen Fettsäuren aus LDLs wird mit hoher Auflösung/genauer Massenspektrometrie und Tandemmassenspektrometrie durchgeführt, die die Charakterisierung der Fettsäurezusammensetzung der bakteriellen Membran und unvoreingenommene Identifizierung neuartiger Kombinationen von Fettsäuren, die bei Exposition gegenüber LDLs in bakteriellen Membranlipiden entstehen. Diese fortschrittlichen Massenspektrometrietechniken bieten eine unvergleichliche Perspektive der Aufnahme von Fettsäure, indem sie die spezifischen exogenen Fettsäuren, die in die Phospholipide eingearbeitet sind, offenlegen. Die hier beschriebenen Methoden sind an die Untersuchung anderer bakterieller Krankheitserreger und alternativer Quellen komplexer Fettsäuren anpassungsfähig.

Das Protokoll zur Anreicherung von LDL aus Hühnereigelb ist in Abbildung 1dargestellt. Dieser Prozess beginnt mit der Verdünnung von ganzem Eigelb mit Kochchen und der Trennung der Eigelbfeststoffe, die als Granulat bezeichnet werden, von der löslichen oder Plasmafraktion, die die LDLs enthält (Abbildung 1)33. Der LDL-Gehalt der Plasmafraktion wird durch die Ausfällung der 30-40 kDa-Livetine (Abbildun...

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Isolation of Lipoprotein Particles from Chicken Egg Yolk for the Study of Bacterial Pathogen Fatty Acid Incorporation into Membrane Phospholipids

Isolierung von Lipoproteinpartikeln aus Hühnereigelb zur Untersuchung des bakteriellen Pathogens Fettsäure-Inkorporation in Membranphospholipide

Diese Methode bietet einen Rahmen für die Untersuchung der Einbeziehung von exogenen Fettsäuren aus komplexen Wirtsquellen in bakterielle Membranen, insbesondere Staphylococcus aureus. Um dies zu erreichen, werden Protokolle zur Anreicherung von Lipoproteinpartikeln aus Hühnereigelb und anschließende Fettsäureprofilierung von bakteriellen Phospholipiden unter Verwendung der Massenspektrometrie beschrieben.

Staphylococcus aureus and other Gram-positive pathogens incorporate fatty acids from the environment into membrane phospholipids. During infection, the ...

