Name: quantification of proliferating human antigen-specific cd4+ t cells using carboxyfluorescein succinimidyl ester
Uploaded: 2019-06-04T13:00:00
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Questo lavoro è stato sostenuto da: The Juvenile Diabetes Research Foundation [JDRF 5-CDA-2014-210-A-N] (S. M.). Il National Health and Medical Research Council (NHMRC GNT123586) (S. M.), Il Diabetes Australia Research Trust Millennium Award (Y17M1-MANS) (S. M.), il Programma operativo di supporto alle infrastrutture del governo vittoriano (S. M., A. D., E. T., M.S.) e NHMRC) e NHMRC Borsa di studio post-laurea APP1094337 e JDRF PhD Top-up Scholarship (M. S.).

Tutti i soggetti hanno dato il consenso informato prima della raccolta del sangue periferico. L'approvazione etica per gli esperimenti con PBMC è stata data da St. Vincent's Hosptial (HREC-A 135/08 e HREC-A 161/15).
1. Preparazione del reagente
<ol><li>
Supporti di cellule T umane
	<ol>
<li>Preparare i supporti RP-5 per la coltura PBMC, che consiste di RPMI 1640, 1x aminoacidi non essenziali, L-alanyl-L-glutamine dipeptide (2 mM), penicillina (100 U/mL)/streptomycin (0,1 mg...

<ol>
	<li>Duque, A., Rakic, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+effects+of+BrdU+and+3H-Thymidine+incorporation+into+DNA+on+cell+proliferation,+position+and+fate.">Different effects of BrdU and 3H-Thymidine incorporation into DNA on cell proliferation, position and fate.</a> Journal of Neuroscience. 31, 15205-15217 (2011).</li><li>Mannering, S. I., Zhong, J. I. E., Cheers, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-cell+activation,+proliferation+and+apoptosis+in+primary+Listeria+monocytogenes+infection.">T-cell activation, proliferation and apoptosis in primary Listeria monocytogenes infection.</a> Immunology. 106, 87-95 (2002).</li><li>Lyons, A. B., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+lymphocyte+division+by+flow+cytometry.">Determination of lymphocyte division by flow cytometry.</a> Journal of Immunological Methods. 171, 131-137 (1994).</li><li>Mannering, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensitive+method+for+detecting+proliferation+of+rare+autoantigen-specific+human+T+cells.">A sensitive method for detecting proliferation of rare autoantigen-specific human T cells.</a> Journal of Immunological Methods. 283, 173-183 (2003).</li><li>Quah, B. J. C., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Use+of+Carboxyfluorescein+Diacetate+Succinimidyl+Ester+(CFSE)+to+Monitor+Lymphocyte+Proliferation.">The Use of Carboxyfluorescein Diacetate Succinimidyl Ester (CFSE) to Monitor Lymphocyte Proliferation.</a> Journal of Visualized Experiments. , 4-7 (2010).</li><li>Ten Brinke, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+T-cell+responses+in+translational+studies:+Optimization+of+dye-based+proliferation+assay+for+evaluation+of+antigen-specific+responses.">Monitoring T-cell responses in translational studies: Optimization of dye-based proliferation assay for evaluation of antigen-specific responses.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1-15 (2017).