Name: isolation of lipoprotein particles from chicken egg yolk for the study of bacterial pathogen fatty acid incorporation into membrane phospholipids
Uploaded: 2019-05-15T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Lipoprotein Particles from Chicken Egg Yolk for the Study of Bacterial Pathogen Fatty Acid Incorporation into Membrane Phospholipids at JoVE.com

אנו מודים לחברי המעבדה האמר על הערכה קריטית של כתב היד ותמיכה בעבודה זו. ד ר אלכס הורביץ מאוניברסיטת קולורדו בית הספר לרפואה סיפק AH1263. ד ר. כריס ווטרס מעבדה באוניברסיטת מישיגן סטייט סיפק ריאגנטים. עבודה זו נתמכת על ידי איגוד הלב האמריקאי הענקת 16SDG30170026 וכספים האתחול לספק על ידי אוניברסיטת מישיגן סטייט.

הערה: הפרוטוקול הבא להעשרת חלקיקי LDL מחלמון ביצת עוף נגזר מוסא ואח ' 200233.
1. הכנת חלמון ביצת עוף להעשרת חלקיקי LDL
<ol><li>באמצעות שטיפת הפגזים עם התמיסה 70% אתנול והתרת האוויר ליבשה, מייבשים שתי ביצי עוף גדולות.</li>
	<li>בעזרת התמיסה של 70% אתנול. ואפשר לייבש את האוויר הצמד ?...

S. האוראוס משלבת חומצות שומן אקסוגני לתוך ממברנה פוספוליפידים27,32,43. סינתזה פוספוליפיד באמצעות חומצות שומן אקסוגני עוקף פפסי עיכוב אבל גם משנה את המאפיינים ביופיזיים של הממברנה27,32,44....

