Name: quantification of proliferating human antigen-specific cd4+ t cells using carboxyfluorescein succinimidyl ester
Uploaded: 2019-06-04T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Proliferating Human Antigen-specific CD4+ T Cells using Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester at JoVE.com

Dit werk werd gesteund door: de juveniele diabetes Research Foundation [JDRF 5-CDA-2014-210-A-N] (S. M.). De National Health and Medical Research Council (NHMRC GNT123586) (S. M.), diabetes Australia Research Trust Millennium Award (Y17M1-MANS) (S. M.), operationeel infrastructuur ondersteuningsprogramma van de Victoriaanse overheid (S. M., A. D., E. T., M. S.) en NHMRC Postdoctorale studiebeurs APP1094337 en JDRF PhD top-up beurs (M. S.).

Alle proefpersonen gaven geïnformeerde toestemming voorafgaand aan het verzamelen van perifeer bloed. Ethische goedkeuring voor experimenten met behulp van PBMC werd gegeven door St. Vincent's hosptial (HREC-A 135/08, en HREC-A 161/15).
1. bereiding van het reagens
<ol><li>
Human T Cell media
	<ol>
<li>Bereid RP-5-media voor op kweek PBMC, dat bestaat uit rpmi 1640, 1x niet-essentiële aminozuren, l-alanyl-L-glutamine dipeptide (2 mm), penicillair (100 U/ml)/streptomycine (...

<ol>
	<li>Duque, A., Rakic, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+effects+of+BrdU+and+3H-Thymidine+incorporation+into+DNA+on+cell+proliferation,+position+and+fate.">Different effects of BrdU and 3H-Thymidine incorporation into DNA on cell proliferation, position and fate.</a> Journal of Neuroscience. 31, 15205-15217 (2011).</li><li>Mannering, S. I., Zhong, J. I. E., Cheers, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-cell+activation,+proliferation+and+apoptosis+in+primary+Listeria+monocytogenes+infection.">T-cell activation, proliferation and apoptosis in primary Listeria monocytogenes infection.</a> Immunology. 106, 87-95 (2002).</li><li>Lyons, A. B., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+lymphocyte+division+by+flow+cytometry.">Determination of lymphocyte division by flow cytometry.</a> Journal of Immunological Methods. 171, 131-137 (1994).</li><li>Mannering, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensitive+method+for+detecting+proliferation+of+rare+autoantigen-specific+human+T+cells.">A sensitive method for detecting proliferation of rare autoantigen-specific human T cells.</a> Journal of Immunological Methods. 283, 173-183 (2003).</li><li>Quah, B. J. C., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Use+of+Carboxyfluorescein+Diacetate+Succinimidyl+Ester+(CFSE)+to+Monitor+Lymphocyte+Proliferation.">The Use of Carboxyfluorescein Diacetate Succinimidyl Ester (CFSE) to Monitor Lymphocyte Proliferation.</a> Journal of Visualized Experiments. , 4-7 (2010).</li><li>Ten Brinke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+T-cell+responses+in+translational+studies:+Optimization+of+dye-based+proliferation+assay+for+evaluation+of+antigen-specific+responses.">Monitoring T-cell responses in translational studies: Optimization of dye-based proliferation assay for evaluation of antigen-specific responses.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1-15 (2017).</li><li>Gillespie, G. M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strong+TCR+Conservation+and+Altered+T+Cell+Cross-Reactivity+Characterize+a+B*57-Restricted+Immune+Response+in+HIV-1+Infection.">Strong TCR Conservation and Altered T Cell Cross-Reactivity Characterize a B*57-Restricted Immune Response in HIV-1 Infection.</a> Journal of Immunolgy. 177, 3893-3902 (2006).</li><li>Tynan, F. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+Resolution+Structures+of+Highly+Bulged+Viral+Epitopes+Bound+to+Major+Histocompatibility+Complex+Class+I:+Implications+for+t-cell+receptor+engagement+and+t-cell+immunodominance.">High Resolution Structures of Highly Bulged Viral Epitopes Bound to Major Histocompatibility Complex Class I: Implications for t-cell receptor engagement and t-cell immunodominance.</a> Journal of Biological Chemistry. 280, 23900-23909 (2005).</li><li>Blanchard, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoplasmic+reticulum+aminopeptidase+associated+with+antigen+processing+defines+the+composition+and+structure+of+MHC+class+I+peptide+repertoire+in+normal+and+virus-infected+cells.">Endoplasmic reticulum aminopeptidase associated with antigen processing defines the composition and structure of MHC class I peptide repertoire in normal and virus-infected cells.</a> Journal of Immunology. 184, 3033-3042 (2010).</li><li>Glanville, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+specificity+groups+in+the+T+cell+receptor+repertoire+repertoire.">Identifying specificity groups in the T cell receptor repertoire repertoire.</a> Nature. 547, 94-98 (2017).</li><li>Wooldridge, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tricks+with+tetramers:+how+to+get+the+most+from+multimeric+peptide+MHC.">Tricks with tetramers: how to get the most from multimeric peptide MHC.</a> Immunology. 126, 147-164 (2009).</li><li>Mannering, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+method+for+cloning+human+autoantigen-specific+T+cells.">An efficient method for cloning human autoantigen-specific T cells.</a> Journal of Immunological Methods. 298, 83-92 (2005).</li><li>So, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proinsulin+C-peptide+is+an+autoantigen+in+people+with+type+1+diabetes.">Proinsulin C-peptide is an autoantigen in people with type 1 diabetes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115, (2018).</li><li>Hui-Yuen, J., Mcallister, S., Koganti, S., Hill, E., Bhaduri-Mcintosh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+Epstein-Barr+Virus+Growth-transformed+Lymphoblastoid+Cell+Lines.">Establishment of Epstein-Barr Virus Growth-transformed Lymphoblastoid Cell Lines.</a> Journal of Visualized Experiments. , 2-7 (2011).</li><li>Alexander-Miller, M. A., Leggatt, G. R., Berzofsky, J. A., Moss, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+expansion+of+high+or+low+avidity+cytotoxic+T+lymphocytes+and+efficacy+for+adoptive+immunotherapy.">Selective expansion of high or low avidity cytotoxic T lymphocytes and efficacy for adoptive immunotherapy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93, 4102-4107 (1996).</li></ol>

