Name: preparation of neutrally-charged, ph-responsive polymeric nanoparticles for cytosolic sirna delivery
Uploaded: 2019-05-02T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Neutrally-charged, pH-responsive Polymeric Nanoparticles for Cytosolic siRNA Delivery at JoVE.com

ويعرب أصحاب البلاغ عن امتنانهم لكل من السيد كريغ دوفال والسيدة ريبيكا كوك للوصول إلى البيانات وموارد المختبر لاجراء هذا البحث. ويعرب المؤلفون عن امتنانهم لمعهد فانديبلت للعلوم والهندسة الهندسية (VINSE) للوصول إلى أدوات DLS و TEM (NSF EPS 1004083). ويعرب أصحاب البلاغ عن امتنانهم للمؤسسة الوطنية للعلوم لدعم برنامج زمالات البحوث العليا (NSF # 1445197). ويعرب أصحاب البلاغ عن امتنانهم للمعاهد الوطنية للصحة علي الدعم المالي (المعاهد القومية للصحة R01 EB019409). ويعرب أصحاب البلاغ عن امتنانهم لبرنامج وزاره الدفاع للبحوث الطبية الموجهة من أجل الدعم المالي (OR130302 CDMRP).

1-اعداد وتوصيف المصادر الكترونيه
<ol><li>اعداد si-NP<ol>
<li>تذوب البوليمر في 10 ملم العازلة حامض الستريك (pH 4.0) في 3.33 mg/mL. البوليمر يمكن أولا ان يذوب في تركيز 10x في الايثانول لضمان انحلال. ملاحظه: يمكن أذابه البوليمر عند تركيزات اقل ، ولكن استخدام التركيزات فوق 3.33 mg/mL يمكن ان يمنع تشكيل NP متجانسة.</li>
		...