סטפילוקוקוס-עמיד S. האוראוס (MRSA) הוא הגורם המוביל לזיהום הקשורות לבריאות הקשורים ועמידות לאנטיביוטיקה הקשורים הוא אתגר קליני ניכר1,2,3. לכן, ההתפתחות של אסטרטגיות טיפוליות הרומן הוא בעדיפות גבוהה. אסטרטגיה לטיפול מבטיח פתוגנים גראם חיוביים היא סינתזה חומצת שומן מעכב, דרישה הייצור פוספוליפיד הממברנה, ב -S.האורמית, כולל זרחן (PG), ליצ-PG, ו-cardiolipin4. ב חיידקים, הייצור חומצת שומן מתרחשת באמצעות מסלול החומצות שומן סינתזה השני (פאפסי)5, אשר שונה באופן משמעותי מעמיתו איקריוטית, עושה fasii טרה אטרקטיבית לפיתוח אנטיביוטי5,6 . מעכבי FASII בעיקר היעד FabI, אנזים הדרוש חומצת שומן התארכות שרשרת פחמן7. Triclosan המדכא משמש באופן נרחב במוצרי הצרכן והרפואי8,9. מעכבי fabi נוספים מפותחים על ידי חברות תרופות מספר לטיפול בזיהום האוראוס10,11,12,13,14 ,15,16,17,18,19,20,21,22,23 ,24,25,26. עם זאת, הרבה פתוגנים גראם חיוביים, כולל S.האוראוס, מסוגלים לניקוי חומצות שומן אקסוגני עבור סינתזה פוספוליפיד, לעקוף את העכבות האלה27,28,29. לפיכך, הפוטנציאל הקליני של מעכבי פאג'י הוא דיון בשל פערים ניכרים בידע שלנו על מקורות של חומצות שומן מארח ומנגנונים שבהם פתוגנים לחלץ חומצות שומן מן המארח27,28. כדי להתמודד עם הפערים האלה, פיתחנו lipidomic ניתוח שיטה משוחדת לפקח על שילוב של חומצת שומן אקסוגני מן ליפופרוטאין חלקיקים לתוך פוספוליפידים קרום של האוראוס. 
במהלך אלח דם, ליפופרוטאין חלקיקים מארחים מייצגים מקור פוטנציאלי של חומצות שומן נגזרות מארח בתוך ואצלב, כרוב חומצות שומן מארח משויכים החלקיקים30. ליפורופנס מורכב פגז ידרופילי מורכב של פוספוליפידים וחלבונים התוחמים ליבת הידרופובי של טריגליצרידים ואסטרים כולסטרול31. ארבעה כיתות גדולות של ליפופרוטאינים-chylomicron, ליפופרוטאין בצפיפות נמוכה מאוד, ליפופרוטאין בצפיפות גבוהה, וליפופרוטאין בצפיפות נמוכה (LDL) — מיוצרים על ידי המארח והפונקציה כמו כלי רכב הובלה ליפיד, אספקת חומצות שומן וכולסטרול אל ומ תאים מארחים באמצעות הכלי ואצלב. LDLs הם בשפע חומצת שומן esterified כולל טריגליצרידים ואסטרים כולסטרול31. בעבר הדגמנו כי LDLs אנושי מאוד מטוהרים הם מקור בר קיימא של חומצות שומן אקסוגני לסינתזה PG, ובכךלספק מנגנון עבור מעכבי fasii לעקוף את ה32. טיהור אנושי LDLs יכול להיות מאתגר מבחינה טכנית זמן רב בעוד מקורות מסחריים של LDLs האדם מטוהרים הם יקרים מאוד לשימוש על בסיס שגרתי או לבצע מסכי חיידקי בקנה מידה גדול. כדי לטפל במגבלות אלה, שינו הליך להעשרה של LDLs מחלמון ביצת עוף, מקור עשיר ליפופרוטאין חלקיקים33. השתמשנו בהצלחה בספקטרום לא ממוקד, ברזולוציה גבוהה/מדויקת בספקטרומטר מסה ובספקטרומטר מסה דו-מושביים כדי לפקח על השילוב של חומצות השומן האנושיות הנגזרות LDL לתוך הקרום של S. האוראוס32. שלא כמו שיטות שדווחו קודם לכן, גישה זו יכולה לכמת חומצות שומן בודדות איזוers עבור כל אחד משלושת הסוגים העיקריים של פוספולילוטופיד זרחן. חומצה אולאית (18:1) היא חומצת שומן בלתי רווי בתוך כל חלקיקי ליפופרוטאין, כי הוא שולב בקלות לתוך S. האורליפידים פוספוליפיפיחלקיקים29,30,32. S. האוראוס אינו מסוגל לסינתזה חומצה אולאית29; לכן, כמות של פוספוליפיד משולב חומצה אולאית קובע את הנוכחות של ליפופרוטאין מארחים-חומצות שומן נגזרות בתוך קרום ממברנה משולבת29. אלה מינים פוספוליפיד יכול להיות מזוהה על ידי המדינה-of-the-אמנות השיטה הספקטרומטר המסה תיאר כאן, מציע ברזולוציה חסרת תקדים של הרכב הקרום של האוראוס תרבותי בנוכחות של מקור חומצת שומן זה סביר נתקלת בזמן ההדבקה.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ammonium sulfate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP212R-1</td>
			<td>&#8805;99.5% pure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture incubator</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>MaxQ 6000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrafuge</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>75-217-420</td>
			<td>Sorvall Legen XTR, rotor F14-6x250 LE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Costar assay plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3788</td>
			<td>96 well</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper</td>
			<td>Schleicher &#38; Schuell</td>
			<td>597</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large chicken egg</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Common store bought egg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate spectrophotometer</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>Epoch 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S. aureus strain AH1263</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Provided by Alex Horswill of the University of Colorado</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis tubing</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>68700</td>
			<td>7,000 MWCO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>Becton, Dickison and Company</td>
			<td>211705</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5 mm zirconium oxide beads</td>
			<td>Next Advance</td>
			<td>ZROB05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bullet Blender</td>
			<td>Next Advance</td>
			<td>BBX24B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol (LC-MS grade)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A4561</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform (reagent grade)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>MCX10559</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol (LC-MS grade)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A4611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimyristoyl phosphatidylcholine</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>850345C-25mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9830</td>
			<td>&#8805;99.5% pure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium formate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>70221-25G-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xcalibur software</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>OPTON-30801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LTQ-Orbitrap Velos mass spectrometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td>high resolution/accurate mass MS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 1260 capillary HPLC</td>
			<td>Agilent</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SpeedVac Vacuum Concentrators</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of lipoprotein particles from chicken egg yolk for the study of bacterial pathogen fatty acid incorporation into membrane phospholipids

