Name: isolation of lipoprotein particles from chicken egg yolk for the study of bacterial pathogen fatty acid incorporation into membrane phospholipids
Uploaded: 2019-05-15T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Lipoprotein Particles from Chicken Egg Yolk for the Study of Bacterial Pathogen Fatty Acid Incorporation into Membrane Phospholipids at JoVE.com

Biz bu işin el yazması ve destek kritik değerlendirme için Hammer laboratuar üyelerine teşekkür ederiz. Dr Alex Horswill üniversite Colorado Okulu tıp nazik AH1263 sağladı. Dr. Chris Waters laboratuar Michigan State Üniversitesi reaktifler sağladı. Bu çalışma Amerikan Kalp Derneği Grant 16, 30170026 ve başlangıç fonları Michigan State Üniversitesi tarafından sağlanan tarafından desteklenmektedir.

Not: tavuk yumurtası sarısı gelen LDL partiküllerin zenginleştirme için aşağıdaki protokol Moussa ve al. 200233.
1. LDL parçacıklarının zenginleşmesi için tavuk yumurtası sarısı hazırlanması
<ol><li>70% etanol çözeltisi ile kabukları yıkayarak iki büyük tavuk yumurtası sanitize ve kuru hava sağlar.</li>
	<li>% 70 etanol çözeltisi kullanarak yumurta ayırıcı sanitize ve kuru hava sağlar. Yumurta ayırıcı orta ölçekli bir Beaker duda...

S. aureus membran fosfolipidlerin içine eksojen yağ asitleri birleştirir27,32,43. Eksojen yağ asitleri kullanarak fosfolipid sentezi fasii inhibisyonu atlar ama aynı zamanda membranın Biyofizik özelliklerini değiştirir27,32,44. Gram-pozitif patojenlerin fosfolipidlerine eksojen yağ asitleri eklenmesi iyi belgelenmiş ...

