Name: murine model of central venous stenosis using aortocaval fistula with an outflow stenosis
Uploaded: 2019-07-11T13:00:00
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Ce travail a été soutenu par le National Institute of Health (NIH) des États-Unis Grant R01-HL128406; le prix I01-BX00236 du Programme d'examen du mérite du Ministère des Anciens Combattants des États-Unis pour la recherche et le développement en laboratoire biomédical; ainsi qu'avec les ressources et l'utilisation des installations au va Connecticut Healthcare System, West Haven, CT.

Toutes les expériences ont été réalisées avec l'approbation du Comité institutionnel de soins et d'utilisation des animaux de l'Université Yale (IACUC).
1. Anesthésie et procédures préopératoires
<ol><li>Stériliser tous les instruments et matériaux chirurgicaux en autoclantant. Activez le dispositif de support thermique pour être certain qu'il est chaud (40 à 42 oC).</li>
	<li>Placez une souris C57BL/6 de 9 à 11 semaines dans une chambre d'induction acrylique et anesthésiez-...

<ol>
	<li>Dember, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+clopidogrel+on+early+failure+of+arteriovenous+fistulas+for+hemodialysis:+a+randomized+controlled+trial.">Effect of clopidogrel on early failure of arteriovenous fistulas for hemodialysis: a randomized controlled trial.</a> JAMA. 299 (18), 2164-2171 (2008).</li><li>Dixon, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+don't+fistulas+mature?.">Why don't fistulas mature?.</a> Kidney International. 70 (8), 1413-1422 (2006).</li><li>Wilmink, T., Hollingworth, L., Powers, S., Allen, C., Dasgupta, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+History+of+Common+Autologous+Arteriovenous+Fistulae:+Consequences+for+Planning+of+Dialysis.">Natural History of Common Autologous Arteriovenous Fistulae: Consequences for Planning of Dialysis.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 51 (1), 134-140 (2016).</li><li>Al-Jaishi, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patency+rates+of+the+arteriovenous+fistula+for+hemodialysis:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Patency rates of the arteriovenous fistula for hemodialysis: a systematic review and meta-analysis.</a> American Journal of Kidney Diseases. 63 (3), 464-478 (2014).</li><li>Rocco, M. V., Bleyer, A. J., Burkart, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilization+of+inpatient+and+outpatient+resources+for+the+management+of+hemodialysis+access+complications.">Utilization of inpatient and outpatient resources for the management of hemodialysis access complications.</a> American Journal of Kidney Diseases. 28 (2), 250-256 (1996).</li><li>Roy-Chaudhury, P., Sukhatme, V. P., Cheung, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemodialysis+vascular+access+dysfunction:+a+cellular+and+molecular+viewpoint.">Hemodialysis vascular access dysfunction: a cellular and molecular viewpoint.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 17 (4), 1112-1127 (2006).</li><li>Quencer, K. B., Arici, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arteriovenous+Fistulas+and+Their+Characteristic+Sites+of+Stenosis.">Arteriovenous Fistulas and Their Characteristic Sites of Stenosis.</a> AJR: American Journal of Roentgenology. 205 (4), 726-734 (2015).</li><li>Kian, K., Asif, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cephalic+arch+stenosis.">Cephalic arch stenosis.</a> Semin Dial. 21 (1), 78-82 (2008).</li><li>Agarwal, A. 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D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eph-B4+regulates+adaptive+venous+remodeling+to+improve+arteriovenous+fistula+patency.">Eph-B4 regulates adaptive venous remodeling to improve arteriovenous fistula patency.</a> Scientific Reports. 7 (1), 15386 (2017).</li><li>Payne, H., Brill, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stenosis+of+the+Inferior+Vena+Cava:+A+Murine+Model+of+Deep+Vein+Thrombosis.">Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis.</a> J Vis Exp. (130), (2017).</li><li>Nam, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+carotid+ligation+is+a+model+of+acutely+induced+disturbed+flow,+leading+to+rapid+endothelial+dysfunction+and+atherosclerosis.">Partial carotid ligation is a model of acutely induced disturbed flow, leading to rapid endothelial dysfunction and atherosclerosis.</a> American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 297 (4), H1535-H1543 (2009).</li><li>Ene-Iordache, B., Remuzzi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disturbed+flow+in+radial-cephalic+arteriovenous+fistulae+for+haemodialysis:+low+and+oscillating+shear+stress+locates+the+sites+of+stenosis.">Disturbed flow in radial-cephalic arteriovenous fistulae for haemodialysis: low and oscillating shear stress locates the sites of stenosis.</a> Nephrology, Dialysis, Transplantation. 27 (1), 358-368 (2012).</li><li>Yamamoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disturbed+shear+stress+reduces+Klf2+expression+in+arterial-venous+fistulae+in+vivo.">Disturbed shear stress reduces Klf2 expression in arterial-venous fistulae in vivo.</a> Physiological reports. 3, (2015).</li><li>Remuzzi, A., Ene-Iordache, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+paradigms+for+dialysis+vascular+access:+upstream+hemodynamics+and+vascular+remodeling+in+dialysis+access+stenosis.">Novel paradigms for dialysis vascular access: upstream hemodynamics and vascular remodeling in dialysis access stenosis.</a> Clinical Journal of the American Society of Nephrology. 8 (12), 2186-2193 (2013).</li></ol>