לשלב את חומצות השומן מהסביבה לתוך ממברנה פוספוליפידים. במהלך הזיהום, רוב חומצות השומן האקסוגני נמצאים בתוך ליפופרוטאין חלקיקים מארחים. חוסר ודאות נשאר באשר למאגרים של חומצות שומן מארח ומנגנונים שבהם חיידקים לחלץ חומצות שומן מן החלקיקים ליפופרוטאין. בעבודה זו, אנו מתארים פרוטוקולים עבור העשרה של ליפופרוטאין בצפיפות נמוכה (LDL) חלקיקים מחלמון ביצת עוף ולקבוע אם LDLs לשמש מאגרים חומצות שומן עבור האוראוס. שיטה זו מנצלת ניתוח lipidomic משוחדת ו LDLs עוף, מודל יעיל וחסכוני לחקר האינטראקציות בין LDLs וחיידקים. הניתוח של האינטגרציה האורבית של חומצות שומן אקסוגני מ LDLs מבוצע באמצעות ברזולוציה גבוהה/מדויק מאוד ספקטרומטריה ומדויקת ספקטרומטר מסה, המאפשר אפיון של הרכב חומצת שומן של החיידק קרום וזיהוי משוחדת של שילובים הרומן של חומצות שומן העולות ליפידים ממברנה חיידקי לאחר החשיפה LDLs. אלו טכניקות מתקדמות הספקטרומטר מסה להציע פרספקטיבה שאין כמוה של התאגדות חומצת שומן על ידי חשיפת חומצות שומן מסוימות האקסוסוגני שולבו הפוספוליפידים. השיטות המפורטות כאן הם להתאמה למחקר של פתוגנים חיידקיים אחרים ומקורות חלופיים של חומצות שומן מורכבות.

הפרוטוקול להעשרת ה-LDL מחלמון ביצת עוף מומחש באיור 1. תהליך זה מתחיל על ידי לדלל חלמון ביצה שלמה עם מלוחים והפרדת מוצקים חלמון ביצה המכונה גרגירים מן השבר מסיס או פלזמה המכיל את LDLs (איור 1)33. תוכן ה-LDL של השבר פלזמה מועשר עוד יותר ע?...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Lipoprotein Particles from Chicken Egg Yolk for the Study of Bacterial Pathogen Fatty Acid Incorporation into Membrane Phospholipids at JoVE.com

Isolation of Lipoprotein Particles from Chicken Egg Yolk for the Study of Bacterial Pathogen Fatty Acid Incorporation into Membrane Phospholipids

בידוד של חלקיקי ליפופרוטאין מעוף חלמון ביצה לחקר הפתוגן חומצות שומן בקטריאלי התאגדות לתוך ממברנה פוספוליפידים

שיטה זו מספקת מסגרת ללימוד שילוב של חומצות שומן אקסוגני ממקורות מארחים מורכבים לקרומים חיידקיים, בעיקר סטייהילוקוקוס. כדי להשיג זאת, פרוטוקולים עבור העשרת ליפופרוטאין חלקיקים מחלמון ביצת עוף ובעקבות הפרופיל חומצות שומן לאחר מכן של פוספוליפידים חיידקיים ניצול ספקטרומטר מסה מתוארים.

Staphylococcus aureus and other Gram-positive pathogens incorporate fatty acids from the environment into membrane phospholipids. During infection, the ...