<ol>
	<li>Fire, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potent+and+specific+genetic+interference+by+double-stranded+RNA+in+Caenorhabditis+elegans.">Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 391 (6669), 806-811 (1998).</li><li>Elbashir, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Duplexes+of+21-nucleotide+RNAs+mediate+RNA+interference+in+cultured+mammalian+cells.">Duplexes of 21-nucleotide RNAs mediate RNA interference in cultured mammalian cells.</a> Nature. 411 (6836), 494-498 (2001).</li><li>Soutschek, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+silencing+of+an+endogenous+gene+by+systemic+administration+of+modified+siRNAs.">Therapeutic silencing of an endogenous gene by systemic administration of modified siRNAs.</a> Nature. 432 (7014), 173-178 (2004).</li><li>Hannon, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference.">RNA interference.</a> Nature. 418, 244 (2002).</li><li>Dykxhoorn, D. M., Palliser, D., Lieberman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+silent+treatment:+siRNAs+as+small+molecule+drugs.">The silent treatment: siRNAs as small molecule drugs.</a> Gene Therapy. 13 (6), 541-552 (2006).</li><li>Wittrup, A., Lieberman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knocking+down+disease:+a+progress+report+on+siRNA+therapeutics.">Knocking down disease: a progress report on siRNA therapeutics.</a> Nature Reviews Genetics. 16 (9), 543 (2015).</li><li>Li, H. E., Nelson, C. C., Evans, B., Duvall, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delivery+of+Intracellular-Acting+Biologics+in+Pro-Apoptotic+Therapies.">Delivery of Intracellular-Acting Biologics in Pro-Apoptotic Therapies.</a> Current Pharmaceutical Design. 17 (3), 293-319 (2011).</li><li>Bartlett, D. W., Davis, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+siRNA+nuclease+stability+on+the+in+vitro+and+in+vivo+kinetics+of+siRNA-mediated+gene+silencing.">Effect of siRNA nuclease stability on the in vitro and in vivo kinetics of siRNA-mediated gene silencing.</a> Biotechnology and Bioengineering. 97 (4), 909-921 (2007).</li><li>Zuckerman, J. E., Choi, C. H., Han, H., Davis, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polycation-siRNA+nanoparticles+can+disassemble+at+the+kidney+glomerular+basement+membrane.">Polycation-siRNA nanoparticles can disassemble at the kidney glomerular basement membrane.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 109 (8), 3137-3142 (2012).</li><li>Dominska, M., Dykxhoorn, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breaking+down+the+barriers:+siRNA+delivery+and+endosome+escape.">Breaking down the barriers: siRNA delivery and endosome escape.</a> Journal of Cell Science. 123 (Pt 8), 1183-1189 (2010).</li><li>Gilleron, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image-based+analysis+of+lipid+nanoparticle&#8211;mediated+siRNA+delivery,+intracellular+trafficking+and+endosomal+escape.">Image-based analysis of lipid nanoparticle&#8211;mediated siRNA delivery, intracellular trafficking and endosomal escape.</a> Nature Biotechnology. 31 (7), 638 (2013).</li><li>Sahay, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficiency+of+siRNA+delivery+by+lipid+nanoparticles+is+limited+by+endocytic+recycling.">Efficiency of siRNA delivery by lipid nanoparticles is limited by endocytic recycling.</a> Nature Biotechnology. 31 (7), 653-658 (2013).</li><li>Wittrup, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+lipid-formulated+siRNA+release+from+endosomes+and+target+gene+knockdown.">Visualizing lipid-formulated siRNA release from endosomes and target gene knockdown.</a> Nature Biotechnology. 33 (8), 870-876 (2015).</li><li>Kanasty, R., Dorkin, J. R., Vegas, A., Anderson, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delivery+materials+for+siRNA+therapeutics.">Delivery materials for siRNA therapeutics.</a> Nature Materials. 12 (11), 967-977 (2013).</li><li>Adams, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patisiran,+an+RNAi+Therapeutic,+for+Hereditary+Transthyretin+Amyloidosis.">Patisiran, an RNAi Therapeutic, for Hereditary Transthyretin Amyloidosis.</a> New England Journal of Medicine. 379 (1), 11-21 (2018).</li><li>Dang, C. V., Reddy, E. P., Shokat, K. M., Soucek, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drugging+the+'undruggable'+cancer+targets.">Drugging the 'undruggable' cancer targets.</a> Nature Reviews Cancer. 17 (8), 502 (2017).</li><li>Alexis, F., Pridgen, E., Molnar, L. K., Farokhzad, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+affecting+the+clearance+and+biodistribution+of+polymeric+nanoparticles.">Factors affecting the clearance and biodistribution of polymeric nanoparticles.</a> Molecular Pharmaceutics. 5 (4), 505-515 (2008).</li><li>Verbaan, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fate+of+poly(2-dimethyl+amino+ethyl)methacrylate-based+polyplexes+after+intravenous+administration.">The fate of poly(2-dimethyl amino ethyl)methacrylate-based polyplexes after intravenous administration.</a> International Journal of Pharmaceutics. 214 (1-2), 99-101 (2001).</li><li>Lv, H., Zhang, S., Wang, B., Cui, S., Yan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicity+of+cationic+lipids+and+cationic+polymers+in+gene+delivery.">Toxicity of cationic lipids and cationic polymers in gene delivery.</a> Journal of Controlled Release. 114 (1), 100-109 (2006).</li><li>Shi, J., Kantoff, P. W., Wooster, R., Farokhzad, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+nanomedicine:+progress,+challenges+and+opportunities.">Cancer nanomedicine: progress, challenges and opportunities.</a> Nature Reviews Cancer. 17 (1), 20 (2016).</li><li>Torchilin, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+delivery+of+macromolecular+drugs+based+on+the+EPR+effect.">Tumor delivery of macromolecular drugs based on the EPR effect.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 63 (3), 131-135 (2011).