Name: isolation of lipoprotein particles from chicken egg yolk for the study of bacterial pathogen fatty acid incorporation into membrane phospholipids
Uploaded: 2019-05-15T14:30:00
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Agradecemos a los miembros del laboratorio Hammer por su evaluación crítica del manuscrito y el apoyo de este trabajo. El Dr. Alex Horswill de la Escuela de Medicina de la Universidad de Colorado amablemente proporcionó AH1263. El laboratorio del Dr. Chris Waters de la Universidad Estatal de Michigan proporcionó reactivos. Este trabajo fue apoyado por la concesión 16SDG30170026 de la Asociación Americana del Corazón y los fondos de puesta en marcha de la Universidad Estatal de Michigan.

NOTA: El siguiente protocolo para el enriquecimiento de partículas LDL de yema de huevo de pollo se deriva de Moussa et al. 200233.
1. Preparación de yema de huevo de pollo para el enriquecimiento de partículas LDL
<ol><li>Desinfecte dos huevos de pollo grandes lavando las cáscaras con una solución de etanol al 70% y deje secar al aire.</li>
	<li>Desinfecte el separador de huevos con una solución de etanol al 70% y deje secar al aire. Coloque el separador de hue...

S. aureus incorpora ácidos grasos exógenos en su membrana fosfolípidos27,32,43. La síntesis de fosfolípidos utilizando ácidos grasos exógenos evita la inhibición de faSII, pero también altera las propiedades biofísicas de la membrana27,32,44. Si bien la incorporación de ácidos grasos exógenos en fosfolípidos de pa...