פרוטוקול זה מספק מסגרת לחקר שילוב חומצות שומן אקסוגניים ממקורות מארחים מורכבים לתוך קרום חיידקי, במיוחד סטפילוקוקוס אוראוס. הפרוטוקול משתמש בניתוח ליפידומי לא משוחד וחלקיקי ליפופרוטאין המבודדים מחלמוני ביצי עוף כמקור כלכלי לחומצות שומן מורכבות לכימות שילוב חומצות שומן בליפידים חיידקיים. טכניקות ספקטרומטריית המסה המתארות כאן מציעות פרספקטיבה שאין כמוה של פרופיל חומצות השומן של שומנים סטפילוקוקוס אוראוס, אך ניתן להתאים אותן לחקר ממברנות חיידקיות אחרות.בעת ביצוע פרוטוקול זה, יש לדאוג לכך שכל שלב שבר יזהה וישמור על השבר המכיל LDL. הסרת אמוניה סולפט משבר הפלזמה היא קריטית עבור יישומים במורד הזרם של LDLs. לספק מקום בשפע צינורות ולשנות את המים לפי הצורך כדי לאפשר דיאליזה יעילה.כדי להתחיל, לשטוף שני חלמונים פעמיים עם 30 מיליליטר של מלוחים סטריליים פוספט מאגר כדי להסיר אלבומין שיורית. לנקב את קרום vitelline עם קצה פיפטה סטרילית לנקז את התוכן של הממברנה לתוך צינור צנטריפוגה חרוט סטרילי 50 מיליליטר. מוסיפים כ-24 עד 30 מיליליטר או 17 תותב נתרן כלורי טוחן ב-pH 7 לחלמון הביצה ומערבבים במרץ.ואז מניחים את הצינור על שייקר נדנדה לערבב בארבע מעלות צלזיוס במשך 60 דקות. צנטריפוגה דילול חלמון ביצה ב 10 מעלות צלזיוס ב 10, 000 פעמים גרם במשך 45 דקות. מעבירים את שבר הפלזמה העל-טבעי לצינור חרוט סטרילי של 50 מיליליטר, ומשאירים מאחור את השבר האפור.וצנטריפוגה שוב. ראשית, מערבבים את שבר הפלזמה עם 40 נפח מסה אחוז אמוניום סולפט על שייקר נדנדה או מכשיר דומה בארבע מעלות צלזיוס במשך 60 דקות. לאחר התאמת ה- pH, צנטריפוגה שבר הפלזמה בארבע מעלות צלזיוס ו 10, 000 זמן g למשך 45 דקות.הסר את השבר הצהוב semisolid העליון לתוך שבעה צינורות דיאליזה בגודל נקבובית קילודלטון. לספק מינימום של 25% של חדר נוסף בצנרת כדי לאפשר לו להתנפח. מניחים את צינורות הדיאליזה בשלושה ליטרים של מים אולטרה-חמים כדי להדייג בן לילה בשלוש מעלות צלזיוס כדי להסיר את אמוניום סולפט.לאחר דיאליזה, צנטריפוגה הפתרון בארבע מעלות צלזיוס כפי שתואר קודם לכן. מוציאים בזהירות את השבר הצהוב העליון, החציסולי, לצינור סטרילי ומאחסנים בארבע מעלות צלזיוס. לאחר הדגירה הלילית של התרבות, להעביר 500 microliters לשני בקבוקים סטריליים 250 מיליליטר מבולבל המכיל 49.5 מיליליטר של מרק טריפטון 1%.דגירה במשך כארבע שעות ב 37 מעלות צלזיוס עם רועד להגיע לשלב אמצע ארוך. להעביר 100 מיליליטר של תרבות במרווחים של 25 מיליליטר לארבעה צינורות צנטריפוגה סטריליים 50 מיליליטר וצנטריפוגה ארבעת הצינורות ב 10, 000 פעמים גרם כדי גלולה את התאים. הסר את העל-טבעי והשהה מחדש כל גלולת תא ב-750 מיקרוליטרים של מרק טריפטון של 1%.שלב את ארבעת מתלי התאים המיקרו-ליטריים של 750 לצינור יחיד של 15 מיליליטר. ואליקוט 350 מיקרוליטרים של ההשעיה התא לשש צינורות צנטריפוגה סטריליים 1.5 מיליליטר. השתמש פיפטה להוסיף 30 microliters של LDLs לתוך צינור צנטריפוגה 1.5 מיליליטר כדי להשיג ריכוז סופי הרצוי של 5% דגירה ב 37 מעלות צלזיוס עם רועד במשך ארבע שעות.צנטריפוגה התרבויות בארבע מעלות צלזיוס ב 16, 000 פעמים גרם למשך שתי דקות. ולהשעות מחדש את כדורי התא ב330 microliters של מלוחים סטריליים פוספט-מאגר לשטוף. חזור על שטיפה זו עוד פעם אחת.רשום את המשקל של ששת כדורי התא הרטוב על ידי חיסור המשקל של הצינור הריק. הצמד להקפיא את כדורי התא על קרח יבש. ראשית להוסיף כף מדידה אחת של 5 מילימטר תחמוצת זירקוניום חרוזי על גבי כל גלולת תא.הוסיפו 740 מיקרוליטרים של מתנול בדרגת HPLC של 75% מקורר למינוס 80 מעלות צלזיוס ישירות לתוך כל צינור. לאחר מכן הוסיפו שני מיקרוליטרים של 50 מיקרומולרים דימיריסטויל פוספטידילכולין כסטנדרט פנימי. מניחים את המדגם המכיל 1.5 צינורות צנטריפוגה מיליליטר לתוך יציאה זמינה על homogenizer רקמת בלנדר כדור.