Dieses Protokoll bietet einen Rahmen für die Untersuchung der Einbeziehung von exogenen Fettsäuren aus komplexen Wirtsquellen in bakterielle Membranen, insbesondere staphylococcus aureus. Das Protokoll nutzt unvoreingenommene lipidomische Analysen und Lipoproteinpartikel, die aus Hühnereigelb isoliert sind, als wirtschaftliche Quelle komplexer Fettsäuren, um die Aufnahme von Fettsäure in bakterielle Lipide zu quantifizieren. Die hier beschriebenen Massenspektrometrietechniken bieten eine unvergleichliche Perspektive auf das Fettsäureprofil von Staphylococcus aureus Lipiden, können aber an die Untersuchung anderer bakterieller Membranen angepasst werden.Bei der Ausführung dieses Protokolls ist darauf zu achten, dass bei jedem Fraktionierungsschritt der LDL-enthaltene Anteil identifiziert und beibehalten wird. Die Entfernung des Ammoniaksulfats aus der Plasmafraktion ist entscheidend für nachgeschaltete Anwendungen der LDLs. Bieten Sie ausreichend Platz in den Schläuchen und wechseln Sie das Wasser nach Bedarf, um eine effektive Dialyse zu ermöglichen.Zu Beginn zwei Eigelbe zweimal mit 30 Millilitersterilphosphat gepufferter Kochchen waschen, um Restalbumin zu entfernen. Punktieren Sie die Vitelline-Membran mit einer sterilen Pipettenspitze und entleeren Sie den Inhalt der Membran in ein steriles 50 Milliliter konisches Zentrifugenrohr. Etwa 24 bis 30 Milliliter oder 17 Mol-Natriumchloridlösung bei pH-Wert sieben zum Eigelb geben und kräftig vermischen.Dann legen Sie die Röhre auf einem Schaukel-Shaker, um bei vier Grad Celsius für 60 Minuten zu mischen. Zentrifugieren Sie die Eigelbverdünnung bei 10 Grad Celsius bei 10.000 mal g für 45 Minuten. Übertragen Sie die überstande Plasmafraktion in eine sterile 50 Milliliter konische Röhre, so dass die granulierte Fraktion hinter lässt.Und wieder Zentrifuge. Mischen Sie zunächst die Plasmafraktion mit 40 Volumenprozent Ammoniumsulfat auf einem Schaukelschüttler oder einem ähnlichen Gerät bei vier Grad Celsius für 60 Minuten. Nach der Einstellung des pH-Wertes zentrieren Sie die Plasmafraktion bei vier Grad Celsius und 10.000 Zeit g für eine Dauer von 45 Minuten.Entfernen Sie die obere halbfeste gelbe Fraktion in sieben Kilodalton Porengröße Dialyse-Schläuche. Geben Sie mindestens 25 % zusätzlichen Platz in den Schläuchen zur Verfügung, damit sie anschwellen kann. Legen Sie die Dialyseschläuche in drei Liter Reinstwasser, um über Nacht bei drei Grad Celsius zu dialysieren, um das Ammoniumsulfat zu entfernen.Nach der Dialyse zentrieren Sie die Lösung bei vier Grad Celsius, wie zuvor beschrieben. Entfernen Sie vorsichtig die obere, halbfeste gelbe Fraktion in ein steriles Rohr und lagern Sie sie bei vier Grad Celsius. Nach der nächtlichen Inkubation der Kultur 500 Mikroliter in zwei sterile 250 Milliliter verwirrte Kolben mit 49,5 Millilitern 1%Tryptonbrühe übertragen.Etwa vier Stunden bei 37 Grad Celsius mit Schütteln bebrüten, um eine mittlere Phase zu erreichen. 100 Milliliter Kultur in 25 Milliliter-Schritten auf vier sterile 50-Milliliter-Zentrifugenrohre übertragen und die vier Röhren mit 10 000 mal g zentrifugieren, um die Zellen zu pellet. Entfernen Sie den Überstand und setzen Sie jedes Zellpellet in 750 Mikroliter 1%Tryptonbrühe wieder auf.Kombinieren Sie die vier 750 Mikroliter-Zellsuspensionen in einem einzigen 15-Milliliter-Rohr. Und aliquot 350 Mikroliter der Zellsuspension in sechs sterile 1,5 Milliliter Zentrifugenröhren. Verwenden Sie eine Pipette, um 30 Mikroliter LDLs in das 1,5 Milliliter Zentrifugenrohr zu geben, um eine gewünschte Endkonzentration von 5% zu erreichen und bei 37 Grad Celsius mit Schütteln für vier Stunden zu brüten.Zentrifugieren Sie die Kulturen bei vier Grad Celsius bei 16.000 mal g für eine Dauer von zwei Minuten. Und die Zellpellets in 330 Mikroliter steriler Phosphat-gepufferter Saline zum Waschen wieder aufhängen. Wiederholen Sie diese Wäsche noch einmal.Zeichnen Sie das Gewicht der sechs Nasszellpellets auf, indem Sie das Gewicht des leeren Rohres subtrahieren. Fangen Sie die Zellpellets auf Trockeneis ein. Fügen Sie zunächst eine Kugel von 5 Millimeter Zirkonoxid-Perlen auf jedem Zellpellet.Fügen Sie 740 Mikroliter 75%HPLC-Methanol, gekühlt auf minus 80 Grad Celsius, direkt in jede Röhre ein. Dann fügen Sie zwei Mikroliter von 50 Mikromolar Dimyristoylphosphatidylcholin als internen Standard. Legen Sie die Probe mit 1,5 Milliliter Zentrifugenrohren in einen verfügbaren Port auf einem Kugelmischer-Gewebehomogenisator.Homogenisieren Sie die Proben bei niedriger Geschwindigkeit. Einstellung zwei bis drei für drei Minuten. Überprüfen Sie die Proben visuell auf Homogenität.Wenn