Proliferatie op basis van CFSE is een eenvoudige en robuuste methode voor het opsporen en inventariseren van antigeen-specifieke humane CD4+ T-cellen. Het is al eerder aangetoond dat het gebruik van de optimale concentratie van CFSE essentieel is voor optimale resultaten4. Te veel CFSE abrogates proliferatie, terwijl te weinig staat niet toe dat verdeelde en onverdeelde cellen te onderscheiden. Daarentegen worden relatief hoge concentraties (5,0 μM) van CFSE gebruikt om gezuiverde Muri...

De mogelijkheid om antigeen-specifieke T-cellen te detecteren en te bestuderen is belangrijk in onderzoeken naar door cellen gemedieerde immuniteit. Echter, dit is vooral een uitdaging voor autoantigen-specifieke CD4+ T-cel reacties, die zeer zwak en moeilijk te detecteren zijn. Een veelgebruikte methode voor de detectie van antigeen-specifieke lymfocyten proliferatie is [3H]-thymidine, een van nucleotide dat is opgenomen in het DNA van prolifererende cellen. Hoewel de [3H]-thymidine-test DNA-synthese kan detecteren, is deze methode een indirecte maatstaf voor celdeling, omdat DNA-synthese onafhankelijk van mitose kan starten (d.w.z. tijdens genduplicatie en apoptosis1). Dit probleem wordt verergerd door het feit dat antigeen-specifieke proliferatie van cellen kan resulteren in aanzienlijke apoptosis2, wat leidt tot een mogelijke overschatting van antigeen-specifieke proliferatie. Bovendien levert de methode [3H]-thymidine geen fenotypische informatie voor prolifererende lymfocyten, zoals CD4+ of CD8+ Lineage proliferatie in PBMCs, gestimuleerd met antigene peptiden.
In 2003 publiceerden we de eerste kleurstof verdunnings test met behulp van CFSE, genaamd de op CFSE gebaseerde proliferatie test3,4. CFSE is een fluorescerende kleurstof die stabiel bindt aan intracellulaire eiwitten door een covalente binding te vormen aan intracellulaire lysine residuen. Aangezien CFSE-gelabelde eiwitten gelijkelijk worden verdeeld onder dochtercellen3, kunnen cellen die zijn onderverdeeld worden onderscheiden van onverdeelde cellen door Flowcytometrie, wat ook de kwantitatieve fenotypering van lymfocyten populaties mogelijk maakt. Het aantal divisies dat een cel heeft ondergaan vanaf de tijd van de CFSE-kleuring kan worden gemeten tot op zekere hoogte5. Meer recentelijk zijn veel vergelijkbare kleurstoffen ontwikkeld, zoals CellTrace Violet proliferatie Dye (VPD) en CytoTrack Dye, die op dezelfde manier werken6. Dit protocol richt zich op CFSE, maar de principes gelden evenzeer voor andere verwante kleurstoffen.
Peptide-MHC tetrameer kleuring is een veelgebruikte methode voor het opsporen en klonen van antigeen-specifieke CD8+ T-cellen. Dit is een goed opgezette methode7,8,9,10; het klonen op basis van tetrameer vereist echter bestaande kennis van de epitoop/MHC-beperking en elke epitoop vereist zijn eigen tetrameer11, die de reikwijdte van ontdekking en klonen van nieuwe epitoop-specifieke T-cellen beperkt. De op CFSE gebaseerde proliferatie kan worden gebruikt met peptiden, eiwitten of cellysaten. Het hier beschreven protocol is zowel eenvoudig als robuust, en de respons CD4+ T-cellen kunnen worden gesorteerd voor gebruik in downstream functionele en Biochemische karakterisering van de assays12,13.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anti-human CD4-AlexaFluor647</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>317422</td>
			<td>RRID:AB_2716180</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>C1157</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll-Paque Plus</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>71-7167-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax (1x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Influenza A H1N1 (PR8) Matrix protein 1</td>
			<td>Sino Biological</td>
			<td>40010-V07E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Essential amino acids (1x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/ Streptomycin (1x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15070063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pooled human serum</td>
			<td>Australian Red Cross</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proinsulin C-peptide PI33-63</td>
			<td>Purar Chemicals</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom made synthetic peptide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R8758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetanus Toxoid protein</td>
			<td>Statens Serum Intitut</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of proliferating human antigen-specific cd4+ t cells using carboxyfluorescein succinimidyl ester

Beschreven is een eenvoudige, in vitro, kleurstof verdunnings methode voor het meten van antigeen-specifieke CD4+ T celproliferatie in menselijke perifere bloed mononucleaire cellen (PBMCs). De ontwikkeling van stabiele, niet-toxische, fluorescerende kleurstoffen zoals carboxyfluorescein succinimidyl Ester (CFSE) maakt het mogelijk zeldzame, antigeen-specifieke T-cellen te onderscheiden van omstanders door vermindering in fluorescerende kleuring, zoals gedetecteerd door flow cytometrie. Deze methode heeft de volgende voordelen ten opzichte van alternatieve benaderingen: (i) het is zeer gevoelig voor laagfrequente T-cellen, (II) geen kennis van het antigeen of epitoop is vereist, III) het fenotype van de reagerende cellen kan worden geanalyseerd en (IV) levensvatbaar, cellen kunnen worden gesorteerd en gebruikt voor verdere analyse, zoals T-cellen klonen.