S. aureus resistente a la meticilina (MRSA) es la principal causa de infección asociada a la atención sanitaria y la resistencia a los antibióticos asociada es un desafío clínico considerable1,2,3. Por lo tanto, el desarrollo de nuevas estrategias terapéuticas es una alta prioridad. Una estrategia de tratamiento prometedora para patógenos Gram-positivos está inhibiendo la síntesis de ácidos grasos, un requisito para la producción de fosfolípidos de membrana que, en S. aureus, incluye fosfatidilglicerol (PG), lisil-PG, y cardiolipina4. En bacterias, la producción de ácidos grasos se produce a través de la vía de síntesis de ácidos grasos II (FASII)5, que es considerablemente diferente de la contraparte eucariota, haciendo de FASII un objetivo atractivo para el desarrollo de antibióticos5,6 . Los inhibidores de FASII se dirigen principalmente a FabI, una enzima necesaria para el alargamiento de la cadena de carbono de ácidos grasos7. El inhibidor FabI triclosán se utiliza ampliamente en bienes de consumo y médicos8,9. Inhibidores Adicionales FabI están siendo desarrollados por varias compañías farmacéuticas para el tratamiento de la infección por S. aureus 10,11,12,13,14 ,15,16,17,18,19,20,21,22,23 ,24,25,26. Sin embargo, muchos patógenos Gram-positivos, incluyendo S. aureus, son capaces de barrer ácidos grasos exógenos para la síntesis de fosfolípidos, eludiendo la inhibición FASII27,28,29. Así, el potencial clínico de los inhibidores FASII se debate debido a considerables lagunas en nuestro conocimiento de las fuentes de ácidos grasos del huésped y los mecanismos por los cuales los patógenos extraen ácidos grasos del huésped27,28. Para abordar estas lagunas, desarrollamos un método de análisis lipidomico imparcial para monitorear la incorporación de ácidogra exógeno a partir de partículas de lipoproteínas en fosfolípidos de membrana de S. aureus.
Durante la sepsis, las partículas de lipoproteínas huésped representan una fuente potencial de ácidos grasos derivados del huésped dentro de la vasculatura, ya que la mayoría de los ácidos grasos del huésped están asociados con las partículas30. Las lipoproteínas consisten en una cáscara hidrófila compuesta de fosfolípidos y proteínas que encierran un núcleo hidrófobo de triglicéridos y ésteres de colesterol31. El huésped produce cuatro clases principales de lipoproteínas (quilomicron, lipoproteína de muy baja densidad, lipoproteína de alta densidad y lipoproteína de baja densidad (LDL)) y funcionan como vehículos de transporte de lípidos, suministrando ácidos grasos y colesterol hacia y desde células anfitrionas a través de la vasculatura. Los LDL son abundantes en ácidos grasos esterificados incluyendo triglicéridos y ésteres de colesterol31. Hemos demostrado previamente que los LDL humanos altamente purificados son una fuente viable de ácidos grasos exógenos para la síntesis de PG, proporcionando así un mecanismo para el bypass inhibidor de FASII32. La purificación de los LDL humanos puede ser técnicamente difícil y llevar mucho tiempo, mientras que las fuentes comerciales de LDL humanos purificados son prohibitivamente costosas de usar de forma rutinaria o para realizar pantallas bacterianas a gran escala. Para hacer frente a estas limitaciones, hemos modificado un procedimiento para el enriquecimiento de LDL a partir de la yema de huevo de pollo, una rica fuente de partículas de lipoproteínas33. Hemos utilizado con éxito espectrometría de masas no objetivo, de alta resolución/precisa y espectrometría de masas en tándem para monitorear la incorporación de ácidos grasos derivados de LDL humanos en la membrana de S. aureus32. A diferencia de los métodos reportados anteriormente, este enfoque puede cuantificar isómeros de ácidos grasos individuales para cada uno de los tres tipos principales de fosfolípidos estafilocócicos. El ácido oleico (18:1) es un ácido graso insaturado presente en todas las partículas de lipoproteínas del huésped que se incorpora fácilmente en S. aureus phospholipids29,30,32. S. aureus no es capaz de síntesis de ácido oleico29; por lo tanto, la cantidad de ácido oleico incorporado en fosfolípidos establece la presencia de ácidos grasos derivados de lipoproteínas huésped dentro de la membrana estafilocócica29. Estas especies de fosfolípidos pueden ser identificadas por el método de espectrometría de masas de última generación descrito aquí, ofreciendo una resolución sin precedentes de la composición de la membrana de S. aureus cultivada en presencia de una fuente de ácidos grasos que probablemente durante la infección.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ammonium sulfate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP212R-1</td>
			<td>&#8805;99.5% pure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture incubator</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>MaxQ 6000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrafuge</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>75-217-420</td>
			<td>Sorvall Legen XTR, rotor F14-6x250 LE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Costar assay plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3788</td>
			<td>96 well</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper</td>
			<td>Schleicher &#38; Schuell</td>
			<td>597</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large chicken egg</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Common store bought egg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate spectrophotometer</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>Epoch 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S. aureus strain AH1263</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Provided by Alex Horswill of the University of Colorado</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis tubing</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>68700</td>
			<td>7,000 MWCO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>Becton, Dickison and Company</td>
			<td>211705</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5 mm zirconium oxide beads</td>
			<td>Next Advance</td>
			<td>ZROB05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bullet Blender</td>
			<td>Next Advance</td>
			<td>BBX24B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol (LC-MS grade)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A4561</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform (reagent grade)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>MCX10559</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol (LC-MS grade)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A4611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimyristoyl phosphatidylcholine</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>850345C-25mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9830</td>
			<td>&#8805;99.5% pure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium formate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>70221-25G-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xcalibur software</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>OPTON-30801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LTQ-Orbitrap Velos mass spectrometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td>high resolution/accurate mass MS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 1260 capillary HPLC</td>
			<td>Agilent</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SpeedVac Vacuum Concentrators</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of lipoprotein particles from chicken egg yolk for the study of bacterial pathogen fatty acid incorporation into membrane phospholipids

Staphylococcus aureus y otros patógenos Gram-positivos incorporan ácidos grasos del medio ambiente en fosfolípidos de membrana. Durante la infección, la mayoría de los ácidos grasos exógenos están presentes dentro de las partículas de lipoproteínas del huésped. Sigue habiendo incertidumbre en cuanto a los reservorios de ácidos grasos huésped y los mecanismos por los cuales las bacterias extraen ácidos grasos de las partículas de lipoproteínas. En este trabajo, describimos protocolos para el enriquecimiento de partículas de lipoproteínas de baja densidad (LDL) a partir de yema de huevo de pollo y determinando si los LDL sirven como reservorios de ácidos grasos para S. aureus. Este método explota el análisis lipidémico imparcial y los LDL de pollo, un modelo eficaz y económico para la exploración de interacciones entre LDL y bacterias. El análisis de la integración de S. aureus de ácidos grasos exógenos de lDL se realiza utilizando espectrometría de masas de alta resolución/precisa y espectrometría de masas en tándem, permitiendo la caracterización de la composición de ácidos grasos de la bacteria identificación imparcial de nuevas combinaciones de ácidos grasos que surgen en los lípidos de la membrana bacteriana al exponerse a los LDL. Estas técnicas avanzadas de espectrometría de masas ofrecen una perspectiva sin igual de la incorporación de ácidos grasos al revelar los ácidos grasos exógenos específicos incorporados en los fosfolípidos. Los métodos descritos aquí son adaptables al estudio de otros patógenos bacterianos y fuentes alternativas de ácidos grasos complejos.