Zellklumpen sichtbar sind, fahren Sie mit der Homogenisierung im Aufzählungszeicheninblender in zwei Minutenschritten fort. Als nächstes fügen Sie 270 Mikroliter Chloroform zu jeder Probe in einer chemischen Rauchhaube hinzu. Wirbeln Sie die Proben 30 Minuten lang kräftig an.Zentrifugieren Sie die Proben in einer Tischzentrifuge bis zu 30 Minuten bei mindestens 2.000 mal g. In der chemischen Rauchhaube sammeln Sie den monophasischen Überstand und übertragen Sie ihn in ein neues Reagenzglas, während Sie das Proteinpellet am Boden des Extraktionsrohrs sorgfältig vermeiden. Übertragen Sie die zuvor hergestellten verdünnten Lipidextrakte in eine entsprechende Autosampler-Durchstechflasche.Für die Strömungsinjektions-basierte Analyse legen Sie die Autosampler-Durchstechflaschen in einen temperaturgesteuerten Autosampler eines HPLC-Systems, das in der Lage ist, Kapillarflussanwendungen zu nutzen. Richten Sie das HPLC-System entsprechend dem Manuskript ein. Das Eluent wird von der HPLC-Transferleitung zum Massenspektrometer durch eine Elektrospray-Ionisationsquelle eingeführt, die mit einer strömungsarmen 34-Spur-Metallnadel ausgestattet ist.Stellen Sie in der Gerätesteuerungssoftware Thermo Tune Plus die Ionisationsspannung auf 4.000 Volt und das Mantelgas auf fünf ein. Legen Sie in ähnlicher Weise die Kapillartemperatur auf 150 Grad Celsius und die S-Linse auf 50 % fest. Klicken Sie im Menü "Analyzer" auf FTMS. Legen Sie das Massenbereichsfeld auf normal und im Auflösungsfeld 100 000 aus.Stellen Sie sicher, dass der Scantyp auf "Voll" festgelegt ist. Geben Sie im Menü "Scanbereiche" 200 in das erste Massenfeld ein, und geben Sie 2 000 in das letzte Massenfeld ein. Nach weiterer Definition der beobachteten Massengenauigkeit, durchschnittlich das Signal über den breiten Peak im gesamten Ionenchromatogramm.Klicken Sie mit der rechten Maustaste auf das Thumbtack-Symbol im Anzeigefenster des Massenspektrums, und wählen Sie die Liste des Ansichtsspektrums aus. Wählen Sie im gleichen Menü die Anzeigeoptionen und dann alle Spitzen im Anzeigemenü um. Klicken Sie auf die Schaltfläche okay, um das Anzeigefenster zu schließen.Klicken Sie mit der rechten Maustaste erneut auf das Thumbtack-Symbol im Anzeigefenster des Massenspektrums, und wählen Sie die genaue Masse der Export-Zwischenablage aus. Fügen Sie die exportierte Datenzelle A1 des ersten Arbeitsblatts in die neue Excel-Tabelle ein, und fahren Sie entsprechend dem Manuskript fort. Um genaue massenbasierte Lipididentifikationen durchzuführen, öffnen Sie die LIMSA-Software.Wählen Sie im Hauptmenü die Peak-Liste unter dem Menü "Spektrumtyp" aus. Wählen Sie den positiven Modus oder den negativen Modus aus, um der Polarität zu entsprechen, in der die Massenspektrometriedaten erfasst wurden. Geben Sie in der Spitzenbreite bei maximal ergehend und über dem Z-Fenster das gewünschte Massensuchfenster für die Spitzensuche ein.In diesem Protokoll wurde der LDL-Gehalt der Plasmafraktion durch die Ausfällung der 30 bis 40 Kilodalton-Betalevitine weiter angereichert. Das Vorhandensein von Proteinbändern bei 140, 80, 65, 60 und 15 Kilodaltonkorreliert mit den Apoproteinen von LDLs. Die Behandlung mit Triclosan hemmt das Wachstum von Staph aureus in fettsäurefreiem Medium.Während die Ergänzung von Kulturen mit Eigelbplasma als exogene Fettsäurequellen triclosan-induzierte Wachstumshemmung überwindet. In ähnlicher Weise, Supplementierung von Triclosan-behandelten Kulturen mit angereichertem Eigelb LDL stellt das Wachstum wieder her. Darüber hinaus unterstützt die Zugabe von Eigelb LDLs das Wachstum einer zuvor charakterisierten S.aureus-Fettsäure, Auxotroph.Der Gehalt an Präfettsäure wurde in 1% Tryptonbrühe oder Hühnereigelb LDL unter Verwendung von Strömungsinjektion serategenauer Massenspektrometrie gemessen. Es wurden minimale Mengen an freier Fettsäure gefunden. Orthogonale partielle kleinste Quadrate diskriminant Analyse von reichlich Staph Aureus Membran Phospholipide zeigten klare Klassentrennung, mit einer Fettsäurezusammensetzung von unbehandelten und Hühnereigelb LDL behandelt Endes.Die Anreicherung von LDLs aus Hühnereigelb bietet eine kostengünstige Quelle komplexer Fettsäuren zur Untersuchung der Wechselwirkungen zwischen bakteriellen Krankheitserregern und Wirtslipoproteinen. Chloroform und Methanol, das bei der Herstellung von Lipidextrakten verwendet wird, sind gefährlich. Bitte achten Sie darauf, diese Reagenzien in einer chemischen Rauchhaube zu verwenden und alle Abfallströme zu enthalten.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Bacterial Inner-membrane Display for Screening a Library of Antibody Fragments