הומוגניזציה של הדגימות במהירות נמוכה. הגדרת שתיים עד שלוש במשך שלוש דקות. בדיקה חזותית של הדגימות להומוגניות.אם גושי תאים גלויים, המשך הומוגניזציה בבלנדר התבליטים במרווחים של שתי דקות. לאחר מכן להוסיף 270 microliters של כלורופורם לכל מדגם במכסה המנוע אדים כימיים. מערבולת הדגימות במרץ במשך 30 דקות.צנטריפוגה הדגימות בצנטריפוגה ספסל העליון עד 30 דקות לפחות של 2, 000 פעמים g. במכסה המנוע של האדים הכימיים, אוספים את העל-טבעי המונופאזי ומעבירים אותו למבחנה חדשה תוך הימנעות זהירה מכדור החלבון בתחתית צינור החילוץ. מעבירים את תמציות השומנים המדוללים שהוכנו בעבר לבקבוקון מדגם אוטומטי מתאים.לצורך ניתוח מבוסס הזרמת זרימה, מקם את בקבוקוני הדגימה האוטומטית בדגימה אוטומטית מבוקרת טמפרטורה של מערכת HPLC המסוגלת יישומים של זרימה נימית. הגדר את מערכת HPLC בהתאם לכתב היד. Eluent הוא הציג מ קו העברת HPLC לספקטרומטר המסה דרך מקור יינון electrospray מצויד במחט מתכת 34 מד זרימה נמוכה.בתוכנת בקרת המכשירים Thermo Tune Plus, הגדר את מתח היוון ל-4,000 וולט וגז נדן לחמישה. באופן דומה, הגדר את טמפרטורת נימי ל 150 מעלות צלזיוס ואת עדשת S ל 50%לחץ על כפתור הסריקה להגדיר, בתפריט מנתח, בחר FTMS. הגדר את שדה טווח המסה כנורמלי ובתחום הרזולוציה, בחר 100, 000.ודא שסוג הסריקה מוגדר כמלא. תחת תפריט טווחי הסריקה, הזן 200 בשדה המסה הראשון והזן 2,000 בשדה המסה האחרון. לאחר הגדרה נוספת של דיוק המסה שנצפה, ממוצע האות על פני הפסגה הרחבה בכרומטוגרמת היונים הכוללת.לחץ באמצעות לחצן העכבר הימני על סמל הגודל הממוזער בחלון התצוגה של ספקטרום המסה ובחר רשימת ספקטרום תצוגה. מאותו תפריט, בחר אפשרויות תצוגה ולאחר מכן כל התיבה הדו-מצבית 'פסגות' בתפריט התצוגה. לחץ על לחצן אישור כדי לסגור את חלון התצוגה.לחץ שוב על סמל הגודל הממוזער בחלון התצוגה של ספקטרום המסה ובחר את המסה המדויקת של לוח הייצוא. הדבק את תא הנתונים המיוצא A1 של גליון העבודה הראשון בגיליון האלקטרוני החדש של Excel והמשך בהתאם לכתב היד. כדי לבצע זיהויי שומנים מדויקים על בסיס מסה, פתח את תוכנת LIMSA.מהתפריט הראשי, בחר רשימת שיא תחת תפריט סוג ספקטרום. בחר מצב חיובי או מצב שלילי כדי להתאים לקוטביות שבה נרכשו נתוני ספקטרומטריית המסה. בשיא רוחב מלא בחצי מקסימום מעל חלון z, הזן את חלון החיפוש ההמוני הרצוי למציאת שיא.בפרוטוקול זה, תוכן LDL של שבר הפלזמה הועשר עוד יותר על ידי משקעים של 30 עד 40 לוטין בטא קילודלטון. נוכחותם של רצועות חלבון ב 140, 80, 65, 60, ו 15 קילודלטונים בקורלציה עם האפופרוטאינים של LDLs. טיפול עם triclosan מעכב את הצמיחה של aureus staph במדיום ללא חומצות שומן.בעוד שכשהם תרבויות עם פלזמה חלמון ביצה כמו מקורות חומצת שומן אקסוגניים מתגבר על עיכוב הצמיחה הנגרמת על ידי triclosan. באופן דומה, תוספי של תרבויות triclosan מטופלים עם LDL חלמון ביצה מועשר משחזר את הצמיחה. כמו כן, תוספת של LDLs חלמון ביצה תומך בצמיחה של חומצת שומן S.aureus מאופיין בעבר, auxotroph.תוכן חומצות טרום שומן נמדד 1%טריפטון מרק או חלמון ביצה עוף LDL על ידי שימוש בהזרקת זרימה ספקטרומטריית מסה מדויקת ברזולוציה גבוהה. נמצאו כמויות מינימליות של חומצות שומן חופשיות. אורתוגונל חלקי פחות ריבועים ניתוח מפלה של שפע staph aureus קרום פוספוליפידים הפגינו הפרדה מעמדית ברורה, עם הרכב חומצת שומן של תנאים לא מטופלים חלמון ביצה עוף LDL מטופלים.העשרת LDLs מחלמון ביצה עוף מספקת מקור זול של חומצות שומן מורכבות לחקירת האינטראקציות בין פתוגנים חיידקיים לליפופרוטאינים מארחים. כלורופורם ומתנול המשמשים להכנת תמציות השומנים מסוכנים. אנא הקפידו להשתמש בריג'נטים אלה במכסה המנוע של אדים כימיים ולהכיל את כל זרמי הפסולת.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Bacterial Inner-membrane Display for Screening a Library of Antibody Fragments