</li><li>Duncan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dawning+era+of+polymer+therapeutics.">The dawning era of polymer therapeutics.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 2 (5), 347 (2003).</li><li>Tang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+the+optimal+size+of+anticancer+nanomedicine.">Investigating the optimal size of anticancer nanomedicine.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 111 (43), 15344-15349 (2014).</li><li>Nelson, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Balancing+Cationic+and+Hydrophobic+Content+of+PEGylated+siRNA+Polyplexes+Enhances+Endosome+Escape,+Stability,+Blood+Circulation+Time,+and+Bioactivity+in+vivo.">Balancing Cationic and Hydrophobic Content of PEGylated siRNA Polyplexes Enhances Endosome Escape, Stability, Blood Circulation Time, and Bioactivity in vivo.</a> ACS Nano. 7 (10), 8870-8880 (2013).</li><li>Jackson, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zwitterionic+Nanocarrier+Surface+Chemistry+Improves+siRNA+Tumor+Delivery+and+Silencing+Activity+Relative+to+Polyethylene+Glycol.">Zwitterionic Nanocarrier Surface Chemistry Improves siRNA Tumor Delivery and Silencing Activity Relative to Polyethylene Glycol.</a> ACS Nano. , (2017).</li><li>Akinc, A., Thomas, M., Klibanov, A. M., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+polyethylenimine-mediated+DNA+transfection+and+the+proton+sponge+hypothesis.">Exploring polyethylenimine-mediated DNA transfection and the proton sponge hypothesis.</a> The Journal of Gene Medicine. 7 (5), 657-663 (2005).</li><li>de Wet, J. R., Wood, K. V., DeLuca, M., Helinski, D. R., Subramani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Firefly+luciferase+gene:+structure+and+expression+in+mammalian+cells.">Firefly luciferase gene: structure and expression in mammalian cells.</a> Molecular and Cellular Biology. 7 (2), 725-737 (1987).</li><li>Aggarwal, P., Hall, J. B., McLeland, C. B., Dobrovolskaia, M. A., McNeil, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticle+interaction+with+plasma+proteins+as+it+relates+to+particle+biodistribution,+biocompatibility+and+therapeutic+efficacy.">Nanoparticle interaction with plasma proteins as it relates to particle biodistribution, biocompatibility and therapeutic efficacy.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 61 (6), 428-437 (2009).</li><li>Geng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shape+effects+of+filaments+versus+spherical+particles+in+flow+and+drug+delivery.">Shape effects of filaments versus spherical particles in flow and drug delivery.</a> Nature Nanotechnology. 2 (4), 249 (2007).</li><li>Chauhan, V. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+nanorods+and+nanospheres+for+real-time+in+vivo+probing+of+nanoparticle+shape-dependent+tumor+penetration.">Fluorescent nanorods and nanospheres for real-time in vivo probing of nanoparticle shape-dependent tumor penetration.</a> Angewandte Chemie International Edition. 50 (48), 11417-11420 (2011).</li><li>Chu, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma,+tumor+and+tissue+pharmacokinetics+of+Docetaxel+delivered+via+nanoparticles+of+different+sizes+and+shapes+in+mice+bearing+SKOV-3+human+ovarian+carcinoma+xenograft.">Plasma, tumor and tissue pharmacokinetics of Docetaxel delivered via nanoparticles of different sizes and shapes in mice bearing SKOV-3 human ovarian carcinoma xenograft.</a> Nanomedicine. 9 (5), 686-693 (2013).</li><li>Werfel, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+mTORC2+Inhibitor+Therapeutically+Blocks+Breast+Cancer+Cell+Growth+and+Survival.">Selective mTORC2 Inhibitor Therapeutically Blocks Breast Cancer Cell Growth and Survival.</a> Cancer Research. 78 (7), 1845-1858 (2018).</li><li>Sarett, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipophilic+siRNA+targets+albumin+in+situ+and+promotes+bioavailability,+tumor+penetration,+and+carrier-free+gene+silencing.">Lipophilic siRNA targets albumin in situ and promotes bioavailability, tumor penetration, and carrier-free gene silencing.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 114 (32), E6490-E6497 (2017).</li><li>Williams, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrinsic+apoptotic+pathway+activation+increases+response+to+anti-estrogens+in+luminal+breast+cancers.">Intrinsic apoptotic pathway activation increases response to anti-estrogens in luminal breast cancers.</a> Cell Death and Disease. 9 (2), 21 (2018).</li><li>Evans, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+Vivo+Red+Blood+Cell+Hemolysis+Assay+for+the+Evaluation+of+pH-responsive+Endosomolytic+Agents+for+Cytosolic+Delivery+of+Biomacromolecular+Drugs.">Ex Vivo Red Blood Cell Hemolysis Assay for the Evaluation of pH-responsive Endosomolytic Agents for Cytosolic Delivery of Biomacromolecular Drugs.</a> Journal of Visualized Experiments. (73), e50166 (2013).</li><li>Werfel, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combinatorial+Optimization+of+PEG+Architecture+and+Hydrophobic+Content+Improves+siRNA+Polyplex+Stability,+Pharmacokinetics,+and+Potency+In+vivo.">Combinatorial Optimization of PEG Architecture and Hydrophobic Content Improves siRNA Polyplex Stability, Pharmacokinetics, and Potency In vivo.</a> Journal of Controlled Release. , (2017).</li><li>Kilchrist, K. V., Evans, B. C., Brophy, C. M., Duvall, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+Enhanced+Cellular+Uptake+and+Cytosolic+Retention+of+MK2+Inhibitory+Peptide+Nano-polyplexes.">Mechanism of Enhanced Cellular Uptake and Cytosolic Retention of MK2 Inhibitory Peptide Nano-polyplexes.</a> Cellular and Molecular Bioengineering. 9 (3), 368-381 (2016).</li><li>Kilchrist, K. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gal8+Visualization+of+Endosome+Disruption+Predicts+Carrier-Mediated+Biologic+Drug+Intracellular+Bioavailability.">Gal8 Visualization of Endosome Disruption Predicts Carrier-Mediated Biologic Drug Intracellular Bioavailability.</a> ACS Nano. , (2019).</li></ol>

