Name: blood collection through subclavian vein puncture in mice
Uploaded: 2019-05-04T13:00:00
Duration: 6 min 3 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Blood Collection Through Subclavian Vein Puncture in Mice at JoVE.com

Detta arbete stöddes av bidraget från National Natural Science Foundation i Kina nr 81670269, nr 81500355 och nr 81500226.

Denna studie godkändes av central South University etik kommittén för djur forskning från andra Xiangya Hospital (Changsha, Kina). Manuskriptet utarbetades enligt ANLÄND (Animal Research: rapportering av in vivo experiment) rikt linjer12.
1. material och djur
<ol><li>Förbered material som krävs: 75% etanol, tejp, epileringsmedel, 2 mL tub, 1,0 mL spruta i samband med nål (26G), elektronisk skala, Heparin och saltlösning (se material tabell).</li>
	<li>Djur: Förbered 10 Kunming möss, 6-8 veckor gamla och väger 21,6-28,3 g (se tabell över material). Underhåll möss i enlighet med hand boken för skötsel och användning av försöks djur13.</li>
</ol>2. anestesi och djur positionering
<ol><li>Väg musen för att beräkna den erforderliga doseringen av anestesi medel.</li>
	<li>Injicera natriumpentobarbital (60 mg/kg) genom intraperitoneal injektion för att inducera generell anestesi14 (figur 1). Applicera en steril ögon smörjning salva i början av förfarandet för att förhindra skador på exponerade ögon. Obs: möss anses vara tillräckligt bedövade när visar ingen motor svar på testning av pedal abstinens reflex, svans nypa, eller buken huden nypa.</li>
	<li>Placera musen i Operations bordet i en liggande position och 2-4 cm bort från kanten av bordet för att under lätta åder punktering (figur 2). Fäst armar och ben i en bekväm position som visas i figur 2. Ingen intubation eller mekanisk ventilation behövs i hela proceduren.</li>
	<li>Applicera epilering agent runt infraclavicular utrymme med en bomulls pinne.</li>
	<li>Tre minuter senare, tvätta epilering agent med en våt bomulls pinne för att ta bort pälsen och eventuell synlig smuts.</li>
	<li>Sterilisera infraclavicular utrymme med 75% etanol och sedan torka med ren gasväv.</li>
</ol>3. subclavian åder punktering och blod insamling
<ol><li>Identifiera placeringen av nyckelbenet ben och överlägsen Sternal fossa med ett finger.</li>
	<li>Lokalisera punkteringsstället nära mitten av nyckelbenet ben och stjärtfenan till den. Placera det vänstra pekfingret lateralt till punkteringsstället att fixa huden och subkutan vävnad (figur 3).</li>
	<li>Flytta nålen uppåt och cranially mot den överlägsna Sternal fossa. När nålen kommer in i subkutan vävnad, flytta ring fingret på höger hand bakåt för att bilda ett negativt tryck (figur 3). Obs: under detta steg bör positionen för operatörens högra hand vara något lägre än Operations bordet för att få nålen att röra sig uppåt och överlägset horisontal planet. Det är därför djuret placeras nära kanten av bordet.</li>
	<li>Flytta sprutan framåt 3-4 mm men sluta om det inte finns någon blod avrinning i sprutan. Sedan sakta dra tillbaka sprutan och hålla ett negativt tryck i den. I de flesta fall skulle blodet komma in i sprutan när du drar tillbaka.</li>
	<li>När blodet kommer in i sprutan, fixera sprutan och behåll det negativa trycket tills önskad volym (200 μL) blod samlas i sprutan.</li>
	<li>Efter blod insamling, dra upp punkteringsnålen och tryck på punkteringsstället med en bomullstuss något i 1-2 minuter för att stoppa blödningen. Sedan, tillbaka möss till buren. Obs: ibland kunde man inte få blod vid sitt första försök. Justera nålens riktning i sidled och upprepa steg 3.3-3.5. Om 3 försök Miss lyckas med att få blod prov, Byt till den andra sidan.</li>
	<li>Överför blod provet till ett hepariniserat rör.</li>
</ol>4. återhämtning av möss
<ol><li>Medan pentobarbital anestesi är i kraft, hastighet återhämtning genom att ge värme stöd tills musen rör sig igen.</li>
</ol>