In vitro stimulatie van humane PBMCs met tetanus toxoïde proteïne: PBMCs werden gekleurd met CFSE en werden gedurende 7 dagen gestimuleerd in de aanwezigheid van tetanutoxoïde. Bijna alle donoren toonden een sterke T-cel respons op tetanutoxoïde omdat ze waren gevaccineerd, waardoor tetanus tetanustoxoïd een nuttige positieve controle antigeen. Figuur 2 toont in drievis, dat de proliferatie van de CFSE van CD4+ T cellen van ongestimuleerde PBM...

Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Proliferating Human Antigen-specific CD4+ T Cells using Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester at JoVE.com

Quantification of Proliferating Human Antigen-specific CD4+ T Cells using Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester

Kwantificering van prolifererende humane antigeen-specifieke CD4+ T-cellen met behulp van Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester

Gepresenteerd hier is een protocol voor het meten van prolifererende CD4+ T cellen in reactie op antigene eiwitten of peptiden met behulp van kleurstof verdunning. Deze bepaling is bijzonder gevoelig voor zeldzame antigeen-specifieke T-cellen en kan worden gewijzigd om het klonen van antigeen-specifieke cellen te vergemakkelijken.

Described is a simple, in vitro, dye dilution-based method for measuring antigen-specific CD4+ T cell proliferation in human peripheral blood mononuclear ...