Le modèle aVF murine a été utilisé pour étudier les mécanismes de base et les événements moléculaires conduisant à la maturation AVF13,14. Dans cette étude, nous avons modifié un modèle aVF murine établi pour créer un nouveau modèle de fistule aortocaval murine avec une sténose IVC dans le tractus sortant de la fistule. Notre modèle de ligature est semblable à plusieurs modèles murins précédemment décrits qui emploient la ligature vasculair...

Les fistules artérioveineuses (AVF) sont les accès les plus communs pour l'hémodialyse, avec la patency supérieure et l'infection réduite comparée à d'autres accès tels que des greffes ou des cathéters veineux centraux. Cependant, jusqu'à 60% de l'AVF ne parviennent pas à mûrir1,2,3; un examen systématique récent a indiqué que les taux de patency primaire à 1 an étaient seulement 60%4. La sténose le long de l'écoulement veineux provoque principalement l'échec de la maturation AVF5,6. Il y a certains endroits caractéristiques enclins à la sténose proximale à la fistule : le segment de balancement juxtaanastomotic pour la fistule radiocéphalique, la région céphalique d'arc pour la fistule brachiocéphalique et la veine centrale pour la fistule avec précédemment placé ipsilateral subclavian ou interne cathéters de veine jugulaire7,8.
La sténose veineuse centrale est souvent asymptomatique dans les patients sans AVF, mais peut causer l'oiséème d'extrémité ipsilateral par l'hypertension veineuse aussi bien que l'échec de la maturation de fistule une fois défié par le fluxdefistule 9. La pathophysiologie de la sténose veineuse centrale est très probablement liée à l'inflammation et à la cascade activée de coagulation après le placement de dispositif. En outre, le mouvement constant de la pointe du cathéter ainsi que l'écoulement accru de la fistule peuvent altérer le stress de cisaillement, ayant pour résultat le dépôt de plaquette et l'épaississement de mur veineux10. Pour comprendre les mécanismes de base sous-jacents à l'échec de la VVA causée par la sténose veineuse centrale, un modèle animal imitant la sténose veineuse centrale avec une AVF est nécessaire.
Nous avons établi un modèle de fistule d'aortocaval murine qui est facile à exécuter et maître et récapitule le cours clinique de l'AVF humaine. 11 Nous avons appliqué les concepts et la technique de plusieurs modèles murins précédemment établis pour créer un modèle murine nouveau d'AVF avec la sténose veineuse. Nous introduisons un modèle de fistule aortocavale murine avec une sténose IVC dans la fistule de sortie qui peut être employée pour l'étude de la sténose veineuse centrale.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>20-60 Mhz scan head</td>
			<td>VisualSonics Inc.</td>
			<td>RMV-704</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 Sterile Micro Suture, 6mm (140 &#181;), 3/8 Circle, TAP Point Needle</td>
			<td>AROSuture</td>
			<td>T06A08N14-13</td>
			<td>polyamide monofilament sutures</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Induction Chamber, 2 Liter 
			3.75&#34;W x 9.00&#34;D x 3.75&#34;H</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>941444</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflo, Isoflurane liquid</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>26675-46-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mice, C57BL/6J</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pet Bed Microwave Heating Pad</td>
			<td>Snuggle Safe</td>
			<td>6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Needle 25G</td>
			<td>BD</td>
			<td>305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surflo I.V. Catheter 22G</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SR-OX2225CA</td>
			<td>0.85mm outer diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vascular clamp</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>RS-5424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo770 High Resolution Imaging System</td>
			<td>VisualSonics Inc.</td>
			<td>770</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine model of central venous stenosis using aortocaval fistula with an outflow stenosis