Metikiline dayanıklı S. aureus (MRSA) sağlık bağlantılı enfeksiyonun önde gelen nedenidir ve ilişkili antibiyotik direnci önemli bir klinik zorluk1,2,3. Bu nedenle, yeni terapötik stratejilerin geliştirilmesi yüksek önceliktir. Gram-pozitif patojenler için umut verici bir tedavi stratejisi yağ asidi sentezini inhibe ediyor, S. aureus'ta fosfatidilgliserin (PG), lysyl-PG ve kardiyolipin4içeren membran fosfolipid üretiminin bir gereksinimi. Bakterilerde, yağ asidi üretimi yağ asidi sentezi II yolu (fasii)5ile gerçekleşir, bu da ökaryotik mevkidaşı 'ndan önemli ölçüde farklıdır, antibiyotik gelişimi için fasii 'ye cazip bir hedef haline gelir5,6 . FASıı inhibitörleri öncelikle FabI hedef, yağ asidi karbon zincir uzaması için gerekli bir enzim7. Fabi inhibitörü triklosan, tüketici ve tıbbi malların8,9' da geniş çapta kullanılmaktadır. Ek Fabi inhibitörleri S. aureus enfeksiyonu tedavisi için çeşitli ilaç şirketleri tarafından geliştirilmiştir10,11,12,13,14 ,15,16,17,18,19,20,21,22,23 ,24,25,26. Ancak, S. aureusdahil olmak üzere birçok gram-pozitif patojenler, fosfolipid sentezi için eksojen yağ asitleri atma yeteneğine sahiptir, fasii inhibisyonu bypass27,28,29. Bu nedenle, fasii inhibitörlerinin klinik potansiyeli, ana yağ asitleri kaynaklarının bilgilerimizde önemli boşluklar ve patojenler,27,28ana gelen yağ asitleri ayıklamak mekanizmaları nedeniyle tartışılır. Bu boşlukları ele almak için, lipoprotein parçacıklarından S. aureusmembran fosfolipidlerine kadar eksojen yağ asidin birleştirildiğini izlemek için tarafsız bir lipidomik analiz yöntemi geliştirdik.
Sepsis sırasında, ana yağ asitleri çoğunluğu parçacıklar30ile ilişkili olarak ev sahibi lipoprotein parçacıkları damar içinde ev sahibi türetilmiş yağ asitleri potansiyel bir kaynak temsil eder. Lipoproteinler, trigliserid ve kolesterol esterlerinin hidrofobik çekirdeğini kapsayan fosfolipidler ve proteinlerden oluşan hidrofilik bir kabuk oluşur31. Lipoproteinleri dört ana sınıfları--chylomicron, çok düşük yoğunluklu lipoprotein, yüksek yoğunluklu lipoprotein, ve düşük yoğunluklu lipoprotein (LDL)-, lipid taşıma araçları olarak ev sahibi ve fonksiyon tarafından üretilen yağ asitleri ve kolesterol teslim ve hücreleri damar üzerinden barındırabilir. LDLs trigliserid ve kolesterol esterleri de dahil olmak üzere esterleşmiş yağ asidi bol31. Daha önce son derece saflaştırılmış insan Ldıs PG sentezi için eksojen yağ asitleri uygun bir kaynak olduğunu göstermiştir, böylece FASıı inhibitörü bypass32için bir mekanizma sağlar. İnsan LDL 'Leri arındırmak, teknik olarak zorlu ve zaman alıcı olabilir, çünkü saflaştırılmış insan LDL 'lerin ticari kaynakları rutin olarak kullanmak veya büyük ölçekli bakteriyel ekranlar gerçekleştirmek için yasak şekilde pahalıdır. Bu sınırlamaları gidermek için, biz tavuk yumurta sarısı, lipoprotein parçacıkları33zengin bir kaynak ldls zenginleştirme için bir prosedür değiştirildi. İnsan LDL türevi yağ asitlerinin S. aureus32membranı içine eklenmesi için hedefsiz, yüksek çözünürlüklü/doğru kütle spektrometresi ve tandem kütle spektrometresi başarıyla kullandık. Daha önce bildirilen yöntemlerden farklı olarak, bu yaklaşım üç büyük stafilokok fosfolipid türünün her biri için bireysel yağ asidi izomerleri ölçebilir. Oleik asit (18:1) S. aureus fosfolipidler29,30,32içine kolayca dahil tüm ev sahibi lipoprotein parçacıkları içinde mevcut doymamış bir yağ asidi. S. aureus oleik asit sentezi29yeteneğine sahip değildir; Bu nedenle, fosfolipid-Incorporated oleik asit miktarı stafilokok membran içinde Host lipoprotein türetilmiş yağ asitleri varlığı kurar29. Bu fosfolipid türler, burada açıklanan State-of-the-art kitle spektrometresi yöntemi ile tespit edilebilir, bir yağ asidi kaynağının varlığında S. aureus küllik eşsiz çözünürlüğü sunan büyük olasılıkla enfeksiyon sırasında karşılaşır.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ammonium sulfate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP212R-1</td>
			<td>&#8805;99.5% pure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture incubator</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>MaxQ 6000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrafuge</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>75-217-420</td>
			<td>Sorvall Legen XTR, rotor F14-6x250 LE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Costar assay plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3788</td>
			<td>96 well</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper</td>
			<td>Schleicher &#38; Schuell</td>
			<td>597</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large chicken egg</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Common store bought egg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate spectrophotometer</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>Epoch 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S. aureus strain AH1263</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Provided by Alex Horswill of the University of Colorado</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis tubing</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>68700</td>
			<td>7,000 MWCO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>Becton, Dickison and Company</td>
			<td>211705</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5 mm zirconium oxide beads</td>
			<td>Next Advance</td>
			<td>ZROB05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bullet Blender</td>
			<td>Next Advance</td>
			<td>BBX24B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol (LC-MS grade)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A4561</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform (reagent grade)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>MCX10559</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol (LC-MS grade)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A4611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimyristoyl phosphatidylcholine</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>850345C-25mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>9830</td>
			<td>&#8805;99.5% pure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium formate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>70221-25G-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xcalibur software</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>OPTON-30801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LTQ-Orbitrap Velos mass spectrometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td>high resolution/accurate mass MS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 1260 capillary HPLC</td>
			<td>Agilent</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SpeedVac Vacuum Concentrators</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of lipoprotein particles from chicken egg yolk for the study of bacterial pathogen fatty acid incorporation into membrane phospholipids