Dit protocol biedt een platform voor het bestuderen van CD4T-celreacties die vaak zwak en moeilijk te detecteren zijn. Deze techniek maakt het mogelijk voor de detectie, opsoming en isolatie van CD4T cellen zonder voorkennis met betrekking tot antigeen presentatie. Het belangrijkste voordeel is de analyse van CD4T cellen die vrij vaak zeldzame populaties geassocieerd met auto-immuunziekten zoals type een diabetes.Bij het verkrijgen van het perifere bloedmonster van een gezonde donor, verdun het bloed in PBS in ten minste een tot twee verhouding voordat gelaagdheid 35 milliliter bloed meer dan 15 milliliter dichtheidsgradiënt medium in een 50 milliliter buis. Scheid de cellen door dichtheidsgradiëntcentrifugatie en verwijder ongeveer 20 milliliter van de resulterende bovenste plasmalaag. Dan verzamelen van de witte bloedcel laag verzorgen om de rode bloedcel pellet te voorkomen en was de cellen drie keer in verse PBS.Verdun de cellen na het tellen één keer 10 tot de zesde perifere bloedmonnucleaire cel of PBMC per milliliter PBS-concentratie. Voeg 300 microliter cellen voor elke controle in individuele 10 milliliter buizen. Na topping elke buis met PBS, sediment de cellen door centrifugatie en resuspend de cellen op een een keer 10 tot de zesde cellen per milliliter van RP5 medium concentratie.Dan plaat 100 microliter cellen per controle op elk van de drie putten van een 96 put plaat met 100 microliter van RP5 medium per put. Plaats de plaat zeven dagen in de couveuse van de celkweek. Breng vervolgens de resterende PBMCs over in een nieuwe buis van 50 milliliter en voeg één microliter CFSE-werkvoorraadoplossing per milliliter celsuspensie toe aan de zijkant van de buis.Snel de buis meerdere keren omkeren en plaats de cellen in een celcultuur incubator gedurende vijf minuten. Aan het einde van de incubatie, arresteer de reactie met vijf milliliter RP5-medium en verzamel de cellen door centrifugatie. Resuspend de pellet op een keer 10 tot de zesde PBMCs per milliliter van verse RP5 medium en voeg een milliliter cellen aan een 10 milliliter buis per te testen antigeen.Voeg vervolgens 100 microliter cellen per antigeen toe aan elk van de drie putten van een 96 putplaat goed met 100 microliter van RP5 medium aangevuld met het verdunde antigeen van belang per put. Plaats de plaat zeven dagen in de couveuse van de celkweek. Om de CD4+T-celpopulaties te bevlekken voor stromingscytometrische analyse, breng aan het einde van de cultuur het volledige volume cellen van elke bron over naar individuele fluorescentie geactiveerde celsorterende of FACS-buizen.Was elk monster met een milliliter PBS aangevuld met 0,1% foetale kalf serum of FCS. Resuspend de pellets in een geschikte anti-menselijke CD4 antilichaam in 100 microliter van PBS plus FCS per buis. Incubeer de cellen op vier graden Celsius gedurende 20 minuten beschermd tegen licht.Aan het einde van de incubatie, was de monsters in een milliliter verse PBS plus FCS per buis en resuspend de pellets in 100 microliters van verse PBS plus FCS. Voeg vlak voor de analyse