Inner-קרום חיידקי תצוגה להקרנת ספרייה של שברי נוגדן

Antibodies engineered for intracellular function must not only have affinity for their target antigen, but must also be soluble and correctly folded in ...

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

זיהוי של חומצות שומן ב<em&gt; Cereus בצילוס</em

The Bacillus species contain branched chain and unsaturated fatty acids (FAs) with diverse positions of the methyl branch (iso or anteiso) and of the ...

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

באמצעות הפיגום ליפוזומים כדי לשקם אינטראקציות ליפידים-הפרוקסימלי חלבונים<em&gt; במבחנה</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

Fatty Acid 13C Isotopologue Profiling Provides Insight into Trophic Carbon Transfer and Lipid Metabolism of Invertebrate Consumers

Fatty Acid 13C Isotopologue Profiling Provides Insight into Trophic Carbon Transfer and Lipid Metabolism of Invertebrate Consumers

חומצת שומן 13C איזוטופולוג פרופיל מספק תובנה מטבולי של הגעה צרכנים והעברת פחמן עם מחלות

Fatty acids (FAs) are useful biomarkers in food web ecology because they are typically assimilated as a complete molecule and transferred into consumer ...

Rapid Isolation of the Mitoribosome from HEK Cells

בידוד מהיר של Mitoribosome מתאי HEK

The human mitochondria possess a dedicated set of ribosomes (mitoribosomes) that translate 13 essential protein components of the oxidative ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

Assay ספקטרוסקופיה התנודות זריחה של אינטראקציות חלבון-חלבון באנשי קשר תא-תא

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

Single Liposome Measurements for the Study of Proton-Pumping Membrane Enzymes Using Electrochemistry and Fluorescent Microscopy

ליפוזום יחיד מדידות לצורך המחקר של משאבות פרוטונים אנזימים ממברנה בעזרת מיקרוסקופ פלואורסצנטי אלקטרוכימיה

Proton-pumping enzymes of electron transfer chains couple redox reactions to proton translocation across the membrane, creating a proton-motive force used ...

Enrichment of Native Lipoprotein Particles with microRNA and Subsequent Determination of Their Absolute/Relative microRNA Content and Their Cellular Transfer Rate

העשרה של ליפופרוטאין חלקיקים מקומיים עם מיקרואורנה והקביעה הבאה של התוכן המוחלט שלהם/מיקרוליאורנה וקצב העברת הסלולר שלהם

Lipoprotein particles are predominately transporters of lipids and cholesterol in the bloodstream. Furthermore, they contain small amounts of strands of ...

PeptiQuick, a One-Step Incorporation of Membrane Proteins into Biotinylated Peptidiscs for Streamlined Protein Binding Assays

PeptiQuick, שילוב של צעד אחד של חלבונים ממברנות לתוך ביוטילדיסקי Peptiquick עבור כריכת חלבון מפושטת

Membrane proteins, including transporters, channels, and receptors, constitute nearly one-fourth of the cellular proteome and over half of current drug ...