Name: murine model of central venous stenosis using aortocaval fistula with an outflow stenosis
Uploaded: 2019-07-11T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Model of Central Venous Stenosis using Aortocaval Fistula with an Outflow Stenosis at JoVE.com

Este trabalho foi apoiado pelo Instituto Nacional de saúde dos EUA (NIH) Grant R01-HL128406; o departamento de Estados Unidos da Veterans Affairs laboratório biomédico pesquisa e desenvolvimento programa mérito Review Award I01-BX002336; bem como com os recursos e o uso de instalações no VA Connecticut Healthcare System, West Haven, CT.

Todos os experimentos foram realizados com a aprovação do Comitê institucional de cuidados e uso de animais da Universidade de Yale (IACUC).
1. anestesia e procedimentos pré-operatórios
<ol><li>Esterilizar todos os instrumentos cirúrgicos e materiais por autoclavagem. Ligue o dispositivo de suporte térmico para ter a certeza de que está quente (40 – 42 ° c).</li>
	<li>Coloc um rato velho de 9-11-Week C57Bl/6 em uma câmara acrílica da indução e anestesiá-la com o isoflurano va...

<ol>
	<li>Dember, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+clopidogrel+on+early+failure+of+arteriovenous+fistulas+for+hemodialysis:+a+randomized+controlled+trial.">Effect of clopidogrel on early failure of arteriovenous fistulas for hemodialysis: a randomized controlled trial.</a> JAMA. 299 (18), 2164-2171 (2008).</li><li>Dixon, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+don't+fistulas+mature?.">Why don't fistulas mature?.</a> Kidney International. 70 (8), 1413-1422 (2006).</li><li>Wilmink, T., Hollingworth, L., Powers, S., Allen, C., Dasgupta, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+History+of+Common+Autologous+Arteriovenous+Fistulae:+Consequences+for+Planning+of+Dialysis.">Natural History of Common Autologous Arteriovenous Fistulae: Consequences for Planning of Dialysis.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 51 (1), 134-140 (2016).</li><li>Al-Jaishi, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patency+rates+of+the+arteriovenous+fistula+for+hemodialysis:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Patency rates of the arteriovenous fistula for hemodialysis: a systematic review and meta-analysis.</a> American Journal of Kidney Diseases. 63 (3), 464-478 (2014).</li><li>Rocco, M. V., Bleyer, A. J., Burkart, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilization+of+inpatient+and+outpatient+resources+for+the+management+of+hemodialysis+access+complications.">Utilization of inpatient and outpatient resources for the management of hemodialysis access complications.</a> American Journal of Kidney Diseases. 28 (2), 250-256 (1996).</li><li>Roy-Chaudhury, P., Sukhatme, V. P., Cheung, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemodialysis+vascular+access+dysfunction:+a+cellular+and+molecular+viewpoint.">Hemodialysis vascular access dysfunction: a cellular and molecular viewpoint.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 17 (4), 1112-1127 (2006).</li><li>Quencer, K. 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K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+vein+stenosis.">Central vein stenosis.</a> American Journal of Kidney Diseases. 61 (6), 1001-1015 (2013).</li><li>Glanz, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axillary+and+subclavian+vein+stenosis:+percutaneous+angioplasty.">Axillary and subclavian vein stenosis: percutaneous angioplasty.</a> Radiology. 168 (2), 371-373 (1988).</li><li>Yamamoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+aortocaval+fistula+recapitulates+human+arteriovenous+fistula+maturation.">The mouse aortocaval fistula recapitulates human arteriovenous fistula maturation.</a> American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 305 (12), H1718-H1725 (2013).</li><li>North American Symptomatic Carotid Endarterectomy Trial. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods,+patient+characteristics,+and+progress.">Methods, patient characteristics, and progress.</a> Stroke. 22 (6), 711-720 (1991).</li><li>Kuwahara, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD44+Promotes+Inflammation+and+Extracellular+Matrix+Production+During+Arteriovenous+Fistula+Maturation.">CD44 Promotes Inflammation and Extracellular Matrix Production During Arteriovenous Fistula Maturation.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 37 (6), 1147-1156 (2017).</li><li>Protack, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eph-B4+regulates+adaptive+venous+remodeling+to+improve+arteriovenous+fistula+patency.">Eph-B4 regulates adaptive venous remodeling to improve arteriovenous fistula patency.</a> Scientific Reports. 7 (1), 15386 (2017).</li><li>Payne, H., Brill, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stenosis+of+the+Inferior+Vena+Cava:+A+Murine+Model+of+Deep+Vein+Thrombosis.">Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis.</a> J Vis Exp. (130), (2017).</li><li>Nam, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+carotid+ligation+is+a+model+of+acutely+induced+disturbed+flow,+leading+to+rapid+endothelial+dysfunction+and+atherosclerosis.">Partial carotid ligation is a model of acutely induced disturbed flow, leading to rapid endothelial dysfunction and atherosclerosis.</a> American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 297 (4), H1535-H1543 (2009).</li><li>Ene-Iordache, B., Remuzzi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disturbed+flow+in+radial-cephalic+arteriovenous+fistulae+for+haemodialysis:+low+and+oscillating+shear+stress+locates+the+sites+of+stenosis.">Disturbed flow in radial-cephalic arteriovenous fistulae for haemodialysis: low and oscillating shear stress locates the sites of stenosis.</a> Nephrology, Dialysis, Transplantation. 27 (1), 358-368 (2012).</li><li>Yamamoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disturbed+shear+stress+reduces+Klf2+expression+in+arterial-venous+fistulae+in+vivo.">Disturbed shear stress reduces Klf2 expression in arterial-venous fistulae in vivo.</a> Physiological reports. 3, (2015).</li><li>Remuzzi, A., Ene-Iordache, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+paradigms+for+dialysis+vascular+access:+upstream+hemodynamics+and+vascular+remodeling+in+dialysis+access+stenosis.">Novel paradigms for dialysis vascular access: upstream hemodynamics and vascular remodeling in dialysis access stenosis.</a> Clinical Journal of the American Society of Nephrology. 8 (12), 2186-2193 (2013).</li></ol>