één microliter propidiumjodide toe aan elke buis om uitsluiting van dode cellen mogelijk te maken. Poort de lymfocyten volgens hun voorwaartse en zijverstrooiingsgebieden.Om de apoptotische cellen uit te sluiten, poort het voorwaartse verspreidingsgebied versus propidium jodide negatieve cellen en gebruik de niet-gekleurde cellen om een spanningsbasislijn voor de niet-fluorescerende cellen in te stellen. Stel de spanningen voor de CD4 antilichaamfluorofoforeren en het CFSE-signaal zo in dat het tl-signaal voor elk van deze signalen onder de 1000 ligt. Gebruik de CFSE- en CD4-monsters met één kleur om een positief fluorescerend signaal voor elke kleur te bevestigen met behulp van de spanningen die zijn ingesteld met de niet-gekleurde cellen.Aangezien CFSE en propidium jodide enige spectrale overlap hebben, past u de compensatie aan om de propidium jodidefluorescentie af te trekken van de CFSE-fluorescentie totdat het CFSE-monster geen signaal oplevert in het propidiumjodidekanaal. Wanneer alle monsters zijn geanalyseerd, bereken de celdelingsindex door het aantal verdeelde cellen te delen door 5000 onverdeelde cellen van de door antigeen gestimuleerde groep door het gemiddelde aantal verdeelde cellen per 5000 onverdeelde cellen van de cellen die zonder antigeen worden gekweekt. Bijna alle donoren vertonen een sterke T-cel respons op Tetanus toxoïde na in vitro stimulatie, omdat de donoren zijn gevaccineerd waardoor Tetanus toxoïde een nuttig positief bestrijdingsantigeen is.De proliferatie van CD4+T-cellen uit niet-geprikkelde PBMCs is echter minimaal. Na zeven dagen van stimulatie met menselijke pro-insuline C-peptide, pro-insuline C-peptide specifieke CD4 + T cellen kunnen worden gedetecteerd in het perifere bloed van een individu met type een diabetes. PBMC gestimuleerd met influenza Een virus matrix eiwit tonen ook proliferatie.Samen tonen deze gegevens aan dat de test kan worden uitgevoerd met behulp van volledige lengte eiwitten en korte synthetische peptiden. De FACS-component van deze methode kan worden uitgevoerd met behulp van een celsorteerstroomcytometer. Met behulp van een celsorteerder kunnen de antigeenspecifieke T-cellen op het niveau van één cel worden geïsoleerd voor downstream-analyse.Deze methode heeft toegestaan voor de ontdekking van CD4T celreacties bij personen met een vroeg begin type een diabetes. Het analyseren van deze zeldzame T-cel populaties met behulp van andere methoden presenteert verschillende technische uitdagingen.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Quantification of Proliferating Human Antigen-specific CD4+ T Cells using Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester

Antigen Specific In Vivo Killing Assay using CFSE Labeled Target Cells

Antigen Specific In Vivo Killing Assay using CFSE Labeled Target Cells

Antigen Specifieke In Vivo Killing Assay met behulp van CFSE Labeled doelcellen

Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) can be used to easily and quickly label a cell population of interest for in vivo investigation.  ...

