Name: quantification of proliferating human antigen-specific cd4+ t cells using carboxyfluorescein succinimidyl ester
Uploaded: 2019-06-04T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Proliferating Human Antigen-specific CD4+ T Cells using Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af: juvenil diabetes Research Foundation [JDRF 5-CDA-2014-210-A-N] (S. M.). Det nationale sundheds-og medicinsk Forskningsråd (NHMRC GNT123586) (S. M.), diabetes Australia Research Trust Millennium Award (Y17M1-MANS) (S. M.), operationel infrastruktur støtte program for den victorianske regering (S. M., A. D., E. T., M. S.), og NHMRC Postgraduate Scholarship APP1094337 og JDRF PhD top-up Scholarship (M. S.).

Alle forsøgspersoner gav informeret samtykke forud for indsamlingen af perifert blod. Etisk godkendelse af forsøg med PBMC blev givet af St. Vincents Hosptial (HREC-A 135/08 og HREC-A 161/15).
1. klargøring af reagens
<ol><li>
Menneskelige T-celle medier
	<ol>
<li>Forbered RP-5 medier til dyrkning PBMC, som består af RPMI 1640, 1x ikke-essentielle aminosyrer, L-alanyl-L-glutamin dipeptid (2 mM), penicillin (100 U/mL)/streptomycin (0,1 mg/mL), og 5% poolede humane serum (...

<ol>
	<li>Duque, A., Rakic, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+effects+of+BrdU+and+3H-Thymidine+incorporation+into+DNA+on+cell+proliferation,+position+and+fate.">Different effects of BrdU and 3H-Thymidine incorporation into DNA on cell proliferation, position and fate.</a> Journal of Neuroscience. 31, 15205-15217 (2011).</li><li>Mannering, S. I., Zhong, J. I. E., Cheers, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-cell+activation,+proliferation+and+apoptosis+in+primary+Listeria+monocytogenes+infection.">T-cell activation, proliferation and apoptosis in primary Listeria monocytogenes infection.</a> Immunology. 106, 87-95 (2002).</li><li>Lyons, A. B., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+lymphocyte+division+by+flow+cytometry.">Determination of lymphocyte division by flow cytometry.</a> Journal of Immunological Methods. 171, 131-137 (1994).</li><li>Mannering, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensitive+method+for+detecting+proliferation+of+rare+autoantigen-specific+human+T+cells.">A sensitive method for detecting proliferation of rare autoantigen-specific human T cells.</a> Journal of Immunological Methods. 283, 173-183 (2003).</li><li>Quah, B. J. C., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Use+of+Carboxyfluorescein+Diacetate+Succinimidyl+Ester+(CFSE)+to+Monitor+Lymphocyte+Proliferation.">The Use of Carboxyfluorescein Diacetate Succinimidyl Ester (CFSE) to Monitor Lymphocyte Proliferation.</a> Journal of Visualized Experiments. , 4-7 (2010).</li><li>Ten Brinke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+T-cell+responses+in+translational+studies:+Optimization+of+dye-based+proliferation+assay+for+evaluation+of+antigen-specific+responses.">Monitoring T-cell responses in translational studies: Optimization of dye-based proliferation assay for evaluation of antigen-specific responses.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1-15 (2017).</li><li>Gillespie, G. M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strong+TCR+Conservation+and+Altered+T+Cell+Cross-Reactivity+Characterize+a+B*57-Restricted+Immune+Response+in+HIV-1+Infection.">Strong TCR Conservation and Altered T Cell Cross-Reactivity Characterize a B*57-Restricted Immune Response in HIV-1 Infection.</a> Journal of Immunolgy. 177, 3893-3902 (2006).</li><li>Tynan, F. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+Resolution+Structures+of+Highly+Bulged+Viral+Epitopes+Bound+to+Major+Histocompatibility+Complex+Class+I:+Implications+for+t-cell+receptor+engagement+and+t-cell+immunodominance.">High Resolution Structures of Highly Bulged Viral Epitopes Bound to Major Histocompatibility Complex Class I: Implications for t-cell receptor engagement and t-cell immunodominance.</a> Journal of Biological Chemistry. 280, 23900-23909 (2005).</li><li>Blanchard, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoplasmic+reticulum+aminopeptidase+associated+with+antigen+processing+defines+the+composition+and+structure+of+MHC+class+I+peptide+repertoire+in+normal+and+virus-infected+cells.">Endoplasmic reticulum aminopeptidase associated with antigen processing defines the composition and structure of MHC class I peptide repertoire in normal and virus-infected cells.</a> Journal of Immunology. 184, 3033-3042 (2010).</li><li>Glanville, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+specificity+groups+in+the+T+cell+receptor+repertoire+repertoire.">Identifying specificity groups in the T cell receptor repertoire repertoire.</a> Nature. 547, 94-98 (2017).</li><li>Wooldridge, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tricks+with+tetramers:+how+to+get+the+most+from+multimeric+peptide+MHC.">Tricks with tetramers: how to get the most from multimeric peptide MHC.</a> Immunology. 126, 147-164 (2009).</li><li>Mannering, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+method+for+cloning+human+autoantigen-specific+T+cells.">An efficient method for cloning human autoantigen-specific T cells.</a> Journal of Immunological Methods. 298, 83-92 (2005).</li><li>So, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proinsulin+C-peptide+is+an+autoantigen+in+people+with+type+1+diabetes.">Proinsulin C-peptide is an autoantigen in people with type 1 diabetes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115, (2018).</li><li>Hui-Yuen, J., Mcallister, S., Koganti, S., Hill, E., Bhaduri-Mcintosh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+Epstein-Barr+Virus+Growth-transformed+Lymphoblastoid+Cell+Lines.">Establishment of Epstein-Barr Virus Growth-transformed Lymphoblastoid Cell Lines.</a> Journal of Visualized Experiments. , 2-7 (2011).</li><li>Alexander-Miller, M. A., Leggatt, G. R., Berzofsky, J. A., Moss, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+expansion+of+high+or+low+avidity+cytotoxic+T+lymphocytes+and+efficacy+for+adoptive+immunotherapy.">Selective expansion of high or low avidity cytotoxic T lymphocytes and efficacy for adoptive immunotherapy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93, 4102-4107 (1996).</li></ol>