يتم تشكيل si-NPs الموصوفة هنا من قبل جمعيه كهرباء من البوليمرات انييوني سيرنا و موجب في مجمعات polyion (بوليبليكسيس). يتم تسهيل المعقدة إلكتروستاتي من sirna وكتله db موجب من البوليمرات PEG-db عن طريق الاختلاط في انخفاض درجه الحموضة (4.0). في pH 4.0 ، DMAEMA هو protonated للغاية ، التالي كتله DB مشحونة للغاية. وهذا يضم?...

لان سيرناس تمنع ترجمه البروتينات من تسلسلات mrna ، فانها يمكن نظريا ان تستخدم للمخدرات جميع الامراض المعروفة1،2،3،4،5. ومع ذلك ، فان استخدام sirna في الطب محدود من قبل الشخصية الدوائية الفقيرة بشكل شامل من جزيئات sirna6،7. عند حقنها عن طريق الوريد ، يتم مسح سيرناس بسرعة من خلال الكلي و/أو المتدهورة من قبل نوكليسيس8،9. نظرا لحجمه الكبير والشحنة السالبة ، لا يمكن ل sirna إدخال الخلايا أو الهروب من المسار endolysosomal للوصول إلى مجمع إسكات الناجمة عن الجيش النيبالي الريبي (risc) الذي يقيم في عصارة10،11،12، 13-الآن التالي ، فقد ركزت الجهود المكثفة علي تصميم وتنفيذ استراتيجيات التسليم في سيرنا14. وقد ركز هذا الجهد إلى حد كبير علي تطوير المواد النانويه المستندة إلى الدهون والبوليمر التي حزمه sirna ، حمايته من التطهير والتدهور في الجسم المجري ، والبدء في امتصاص الخلوية والهروب الباطني من خلال مجموعات الأمين موجب المؤين. وقد تم الإبلاغ عن العديد من النجاحات قبل السريرية ومؤخرا, وقد تم الإبلاغ عن النجاح السريرية الاولي ل جسيمات متناهي المستندة إلى الولادة سيرنا الكبدية لعلاج وراثي transthyretin-توسط (حطاب) الداء النشواني15.
هناك العديد من الجينات المسببة للسرطان التي هي حاليا "غير قابله للتوصيل" من قبل الصيدلة التقليدية (اي ، المخدرات جزيء صغير) ، وتحفيز تصميم النانويه سيرنا البوليمر (si-NPs) لعلاج السرطان16. ومع ذلك ، هناك مجموعه منفصلة من معلمات التصميم التي يجب النظر فيها للتسليم غير الكبدي سيرنا. يجب ان نظام التسليم حماية المسؤول موجب من polyplex الذي يسبب التراص داخل الدورة الدموية الجهازية17,18,19. لولادة الورم ، علي وجه التحديد ، si-NP الاستقرار أمر ضروري لمنح الدورة الدموية الطويلة ، التالي زيادة تراكم داخل الأورام عن طريق نفاذيه معززه والاحتفاظ (الثوري) تاثير20،21. وعلاوة علي ذلك ، السيطرة علي حجم si-NP أمر ضروري لان الجسيمات النانويه فقط حوالي 20-200 nm القطر في حجم الرافعة المالية الثورية22، وأصغر Si-NPs (~ 20-50 nm القطر) معرض تحسين تغلغل الورم علي جسيمات نانويه أكبر حجما الجسيمات المجهرية23.
لمعالجه هذه القيود تصميم اضافيه لولادة الورم الجهازية من siRNA بعد الاداره الوريدية ، وقد وضعت المحايدة ، والاستجابة لدرجه الحموضة si-NPs (الشكل 1)24. هذه si-NPs هي PEGylated ، أو في الاونه الاخيره ، Zwitterionated25، لتهمه سطح محايد ومقاومه لامتصاص البروتين والانحلال في الدورة الدموية. نظرا لأنها لا يمكن ان تعتمد فقط علي الطابع موجب لدفع التسليم داخل الخلايا ، الهروب الباطنية فعاله للغاية أمر حتمي لتحقيق إسكات الجينات قويه. وبناء علي ذلك ، فان جوهر هذه si-NPs يتكون من نواه التنظير الباطني للغاية التي هي خاملة في الأس الهيدروجيني خارج الخلية (7.4) ، ولكن الذي يتم تشغيله بطريقه تشبه التبديل في الظروف المحمضة للمسار اندوليسومال [pH 6.8 (التنظير المبكر) – 5.0 ( lysosomes)]. وأخيرا ، فان مزيجا من المحتوي الموجب والمسعور داخل النواة الاساسيه لل si-NPs يوفر كلا من قوات تثبيت الاستقرار الكهروستاتيكية والكهربائية ، مما يحسن استقرار القوه الخاصة بالدم مقارنه بالنظم المجردة.
التكامل بين العديد من الوظائف في تصميم بسيط نسبيا هو ممكن باستخدام العكس بالاضافه إلى تجزئه سلسله نقل (طوف) التي تسيطر عليها البلمره لإنتاج البوليمرات مع الهندسة المعمارية المعقدة وتكوين دقيق. لإنتاج si-NPs مع تهمه سطح محايد ، الأس الهيدروجيني الاستجابة ، والاستقرار NP ، ويستخدم الطوافة لتوليف بولي (الاثيلين جلايكول-b-[2-(ديميثيلامينو) ايثيل ميثاكريليت-المشترك بوتيل ميثاكريلات]) (PEG-DB ؛ الشكل 1 (ا). PEG-DB هو بالكهرباء المعقدة مع siRNA ، وتشكيل si-NPs مع الكورونا شماعة و DB/siRNA الاساسيه (الشكل 1B). PEG تشكل طبقه مائية خاملة ومشحونة بالتحييد علي كورونا si-NP. كتله DB يتكون من 50:50 المولي نسبه 2-(ديميثيلامينو) ايثيل ميثلات (DMAEMA) وبوتيل ميثاكريليت (النقد الخاص). الموجبة DMAEMA المجمعات بالكهرباء سلبيا مشحونة siRNA. الشركاء الذاتيين لمؤسسه نقد البحرين داخل النواة NP بواسطة التفاعلات فان دير فالس ، وزيادة الاستقرار NP. معا ، DMAEMA والنقد الخاص نقل السلوك الدهني المعتمد علي الأس الهيدروجيني إلى كتله البوليمر DB. في الأس الهيدروجيني خارج الخلية ، يتم عزل كتله DB إلى النواة si-NP وخاملة إلى الطبقات الدهنية. في ظل الظروف الحمضية ، مثل تلك الموجودة في المسار اندوليسومال ، DMAEMA المؤين داخل كتله DB يسهل تاثير الإسفنج البروتون ، حيث يؤدي التخزين المؤقت الباطني إلى تورم اوموتيك وتمزق26. بالاضافه إلى ذلك ، فان الجماليات المائية التي تسبب رهاب الماء داخل كتله DB تدمج بشكل فعال في الطبقات الدهنية الشحمية ، مما يؤدي إلى انحلال التنظير الباطني القوي. وهكذا ، يتم معقده siRNA مع PEG-DB لتشكيل si-NPs التي هي محايده-مشحونة ومستقره للغاية في درجه الحموضة خارج الخلية ولكن الذي يعطل الطبقات الدهنية في الحموضة الحمضية ، وضمان التسليم السيتووليك من حموله siRNA.
وهنا وصفت الإجراءات التجريبية لإنتاج si-NPs من PEG-DB. يتم عرض ومناقشه طرق توصيف المعلمات الفيزيائية الكيميائية والنشاط الحيوي ل si-NPs. [أين وردر تو] سريعا قيمت [س-نب] [بيوكتيفيتي], استعملت [لوسيفيتاز] كمورثه نموذجيه ل [كالجن] دراسات. اليراع Luciferase هو البروتين المسؤول عن ' توهج ' من الحشرات27. وبناء علي ذلك ، فان الخلايا الثديية التي تمر بالجينات الملتقطة لليراع الضوئي تنتج توهجا "متوهجا" يمكن الإمساك به باستخدام مقياس الاناره لقياس مستويات تعبير لوسيفيرياز. هنا ، ونحن نستخدم Luciferase لتقييم النشاط الحيوي لل si-NPs من خلال تقديم siRNA ضد Luciferase وتحديد كميه الانخفاض المقابلة في التلالؤ الإحيائي في الخلايا التعبير Luciferase مقارنه بالخلايا التي تتلقي siRNA تدافعت.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.45 mm pore-size syringe filters</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>F25133</td>
			<td>17 mm diameter, PTFE membrane</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0-14 pH test strips</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>P4786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10x TAE buffer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific/Invitrogen</td>
			<td>AM9869</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-7.7 pH test strips</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>P3536</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well black walled plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3603</td>
			<td>Tissue-culture treated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose Powder</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific/Invitrogen</td>
			<td>16500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric acid monohydrate</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>C1909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dibasic sodium phosphate dihydrate</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>71643</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-luciferin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>88294</td>
			<td>Monopotassium Salt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11995065</td>
			<td>High glucose and pyruvate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>459836</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethidium bromide</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific/Invitrogen</td>
			<td>15585011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>26140079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>loading dye</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific/Invitrogen</td>
			<td>R0611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luciferase siRNA</td>
			<td>IDT</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Antisense Strand Sequense: GAGGAGUUCAUUAUCAGUGCAAUUGUU Sense Strand Sequense: CAAUUGCACUGAUAAUGAACUCCT*C* *DNA bases</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-231 / Luciferase (Bsd) stable cells</td>
			<td>GenTarget Inc</td>
			<td>SC059-Bsd</td>
			<td>Luciferase-expressing cells sued to assess si-NP bioactivity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>monobasic sodium phosphate monohydrate</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>S9638</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scarmbled siRNA</td>
			<td>IDT</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Antisense Strand Sequense: AUACGCGUAUUAUACGCGAUUAACGAC Sense Strand Sequense: CGUUAAUCGCGUAUAAUACGCGUA*T* *DNA bases</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>square polystyrene cuvettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-955-129</td>
			<td>4.5 mL capacity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEM grids</td>
			<td>Ted Pella, Inc.</td>
			<td>1GC50</td>
			<td>PELCO Center-Marked Grids, 50 mesh, 3.0mm O.D., Copper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trisodium citrate dihydrate</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>S1804</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>uranyl acetate</td>
			<td>Polysciences, Inc.</td>
			<td>21447-25</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of neutrally-charged, ph-responsive polymeric nanoparticles for cytosolic sirna delivery