</li><li>Gillespie, G. M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strong+TCR+Conservation+and+Altered+T+Cell+Cross-Reactivity+Characterize+a+B*57-Restricted+Immune+Response+in+HIV-1+Infection.">Strong TCR Conservation and Altered T Cell Cross-Reactivity Characterize a B*57-Restricted Immune Response in HIV-1 Infection.</a> Journal of Immunolgy. 177, 3893-3902 (2006).</li><li>Tynan, F. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+Resolution+Structures+of+Highly+Bulged+Viral+Epitopes+Bound+to+Major+Histocompatibility+Complex+Class+I:+Implications+for+t-cell+receptor+engagement+and+t-cell+immunodominance.">High Resolution Structures of Highly Bulged Viral Epitopes Bound to Major Histocompatibility Complex Class I: Implications for t-cell receptor engagement and t-cell immunodominance.</a> Journal of Biological Chemistry. 280, 23900-23909 (2005).</li><li>Blanchard, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoplasmic+reticulum+aminopeptidase+associated+with+antigen+processing+defines+the+composition+and+structure+of+MHC+class+I+peptide+repertoire+in+normal+and+virus-infected+cells.">Endoplasmic reticulum aminopeptidase associated with antigen processing defines the composition and structure of MHC class I peptide repertoire in normal and virus-infected cells.</a> Journal of Immunology. 184, 3033-3042 (2010).</li><li>Glanville, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+specificity+groups+in+the+T+cell+receptor+repertoire+repertoire.">Identifying specificity groups in the T cell receptor repertoire repertoire.</a> Nature. 547, 94-98 (2017).</li><li>Wooldridge, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tricks+with+tetramers:+how+to+get+the+most+from+multimeric+peptide+MHC.">Tricks with tetramers: how to get the most from multimeric peptide MHC.</a> Immunology. 126, 147-164 (2009).</li><li>Mannering, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+method+for+cloning+human+autoantigen-specific+T+cells.">An efficient method for cloning human autoantigen-specific T cells.</a> Journal of Immunological Methods. 298, 83-92 (2005).</li><li>So, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proinsulin+C-peptide+is+an+autoantigen+in+people+with+type+1+diabetes.">Proinsulin C-peptide is an autoantigen in people with type 1 diabetes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115, (2018).</li><li>Hui-Yuen, J., Mcallister, S., Koganti, S., Hill, E., Bhaduri-Mcintosh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+Epstein-Barr+Virus+Growth-transformed+Lymphoblastoid+Cell+Lines.">Establishment of Epstein-Barr Virus Growth-transformed Lymphoblastoid Cell Lines.</a> Journal of Visualized Experiments. , 2-7 (2011).</li><li>Alexander-Miller, M. A., Leggatt, G. R., Berzofsky, J. A., Moss, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+expansion+of+high+or+low+avidity+cytotoxic+T+lymphocytes+and+efficacy+for+adoptive+immunotherapy.">Selective expansion of high or low avidity cytotoxic T lymphocytes and efficacy for adoptive immunotherapy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93, 4102-4107 (1996).</li></ol>