El protocolo para el enriquecimiento de LDL a partir de la yema de huevo de pollo se ilustra en la Figura1. Este proceso comienza diluyendo la yema de huevo entera con salina y separando los sólidos de yemade huevo conocidos como gránulos de la fracción soluble o plasmática que contiene los LDL (Figura 1)33. El contenido de LDL de la fracción plasmática se enriquece aún más con la<strong class="xfi...

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Isolation of Lipoprotein Particles from Chicken Egg Yolk for the Study of Bacterial Pathogen Fatty Acid Incorporation into Membrane Phospholipids

Aislamiento de partículas de lipoproteínas de yema de huevo de pollo para el estudio de la incorporación de ácidos grasos patógenos bacterianos en fosfolípidos de membrana

Este método proporciona un marco para el estudio de la incorporación de ácidos grasos exógenos de fuentes huésped complejas en membranas bacterianas, particularmente Staphylococcus aureus. Para lograrlo, se describen los protocolos para el enriquecimiento de partículas de lipoproteínas a partir de la yema de huevo de pollo y el posterior perfilado de ácidos grasos de fosfolípidos bacterianos utilizando espectrometría de masas.

Staphylococcus aureus and other Gram-positive pathogens incorporate fatty acids from the environment into membrane phospholipids. During infection, the ...