La sténose veineuse centrale est une entité importante contribuant à l'échec artériovenous de fistule (AVF). Un modèle aVF murine a été modifié pour créer une ligature partielle du cava inférieur de veine (IVC) dans le courant sortant de la fistule, imitant la sténose veineuse centrale. Les aspects techniques de ce modèle sont introduits. L'aorte et l'IVC sont exposés, suite à une incision abdominale. L'aorte infra-rénale et l'IVC sont disséqués pour le clampage proximal, et l'aorte distale est exposée pour la perforation. L'IVC au milieu entre la veine rénale gauche et la bifurcation aortique est soigneusement disséqué pour placer un 8-0 suture sous l'IVC. Après le clampage de l'aorte et de l'IVC, une AVF est créée en perforant l'aorte infra-rénale à travers les deux murs dans l'IVC avec une aiguille de 25 G, suivie d'une ligature d'un cathéter intra-veineux (IV) de 22 G et d'IVC ensemble. Le cathéter est ensuite enlevé, créant une sténose veineuse reproductible sans occlusion. L'aorte et l'IVC sont non-clamped après confirmation de l'hémostasie primaire. Ce nouveau modèle de sténose veinenelle centrale est facile à réaliser, reproductible, et facilitera les études sur l'échec de l'AVF.

Les souris mâles ont subi l'opération mentionnée ci-dessus pour créer une AVF et une sténose ivC. Les souris témoins n'ont subi que la laparotomie et la dissection des tissus entourant l'IVC, par exemple, une procédure fictive, ou seulement la création d'une sténose IVC sans création simultanée d'une AVF.
L'IVC a été observé avec l'échographie doppler le jour 7 après l'intervention chirurgicale (<strong class="xf...

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Murine Model of Central Venous Stenosis using Aortocaval Fistula with an Outflow Stenosis

Une fistule aortocaval a été créée en perforant l'aorte infra-rénale murine à travers les deux murs dans le cava vena inférieur et a été suivie par la création d'une sténose dans son écoulement par l'intermédiaire de la ligature partielle du cava vena inférieur. Ce modèle reproductible peut être utilisé pour étudier la sténose veineuse centrale.

Modèle murine de la sténose veineuse centrale utilisant la fistule d'Aortocaval avec une stenose sortante

Central venous stenosis is an important entity contributing to arteriovenous fistula (AVF) failure. A murine AVF model was modified to create a partial ...