Staphylococcus aureus ve diğer gram-pozitif patojenler, çevreye gelen yağ asitleri membranlı fosfolipidlere dahil ederler. Enfeksiyon sırasında, eksojen yağ asitleri çoğunluğu ana lipoprotein parçacıkları içinde mevcut. Belirsizlik, ana yağ asitleri rezervuarında ve bakterilerin lipoprotein parçacıklarından yağ asitleri özü olan mekanizmalar olarak kalır. Bu çalışmanın içinde, tavuk yumurtası sarısı ile düşük yoğunluklu lipoprotein (LDL) parçacıklarının zenginleşmesi ve LDL 'Lerin S. aureusiçin yağ asidi rezervuarları olarak hizmet edip etmediğini belirlemek için protokoller açıklanmaktadır. Bu yöntem, tarafsız lipidomik analiz ve tavuk Ldıs, Ldıs ve bakteriler arasındaki etkileşimlerin keşfi için etkili ve ekonomik bir model istismar. LDL 'lerden eksojen yağ asitleri S. aureus entegrasyonu Analizi yüksek çözünürlüklü/doğru kütle spektrometresi ve tandem kütle spektrometresi kullanılarak gerçekleştirilir, bakteriyel yağ asidi bileşiminin karakterizasyonu sağlayan membran ve Ldıs maruz kaldıktan sonra bakteriyel membran lipidlerde ortaya çıkan yağ asitleri yeni kombinasyonları tarafsız tanımlaması. Bu gelişmiş kütle spektrometresi teknikleri, fosfolipidlere dahil edilen özel eksojen yağ asitlerini açığa çıkararak yağ asidi birleştirmesi için eşsiz bir perspektif sunar. Burada özetlenen Yöntemler diğer bakteriyel patojenlerin incelenmesi ve karmaşık yağ asitleri alternatif kaynaklarının uyarlanabilir.

Tavuk yumurtası sarısı tarafından LDL zenginleştirme Protokolü Şekil 1' de gösterilmiştir. Bu işlem, tüm yumurta sarısı ile tuz seyreltilerek başlar ve yumurta sarısı katıları ayrıştırmadan veya plazma kesir Ldıs içeren granül olarak adlandırılan ayıran (Şekil 1)33. Plazma fraksiyonu LDL içeriği daha fazla yağış ile zenginleştirilmiştir ~ 30-40 kDa β-livetins (<strong cl...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Lipoprotein Particles from Chicken Egg Yolk for the Study of Bacterial Pathogen Fatty Acid Incorporation into Membrane Phospholipids at JoVE.com

Isolation of Lipoprotein Particles from Chicken Egg Yolk for the Study of Bacterial Pathogen Fatty Acid Incorporation into Membrane Phospholipids

Membran fosfolipidler içine bakteriyel patojen yağ asidi kuruluş çalışması için tavuk yumurtası sarısı lipoprotein parçacıklarının yalıtım

Bu yöntem, özellikle Staphylococcus aureusgibi kompleks ana kaynaklardan gelen eksojen yağ asitleri dahil etmek için bir çerçeve sağlar. Bunu başarmak için, tavuk yumurtası sarısı ve kütle spektrometresi kullanan bakteriyel fosfolipidlerin sonraki yağ asidi profillerinden lipoprotein parçacıklarının zenginleşmesi için protokoller açıklanmıştır.

Staphylococcus aureus and other Gram-positive pathogens incorporate fatty acids from the environment into membrane phospholipids. During infection, the ...