يعتمد نجاح siRNA كدواء جزيئي مستهدف علي تسليم السيتوسيوليك الفعال إلى الخلايا داخل انسجه الامراض. تم تحقيق النجاح السريري لعلاج الأهداف التي كانت في السابق "غير قابله للتوصيل" للامراض الكبدية مع siRNA. ومع ذلك ، فان الولادة الفعالة سيرنا تتطلب اعتبارات التصميم الدوائية الاضافيه ، بما في ذلك وقت التداول الطويل ، والتهرب من أجهزه التخليص (علي سبيل المثال، الكبد والكلي) ، واختراق الورم والاحتفاظ به. هنا ، ونحن وصف الاعداد وفي المختبر الفيزيائية/البيولوجية توصيف الجسيمات النانويه البوليمريه المصممة لكفاءة التسليم siRNA ، وخاصه إلى الانسجه غير الكبدية مثل الأورام. ويتم اعداد جسيمات نانويه siRNA بواسطة المعقدة الكهربائية من siRNA و diblock كوبوليمر بولي (الاثيلين جلايكول-b-[2-(ديميثيلامينو) ايثيل ميثريلات-المشترك بوتيل ميثاكريلات]) (PEG-DB) لتشكيل المجمعات polyion ( بوليبليكسيس) حيث يتم عزل siRNA داخل النواة polyplex و PEG يشكل الإكليل المائي ، المحايدة المشحونة. وعلاوة علي ذلك ، فان كتله DB يصبح غشاء-lytic كما حويصلات من المسار endolysosomal (< pH 6.8) ، مما اثار الهروب الباطني والتسليم عصاري خلوي من sirna. طرق لتوصيف الخصائص الفيزيائية الكيميائية من الجسيمات النانويه siRNA مثل الحجم ، والشحن السطحي ، وتشكل الجزيئات ، و siRNA التحميل موصوفه. يتم قياس النشاط الحيوي لجسيمات نانويه sirna باستخدام لوسيفيراز كجين نموذج في الجينات السريعة والعالية الانتاجيه إسكات الفحص. وتعتبر التصاميم التي تمر هذه الاختبارات الاوليه (مثل بوليبليكسيس القائم علي الوتد DB) مناسبه للترجمة إلى الدراسات الحيوانية قبل السريرية تقييم تسليم siRNA إلى الأورام أو مواقع أخرى من علم الامراض.