O modelo murino AVF tem sido utilizado para estudar os mecanismos básicos e eventos moleculares que levam à maturação da fav13,14. Neste estudo, nós modificamos um modelo murino estabelecido de AVF para criar um modelo murino novo da fístula do aortocaval com um stenosis de IVC no intervalo da saída da fístula. Nosso modelo da ligadura é similar a diversos modelos murino previamente descritos que usam a ligadura vascular. Um modelo murino de trombose ven...

As fístulas arteriovenosas (fav) são os acessos mais comuns para hemodiálise, com patência superior e infecção reduzida em comparação com outros acessos, como enxertos ou cateteres venosos centrais. No entanto, até 60% das AVF não amadurecem1,2,3; uma revisão sistemática recente relatou que as taxas preliminares do patência em 1 ano eram somente 60%4. A estenose ao longo do fluxo venoso causa predominantemente falência da maturação da fav5,6. Existem certos locais característicos propensos a estenose proximal à fístula: o segmento de balanço justaanastomose para a fístula radiocefálica, a região do arco cefálico para a fístula Braquiocefálica e a veia central para a fístula com previamente cateteresdeveia jugular interna ou subclávia ipsilateral7,8.
O stenosis venoso central é frequentemente assintomático nos pacientes sem um AVF, mas pode causar o edema ipsilateral da extremidade pela hipertensão venosa assim como a falha da maturação da fístula quando desafiado pelo fluxo9da fístula. A patofisiologia do stenosis venoso central é mais provável relacionada à inflamação e à cascata ativada da coagulação após a colocação do dispositivo. Além disso, o movimento constante da ponta do cateter, bem como o aumento do fluxo da fístula podem alterar o estresse de cisalhamento, resultando em deposição plaquetária e espessamento da parede venosa10. Para compreender os mecanismos básicos que subjacentes à falha AVF causada pelo stenosis venoso central, um modelo animal que imita o stenosis venoso central com um AVF é exigido.
Nós estabelecemos um modelo murino da fístula do aortocaval que seja fácil de executar e dominar e recapitula o curso clínico do AVF humano. 11 nós aplicamos os conceitos e a técnica de diversos modelos murino previamente estabelecidos para criar um modelo murino novo de AVF com stenosis venoso. Nós introduzimos um modelo murino do aortocaval da fístula com um stenosis de IVC na fístula do saída que pode ser usada para o estudo do stenosis venoso central.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>20-60 Mhz scan head</td>
			<td>VisualSonics Inc.</td>
			<td>RMV-704</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 Sterile Micro Suture, 6mm (140 &#181;), 3/8 Circle, TAP Point Needle</td>
			<td>AROSuture</td>
			<td>T06A08N14-13</td>
			<td>polyamide monofilament sutures</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Induction Chamber, 2 Liter 
			3.75&#34;W x 9.00&#34;D x 3.75&#34;H</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>941444</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflo, Isoflurane liquid</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>26675-46-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mice, C57BL/6J</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pet Bed Microwave Heating Pad</td>
			<td>Snuggle Safe</td>
			<td>6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Needle 25G</td>
			<td>BD</td>
			<td>305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surflo I.V. Catheter 22G</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SR-OX2225CA</td>
			<td>0.85mm outer diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vascular clamp</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>RS-5424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo770 High Resolution Imaging System</td>
			<td>VisualSonics Inc.</td>
			<td>770</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine model of central venous stenosis using aortocaval fistula with an outflow stenosis

