Name: droplet digital trap (ddtrap): adaptation of the telomere repeat amplification protocol to droplet digital polymerase chain reaction
Uploaded: 2019-05-03T15:00:00
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提交人感谢国家卫生研究院 (NIH) 的资金来源 (NCI-R00-C197672-01A1)。小细胞肺癌系 (SHP77 和 H82) 是来自 UT 西南医疗中心的 John Minna 博士和 Adi Gazdar 博士的慷慨礼物。

1. 缓冲液的准备和储存
<ol><li>制备50毫升的1x 库存 rnase-dnase 游离 np-40 裂解缓冲液 (10 mM Tris-HCl [pH 8.0], 1 ML MgCl2, 1 mm 乙二胺四乙酸 (edta), 1% [vol/vol] np-40, 10% [vol/vol] 甘油, 150 mM nacl, 5 mm β-硫醇, 和 0.1 mm 4-盐酸苯磺酰氟 (AEBSF)。此缓冲液可在-20°c 下进行采样和存储, 以供将来使用。避免冻融循环, 以获得最佳的细胞裂解。</li>
	<li>准备50毫升的10倍库存 Rnase-/DNAS 无 trap 扩展缓冲液 (200 mM Tris-HCl [pH ...

<ol>
	<li>Frenck, R. W., Blackburn, E. H., Shannon, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+rate+of+telomere+sequence+loss+in+human+leukocytes+varies+with+age.">The rate of telomere sequence loss in human leukocytes varies with age.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95 (10), 5607-5610 (1998).</li><li>Morin, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+telomere+terminal+transferase+enzyme+is+a+ribonucleoprotein+that+synthesizes+TTAGGG+repeats.">The human telomere terminal transferase enzyme is a ribonucleoprotein that synthesizes TTAGGG repeats.</a> Cell. 59 (3), 521-529 (1989).</li><li>de Lange, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+telomeres+solve+the+end-protection+problem.">How telomeres solve the end-protection problem.</a> Science. 326 (5955), 948-952 (2009).</li><li>Shay, J. W., Wright, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+telomeres+and+telomerase+in+cancer.">Role of telomeres and telomerase in cancer.</a> Seminars in Cancer Biology. 21 (6), 349-353 (2011).</li><li>Kim, W., Shay, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-range+telomere+regulation+of+gene+expression:+Telomere+looping+and+telomere+position+effect+over+long+distances+(TPE-OLD).">Long-range telomere regulation of gene expression: Telomere looping and telomere position effect over long distances (TPE-OLD).</a> Differentiation. 99, 1-9 (2018).</li><li>Robin, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Telomere+position+effect:+regulation+of+gene+expression+with+progressive+telomere+shortening+over+long+distances.">Telomere position effect: regulation of gene expression with progressive telomere shortening over long distances.</a> Genes Development. 28 (22), 2464-2476 (2014).</li><li>Shay, J. W., Wright, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescence+and+immortalization:+role+of+telomeres+and+telomerase.">Senescence and immortalization: role of telomeres and telomerase.</a> Carcinogenesis. 26 (5), 867-874 (2005).</li><li>Norton, J. C., Holt, S. E., Wright, W. E., Shay, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+detection+of+human+telomerase+activity.">Enhanced detection of human telomerase activity.</a> DNA Cell Biology. 17 (3), 217-219 (1998).</li><li>Herbert, B. S., Hochreiter, A. E., Wright, W. E., Shay, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonradioactive+detection+of+telomerase+activity+using+the+telomeric+repeat+amplification+protocol.">Nonradioactive detection of telomerase activity using the telomeric repeat amplification protocol.</a> Nature Protocols. 1 (3), 1583-1590 (2006).</li><li>Vogelstein, B., Kinzler, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Digital+PCR.">Digital PCR.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 96 (16), 9236-9241 (1999).</li><li>Ludlow, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+telomerase+enzyme+activity+determination+using+droplet+digital+PCR+with+single+cell+resolution.">Quantitative telomerase enzyme activity determination using droplet digital PCR with single cell resolution.</a> Nucleic Acids Research. 42 (13), e104 (2014).</li><li>Huang, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Maintenance+of+Telomere+Length+in+CD28++T+Cells+During+T+Lymphocyte+Stimulation.">The Maintenance of Telomere Length in CD28+ T Cells During T Lymphocyte Stimulation.</a> Scientific Reports. 7 (1), 6785 (2017).</li><li>Ludlow, A. T., Shelton, D., Wright, W. E., Shay, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ddTRAP:+A+Method+for+Sensitive+and+Precise+Quantification+of+Telomerase+Activity.">ddTRAP: A Method for Sensitive and Precise Quantification of Telomerase Activity.</a> Methods Molecular Biology. 1768, 513-529 (2018).</li></ol>