CFSE-baseret spredning er en enkel og robust metode til påvisning og optælling af antigen-specifikke humane CD4+ T-celler. Det er tidligere blevet påvist, at anvendelse af den optimale koncentration af CFSE er afgørende for optimale resultater4. For meget CFSE ophæver spredningen, hvorimod alt for lidt ikke giver mulighed for at skelne mellem opdelte og uddelte celler. I modsætning hertil anvendes relativt høje koncentrationer (5,0 μM) af CFSE til mærkning af renset murine T-ce...

Evnen til at detektere og studere antigen specifikke T-celler er vigtig i undersøgelser af cellemedieret immunitet. Det er dog særligt udfordrende for auto antigen-specifikke CD4+ T-celle-respons, som er meget svage og svære at detektere. En fælles metode til påvisning af antigen-specifik lymfocyt proliferation er [3H]-thymidin, som er en radioaktivt mærket nukleotid indarbejdet i DNA af prolifererende celler. Selv om [3H]-thymidinanalysen kan detektere DNA-syntese, er denne metode en indirekte måling af celledeling, fordi DNA-syntesen kan initiere uafhængigt af mitose (dvs. under genduplikering og apoptose1). Dette problem forværres af, at antigen specifik spredning af celler kan resultere i betydelig apoptose2, hvilket fører til potentiel overvurdering af antigen specifik spredning. Desuden giver [3H]-thymidinmetoden ikke fænotypiske oplysninger til prolifererende lymfocytter, såsom CD4+ eller CD8+ Lineage proliferation i pbmcs stimuleret med antigene peptider.
I 2003 udgav vi den første farve fortyndingsanalyse ved hjælp af cfse, kaldet cfse-baseret proliferation assay3,4. CFSE er et fluorescerende farvestof, der binder stabilt til intracellulære proteiner ved at danne en kovalent binding til intracellulære lysin rester. Da CFSE-mærkede proteiner er fordelt ligeligt blandt datter celler3, kan celler, der har delt, skelnes fra ikke-opdelte celler ved flow cytometri, hvilket også giver mulighed for kvantitativ fænotype af lymfocyt populationer. Faktisk kan antallet af divisioner, en celle har gennemgået fra tidspunktet for CFSE-farvning, måles til en vis grad5. For nylig, mange lignende farvestoffer såsom CellTrace violet spredning farvestof (VPD) og CytoTrack farvestof er blevet udviklet, som arbejder på en lignende måde6. Denne protokol fokuserer på CFSE, men principperne gælder også for andre relaterede farvestoffer.
Peptid-MHC transthyretin farvning er en almindeligt anvendt metode til påvisning og kloning antigen-specifikke CD8+ T-celler. Dette er en veletableret metode7,8,9,10; imidlertid kræver transthyretin-baseret kloning eksisterende viden om epitop/MHC-begrænsningen, og hver epitop kræver sin egen transthyretin11, hvilket begrænser omfanget af opdagelsen og kloning af nye epitop-specifikke T-celler. Den CFSE-baserede spredning kan anvendes med peptider, proteiner eller celle lysates. Den protokol, der er beskrevet heri, er både enkel og robust, og de responderende CD4+ T- celler kan sorteres til brug i downstream funktionelle og biokemiske karakterisering assays12,13.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anti-human CD4-AlexaFluor647</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>317422</td>
			<td>RRID:AB_2716180</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>C1157</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll-Paque Plus</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>71-7167-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax (1x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Influenza A H1N1 (PR8) Matrix protein 1</td>
			<td>Sino Biological</td>
			<td>40010-V07E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Essential amino acids (1x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/ Streptomycin (1x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15070063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pooled human serum</td>
			<td>Australian Red Cross</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proinsulin C-peptide PI33-63</td>
			<td>Purar Chemicals</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom made synthetic peptide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R8758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetanus Toxoid protein</td>
			<td>Statens Serum Intitut</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of proliferating human antigen-specific cd4+ t cells using carboxyfluorescein succinimidyl ester