بعض الخصائص الاساسيه لفعالية si-NPs لفي الجسم الحيوي التسليم siRNA هي الحجم المناسب (~ 20-200 nm القطر) ، siRNA التعبئة والتغليف ، والجينات إسكات النشاط الحيوي. وفي حين ان هذه القائمة ليست شامله (كما تناولتها المناقشة) ، فانه ينبغي تاكيد هذه الخصائص الاساسيه قبل النظر في اجراء مزيد من ...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Neutrally-charged, pH-responsive Polymeric Nanoparticles for Cytosolic siRNA Delivery at JoVE.com

Preparation of Neutrally-charged, pH-responsive Polymeric Nanoparticles for Cytosolic siRNA Delivery

طرق لاعداد وتوصيف الخواص الفيزيائية الكيميائية والنشاط الحيوي من المضادة للحمض المشحون ، وقدمت الأس الهيدروجيني المستجيبة لل النانويه. وتناقش معايير نجاح siRNA ادويه النانويه مثل الحجم ، والتشكل ، وتهمه السطح ، والتحميل siRNA ، وإسكات الجينات.

اعداد الحساسة المحايدة ، والتي تستجيب لدرجه الحموضة البوليمر النانويه لتسليم سيرتووليك siRNA

The success of siRNA as a targeted molecular medicine is dependent upon its efficient cytosolic delivery to cells within the tissue of pathology. Clinical ...