La proliferazione basata su CFSE è un metodo semplice e robusto per rilevare ed enumerare le cellule CD4 umane specifiche dell'antigene e le cellule T. È stato dimostrato in precedenza che l'utilizzo della concentrazione ottimale di CFSE è essenziale per ottenere risultati ottimali4. Troppo CFSE abroga la proliferazione, mentre troppo poco non consente di distinguere le cellule divise e indivise. Al contrario, concentrazioni relativamente elevate (5,0 M) di CFSE vengono utilizzate pe...

La capacità di rilevare e studiare le cellule T specifiche dell'antigene è importante negli studi sull'immunità mediata dalle cellule. Tuttavia, in questo modo è particolarmente difficile per il CD4 specifico di autoantigen- risposte delle cellule T, che sono molto deboli e difficili da rilevare. Un metodo comune utilizzato per la rilevazione della proliferazione dei linfociti specifici dell'antigene è [3H]-thymidine, che è un nucleotide radioetichettato incorporato nel DNA delle cellule che proliferano. Anche se l'analisi [3H]-timinano può rilevare la sintesi del DNA, questo metodo è una misura indiretta della divisione cellulare, perché la sintesi del DNA può avviare indipendentemente dalla mitosi (cioè durante la duplicazione genica e l'apoptosi1). Questo problema è aggravato dal fatto che la proliferazione delle cellule specifichedell'antigene può provocare una notevole apoptosi 2, portando a una potenziale sopravalutazione della proliferazione specifica dell'antigene. Inoltre, il metodo [3H]-thymidine non fornisce informazioni fenotipiche per la proliferazione dei linfociti, come cd4o CD8- proliferazione del lignaggio nei PBMCC stimolati con peptidi antigenici.
Nel 2003, abbiamo pubblicato il primo saggio di diluizione del colorone utilizzando CFSE, chiamato il saggio di proliferazione basato su CFSE3,4. CFSE è un tinrito fluorescente che si lega stabilmente alle proteine intracellulari formando un legame covalente ai residui di lisina intracellulare. Poiché le proteine con etichetta CFSE sono divise equamente tra le cellule figlie3, le cellule che si sono divise possono essere distinte dalle cellule indivise per citometria di flusso, il che consente anche la fenotipizzazione quantitativa delle popolazioni di linfociti. Infatti, il numero di divisioni che una cellula ha subito dal momento della colorazione CFSE può essere misurato in una certa misura5. Più recentemente, sono stati sviluppati molti coloranti simili come cellTrace Violet proliferation colorante (VPD) e CytoTrack colorante, che funzionano in modo simile6. Questo protocollo si concentra su CFSE, ma i principi si applicano ugualmente ad altri coloranti correlati.
La colorazione del tetramer Peptide-MHC è un metodo ampiamente utilizzato per rilevare e clonare cellule CD8- T specifiche dell'antigene. Questo è un metodo ben consolidato7,8,9,10; tuttavia, la clonazione basata su tetramer richiede una conoscenza esistente della restrizione epitope/MHC e ogni epitopo richiede un proprio tetramero11, che limita l'ambito di scoperta e clonazione di nuove cellule T specifiche dell'epitopo. La proliferazione basata su CFSE può essere utilizzata con peptidi, proteine o lismi cellulari. Il protocollo qui descritto è semplice e robusto, e il rispondente CD4- t cellule possono essere ordinati per l'uso in saggi di caratterizzazione funzionale e biochimica a valle12,13.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anti-human CD4-AlexaFluor647</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>317422</td>
			<td>RRID:AB_2716180</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>C1157</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll-Paque Plus</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>71-7167-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax (1x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Influenza A H1N1 (PR8) Matrix protein 1</td>
			<td>Sino Biological</td>
			<td>40010-V07E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Essential amino acids (1x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/ Streptomycin (1x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15070063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pooled human serum</td>
			<td>Australian Red Cross</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proinsulin C-peptide PI33-63</td>
			<td>Purar Chemicals</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom made synthetic peptide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R8758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetanus Toxoid protein</td>
			<td>Statens Serum Intitut</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of proliferating human antigen-specific cd4+ t cells using carboxyfluorescein succinimidyl ester

Descritto è un metodo semplice, in vitro, basato sulla diluizione dei coloranti per misurare la proliferazione delle cellule T specifiche dell'antigene nelle cellule mononucleari del sangue periferico umano (PMC). Lo sviluppo di coloranti stabili, non tossici e fluorescenti come carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE) consente di distinguere le cellule T rare e specifiche dell'antigene dai bystander per diminuzione della colorazione fluorescente, come rilevato dalla citometria di flusso. Questo metodo presenta i seguenti vantaggi rispetto agli approcci alternativi: (i) è molto sensibile alle cellule T a bassa frequenza, (ii) non è richiesta alcuna conoscenza dell'antigene o dell'epitopo, (iii) il fenotipo delle cellule rispondenti può essere analizzato e (iv) vitale, rispondente, rispondendo le cellule possono essere ordinate e utilizzate per ulteriori analisi, come la clonazione delle cellule T.