O stenosis venoso central é uma entidade importante que contribui à falha arteriovenosa da fístula (AVF). Um modelo murino de AVF foi modificado para criar uma ligadura parcial da veia cava inferior (IVC) na saída da fístula, imitando o stenosis venoso central. Os aspectos técnicos deste modelo são introduzidos. A aorta e o IVC são expostos, seguindo uma incisão abdominal. A aorta infra-renal e o IVC são dissecados para o aperto proximal, e a aorta longe do ponto de origem é expor para a punctura. O IVC no ponto médio entre a veia renal esquerda e a bifurcação aórtica é dissecado com cuidado para coloc um 8-0 sutura o IVC. Após o aperto da aorta e da VCI, uma fav é criada perfurando a aorta infra-renal através de ambas as paredes para o IVC com uma agulha de 25 G, seguida de ligando um cateter intra-venoso (IV) de 22 G e IVC juntos. O cateter é então removido, criando uma estenose venosa reprodutível sem oclusão. A aorta e o IVC são apalpe após ter confirmado o hemostasis preliminar. Este modelo novo do stenosis da veia central é fácil de executar, reprodutível, e facilitará estudos na falha de AVF.

Os ratos machos submeteram-se à operação mencionada acima para criar um AVF e um stenosis de IVC. Os ratos do controle submeteram-se somente à laparotomia e à dissecção dos tecidos que cercam o IVC, por exemplo, um procedimento Sham, ou somente a criação de um stenosis de IVC sem criação simultânea de um AVF.
O IVC foi observado com ultrassonografia Doppler no 7º dia após o procedimento cirúrgico (<strong class="x...

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Murine Model of Central Venous Stenosis using Aortocaval Fistula with an Outflow Stenosis

Uma fístula aortocaval foi criada puncionando a aorta infra-renal murino através de ambas as paredes na veia inferior oca e foi seguida pela criação de um stenosis em seu saída através da ligadura parcial da veia inferior oca. Este modelo reprodutível pode ser usado para estudar a estenose venosa central.

Modelo murino de estenose venosa central usando fístula Aortocaval com estenose de saída

Central venous stenosis is an important entity contributing to arteriovenous fistula (AVF) failure. A murine AVF model was modified to create a partial ...