Beskrevet er en simpel, in vitro, farve fortyndingsbaseret metode til måling af antigen-specifik CD4+ T- celle proliferation i humant perifert blod mononukleære celler (PBMCs). Udviklingen af stabile, ikke-giftige, fluorescerende farvestoffer såsom carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE) gør det muligt at skelne sjældne, antigen specifikke T-celler fra tilskuere ved formindskelse i fluorescerende farvning, som detekteres af flowcytometri. Denne metode har følgende fordele i forhold til alternative tilgange: (i) det er meget følsomt over for lavfrekvente T-celler, (II) ingen viden om antigen eller epitop er påkrævet, (III) Fænotypen af de responderende celler kan analyseres, og (IV) levedygtige, reagerer celler kan sorteres og bruges til yderligere analyse, såsom T-celle kloning.

In vitro stimulation af humane pbmcs med stivkrampe tetanustoksoid protein: pbmcs blev plettet med cfse og stimuleret i 7 dage i nærværelse af stivkrampe tetanustoksoid. Næsten alle donorer viste en stærk T celle respons på stivkrampe tetanustoksoid, fordi de var blevet vaccineret, hvilket gør stivkrampe tetanustoksoid en nyttig positiv kontrol antigen. Figur 2 viser i tre eksemplarer, at cfse-SPREDNINGEN af CD4+ T- celler fra Ustimulerede pb...

Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Proliferating Human Antigen-specific CD4+ T Cells using Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester at JoVE.com

Quantification of Proliferating Human Antigen-specific CD4+ T Cells using Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester

Kvantificering af prolifererende humane antigen-specifikke CD4+ T-celler ved hjælp af Carboxyfluorescein Succinimidyl ester

Præsenteret her er en protokol til måling af prolifererende CD4+ T- celler som reaktion på antigene proteiner eller peptider ved hjælp af Dye fortynding. Denne analyse er særligt følsom over for sjældne antigen-specifikke T-celler og kan modificeres for at lette kloning af antigen-specifikke celler.

Described is a simple, in vitro, dye dilution-based method for measuring antigen-specific CD4+ T cell proliferation in human peripheral blood mononuclear ...