Stimolazione in vitro dei PMC umani con proteina toxoidte del tetano: i PMC sono stati macchiati con CFSE e stimolati per 7 giorni in presenza di toxoid tetano. Quasi tutti i donatori hanno mostrato una forte risposta delle cellule T al tetano toxoid perché erano stati vaccinati, il che rende il tetano toxoid un utile antigene di controllo positivo. La figura 2 dimostra in triplice copia, che la proliferazione CFSE di CD4- Le cellule T provenienti...

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Quantification of Proliferating Human Antigen-specific CD4+ T Cells using Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester

Quantificazione delle cellule CD4 specifiche dell'antigene umano che proliferano utilizzando Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester

Presentato qui è un protocollo per la misurazione delle cellule CD4 - T proliferanti in risposta a proteine antigeniche o peptidi utilizzando la diluizione del tinri. Questo analisi è particolarmente sensibile alle rare cellule T specifiche dell'antigene e può essere modificato per facilitare la clonazione delle cellule specifiche dell'antigene.

Described is a simple, in vitro, dye dilution-based method for measuring antigen-specific CD4+ T cell proliferation in human peripheral blood mononuclear ...

Questo protocollo fornisce una piattaforma per lo studio delle risposte delle celle CD4T che sono spesso deboli e difficili da rilevare. Questa tecnica consente il rilevamento, l'enumerazione e l'isolamento delle celle CD4T senza alcuna conoscenza preliminare della presentazione dell'antigene. Il vantaggio principale è l'analisi delle cellule CD4T che sono abbastanza spesso popolazioni rare associate a condizioni autoimmuni come il diabete di tipo uno.Dopo aver ottenuto il campione di sangue periferico da un donatore sano, diluire il sangue in PBS in almeno uno o due rapporti prima di stratificazione di 35 millilitri di sangue oltre 15 millilitri di mezzo gradiente di densità in un tubo da 50 millilitri. Separare le cellule per centrifugazione del gradiente di densità e rimuovere circa 20 millilitri dello strato plasmatico superiore risultante. Quindi raccogliere lo strato di globuli bianchi facendo attenzione ad evitare il pellet di globuli rossi e lavare le cellule tre volte in PBS fresco.Dopo il conteggio, diluire le cellule a una cella mononucleare del sangue una volta 10-10 o PBMC per millilitro di concentrazione di PBS. Aggiungere 300 microlitri di celle per ogni controllo in singoli tubi da 10 millilitri. Dopo aver topping ogni tubo con PBS, sedimentare le cellule per centrifugazione e rimosorsi le cellule a una volta 10 alla sesta colonna per millilitro di concentrazione media RP5.Quindi placcare 100 microlitri di cellule per controllo a ciascuno dei tre pozzi di una piastra di 96 porri contenente 100 microlitri di RP5 medio per pozzo. Posizionare la piastra nell'incubatore di coltura cellulare per sette giorni. Successivamente, trasferire i RESTANTI PBBC in un nuovo tubo da 50 millilitri e aggiungere un microlitro di soluzione di materiale di lavoro CFSE per un millilitro di sospensione cellulare sul lato del tubo.Invertire rapidamente il tubo più volte per mescolare e posizionare le cellule in un incubatore di coltura cellulare per cinque minuti. Alla fine dell'incubazione, arrestare la reazione con cinque millilitri di mezzo RP5 e raccogliere le cellule per centrifugazione. Resuspend il pellet a uno per 10 al sesto PBBC per millilitro di mezzo RP5 fresco e aggiungere un millilitro di cellule a un tubo da 10 millilitri per antigene da testare.Aggiungere quindi 100 microlitri di cellule per antigene a ciascuno dei tre pozzali di un pozzo di 96 piastre contenenti 100 microlitri di mezzo RP5 integrati con l'antigene diluito di interesse per pozzo. Posizionare la piastra nell'incubatore di coltura cellulare per