La sténose veineuse centrale peut causer la fistule aortocaval, ou AVF, échec primaire de maturation, aussi bien que l’échec ultérieur dans une fistule de travail. Cette technique utilise une version modifiée d’un modèle avf murin établi qui récapitule le cours clinique de l’AVF humain et est facilement maîtrisé à travers plusieurs étapes critiques. Avant de commencer l’intervention, confirmez un manque de réponse au pincement des orteils chez une souris C57-Black/6 de neuf à 11 semaines et placez la souris dans la position de supination dans la zone chirurgicale.Appliquez de l’onguent sur les yeux de l’animal et retirez la fourrure du côté ventral du cou vers le bas-ventre. Nettoyez et désinfectez ensuite le site chirurgical avec trois gommages séquentiels de 10 % povidone-iode et 70 % d’isopropanol, et placez un drapé chirurgical sur l’animal. Pour l’exposition au site de pinces et de perforation, placez la souris sous un microscope dissection et, à l’aide d’une technique stérile et d’un scalpel, faites une incision abdominale profonde pour la peau, de la ligne médiane, du bord inférieur du foie à juste au-dessus du pubis.Couper à travers la musculature avec des ciseaux pour ouvrir la cavité abdominale, et insérer un rétracteur dans l’abdomen. Déplacez les entrailles sur le côté droit et enveloppez-les dans une gaze saline. Déplacez la vessie et les vésicules séminales sur le côté caudal de l’animal, et utilisez un support en micronœil pour disséquer la mésenterie entre le rectum et le rétroperitoneum pour obtenir une vue complète de l’aorte et du véna cava inférieur, ou IVC.Ensuite, utilisez le support de micronède pour disséquer l’aorte infrarenale et l’IVC en bloc des tissus rétroperitoneals latéraux et dorsal environnants pour croiser les tissus ensemble, et disséquer les tissus environnants pour exposer le site de perforation aortique à environ trois quarts de la distance de la veine rénale gauche à la bifurcation aortique. Pour l’isolement de l’IVC, disséquer entre l’IVC infrarenal et l’aorte immédiatement distal à la veine rénale gauche et étendre la dissection distally à mi-chemin entre la veine rénale gauche et la bifurcation aortique pour l’observation infrarenal postopératoire d’IVC. Faire une fenêtre pour séparer l’IVC de l’aorte, et disséquer l’IVC du tissu environnant.Ensuite, placez soigneusement un 8-0 suture monofilament polyamide sous l’IVC et l’aorte avant de tirer l’extrémité de suture à travers la fenêtre pour positionner la suture sous l’IVC seulement. Pour créer l’AVF, pliez d’abord une aiguille de calibre 25 à un angle de 45 à 60 degrés à quatre millimètres de la pointe de l’aiguille et serrez l’aorte infrarenale et l’IVC à l’aide d’un clip microchirurgical. Saisir le tissu conjonctif entourant la bifurcation, faire pivoter l’aorte de façon médiocre et caudally pour exposer le site de ponction de l’aorte légèrement étirée vers le côté ventral, et utiliser l’aiguille de calibre 25 pour percer l’aorte dans l’IVC.Lorsque le tissu a été percé, relâchez l’aorte et tirez vers le haut du côté gauche de l’aorte pour couvrir le site de perforation avec le tissu environnant. Retirez ensuite l’aiguille et appuyez doucement sur le site de perforation à l’aide d’un écouvillon à bout de coton pour l’hémostase. Pour la création de sténose IVC, placez la pointe d’un cathéter intraveineux de calibre 22 longituditinement sur l’IVC et ligatez le cathéter à l’IVC avec un 8-0 Suture.Lorsque la suture a été placée, retirer le cathéter et confirmer l’hémostase primaire avant de dégriffer l’aorte et l’IVC. Couvrir le site de perforation pendant une autre minute pour s’assurer de l’hémostase, et retourner les organes à leur cavité abdominale avant de fermer l’abdomen avec des sutures 6-0. Placez ensuite la souris dans une cage individuelle sans literie sur un dispositif de soutien thermique avec surveillance jusqu’à la récupération complète, et utilisez l’échographie Doppler pour confirmer la patency de la fistule.Le septième jour après la procédure chirurgicale, les secteurs de fistule et de sténose de l’IVC sont facilement détectés dans la vue longitudinale. Chez les souris portant une sténose sans AVF, le segment de sténose présente une forme veineuse d’onde avec plus d’élargissement spectral que les souris sham-operated mais sans beaucoup de pulsatility. Chez les souris ayant un AVF ainsi qu’une sténose, le segment de sténose montre une forme d’onde pulsatile en plus de l’élargissement spectral, et la vitesse maximale moyenne du flux à la sténose chez les souris ayant un AVF avec sténose est significativement plus élevée que chez les souris atteintes de sténose seule.Le diamètre moyen d’IVC à la sténose chez les souris avec la sténose seule est semblable à celui observé chez les souris avec un AVF et une sténose. En outre, en utilisant le segment en amont ou en aval comme référence, la sténose en pourcentage est significativement plus grande chez les souris ayant un AVF en plus d’une sténose. Lorsque vous ligate le cathéter IV et l’IVC ensemble, il est important de les attacher étroitement pour créer une sténose reproductible.L’application de cette procédure au modèle veineux murin d’implantation de greffe pourrait répondre comment surmonter l’occlusion de la sténose veineuse de greffe.

Research

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Medicine

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