Bakterielle Inner-Membran-Display für das Screening einer Bibliothek von Antikörperfragmenten

Antibodies engineered for intracellular function must not only have affinity for their target antigen, but must also be soluble and correctly folded in ...

Forschung

Biochemie

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identifizierung von Fettsäuren in<em&gt; Bacillus cereus</em

The Bacillus species contain branched chain and unsaturated fatty acids (FAs) with diverse positions of the methyl branch (iso or anteiso) and of the ...

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Scaffold Liposomen zu rekonstituieren Lipid-proximalen Protein-Protein-Wechselwirkungen<em&gt; In Vitro</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

Fatty Acid 13C Isotopologue Profiling Provides Insight into Trophic Carbon Transfer and Lipid Metabolism of Invertebrate Consumers

Fatty Acid 13C Isotopologue Profiling Provides Insight into Trophic Carbon Transfer and Lipid Metabolism of Invertebrate Consumers

Fettsäure- 13C Isotopologue Profilierung gibt Einblick in trophische Carbon Transfer und Fettstoffwechsel der Wirbellosen Verbraucher

Fatty acids (FAs) are useful biomarkers in food web ecology because they are typically assimilated as a complete molecule and transferred into consumer ...

Rapid Isolation of the Mitoribosome from HEK Cells

Schnelle Isolierung von Mitoribosome von HEK Zellen

The human mitochondria possess a dedicated set of ribosomes (mitoribosomes) that translate 13 essential protein components of the oxidative ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

Eine Fluoreszenz Fluktuation Spektroskopie Assay von Protein-Protein-Wechselwirkungen an den Zell-Zell-Kontakten

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

Single Liposome Measurements for the Study of Proton-Pumping Membrane Enzymes Using Electrochemistry and Fluorescent Microscopy

Einzelne Liposomen Messungen für das Studium der Protonen-Pumpen Membran Enzyme mit Elektrochemie und Fluoreszenz-Mikroskopie

Proton-pumping enzymes of electron transfer chains couple redox reactions to proton translocation across the membrane, creating a proton-motive force used ...

Enrichment of Native Lipoprotein Particles with microRNA and Subsequent Determination of Their Absolute/Relative microRNA Content and Their Cellular Transfer Rate

Anreicherung von Ureinium Lipoprotein-Partikeln mit Mikro-RNA und anschließender Bestimmung ihrer Absolute/Relative MicroRNA-Inhalte und ihrer Celluläre Transferquote

Lipoprotein particles are predominately transporters of lipids and cholesterol in the bloodstream. Furthermore, they contain small amounts of strands of ...

PeptiQuick, a One-Step Incorporation of Membrane Proteins into Biotinylated Peptidiscs for Streamlined Protein Binding Assays

PeptiQuick, ein Ein-Schritt-Einbindung von Membranproteinen in biotinylierte Peptidiscs für optimierte Proteinbindungstests

Membrane proteins, including transporters, channels, and receptors, constitute nearly one-fourth of the cellular proteome and over half of current drug ...