Este protocolo proporciona un marco para estudiar la incorporación de ácidos grasos exógenos de fuentes huésped complejas en membranas bacterianas, particularmente staphylococcus aureus. El protocolo utiliza análisis lipidómicos imparciales y partículas de lipoproteínas aisladas de las yemas de huevo de pollo como fuente económica de ácidos grasos complejos para cuantificar la incorporación de ácidos grasos en lípidos bacterianos. Las técnicas de espectrometría de masas que se describen aquí ofrecen una perspectiva sin igual del perfil de ácidos grasos de los lípidos estafilococos aureus, pero se pueden adaptar para estudiar otras membranas bacterianas.Al realizar este protocolo, se debe tener cuidado de que cada paso de fraccionamiento identifique y conserve la fracción que contiene LDL. La eliminación del sulfato de amoníaco de la fracción de plasma es fundamental para las aplicaciones posteriores de los LDL. Proporcionar un amplio espacio en el tubo y cambiar el agua según sea necesario para permitir la diálisis eficaz.Para comenzar, lave dos yemas de huevo dos veces con 30 mililitros de solución salina tamponada de fosfato estéril para eliminar la albúmina residual. Perfore la membrana vitellina con una punta de pipeta estéril y drene el contenido de la membrana en un tubo de centrífuga cónica estéril de 50 mililitros. Añadir aproximadamente de 24 a 30 mililitros o 17 molares de solución de cloruro sódico a pH siete a la yema del huevo y mezclar vigorosamente.A continuación, coloque el tubo en una coctelera para mezclar a cuatro grados centígrados durante 60 minutos. Centrifugar la dilución de la yema de huevo a 10 grados centígrados a 10.000 g durante 45 minutos. Transfiera la fracción de plasma sobrenadante en un tubo cónico estéril de 50 mililitros, dejando atrás la fracción granular peletónica.Y centrifugar otra vez. En primer lugar, mezcle la fracción de plasma con un 40 por ciento de sulfato de amonio por volumen de masa en un agitador o dispositivo similar a cuatro grados centígrados durante 60 minutos. Después de ajustar el pH, centrifugar la fracción de plasma a cuatro grados Celsius y 10.000 g durante una duración de 45 minutos.Retire la fracción amarilla semisólida superior en tubos de diálisis de tamaño de poro de siete kilodalton. Proporcione un mínimo del 25% de espacio adicional en el tubo para permitir que se hinche. Coloque el tubo de diálisis en tres litros de agua ultrapura para dializar durante la noche a tres grados centígrados para eliminar el sulfato de amonio.Después de la diálisis, centrifugar la solución a cuatro grados centígrados como se describió anteriormente. Retire con cuidado la fracción amarilla semisólida superior a un tubo estéril y guárdelo a cuatro grados centígrados. Después de la incubación nocturna del cultivo, transfiera 500 microlitros a dos matraces estériles de 250 mililitros conflectores que contengan 49,5 mililitros de caldo de triptona al 1%.Incubar durante aproximadamente cuatro horas a 37 grados centígrados con temblores para alcanzar la fase media larga. Transfiera 100 mililitros de cultivo en incrementos de 25 mililitros a cuatro tubos estériles de centrífuga de 50 mililitros y centrifuga los cuatro tubos a 10.000 veces g para peletizar las células. Retire el sobrenadante y vuelva a suspender cada pellet celular en 750 microlitros de caldo de triptona al 1%.Combine las cuatro suspensiones de células de microlitro 750 en un solo tubo de 15 mililitros. Y alícuota 350 microlitros de la suspensión celular en seis tubos estériles de centrífuga de 1,5 mililitros. Utilice una pipeta para añadir 30 microlitros de LDL en el tubo centrífugo de 1,5 mililitros para lograr una concentración final deseada del 5% e incubar a 37 grados centígrados con temblores durante cuatro horas.Centrifugar las culturas a cuatro grados centígrados a 16.000 veces g durante una duración de dos minutos. Y re-suspenda los gránulos celulares en 330 microlitros de solución salina estéril tamponada al fosfato para lavar. Repita este lavado una vez más.Registre el peso de los seis gránulos de células húmedas restando el peso del tubo vacío. Congela los gránulos de la célula sobre hielo seco. Primero agregue una cucharada de cuentas de óxido de circonio de 5 milímetros en la parte superior de cada pellet celular.Agregue 740 microlitros de metanol de grado 75%HPLC refrigerados a menos 80 grados Celsius directamente en cada tubo. A continuación, añadir dos microlitros de 50 micromolar dimyristoyl fosfatidilcolina como un estándar interno. Coloque la muestra que contiene tubos centrífugos de 1,5 mililitros en un puerto disponible en un homogeneizador de tejido mezclador de balas.Homogeneizar las muestras a baja velocidad. Fijando de dos a tres durante tres minutos. Inspeccione visualmente las muestras en busca de homogeneidad.Si los grupos de células son visibles, continúe la homogeneización en la licuadora de balas en incrementos de dos minutos. A continuación, añada 270 microlitros de cloroformo a cada muestra en una campana de humo química. Vórtice las muestras vigorosamente durante 30 minutos.Centrifugar las muestras en una centrífuga de sobremesa hasta 30 minutos como mínimo de 2.000 g. En la campana de humo químico, recoger el sobrenadante monofásico y transferirlo a un nuevo tubo de ensayo evitando cuidadosamente el pellet de proteína en la parte inferior del tubo de extracción. Transfiera los extractos de lípidos diluidos previamente preparados a un vial de automuestreador adecuado.Para el análisis basado en inyección de flujo, coloque los viales de muestreador automático en un muestreador automático controlado por temperatura de un sistema HPLC que sea capaz de aplicaciones de flujo capilar. Configure el sistema HPLC de acuerdo con el manuscrito. El eluyente se introduce desde la línea de transferencia HPLC al espectrómetro de masas a través de una fuente de ionización de electrospray equipada con una aguja metálica de bajo flujo de calibre 34.En el software de control de instrumentos Thermo Tune Plus, ajuste la tensión de ionización a 4.000 voltios y el gas de vaina en cinco. Del mismo modo, ajuste la temperatura capilar a 150 grados Celsius y la lente S en 50%Haga clic en el botón definir escaneo, y en el menú del analizador, seleccione FTMS. Establezca el campo de rango de masa en normal y, en el campo de resolución, seleccione 100.000.Asegúrese de que el tipo de análisis esté establecido en full. En el menú Rangos de escaneo, escriba 200 en el primer campo de masa e introduzca 2.000 en el último campo de masa. Después de definir aún más la precisión de masa observada, promedia la señal a través del pico amplio en el cromatograma iónico total.Haga clic con el botón derecho en el icono de la huella digital en la ventana de visualización del espectro de masas y seleccione ver la lista de espectro. En el mismo menú, seleccione las opciones de visualización y, a continuación, el cuadro de alternancia de todos los picos en el menú de visualización. Haga clic en el botón Aceptar para cerrar la ventana de visualización.Haga clic con el botón derecho en el icono de la huella digital en la ventana de visualización del espectro de masas de nuevo y seleccione la masa exacta del portapapeles de exportación. Pegue la celda de datos exportada A1 de la primera hoja de trabajo en la nueva hoja de cálculo de Excel y continúe de acuerdo con el manuscrito. Para realizar identificaciones precisas de lípidos basados en masa, abra el software LIMSA.En el menú principal, seleccione la lista de picos en el menú de tipo de espectro. Seleccione el modo positivo o el modo negativo para que se corresponda con la polaridad en la que se adquirieron los datos de espectrometría de masas. En el ancho completo del pico a la mitad máximo y sobre la ventana z, introduzca la ventana de búsqueda en masa deseada para la búsqueda de picos.En este protocolo, el contenido de LDL de la fracción plasmática se enriqueció aún más con la precipitación de los levitinas beta de 30 a 40 kilodalton. La presencia de bandas proteicas a 140, 80, 65, 60 y 15 kilodalton se correlacionan con las apoproteínas de las LDL.Mientras que suplementar cultivos con plasma de yema de huevo como fuentes de ácidos grasos exógenos supera la inhibición del crecimiento inducido por triclosán. Del mismo modo, la suplementación de cultivos tratados con triclosán con LDL de yema de huevo enriquecida restaura el crecimiento. Además, la adición de LDL de yema de huevo apoya el crecimiento de un ácido graso S.aureus previamente caracterizado, auxotroph.El contenido de ácidos pregrasados se midió en un 1%caldo de triptona o LDL de yema de huevo de pollo mediante el empleo de espectrometría de masas precisa de alta resolución de inyección de flujo. Se encontraron cantidades mínimas de ácido graso libre. Ortogonal parcial mínimos cuadrados análisis discriminantes de abundante estafiloco aureus membrana fosfolípidos demostrado clara separación de clase, con una composición de ácidos grasos de condiciones tratadas con LDL de yema de huevo de pollo y sin tratar.El enriquecimiento de los LDL de la yema de huevo de pollo proporciona una fuente barata de ácidos grasos complejos para investigar las interacciones entre patógenos bacterianos y lipoproteínas de huésped. El cloroformo y el metanol utilizados en la preparación de extractos de lípidos son peligrosos. Por favor, asegúrese de utilizar estos reactivos en una campana de humos químicos y contener todos los flujos de residuos.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Bacterial Inner-membrane Display for Screening a Library of Antibody Fragments