البروتوكول الحالي مهم لأنه يسمح للباحثين بإنتاج جسيمات نانوية محملة بالسيرنا، وتوصيف هذه الجسيمات النانوية بشكل كاف لضمان ملاءمتها للإدارة للحيوانات قبل الدراسات اللاحقة. وميزة هذا النهج هي إنتاج جسيمات نانوية تزيد من التوافر البيولوجي للرنا وإنتاج جسيمات نانوية مشحونة بشكل محايد وبالتالي مناسبة للإدارة النظامية. هذه التقنية هي مؤثرة لأن جسيمات نانوية سيرنا يمكن تطبيقها لعلاج عدد لا يحصى من الأمراض التي تستلزم الإدارة الجهازية بما في ذلك السرطان وأمراض القلب والأوعية الدموية واضطرابات المناعة الذاتية ، من بين أمور أخرى.للبدء، حل البوليمر في الإيثانول بتركيز 33.3 ملليغرام لكل ملليلتر ويحرك لضمان حل. ثم استخدام ماصة لنقل حل البوليمر في 10 ميليمولار حمض الستريك العازلة للوصول إلى تركيز 3.33 ملليغرام لكل ملليلتر. إضافة الماء المقطر في أنبوب يحتوي على تدخل الجيش الملكي النيبالي الصغيرة لتحقيق تركيز 50 ميكرومولار.خلط البوليمر والصغيرة تتدخل RNA الحلول بدقة في أنبوب عن طريق الأنابيب صعودا وهبوطا لتحقيق نسبة النيتروجين إلى الفوسفات من 10. ضع الأنبوب في درجة الحرارة المحيطة لمدة 30 دقيقة. ثم إضافة ملليلتر واحد من 10 ملليمتر الفوسفات العازلة في درجة اله PH ثمانية إلى أنبوب لتحقيق تركيز 0.28 ملليغرام لكل ملليلتر ومزيج بلطف إما عن طريق الأنابيب أو عكس الأنبوب.للتأكد من أن الأسي هيدروليكي النهائي محايد، حوالي 7.2 إلى 7.5، ماصة 10 ميكرولترات من جسيمات نانوية تدخل صغيرة الحمض النووي الريبي حل على شرائط اختبار الأسي هيدروليك. أولاً، إعداد عينة تشتت الضوء الديناميكية عن طريق تصفية ملليلتر واحد من الجسيمات النانوية الحمض النووي الريبي الصغيرة عند تركيز 0.28 ملليغرام لكل ملليلتر من خلال 0.45 ميكرومتر المسام حجم مرشحات حقنة في الكوارتز مربع أو البوليسترين cuvette. ثم قياس حجم السجل وقياسات تهمة السطح باستخدام أداة تشتت الضوء الديناميكية وفقا لمواصفات الشركة المصنعة.لتأكيد حجم ومورفولوجيا جسيمات نانوية RNA الصغيرة التداخلية باستخدام المجهر الإلكترون الإرسال أولاً إضافة خمسة ميكرولترات من محلول جسيمات نانوية RNA صغيرة مُنصفة عند 0.28 ملليغرام لكل ملليلتر لكل شبكة TEM. ضع الشبكات في درجة الحرارة المحيطة لمدة 60 ثانية. لطخة جافة مع ورقة مرشح لمدة ثلاث ثوان.المقبل، إضافة خمسة ميكروليترات من 3٪ محلول خلات uranyl إلى كل شبكة واحتضان لمدة 20 ثانية. بقعة جافة لمدة ثلاث ثوان. ثم ضع الشبكات في مجفف لتجف بين عشية وضحاها قبل التصوير تحت المجهر الإلكترون انتقال.لأداء تأخر جل agarose ، أولا إضافة غرامين من مسحوق agarose الكهربائية الصف إلى 100 ملليلتر من 1X تريس - خلات - EDTA العازلة في درجة الH ثمانية في منقار لإنتاج 2 ٪ agarose هلام. اثارة لتعليق agarose. ضع القارق المكتشف في ميكروويف لتسخين لمدة دقيقة إلى ثلاث دقائق حتى يتم حل جميع agarose.مرة واحدة تبريد، إضافة خمسة ميكرولترات من بروميد الإتيهيدوم بتركيز 10 ملليغرام لكل ملليلتر في القارص وخلط جيدا. ثم صب agarose في علبة هلام ووضع مشط لإنتاج الآبار. دع الجل يجف لمدة 30 دقيقة.قم بإزالة المشط بعناية لترك آبار التحميل خلفك، وصب 1X Tris-Acetate-EDTA في علبة الجل لملء الحد الأقصى لخط التعبئة. ثم ضع اثنين من aliliter microliter من صبغة التحميل مع عدم وجود SDS أو تقليل العوامل على فيلم البارافين لكل صياغة جسيمات نانوية RNA صغيرة التداخل في نسب النيتروجين إلى الفوسفات المختلفة. ماشيت لخلط 10 ميكرولترات صغيرة تتدخل الحمض النووي الريبي حل نانو جسيمات مع تحميل صبغة على فيلم البارافين.يُضاف الخليط إلى آبار أجاروز جل. قم بتوصيل نظام الكهرباء بمصدر طاقة وتشغيل مصدر جهد 100 فولت لمدة 35 دقيقة أو حتى تجتاز العينات 80٪ من طول الجل. نقل الجل من علبة إلى transilluminator الأشعة فوق البنفسجية وتصور العصابات الحمض النووي الريبي التدخل الصغيرة على transilluminator الأشعة فوق البنفسجية وفقا لمواصفات الشركة المصنعة.تحديد النسبة المثلى النيتروجين إلى الفوسفات على أساس اختفاء عصابات الحمض النووي الريبي التدخل الصغيرة في الجزء السفلي من هلام. لضرب لوسيفيراز الجينات نموذج, البذور الأولى luciferase التعبير عن الخلايا في لوحة 96-جيدا سوداء مسورة مع DMEM في 10٪ FBS في كثافة 2,000 الخلايا في بئر. ضع اللوحة في حاضنة بين عشية وضحاها للسماح للخلايا بالتمسك.في الصباح إزالة وسائل الإعلام وإضافة 10 ميكرولترات لكل بئر من جسيمات نانوية الحمض النووي الريبي الصغيرة تضعف في وسائل الإعلام المصل الكامل لتركيز الحمض النووي الريبي التدخلية الصغيرة النهائية من 100 نانوموللار. إعادة الآبار إلى الحاضنة لمدة 24 ساعة لعلاج الخلايا مع جسيمات نانوية الحمض النووي الريبي الصغيرة التداخل. في اليوم التالي، استبدال وسائل الإعلام مع وسائل الإعلام المصل الكامل تحتوي على 150 ميكروغرام لكل ملليلتر D-luciferin.احتضان الخلايا في درجة حرارة الغرفة لمدة خمس دقائق قبل قياس الإنارة على قارئ لوحة. ثم كرر المرطبات وسائل الإعلام مرتين مع وسائل الإعلام مصل كامل جديد خالية من D-luciferin, تليها الحضانة لمدة 24 ساعة. استبدال وسائل الإعلام مع وسائل الإعلام مصل كامل تحتوي على 150 ملليغرام لكل ملليلتر D-luciferin واحتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة خمس دقائق.قياس الإنارة عند نقطة الوقت 48 ساعة. للدراسات الطولية، وترك غطاء على رأس لوحة البئر عندما خارج مجلس الوزراء السلامة الحيوية للحفاظ على الخلايا في ظل ظروف معقمة ومواصلة الحضانة بعد استبدال وسائل الإعلام التي تحتوي على لوسيفيرين مع وسائل الإعلام الكاملة الطازجة. تظهر قياسات تشتت الضوء الديناميكية أن جسيمات نانوية صغيرة تدخلها RNA واحدة يبلغ قطرها 35 نانومترًا.وجود ذروة واحدة مع عرض الذروة الضيقة يشير إلى توزيع أحادي الواسطة وانخفاض تعدد التخصصات. تؤكد قياسات TEM قياس الحجم من تشتت الضوء الديناميكي يشير إلى وجود مجموعة موحدة من الجسيمات النانوية الحمض النووي الريبي الصغيرة وكشف عن مورفولوجيا كروية للجسيمات النانوية الحمض النووي الريبي الصغيرة. نتج تركيز عال جدا من البوليمر في التحضير خطوة لصغر التداخل RNA جسيمات نانوية اثنين في قطر غير مرغوب فيه من أكبر من 200 نانومتر, متعدد الوسائط والسكان متعددة الفئات, والمجاميع في حل تشكيل لا مورفولوجيا الجسيمات متميزة.كلا صغير التداخل RNA الجسيمات النانوية واحد واثنين من عرض شحنة سطح محايدة المشار إليها من قبل ما يقرب من الصفر يعني القيم المحتملة زيتا. أغاروز هلام تأخر فحص يظهر اختفاء صغيرة تدخل رنا العصابات في أسفل هلام مما يدل على تعقيد الحمض النووي الريبي التدخل الصغيرة إلى البوليمر. البوليمر معقدة تدخل الجيش الملكي النيبالي الصغيرة غير قادر على الهجرة من خلال هلام، وبالتالي تصور في الجزء العلوي من هلام قريب من آبار التحميل.كما يتم زيادة النيتروجين إلى الفوسفات نسبة صغيرة تتدخل RNA التعقيد يزيد كما هو مبين من قبل انخفاض كثافة صغيرة تدخل RNA الفرقة في أسفل هلام. لوكافيراز النشطة بيولوجيا صغيرة تتدخل RNA نانو جسيمات واحدة معارض تقلص بشكل كبير نشاط لوسيفيراس بالمقارنة مع السيطرة المشوشة. في المقابل، لوسيفيراز الصغيرة تتدخل دنا نانو جسيمات اثنين لا تعتبر نشطة بيولوجيا.لإنتاج جسيمات نانوية متسقة مع الخصائص الفيزيائية الكيميائية المطلوبة، يجب استخدام حلول البوليمر مع التركيزات المناسبة والتحقق من صحة الرقم الH من حلول العازلة في كل خطوة من البروتوكول. باستخدام هذه الطرق في بحثنا كنا قادرين على إنتاج العلاجات القائمة على جسيمات نانوية من الرنا للجينات المسببة للسرطان التي لم تكن قابلة للاجهاد من قبل واختبار فعالية هذه العلاجات في النماذج السابقة السريرية لسرطان الثدي.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Formulation of Diblock Polymeric Nanoparticles through Nanoprecipitation Technique