端粒酶活性的测量对于大量的研究主题至关重要, 包括但不限于癌症、端粒生物学、衰老、再生医学和基于结构的药物设计。端粒酶 RNPs 含量低, 即使在癌细胞中也是如此, 这使得这种酶的检测和研究具有挑战性。本文介绍了新开发的 ddTRAP 检测在细胞中对端粒酶活性进行有力量化的分步过程。通过将传统的端粒酶扩展反应与 Dpcr 相结合, 我们能够定量检测肺癌细胞中端粒酶活性 (端粒酶扩展产物)。...

端粒是线性染色体末端的动态 dna-蛋白质复合物。人类端粒由 5 '-ttagggn六角重复量组成, 其长度在出生时的长度为12–15千基 (kb) 1。人类端粒酶, 维持端粒的核糖核酸酶, 首次被鉴定在 HeLa 细胞裂解物 (癌细胞系)2中。端粒和端粒酶共同在基因组保护、基因调控和癌细胞死亡 3、4、5、6等一系列生物过程中发挥着重要作用。
人端粒酶主要由两个关键成分组成, 即端粒酶逆转录酶和端粒酶 RNA (分别为 hTERT 和 HTERT)。蛋白质亚基 hTERT 是端粒酶的催化活性逆转录酶成分。RNA 模板 hTERC 为端粒酶提供了扩展和/或维持端粒的模板。大多数人体组织没有可检测到的端粒酶活性。DNA 聚合酶无法扩展 DNA 滞后链的末端, 以及端粒酶的缺乏, 导致端粒在每轮细胞分裂后逐渐缩短。这些现象导致端粒缩短在大多数体细胞, 直到他们达到一个临界缩短的长度, 从而细胞进入复制衰老的状态。细胞的最大分裂次数是由其端粒长度决定的, 而这种细胞持续分裂被认为是为了防止进展到发生 7.癌细胞能够克服端粒诱导的复制衰老, 并通过利用端粒酶维持端粒继续增殖。大约90% 的癌症激活端粒酶, 使端粒酶活性在癌症检测和治疗中至关重要。
1990年代的发展有助于确定端粒酶的必要成分, 并用于测量各种正常和癌变的细胞和组织中的端粒酶。最初的基于凝胶的 PCR 检测方法使用放射性标记的 DNA 底物来检测端粒酶活性。2006年, 该方法被采用荧光标记的基板8,9进行了改编成非放射性形式。通过使用荧光标记的基板, 用户能够将端粒酶扩展产品可视化为凝胶上的条带, 使其暴露在正确的激发波长下。TRAP 检测方法的灵敏度及其检测粗细胞裂解物端粒酶活性的能力使其成为最广泛使用的端粒酶活性检测方法。然而, TRAP 检测有局限性。该分析是基于凝胶的, 因此很难在中等至高通量的研究中进行必要的复制, 因此, 很少进行适当的统计分析。此外, 基于凝胶的检测很难可靠地量化, 因为无法检测到样本间端粒酶活性的不到两倍的差异。克服这两个限制对于酶活性检测 (如 TRAP) 转移到临床或行业环境以检测患者样本或药物设计研究中的端粒酶活性至关重要。
数字 PCR 最初是在1999年开发的, 作为将 PCR 的指数和模拟性质转化为线性和数字检测10的一种手段。液滴数字 PCR (ddPCR) 是原始数字 PCR 方法的最新创新。液滴数字 PCR 是随着先进的微流体和水中油乳状液化学的出现而出现的, 能够可靠地产生稳定和同样大小的液滴。与基于凝胶甚至定量 PCR (qPCR) 不同, Ppcr 会产生输入材料的绝对定量。Dpcr 的关键是通过将样品分成液滴来产生 ~ 20, 000个单独的反应。在终点 PCR 之后, 液滴读取器以流动-柏树式的方式扫描每个液滴, 计数、施胶大小, 并记录每个液滴中是否存在荧光 (即每个液滴中没有或不存在 PCR 放大器)。然后, 利用泊松的分布, 根据正液滴与液滴总数的比率来估计输入分子。此数字表示每个 PCR 中输入分子数量的估计。此外, 在96孔板上进行了 Pdpcr, 并对其进行了分析, 使用户能够运行许多样品, 并执行生物和技术复制, 以便进行适当的统计分析。因此, 我们将 Dpcr 的强大定量和中等通量特性与 TRAP 检测方法结合起来, 开发了 ddPCR 检测11。本方法旨在为用户研究和有力地量化生物样本11,12的绝对端粒酶活性。DdTRAP 的灵敏度使其能够量化有限和珍贵样品中的端粒酶活性, 包括单细胞测量。此外, 使用者还可以研究端粒酶操作和药物的影响, 绝对定量小于两倍的变化 (约50% 差异)。DdTRAP 是 TRAP 检测技术向现代实验室实验和临床环境的数字化和高吞吐量过程的自然演变。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 M Tris-HCl pH 8.0</td>
			<td>Ambion</td>
			<td>AM9855G</td>
			<td>RNAse/DNAse free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 M MgCl2</td>
			<td>Ambion</td>
			<td>AM9530G</td>
			<td>RnAse/DNAse free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5 M EDTA pH 8.0</td>
			<td>Ambion</td>
			<td>AM9261</td>
			<td>RNAse/DNAse free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surfact- Amps NP-40</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>28324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100% Ultrapure Glycerol</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15514011</td>
			<td>RNAse/DNAse free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phenylmethylsulfonyl fluoride</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>36978</td>
			<td>Powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>516732</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease Free H20</td>
			<td>Ambion</td>
			<td>AM9932</td>
			<td>RNAse/DNAse free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5 mM dNTP mix</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>R72501</td>