Bu protokol, kompleks konak kaynaklardan eksojen yağ asitlerinin bakteri zarlarına, özellikle staphylococcus aureus'a dahil edilmesi için bir çerçeve sağlar. Protokol, bakterilipine yağ asidi eklenmesini ölçmek için karmaşık yağ asitlerinin ekonomik kaynağı olarak tavuk yumurtası sarısından izole edilen tarafsız lipidomik analiz ve lipoprotein partiküllerini kullanmaktadır. Kütle spektrometresi teknikleri burada staphylococcus aureus lipidlerin yağ asidi profili benzersiz bir bakış açısı sunmak açıklar, ancak diğer bakteri membranları çalışmaya adapte edilebilir.Bu protokolü gerçekleştirirken, LDL içeren fraksiyonu tanımlamak ve korumak için her kesirasyon adımına dikkat edilmelidir. Plazma fraksiyonundan amonson sülfat çıkarılması LDLs downstream uygulamaları için önemlidir.Başlamak için, iki yumurta sarısı iki kez steril fosfat tamponlu tuzlu 30 mililitre ile yıkamak artık albumin kaldırmak için. Vitellin membranını steril pipet ucuyla delin ve membranın içeriğini steril 50 mililitrelik konik santrifüj tüpüne boşaltın. Yaklaşık 24 ila 30 mililitre veya 17 molar sodyum klorür çözeltisi pH yedi yumurta sarısı ekleyin ve şiddetle karıştırın.Sonra 60 dakika boyunca dört derece santigrat karıştırmak için bir sallanan shaker üzerine tüp yerleştirin. 45 dakika boyunca 10 santigrat derecede yumurta sarısı seyreltme santrifüj 10, 000 kez g 45 dakika. Supernatant plazma fraksiyonu steril 50 mililitre konik tüp içine transfer, peletli granüler fraksiyonu geride bırakarak.Ve yine santrifüj. İlk olarak, 60 dakika boyunca dört derece santigrat bir sallanan shaker veya benzer bir cihaz üzerinde 40 kütle hacmi yüzde amonyum sülfat ile plazma fraksiyonu karıştırın. pH'ı ayarladıktan sonra plazma fraksiyonu 45 dakika süreyle dört santigrat derece ve 10,000 zaman g'de santrifüj edin.Yedi kilodalton gözenek boyutu diyaliz tüpü içine üst yarı katı sarı fraksiyonu çıkarın. Şişmesi için tüp ekstra oda en az% 25 sağlayın. Amonyum sülfat kaldırmak için üç derece santigrat gecede diyaliz için ultrasaf su üç litre diyaliz tüpü yerleştirin.Diyalizden sonra çözeltiyi daha önce açıklandığı gibi dört santigrat derecede santrifüj edin. Üst, yarı katı sarı fraksiyonu steril bir tüpe dikkatlice çıkarın ve dört santigrat derecede saklayın. Kültürün bir gecede kuluçkasonra, iki steril 250 mililitre baffled şişeler içine 500 mikrolitre aktarın 49.5 mililitre içeren 1% tripon suyu.37 santigrat derecede yaklaşık dört saat boyunca inkübed ve orta-uzun fazulaşmak için sallayarak. 25 mililitrelik artışlarla 100 mililitre kültürü dört steril 50 mililitrelik santrifüj tüpüne aktarın ve dört tüpü 10,000 kez g'de santrifüj edin. Supernatant çıkarın ve % 1 tripon suyu 750 mikrolitre her hücre pelet yeniden askıya.Tek bir 15 mililitrelik tüp içine dört 750 mikrolitre hücre süspansiyonlar birleştirin. Ve aliquot 350 mikrolitre hücre süspansiyonu altı steril 1.5 mililitre lik santrifüj tüpüne dönüşür. İstenilen son konsantrasyonu %5'e çıkarmak için 1,5 mililitrelik santrifüj tüpüne 30 mikrolitre LDL eklemek için bir pipet kullanın ve 4 saat boyunca sallayarak 37 derecede kuluçkaya yatın.Kültürleri 16,000 kez g'de dört derece santigrat derecede iki dakika süreyle santrifüj edin. Ve 330 mikrolitre steril fosfat tamponlu tuzlu suyla hücre peletlerini yeniden askıya alın. Bu yıkamayı bir kez daha tekrarlayın.Boş tüpün ağırlığını çıkararak altı ıslak hücreli peletin ağırlığını kaydedin. Snap kuru buz üzerinde hücre pelet dondurmak. İlk her hücre pelet üstüne 5 milimetre zirkonyum oksit boncuk bir kepçe ekleyin.Her tüp içine eksi 80 santigrat derece soğutulmuş 75% HPLC sınıf metanol 740 mikrolitre ekleyin. Sonra bir iç standart olarak 50 mikromistoil fosfatidilkolin iki mikrolitre ekleyin. 1,5 mililitrelik santrifüj tüpleriçeren numuneyi bir mermi blender doku homogenizer üzerinde kullanılabilir bir bağlantı noktasına yerleştirin.Düşük hızda örnekleri homojenize. Üç dakika için 2-3 ayarlı. Homojenlik için örnekleri görsel olarak inceleyin.Hücre kümeleri görünürse, iki dakikalık artışlarla mermi karıştırıcısında homojenleştirmeye devam edin. Sonraki kimyasal duman kaputunda her örnek için kloroform 270 mikrolitre ekleyin. 