صياغة النانوية Diblock البوليمر من خلال تقنيات Nanoprecipitation

Nanotechnology is a relatively new branch of science that involves harnessing the unique properties of particles that are nanometers in scale ...

Evaluation of Polymeric Gene Delivery Nanoparticles by Nanoparticle Tracking Analysis and High-throughput Flow Cytometry

تقييم توصيل الجينات البوليمرية الجسيمات النانوية من تحليل تتبع جسيمات متناهية الصغر وعالية الإنتاجية قياس التدفق الخلوي

Non-viral gene delivery using polymeric nanoparticles has emerged as an attractive approach for gene therapy to treat genetic diseases1 and as a ...

Programming Stem Cells for Therapeutic Angiogenesis Using Biodegradable Polymeric Nanoparticles

الخلايا الجذعية العلاجية البرمجة لتكوين الأوعية الدموية عن طريق تحلل البوليمر النانوية

Controlled vascular growth is critical for successful tissue regeneration and wound healing, as well as for treating ischemic diseases such as stroke, ...

Microfluidic Fabrication of Polymeric and Biohybrid Fibers with Predesigned Size and Shape

تصنيع ميكروفلويديك من الألياف البوليمرية والحيوية مع الحجم والشكل المصمم مسبقا

A &#8220;sheath&#8221; fluid passing through a microfluidic channel at low Reynolds number can be directed around another &#8220;core&#8221; stream and ...

Harmonic Nanoparticles for Regenerative Research

التوافقي النانوية للبحوث التجديدي

In this visualized experiment, protocol details are provided for in vitro labeling of human embryonic stem cells (hESC) with second harmonic generation ...

Porous Silicon Microparticles for Delivery of siRNA Therapeutics

مسامية السيليكون المجهرية الدقيقة لتسليم سيرنا التداوي

Small interfering RNA (siRNA) can be used to suppress gene expression, thereby providing a new avenue for the treatment of various diseases. However, the ...

Polymeric Microneedle Array Fabrication by Photolithography

البوليمر تصنيع صفيف إبرة مجهرية من قبل الطباعة التصويرية

This manuscript describes the fabrication of polymeric microneedle (MN) arrays by photolithography. It involves a simple mold-free process by using a ...

Fabricating Superhydrophobic Polymeric Materials for Biomedical Applications

افتعال فائقة الكره المواد البوليمرية للتطبيقات الطبية الحيوية

Superhydrophobic materials, with surfaces possessing permanent or metastable non-wetted states, are of interest for a number of biomedical and industrial ...

Delivery of Therapeutic siRNA to the CNS Using Cationic and Anionic Liposomes

تسليم العلاجية سيرنا إلى الجهاز العصبي المركزي عن طريق الموجبة وأنيوني الليبوزومات

Prion diseases result from the misfolding of the normal, cellular prion protein (PrPC) to an abnormal protease resistant isomer called PrPRes.  The ...