			<td>2.5 mM of each dATP, dCTP, dGTP and dTTP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 M KCl</td>
			<td>Ambion</td>
			<td>AM9640G</td>
			<td>RNAse/DNAse free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100% Tween-20</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>9005-64-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5 M EGTA pH 8.0</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>50-255-956</td>
			<td>RNAse/DNAse free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Telomerase Substrate (TS) Primer</td>
			<td>Integrated DNA Technology (IDT)</td>
			<td>Custom Primer (HPLC Purified)</td>
			<td>5&#39;- AATCCGTCGAGCAGAGTT-3&#39;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACX (Revers) Primer</td>
			<td>Integrated DNA Technology (IDT)</td>
			<td>Custom Primer (HPLC Purified)</td>
			<td>5&#39;- GCGCGGCTTACCCTTACCCTTACCCTAACC -3&#39;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thin walled (250 ul) PCR grade tubes</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1402-2900</td>
			<td>strips, plates, tubes etc.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QX200 ddPCR EvaGreen Supermix</td>
			<td>Bio Rad</td>
			<td>1864034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Twin-Tec 96 Well Plate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>Eppendorf 951020362</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Piercable foil heat seal</td>
			<td>Bio Rad</td>
			<td>1814040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Droplet generator cartidges (DG8)</td>
			<td>Bio Rad</td>
			<td>1863008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Droplet generator oil</td>
			<td>Bio Rad</td>
			<td>1863005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Droplet generator gasket</td>
			<td>Bio Rad</td>
			<td>1863009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well Thermocycler T100</td>
			<td>Bio Rad</td>
			<td>1861096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PX1 PCR Plate Sealer</td>
			<td>Bio Rad</td>
			<td>1814000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QX200 Droplet Reader and Quantasoft Software</td>
			<td>Bio Rad</td>
			<td>1864001 and 1864003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ddPCR Droplet Reader Oil</td>
			<td>Bio Rad</td>
			<td>1863004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease Free Filtered Pipette Tips</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td>10 ul, 20 ul , 200 ul and 1000 ul</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

droplet digital trap (ddtrap): adaptation of the telomere repeat amplification protocol to droplet digital polymerase chain reaction

端粒重复扩增协议 (TRAP) 是检测给定样品中端粒酶活性的最广泛使用的检测方法。基于聚合酶链反应 (PCR) 的方法可以对大多数细胞裂解物的酶活性进行可靠的测量。具有荧光标记引物的凝胶为基的 trap 限制了样品的吞吐量, 检测样品差异的能力被限制为酶活性的两倍或更大的变化。液滴数字 TRAP, ddTRAP, 是一种高度敏感的方法, 已从传统的 TRAP 分析进行了改进, 使用户能够对每次运行的96个样本进行可靠的分析, 并获得 DNA (端粒酶延伸产品) 的绝对定量) 在每个 PCR 中输入。因此, 新开发的 ddTRAP 检测克服了传统的基于凝胶的 trap 检测方法的局限性, 为在实验室和临床环境中测量端粒酶活性提供了更有效、更准确和更定量的方法。