30 dakika boyunca güçlü bir şekilde örnekleri girdap.Numuneleri en az 2,000 kez 30 dakikaya kadar bir bank üstü santrifüjde santrifüj edin. Kimyasal duman kaputunda, monophasik supernatant toplamak ve dikkatle ekstraksiyon tüpünün altındaki protein pelet kaçınarak yeni bir test tüpü ne aktarın. Daha önce hazırlanan seyreltilmiş lipid ekstrelerini uygun bir otoörnekleyici şişeye aktarın.Akış enjeksiyonu tabanlı analiz için, otosampler şişelerini kapiller akış uygulamaları yapabilen bir HPLC sisteminin sıcaklık kontrollü otoörnekleyicisine yerleştirin. El yazmasına göre HPLC sistemini kur. Elüent, HPLC transfer hattından kütle spektrometresine düşük akışlı 34 gauge metal iğne ile donatılmış bir elektrosprey iyonizasyon kaynağı ile tanıtılır.Thermo Tune Plus cihaz kontrol yazılımında iyonizasyon voltajını 4.000 volta, kılıf gazını ise beş volta ayarlayın. Benzer şekilde, kılcal damar sıcaklığını 150 dereceye, S-lensi %50'ye ayarlayın Tanımla düğmesini tıklatın ve çözümleyici menüsünde FTMS'yi seçin. Kütle aralığı alanını normale ayarlayın ve çözünürlük alanında 100,000'i seçin.Tbmktürtürün tam olarak ayarlandığından emin olun. Scan aralıkları menüsünün altında, ilk kütle alanına 200 girin ve son kütle alanına 2,000 girin. Gözlenen kütle doğruluğunu daha da tanımladıktan sonra, toplam iyon kromatogramında geniş tepe boyunca sinyalin ortalamasını belirleyin.Kitle spektrum görüntüleme penceresindeki raptiye simgesine sağ tıklayın ve görünüm spektrum listesini seçin. Aynı menüden ekran seçeneklerini seçin ve ardından ekran menüsündeki tüm zirveler kutuyu geçiştirin. Görüntüleme penceresini kapatmak için tamam düğmesini tıklatın.Kitle spektrum görüntüleme penceresindeki raptiye simgesine tekrar tıklayın ve dışa aktarma panosunu tam kütleyi seçin. İlk çalışma sayfasının dışa aktarılan veri hücresi A1'i yeni Excel elektronik tablosuna yapıştırın ve el yazmasına göre devam edin. Doğru kütle tabanlı lipid tanımlamaları gerçekleştirmek için LIMSA yazılımını açın.Ana menüden, spektrum türü menüsüaltında tepe listesini seçin. Kütle spektrometresi verilerinin elde edildiği polariteile karşılık gelecek pozitif modu veya negatif modu seçin. En yüksek tam genişlikte ve z penceresinin üzerinde, en yüksek bulgu için istediğiniz toplu arama penceresini girin.Bu protokolde plazma fraksiyonunun LDL içeriği 30 ila 40 kilodalton beta levitinin yağışla daha da zenginleştirildi. 140, 80, 65, 60 ve 15 kilodaltonprotein bantlarının varlığı LDL'lerin apoproteinleri ile ilişkilidir.Eksojen yağ asidi kaynakları olarak yumurta sarısı plazma ile kültürleri tamamlayan triklosan kaynaklı büyüme inhibisyonu üstesinden gelir. Benzer şekilde, zenginleştirilmiş yumurta sarısı LDL ile triklosan tedavi kültürlerin takviyesi büyüme geri. Ayrıca, yumurta sarısı LDLs eklenmesi daha önce karakterize S.aureus yağ asidi, auxotroph büyümesini destekler.Pre-yağ asidi içeriği% 1 tripton suyu veya tavuk yumurtası sarısı LDL akış enjeksiyonu yüksek çözünürlüklü doğru kütle spektrometresi istihdam tarafından ölçüldü. Az miktarda serbest yağ asidi bulundu. Bol stafilokok aureus membran fosfolipidlerin Ortogonal parsiyel en az kareler ayrımcı analizi, işlenmemiş ve tavuk yumurtası sarısı LDL tedavi koşulları bir yağ asidi bileşimi ile, açık sınıf ayırma gösterdi.Tavuk yumurtası sarısı LDLs zenginleştirme bakteriyel patojenler ve konak lipoproteinler arasındaki etkileşimleri araştırmak için karmaşık yağ asitleri ucuz bir kaynak sağlar. Lipid ekstrelerinin hazırlanmasında kullanılan kloroform ve metanol tehlikelidir. Lütfen bu reaktifleri kimyasal bir duman başlığında kullandığınızdan ve tüm atık akışlarını içerdiğinden emin olun.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Bacterial Inner-membrane Display for Screening a Library of Antibody Fragments