Estenose venosa central pode causar tanto fístula aortocaval, ou AVF, falha primária de maturação, bem como falha posterior em uma fístula de trabalho. Esta técnica usa uma versão modificada de um modelo AVF murine estabelecido que recapitula o curso clínico do AVF humano e é facilmente dominado através de várias etapas críticas. Antes de iniciar o procedimento, confirme a falta de resposta ao beliscão do dedo do pé em um rato C57-Black/6 de nove a 11 semanas de idade e coloque o rato na posição supina na área cirúrgica.Aplique pomada nos olhos do animal e remova a pele do lado ventral do pescoço para o abdômen inferior. Em seguida, limpe e desinfete o local cirúrgico com três esfregões sequenciais de 10% de povidona e 70% isopropanol, e coloque uma cortina cirúrgica sobre o animal. Para a exposição ao local do grampo e punção, coloque o rato sob um microscópio dissecando e, usando técnica estéril e um bisturi, faça uma incisão abdominal profunda, midline, da borda do fígado inferior até um pouco acima do púbis.Corte a musculatura com uma tesoura para abrir a cavidade abdominal e insira um retrátil no abdômen. Mova as entranhas para o lado direito, e enrole-as em uma gaze salina encharcada. Mova a bexiga e as vesículas seminais para o lado caudal do animal, e use um suporte de microaguléce para dissecar o mesentery entre o reto e o retroperitoneum para garantir uma visão completa da aorta e da veia cava inferior, ou IVC.Em seguida, use o suporte de microaréde para dissecar a aorta infrarenal e iVC em bloco a partir dos tecidos retroperitoneais laterais e dorsais ao redor para cruzar os tecidos juntos, e dissecar os tecidos circundantes para expor o local de punção aórtica a aproximadamente três quartos da distância da veia renal esquerda à bifurcação aórtica. Para o isolamento do IVC, dissecar entre o IVC infrarenal e a aorta imediatamente distal à veia renal esquerda e estender a dissecção distally para a metade entre a veia renal esquerda e a bifurcação aórtica para observação de IVC infra-operatório pós-operatório. Faça uma janela para separar o IVC da aorta e dissecar o IVC do tecido circundante.Em seguida, cuidadosamente colocar um 8-0 sutura de monofilamento de poliamida sob o IVC e a aorta antes de puxar a extremidade da sutura através da janela para posicionar a sutura abaixo apenas do IVC. Para criar o AVF, primeiro dobre uma agulha de calibre 25 para um ângulo de 45 a 60 graus a quatro milímetros da ponta da agulha e aperte a aorta infrarenal e o IVC com um clipe microcirúrgico. Agarrando o tecido conjuntivo ao redor da bifurcação, gire a aorta mediada e caudalmente para expor o local de punção da aorta esticada ligeiramente para o lado ventral, e use a agulha de calibre 25 para perfurar através da aorta no IVC.Quando o tecido for perfurado, solte a aorta e puxe para cima do lado esquerdo da aorta para cobrir o local da punção com o tecido circundante. Em seguida, remova a agulha e pressione o local da punção suavemente com um cotonete com ponta de algodão para hemostasia. Para a criação de estenose IVC, coloque a ponta de um cateter intravenoso de 22 bitolas longitudinalmente sobre o IVC e liga o cateter para o IVC com um 8-0 Sutura.Quando a sutura tiver sido colocada, remova o cateter e confirme a hemostasia primária antes de desordenar a aorta e o IVC. Cubra o local da punção por mais um minuto para garantir a hemostasia, e devolva os órgãos à cavidade abdominal antes de fechar o abdômen com suturas de 6-0. Em seguida, coloque o mouse em uma gaiola individual livre de cama em um dispositivo de suporte térmico com monitoramento até a recuperação completa, e use ultrassom Doppler para confirmar a patência da fístula.No sétimo dia após o procedimento cirúrgico, as áreas de fístula e estenose do IVC são facilmente detectadas na visão longitudinal. Em camundongos com estenose sem AVF, o segmento de estenose exibe uma forma de onda venosa com mais ampliação espectral do que ratos operados por vergonha, mas sem muita pulsatilidade. Em camundongos com um AVF, bem como uma estenose, o segmento de estenose mostra uma forma de onda pulsante, além da ampliação espectral, e a velocidade máxima média de tempo do fluxo na estenose em camundongos com um AVF com estenose é significativamente maior do que em camundongos com estenose apenas.O diâmetro médio de IVC na estenose em camundongos apenas com estenose é semelhante ao observado em camundongos com um AVF e estenose. Além disso, usando o segmento upstream ou downstream como referência, a estenose percentual é significativamente maior em camundongos com um AVF, além de uma estenose. Quando você liga o cateter IV e o IVC juntos, é importante amarrá-los firmemente para criar uma estenose reprodutível.A aplicação deste procedimento ao modelo de implantação de enxerto venoso murine poderia responder como superar a oclusão da estenose venosa do enxerto.

Research

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Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta ...

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