使用 ddTRAP, 在由以下细胞系组成的细胞面板中测量端粒酶活性 (图 1): 非小细胞肺癌 (H2882、H1299、Calu6、H920、A549 和 H2882)、小细胞肺癌 (h82 和 SHP77) 和端粒阴性成纤维细胞 (BJ)。在 NP-40 缓冲液中裂解了100万种细胞颗粒, 并在生物三重奏中进行端粒酶扩展反应。一个常见的和高度推荐的负控件是 "NTC", 无模板控件。该样品是通过在端粒酶扩展反应中添加 NP...

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Droplet Digital TRAP ddTRAP: Adaptation of the Telomere Repeat Amplification Protocol to Droplet Digital Polymerase Chain Reaction

我们成功地转换了标准端粒重复扩增协议 (TRAP) 检测, 用于液滴数字聚合酶链反应。这种新的检测方法称为 ddTRAP, 更灵敏、更定量, 可以更好地检测和统计各种人体细胞内端粒酶活性。

液滴数字 TRAP (ddTRAP): 对端粒重复放大协议的适应性, 以实现液滴数字聚合酶链反应

The telomere repeat amplification protocol (TRAP) is the most widely used assay to detect telomerase activity within a given a sample. The polymerase ...

ddTRAP测定提供了对细胞中端粒酶活性进行敏感、可靠和高度定量测量的能力。以中等吞吐量的方式，每运行最多运行 96 个样本，这为我们提供了极大的优势。我们可以运行控件和复制，以对收集的数据进行适当的统计分析。在细胞解解之前，立即解冻NP-40解液缓冲液的冷冻等分。解冻后，将解液缓冲液放在冰上。将PMSF蛋白酶抑制剂加入NP-40解液缓冲液，最终浓度达到0.2毫摩尔。然后，将40微升的解液缓冲液加入含有细胞颗粒的管子中，达到每微升25，000个细胞的细胞等效性。轻轻移液，上下移液，以打破打开细胞。尽量避免冒泡。让细胞在冰上融化30分钟。每10分钟轻轻旋转一次落酸，防止细胞碎片团的形成。在细胞解解过程中，在微离心管中准备端粒酶延伸反应的主混合物，并储存在冰上。细胞解解后，移液器48微升的延长主混合到每个PCR管中。在每个PCR管中加入两个稀释的利沙酸微升，以达到每微升50个细胞的最终细胞等效性，并根据手稿继续端粒酶延伸反应。在微离心管中为 ddTRAP 准备主混合物，并在室温下保持。移液 19.8 微升 ddPCR 主混合到每个 PCR 管中。在每个管中加入2.2微升以前的延长反应溶液，使总体积为22微升。要设置液滴生成盒，首先将 20 微升的制备溶液装入墨盒的中间样品中。轻轻敲击墨盒的侧面，将任何气泡移动到溶液顶部。在装油之前，墨盒的所有孔都必须装入样品。然后，将70微升液滴生成油装入左油井。通过将垫片固定到墨盒的末端，将垫片固定到位，然后将已加载和组装的弹夹放入液滴发生器中。发电机显示一个坚实的绿灯，以通知墨盒是否正确放置。60 到 90 秒后，当发电机指示灯停止闪烁时，循环完成。现在取出墨盒。轻轻地从墨盒中取出垫片。使用多通道移液器将来自右侧井的新产生的液滴的大约 40 微升移液器移液到 96 井 PCR 板中。将所有样品装入 96 井板后，用铝箔 PCR 板密封加热密封板，以防止蒸发。然后，将 96 井板装入热循环器以执行 PCR 反应。首先，将 96 井板加载到液滴读卡器中。正确定向板，使 A1 样品与支架样品匹配。打开与液滴读取器关联的软件。双击第一个井 A01，打开样品井编辑器屏幕。单击"实验"，然后从下拉菜单中选择要使用的检测类型。选择 QX200 ddPCR EvaGreen 超级混合作为正确的检测方法。单击井编辑器屏幕右下角的"应用"，将用户定义的设置保存到所有突出显示的井中。接下来，单击井编辑器屏幕中的 Target，然后单击"目标"下拉菜单以选择未知、引用或无模板控件以定义示例类型。在"示例名称"部分中，标记所有示例并单击"应用"。单击"运行"可读取板。当提示通知应读取板的方向时，选择"运行选项"屏幕中的"列"或"行"。通过双击单个孔或列和行标题以提供信息表，确定每个样品的接受液滴数。对于 ddTRAP，具有 10，000 个或更多接受液滴的样品是有效的，可以进行进一步分析。突出显示表示样本复制和 NTC 样本的孔。通过单击图标在屏幕左下角设置阈值，手动设置样本的阈值。在该协议中，端粒酶活性在细胞面板中测量，该细胞组由9个肺癌细胞系和端粒酶阴性成纤维细胞组成。SHP77、H2887和NTC的所有三种生物复制的荧光振幅设定在2000个左右。正液滴的荧光强度在6000个荧光振幅左右，在顶部形成清晰的群体，与负液滴在1，100个荧光振幅之间分离。所有样本之间每个细胞的端粒酶延长产品总端粒酶延伸产品是根据核酸的测量浓度估算的，核酸代表肺癌系中的端粒酶活性。在解解或延伸反应步骤期间的任何RNase污染都会破坏端粒酶酶活性，因为它是核糖核酸蛋白复合物。ddtrap 可以在细胞中的 htert mRNA 表达水平上与 ddPCR 跟进。这两个数据集使我们能够将 hTERT 的表达与端粒酶活性关联，并更深入地挖掘潜在的端粒酶调控机制，如替代拼接。我们可以探讨对特定拼接因子的操纵及其对端粒酶活性的影响。目前，我们正在设计寡核苷酸拼接调制器作为针对端粒酶活性的潜在药物。