sette giorni. Per macchiare le popolazioni di cellule CD4+T per l'analisi citometrica del flusso, alla fine della coltura trasferire l'intero volume di cellule da ogni pozzo in singoli tubi a celle attivate a fluorescenza o tubi FACS.Lavare ogni campione con un millilitro di PBS integrato con siero di vitello fetale dello 0,1% o FCS. Resuspend i pellet in un anticorpo CD4 anti-umano appropriato in 100 microlitri di PBS più FCS per tubo. Incubare le cellule a quattro gradi Celsius per 20 minuti protetti dalla luce.Al termine dell'incubazione, lavare i campioni in un millilitro di PBS fresco più FCS per tubo e rimospendre i pellet in 100 microlitri di PBS fresco più FCS. Immediatamente prima dell'analisi, aggiungere un microlitro di ioduro di propidio a ciascun tubo per consentire l'esclusione delle cellule morte. Gate i linfociti in base alle loro aree di dispersione anteriore e laterale.Per escludere le cellule apoptotiche, gate l'area di dispersione in avanti rispetto alle cellule negative dello ioduro propidio e utilizzare le celle non macchiate per impostare una linea di base di tensione per le celle non fluorescenti. Impostare le tensioni per il fluoroforo anticorpale CD4 e il segnale CFSE in modo che il segnale fluorescente sia inferiore a 1000 per ciascuno. Utilizzare i campioni CFSE e CD4 a controllo del colore singolo per confermare un segnale fluorescente positivo per ogni colore utilizzando le tensioni impostate con le celle non macchiate.Poiché CFSE e ioduro di propidio hanno una certa sovrapposizione spettrale, regolare la compensazione per sottrarre la fluorescenza dello ioduro propidio dalla fluorescenza CFSE fino a quando il campione di solo CFSE non produce un segnale nel canale del propidio ioduro. Quando tutti i campioni sono stati analizzati, calcolare l'indice di divisione cellulare dividendo il numero di cellule divise per 5000 cellule indivise dal gruppo stimolato dall'antigene per il numero medio di cellule divise per 5000 cellule indivise dalle cellule coltivate senza antigene. Quasi tutti i donatori dimostrano una forte risposta delle cellule T al tossoide di Tetano dopo la stimolazione in vitro perché i donatori sono stati vaccinati rendendo il tossoide tetano un utile antigene di controllo positivo.La proliferazione delle cellule CD4+T da PBBC non stimolati è tuttavia minima. Dopo sette giorni di stimolazione con C-peptide pro-insulina umana, le cellule CD4+T specifiche del C-peptide pro-insulina possono essere rilevate nel sangue periferico di un individuo con diabete di tipo uno. Anche il PBMC stimolato con la proteina della matrice virale influenzale A dimostra la proliferazione.Nel loro insieme, questi dati dimostrano che il saggio può essere eseguito utilizzando proteine a figura intera e brevi peptidi sintetici. Il componente FACS di questo metodo può essere eseguito utilizzando un citometro del flusso di ordinamento delle celle. Utilizzando uno smistatore di celle, le cellule T specifiche dell'antigene possono essere isolate a livello di singola cella per l'analisi a valle.Questo metodo ha permesso la scoperta di risposte cellulari CD4T in individui con diabete di tipo uno ad esordio precoce. L'analisi di queste rare popolazioni di cellule T utilizzando altri metodi presenta varie sfide tecniche.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Quantification of Proliferating Human Antigen-specific CD4+ T Cells using Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester

Antigen Specific In Vivo Killing Assay using CFSE Labeled Target Cells

Antigen Specific In Vivo Killing Assay using CFSE Labeled Target Cells

Antigene specifico In Vivo Analisi Uccidere utilizzando cellule bersaglio CFSE etichetta

Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) can be used to easily and quickly label a cell population of interest for in vivo investigation.  ...