Denne protokol giver en platform til at studere CD4T-celleresponser, der ofte er svage og vanskelige at opdage. Denne teknik gør det muligt at detektionere, optælle og isolere CD4T-celler uden forudgående viden om antigenpræsentation. Den største fordel er analysen af CD4T celler, der er ganske ofte sjældne populationer forbundet med autoimmune tilstande såsom type en diabetes.Efter at have fået den perifere blodprøve fra en sund donor fortyndes blodet i PBS i mindst et til to forhold, før derlægges 35 milliliter blod over 15 milliliter gradientmed massefylde i et 50 milliliterrør. Cellerne adskilles efter massegradientcentrifugering, og ca. 20 milliliter af det resulterende øverste plasmalag fjernes. Derefter indsamles det hvide blodlegemer lag passe på at undgå de røde blodlegemer pellet og vaske cellerne tre gange i frisk PBS.Efter optælling fortyndes cellerne til en gange 10 til den sjette perifere mononukleare blodcelle eller PBMC pr. milliliter PBS-koncentration. Der tilsættes 300 mikroliter celler for hver kontrol i individuelle 10 milliliterrør. Efter topping hvert rør med PBS, sediment cellerne ved centrifugering og resuspenderet cellerne på en gang 10 til den sjette celler pr milliliter af RP5 medium koncentration.Derefter plade 100 mikroliter af celler pr kontrol til hver af tre brønde af en 96 godt plade, der indeholder 100 mikroliter af RP5 medium per brønd. Anbring pladen i cellekulturskuvøsen i syv dage. Dernæst overføres de resterende PBPC'er til et nyt 50 milliliterrør, og der tilsættes en mikroliter CFSE-arbejdslageropløsning pr. milliliter celleaffjedring til siden af røret.Hurtigt vende røret flere gange for at blande og placere cellerne i en celle kultur inkubator i fem minutter. Ved inkubationens afslutning standses reaktionen med fem milliliter RP5-medium, og cellerne opsamres ved centrifugering. Pelletspend på én gang 10 gange til det sjette PBM'er pr. milliliter frisk RP5-medium og tilsættes en milliliter celler til et 10 milliliterrør pr. antigen, der skal testes.Derefter tilsættes 100 mikroliter celler pr. antigen til hver af tre brønde af en 96 brøndplade, der indeholder 100 mikroliter RP5-medium suppleret med det fortyndede antigen af interesse pr. brønd. Anbring pladen i cellekulturskuvøsen i syv dage. For at plette CD4+T-cellepopulationerne til flowcytometrisk analyse overfører hele cellerne i slutningen af kulturen fra hver brønd til individuel fluorescensaktiveret cellesortering eller FACS-rør.Hver prøve vaskes med en milliliter PBS suppleret med 0,1 % føtal kalveserum eller FCS. Opslæm pellets i et passende anti-humant CD4 antistof i 100 mikroliter PBS plus FCS pr. rør. Inkuber cellerne ved fire grader Celsius i 20 minutter beskyttet mod lys.Ved inkubationens afslutning vaskes prøverne i en milliliter frisk PBS plus FCS pr. rør, og pelletsene opsbruges igen i 100 mikroliter frisk PBS plus FCS. Umiddelbart før analysen tilsættes en mikroliter propidium iodid til hvert rør for at tillade udelukkelse af døde celler. Gate lymfocytter i henhold til deres frem og side scatter områder.For at udelukke de apoptotiske celler skal du gate det fremadrettede scatter-område versus propidiumididætte negative celler og bruge de uhæmmede celler til at indstille en spændings baseline for de ikke-fluorescerende celler. Indstil spændingerne for CD4-antistoffluorophore og CFSE-signalet, så fluorescerende signalet er under 1000 for hver. Brug enkelt farvekontrol CFSE- og CD4-prøverne til at bekræfte et positivt fluorescerende signal for hver farve ved hjælp af de spændinger, der er indstillet med de uhæmmede celler.Da CFSE og propidiumidodid har en vis spektrale overlapning, justeres kompensationen for at trække propidiumidodidfluorescensen fra CFSE-fluorescensen, indtil CFSE-eneste prøve ikke giver et signal i propidiumdodidkanalen. Når alle prøverne er blevet analyseret, beregnes cellefordelingsindekset ved at dividere antallet af opdelte celler med 5000 udelte celler fra antigenet stimuleret gruppe med det gennemsnitlige antal opdelte celler pr. 5000 udelte celler fra cellerne dyrket uden antigen. Næsten alle donorer demonstrere en stærk T-celle reaktion på Stivkrampe toksoid efter in vitro stimulation, fordi donorerne er blevet vaccineret gør Tetanus toksoid en nyttig positiv kontrol antigen.Udbredelsen af CD4+T-celler fra ustimulerede PBPC'er er dog minimal. Efter syv dages stimulation med humant pro-insulin C-peptid kan der påvises pro-insulin C-peptid specifikke CD4+T-celler i det perifere blod hos en person med type 1-diabetes. PBMC stimuleret med influenza A virus matrix protein demonstrerer også spredning.Tilsammen viser disse data, at analysen kan udføres ved hjælp af proteiner i fuld længde samt korte syntetiske peptider. FACS-komponenten i denne metode kan udføres ved hjælp af et cellesorteringsstrømscytometer. Ved hjælp af en cellesortering kan de antigenspecifikke T-celler isoleres på det enkelte celleniveau til downstream-analyse.Denne metode har gjort det muligt for opdagelsen af CD4T celle reaktioner hos personer med tidlig debut type en diabetes. Analyse af disse sjældne T-celle populationer udnytte andre metoder præsenterer forskellige tekniske udfordringer.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Quantification of Proliferating Human Antigen-specific CD4+ T Cells using Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester

Antigen Specific In Vivo Killing Assay using CFSE Labeled Target Cells

Antigen Specific In Vivo Killing Assay using CFSE Labeled Target Cells

Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) can be used to easily and quickly label a cell population of interest for in vivo investigation.  ...

The Use of Carboxyfluorescein Diacetate Succinimidyl Ester (CFSE) to Monitor Lymphocyte Proliferation

The Use of Carboxyfluorescein Diacetate Succinimidyl Ester CFSE to Monitor Lymphocyte Proliferation

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE) is an effective and popular means to monitor lymphocyte division1-3.  CFSE covalently labels long-lived ...

Expansion of Human Peripheral Blood  &gamma;&delta; T Cells using Zoledronate

Expansion of Human Peripheral Blood  ÃƒÅ½Ã‚Â³ÃƒÅ½Ã‚Â´ T Cells using Zoledronate

Human &gamma;&delta; T cells can recognize and respond to a wide variety of stress-induced antigens, thereby developing innate broad anti-tumor and ...

Adenoviral Transduction of Naive CD4 T Cells to Study Treg Differentiation

Adenoviral transduktion af Naive CD4 T-celler til at studere Treg Differentiering

Regulatory T cells (Tregs) are essential to provide immune tolerance to self as well as to certain foreign antigens. Tregs can be generated from naive CD4 ...

Isolation and Th17 Differentiation of Na&iuml;ve CD4 T Lymphocytes

Isolation and Th17 Differentiation of NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4 T Lymphocytes

Isolering og Th17 Differentiering af Naïve CD4 T-lymfocytter

Th17 cells are a distinct subset of T cells that have been found to produce interleukin 17 (IL-17), and differ in function from the other T cell subsets ...

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Vurdering af Innate Sensing af HIV-1 inficerede CD4<sup&gt; +</sup&gt; T-celler ved plasmacytoide dendritiske celler ved hjælp af en<em&gt; Ex vivo</em&gt; Co-dyrkningssystem.

HIV-1 innate sensing requires direct contact of infected CD4+ T cells with plasmacytoid dendritic cells (pDCs). In order to study this process, the ...

Killer Artificial Antigen Presenting Cells (KaAPC) for Efficient In Vitro Depletion of Human Antigen-specific T Cells

Killer Artificial Antigen Presenting Cells KaAPC for Efficient In Vitro Depletion of Human Antigen-specific T Cells

Killer Kunstig antigen-præsenterende celler (KaAPC) til effektiv<em&gt; In Vitro</em&gt; Udtømning af humane antigen-specifikke T-celler

Current treatment of T cell mediated autoimmune diseases relies mostly on strategies of global immunosuppression, which, in the long term, is accompanied ...

Generating De Novo Antigen-specific Human T Cell Receptors by Retroviral Transduction of Centric Hemichain

Generating De Novo Antigen-specific Human T Cell Receptors by Retroviral Transduction of Centric Hemichain

Generering<em&gt; De Novo</em&gt; Antigenspecifikke humane T-celle receptorer ved retroviral transduktion af Centric Hemichain

T cell receptors (TCRs) are used clinically to direct the specificity of T cells to target tumors as a promising modality of immunotherapy. Therefore, ...

Development of Stem Cell-derived Antigen-specific Regulatory T Cells Against Autoimmunity

Udvikling af Stem Cell-afledte antigen-specifikke regulatoriske T celler mod Autoimmunitet

Autoimmune diseases arise due to the loss of immunological self-tolerance. Regulatory T cells (Tregs) are important mediators of immunologic ...

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells (iTregs) from Na&#239;ve CD4+ T Cells Using a TGF-&#946;-containing Protocol

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells iTregs from NaÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¯ve CD4+ T Cells Using a TGF-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-containing Protocol

In vitro differentiering af humane CD4 + Foxp3 + Induced Regulatory T-celler (iTregs) fra naive CD4 + T-celler under anvendelse et TGF-β-holdige protokol