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Droplet Digital TRAP (ddTRAP): Adaptation of the Telomere Repeat Amplification Protocol to Droplet Digital Polymerase Chain Reaction

Modified Terminal Restriction Fragment Analysis for Quantifying Telomere Length Using In-gel Hybridization

使用凝胶内杂交来定量端粒长度的修饰末端限制片段分析

There are several different techniques for measuring telomere length, each with their own advantages and disadvantages. The traditional approach, Telomere ...

科研

癌症研究

Counting Proteins in Single Cells with Addressable Droplet Microarrays

用可寻址滴微阵列计算单细胞中的蛋白质

Often cellular behavior and cellular responses are analyzed at the population level where the responses of many cells are pooled together as an average ...

Detection of a CDH1 Rare Transcript Variant in Fresh-frozen Gastric Cancer Tissues by Chip-based Digital PCR

Detection of a CDH1 Rare Transcript Variant in Fresh-frozen Gastric Cancer Tissues by Chip-based Digital PCR

基于芯片的数字 PCR 检测新鲜冷冻胃癌组织中的一个CDH1罕见转录变体

CDH1a, a non-canonical transcript of the CDH1 gene, has been found to be expressed in some gastric cancer (GC) cell lines, whereas it is absent in normal ...

Digital Polymerase Chain Reaction Assay for the Genetic Variation in a Sporadic Familial Adenomatous Polyposis Patient Using the Chip-in-a-tube Format

数字聚合酶链反应法测定零星家族性腺瘤性息肉病患者的基因变异

The quantitative analysis of human genetic variation is crucial for understanding the molecular characteristics of serious medical conditions, such as ...

Digital Analysis of Immunostaining of ZW10 Interacting Protein in Human Lung Tissues

人肺组织中ZW10相互作用蛋白免疫染色的数字化分析

The purpose of this study is to introduce a methodology of the immunostaining of human lung tissues, followed by whole-slide digital scanning and image ...

Important Endpoints and Proliferative Markers to Assess Small Intestinal Injury and Adaptation using a Mouse Model of Chemotherapy-Induced Mucositis

使用小鼠化疗引起的粘炎模型评估小肠损伤和适应的重要端点和增殖标记

Intestinal adaptation is the natural compensatory mechanism that occurs when the bowel is lost due to trauma. The adaptive responses, such as crypt cell ...

Oncogenic Gene Fusion Detection Using Anchored Multiplex Polymerase Chain Reaction Followed by Next Generation Sequencing

使用锚定多路聚合酶链反应的致癌基因融合检测,随后进行下一代测序

Gene fusions frequently contribute to the oncogenic phenotype of many different types of cancer. Additionally, the presence of certain fusions in samples ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

肿瘤细胞外侧尾静脉注射后肺转移的病理分析

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

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