Ricerca

Immunologia e infezioni

The Use of Carboxyfluorescein Diacetate Succinimidyl Ester (CFSE) to Monitor Lymphocyte Proliferation

The Use of Carboxyfluorescein Diacetate Succinimidyl Ester CFSE to Monitor Lymphocyte Proliferation

L&#39;uso di diacetato Carboxyfluorescein succinimidile Ester (CFSE) per monitorare la proliferazione dei linfociti

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE) is an effective and popular means to monitor lymphocyte division1-3.  CFSE covalently labels long-lived ...

Expansion of Human Peripheral Blood  &gamma;&delta; T Cells using Zoledronate

Expansion of Human Peripheral Blood  ÃƒÅ½Ã‚Â³ÃƒÅ½Ã‚Â´ T Cells using Zoledronate

Espansione del sangue periferico umano γδ cellule T con Zoledronato

Human &gamma;&delta; T cells can recognize and respond to a wide variety of stress-induced antigens, thereby developing innate broad anti-tumor and ...

Adenoviral Transduction of Naive CD4 T Cells to Study Treg Differentiation

Trasduzione Adenoviral di CD4 T naive Cells allo Studio Differenziazione Treg

Regulatory T cells (Tregs) are essential to provide immune tolerance to self as well as to certain foreign antigens. Tregs can be generated from naive CD4 ...

Isolation and Th17 Differentiation of Na&iuml;ve CD4 T Lymphocytes

Isolation and Th17 Differentiation of NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4 T Lymphocytes

Isolamento e differenziazione di Th17 Naïve linfociti T CD4

Th17 cells are a distinct subset of T cells that have been found to produce interleukin 17 (IL-17), and differ in function from the other T cell subsets ...

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Valutare l&#39;innato rilevamento dell&#39;infezione da HIV-1 CD4 infetti<sup&gt; +</sup&gt; Cellule T dalle cellule dendritiche plasmacitoidi Utilizzando un<em&gt; Ex vivo</em&gt; Sistema di co-coltura.

HIV-1 innate sensing requires direct contact of infected CD4+ T cells with plasmacytoid dendritic cells (pDCs). In order to study this process, the ...

Killer Artificial Antigen Presenting Cells (KaAPC) for Efficient In Vitro Depletion of Human Antigen-specific T Cells

Killer Artificial Antigen Presenting Cells KaAPC for Efficient In Vitro Depletion of Human Antigen-specific T Cells

Killer artificiale cellule presentanti l&#39;antigene (KaAPC) per una efficiente<em&gt; In Vitro</em&gt; L&#39;esaurimento delle Umana antigene-specifiche cellule T

Current treatment of T cell mediated autoimmune diseases relies mostly on strategies of global immunosuppression, which, in the long term, is accompanied ...

Generating De Novo Antigen-specific Human T Cell Receptors by Retroviral Transduction of Centric Hemichain

Generating De Novo Antigen-specific Human T Cell Receptors by Retroviral Transduction of Centric Hemichain

Generazione<em&gt; De Novo</em&gt; Antigene-specifici T umana recettori cellulari di trasduzione retrovirale di Centric Hemichain

T cell receptors (TCRs) are used clinically to direct the specificity of T cells to target tumors as a promising modality of immunotherapy. Therefore, ...

Development of Stem Cell-derived Antigen-specific Regulatory T Cells Against Autoimmunity

Lo sviluppo di cellule staminali derivate antigene-specifiche cellule T regolatorie contro autoimmunità

Autoimmune diseases arise due to the loss of immunological self-tolerance. Regulatory T cells (Tregs) are important mediators of immunologic ...

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells (iTregs) from Na&#239;ve CD4+ T Cells Using a TGF-&#946;-containing Protocol

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells iTregs from NaÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¯ve CD4+ T Cells Using a TGF-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-containing Protocol

La differenziazione in vitro di cellule CD4 + umana FOXP3 + indotta da T regolatorie (iTregs) da cellule T CD4 Naïve utilizzando un protocollo TGF-β contenenti

Regulatory T cells (Tregs) are an integral part of peripheral tolerance, suppressing immune reactions against self-structures and thus preventing ...