Antikor parçalarının bir kütüphanenin taranması için bakteriyel iç zar görüntü

Antibodies engineered for intracellular function must not only have affinity for their target antigen, but must also be soluble and correctly folded in ...

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

Yağ Asitlerinin Tanımlanması içinde<em&gt; Bacillus cereus</em

The Bacillus species contain branched chain and unsaturated fatty acids (FAs) with diverse positions of the methyl branch (iso or anteiso) and of the ...

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

İskele Lipozomlar kullanarak Lipid-proksimal protein-protein etkileşimleri Sulandırın için<em&gt; İn Vitro</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

Fatty Acid 13C Isotopologue Profiling Provides Insight into Trophic Carbon Transfer and Lipid Metabolism of Invertebrate Consumers

Fatty Acid 13C Isotopologue Profiling Provides Insight into Trophic Carbon Transfer and Lipid Metabolism of Invertebrate Consumers

Yağ asidi 13C profil oluşturma Isotopologue trofik karbon Transfer ve Lipid metabolizması, omurgasız tüketicilerin sağlar

Fatty acids (FAs) are useful biomarkers in food web ecology because they are typically assimilated as a complete molecule and transferred into consumer ...

Rapid Isolation of the Mitoribosome from HEK Cells

Hızlı izole edilmesi HEK hücrelerden Mitoribosome

The human mitochondria possess a dedicated set of ribosomes (mitoribosomes) that translate 13 essential protein components of the oxidative ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

Bir floresan dalgalanma spektroskopisi tahlil Protein-Protein etkileşimlerinin hücre-hücre kişiler

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

Single Liposome Measurements for the Study of Proton-Pumping Membrane Enzymes Using Electrochemistry and Fluorescent Microscopy

Proton pompalama membran enzimler elektrokimya ve floresan mikroskopisi kullanılarak incelenmesi için tek lipozom ölçümleri

Proton-pumping enzymes of electron transfer chains couple redox reactions to proton translocation across the membrane, creating a proton-motive force used ...

Enrichment of Native Lipoprotein Particles with microRNA and Subsequent Determination of Their Absolute/Relative microRNA Content and Their Cellular Transfer Rate

MicroRNA ile yerli lipoprotein parçacıkları zenginleştirme ve onların mutlak/bağıl microRNA Içerik ve onların hücresel transfer hızı sonraki belirlenmesi

Lipoprotein particles are predominately transporters of lipids and cholesterol in the bloodstream. Furthermore, they contain small amounts of strands of ...

PeptiQuick, a One-Step Incorporation of Membrane Proteins into Biotinylated Peptidiscs for Streamlined Protein Binding Assays

PeptiQuick, Aerodinamik Protein Bağlayıcı Tahliller için Biyotinylated Peptidiskler içine Membran Proteinlerin Bir Adım Dahil

Membrane proteins, including transporters, channels, and receptors, constitute nearly one-fourth of the cellular proteome and over half of current drug ...