Visualización interior de la membrana bacteriana para la selección de una biblioteca de fragmentos de anticuerpos

Antibodies engineered for intracellular function must not only have affinity for their target antigen, but must also be soluble and correctly folded in ...

Investigación

Bioquímica

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identificación de los ácidos grasos en la<em&gt; Bacillus cereus</em

The Bacillus species contain branched chain and unsaturated fatty acids (FAs) with diverse positions of the methyl branch (iso or anteiso) and of the ...

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

El uso de andamios liposomas para reconstituir las interacciones proteína-proteína-lípidos proximal<em&gt; In Vitro</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

Fatty Acid 13C Isotopologue Profiling Provides Insight into Trophic Carbon Transfer and Lipid Metabolism of Invertebrate Consumers

Fatty Acid 13C Isotopologue Profiling Provides Insight into Trophic Carbon Transfer and Lipid Metabolism of Invertebrate Consumers

Perfiles de ácidos grasos 13C Isotopologue proporciona una idea de la transferencia trófica de carbono y metabolismo de los lípidos de los consumidores invertebrados

Fatty acids (FAs) are useful biomarkers in food web ecology because they are typically assimilated as a complete molecule and transferred into consumer ...

Rapid Isolation of the Mitoribosome from HEK Cells

Aislamiento rápido de la Mitoribosome de las células HEK

The human mitochondria possess a dedicated set of ribosomes (mitoribosomes) that translate 13 essential protein components of the oxidative ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

Un análisis de espectroscopia de fluorescencia fluctuación de interacciones de proteínas en los contactos célula-célula

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

Single Liposome Measurements for the Study of Proton-Pumping Membrane Enzymes Using Electrochemistry and Fluorescent Microscopy

Medidas solo de liposomas para el estudio de enzimas de membrana bombas de protones usando electroquímica y microscopia fluorescente

Proton-pumping enzymes of electron transfer chains couple redox reactions to proton translocation across the membrane, creating a proton-motive force used ...

Enrichment of Native Lipoprotein Particles with microRNA and Subsequent Determination of Their Absolute/Relative microRNA Content and Their Cellular Transfer Rate

Enriquecimiento de partículas de lipoproteínas nativas con microRNA y determinación posterior de su contenido absoluto/relativo de microRNA y su tasa de transferencia celular

Lipoprotein particles are predominately transporters of lipids and cholesterol in the bloodstream. Furthermore, they contain small amounts of strands of ...

PeptiQuick, a One-Step Incorporation of Membrane Proteins into Biotinylated Peptidiscs for Streamlined Protein Binding Assays

PeptiQuick, una incorporación de un solo paso de proteínas de membrana en peptidiscos biotinylados para ensayos de unión a proteínas optimizadas

Membrane proteins, including transporters, channels, and receptors, constitute nearly one-fourth of the cellular proteome and over half of current drug ...