The Use of Carboxyfluorescein Diacetate Succinimidyl Ester (CFSE) to Monitor Lymphocyte Proliferation

The Use of Carboxyfluorescein Diacetate Succinimidyl Ester CFSE to Monitor Lymphocyte Proliferation

Het gebruik van carboxyfluoresceïne diacetaat succinimidylester (CFSE) om lymfocytproliferatie Monitor

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE) is an effective and popular means to monitor lymphocyte division1-3.  CFSE covalently labels long-lived ...

Expansion of Human Peripheral Blood  &gamma;&delta; T Cells using Zoledronate

Expansion of Human Peripheral Blood  ÃƒÅ½Ã‚Â³ÃƒÅ½Ã‚Â´ T Cells using Zoledronate

Uitbreiding van de humane perifere bloed γδ T-cellen met behulp van zoledronaat

Human &gamma;&delta; T cells can recognize and respond to a wide variety of stress-induced antigens, thereby developing innate broad anti-tumor and ...

Adenoviral Transduction of Naive CD4 T Cells to Study Treg Differentiation

Adenovirale transductie van Naïeve CD4 T-cellen aan Treg Differentiatie Studie

Regulatory T cells (Tregs) are essential to provide immune tolerance to self as well as to certain foreign antigens. Tregs can be generated from naive CD4 ...

Isolation and Th17 Differentiation of Na&iuml;ve CD4 T Lymphocytes

Isolation and Th17 Differentiation of NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4 T Lymphocytes

Isolatie en Th17 Differentiatie van naïeve CD4 T-lymfocyten

Th17 cells are a distinct subset of T cells that have been found to produce interleukin 17 (IL-17), and differ in function from the other T cell subsets ...

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Het beoordelen van de Aangeboren Sensing van HIV-1 geïnfecteerde CD4<sup&gt; +</sup&gt; T cellen door plasmacytoïde dendritische cellen gebruiken een<em&gt; Ex vivo</em&gt; Co-cultuur systeem.

HIV-1 innate sensing requires direct contact of infected CD4+ T cells with plasmacytoid dendritic cells (pDCs). In order to study this process, the ...

Killer Artificial Antigen Presenting Cells (KaAPC) for Efficient In Vitro Depletion of Human Antigen-specific T Cells

Killer Artificial Antigen Presenting Cells KaAPC for Efficient In Vitro Depletion of Human Antigen-specific T Cells

Killer Artificial antigeen presenterende cellen (KaAPC) voor Efficient<em&gt; In Vitro</em&gt; Uitputting van Human Antigeen-specifieke T-cellen

Current treatment of T cell mediated autoimmune diseases relies mostly on strategies of global immunosuppression, which, in the long term, is accompanied ...

Generating De Novo Antigen-specific Human T Cell Receptors by Retroviral Transduction of Centric Hemichain

Generating De Novo Antigen-specific Human T Cell Receptors by Retroviral Transduction of Centric Hemichain

Generating<em&gt; De Novo</em&gt; Antigeen-specifieke menselijke T-cel receptoren door Retrovirale Transductie van Centric Hemichain

T cell receptors (TCRs) are used clinically to direct the specificity of T cells to target tumors as a promising modality of immunotherapy. Therefore, ...

Development of Stem Cell-derived Antigen-specific Regulatory T Cells Against Autoimmunity

Ontwikkeling van stamcel-afgeleide Antigeen-specifieke regulatoire T-cellen tegen auto-immuniteit

Autoimmune diseases arise due to the loss of immunological self-tolerance. Regulatory T cells (Tregs) are important mediators of immunologic ...

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells (iTregs) from Na&#239;ve CD4+ T Cells Using a TGF-&#946;-containing Protocol

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells iTregs from NaÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¯ve CD4+ T Cells Using a TGF-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-containing Protocol

In vitro differentiatie van humane CD4 + FOXP3 + geïnduceerde regulatoire T-cellen (iTregs) van naïeve CD4 + T cellen met behulp van een TGF-β-bevattende Protocol