<ol>
	<li>McCosh, R. B., Kreisman, M. J., Breen, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Frequent+Tail-tip+Blood+Sampling+in+Mice+for+the+Assessment+of+Pulsatile+Luteinizing+Hormone+Secretion.">Frequent Tail-tip Blood Sampling in Mice for the Assessment of Pulsatile Luteinizing Hormone Secretion.</a> Journal of Visualized Experiments. (137), (2018).</li><li>Regan, R. D., Fenyk-Melody, J. E., Tran, S. M., Chen, G., Stocking, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Submental+Blood+Collection+with+the+Retroorbital+and+Submandibular+Methods+in+Mice+(Mus+musculus).">Comparison of Submental Blood Collection with the Retroorbital and Submandibular Methods in Mice (Mus musculus).</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 55 (5), 570-576 (2016).</li><li>Park, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+collection+in+unstressed,+conscious,+and+freely+moving+mice+through+implantation+of+catheters+in+the+jugular+vein:+a+new+simplified+protocol.">Blood collection in unstressed, conscious, and freely moving mice through implantation of catheters in the jugular vein: a new simplified protocol.</a> Physiological Reports. 6 (21), e13904 (2018).</li><li>Heimann, M., Kasermann, H. P., Pfister, R., Roth, D. R., Burki, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+collection+from+the+sublingual+vein+in+mice+and+hamsters:+a+suitable+alternative+to+retrobulbar+technique+that+provides+large+volumes+and+minimizes+tissue+damage.">Blood collection from the sublingual vein in mice and hamsters: a suitable alternative to retrobulbar technique that provides large volumes and minimizes tissue damage.</a> Laboratory Animals. 43 (3), 255-260 (2009).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> Journal of Pharmacology &amp; Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Diehl, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+good+practice+guide+to+the+administration+of+substances+and+removal+of+blood,+including+routes+and+volumes.">A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes.</a> Journal of Applied Toxicology. 21 (1), 15-23 (2001).</li><li>van Herck, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orbital+sinus+blood+sampling+in+rats+as+performed+by+different+animal+technicians:+the+influence+of+technique+and+expertise.">Orbital sinus blood sampling in rats as performed by different animal technicians: the influence of technique and expertise.</a> Laboratory Animals. 32 (4), 377-386 (1998).</li><li>Tsai, P. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+different+blood+collection+methods+on+indicators+of+welfare+in+mice.">Effects of different blood collection methods on indicators of welfare in mice.</a> Lab Anim (NY). 44 (8), 301-310 (2015).</li><li>Holmberg, H., Kiersgaard, M. K., Mikkelsen, L. F., Tranholm, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+blood+sampling+technique+on+blood+quality+and+animal+welfare+in+haemophilic+mice.">Impact of blood sampling technique on blood quality and animal welfare in haemophilic mice.</a> Laboratory Animals. 45 (2), 114-120 (2011).</li><li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+efficacy+of+a+modified+axillary+vein+technique+for+pacemaker+implantation.">Safety and efficacy of a modified axillary vein technique for pacemaker implantation.</a> Cardiology Plus. 3, 104-107 (2018).</li><li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subclavian+Vein+Puncture+As+an+Alternative+Method+of+Blood+Sample+Collection+in+Rats.">Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (141), (2018).</li><li>Kilkenny, C., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+bioscience+research+reporting:+ARRIVE-ing+at+a+solution.">Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution.</a> Laboratory Animals. 44 (4), 377-378 (2010).</li><li>Research, I. f. L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guide for the care and use of laboratory animals. , (1996).</li><li>Redel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+ischemia+and+reperfusion+times+on+myocardial+infarct+size+in+mice+in+vivo.">Impact of ischemia and reperfusion times on myocardial infarct size in mice in vivo.</a> Experimental Biology and Medicine (Maywood, N.J.). 233 (1), 84-93 (2008).</li><li>Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vital+signs+monitoring+during+injectable+and+inhalant+anesthesia+in+mice.">Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice.</a> Experimental Animals. 64 (1), 57-64 (2015).</li><li>Zou, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repeated+Blood+Collection+from+Tail+Vein+of+Non-Anesthetized+Rats+with+a+Vacuum+Blood+Collection+System.">Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System.</a> Journal of Visualized Experiments. (130), (2017).</li></ol>

Ingen deklarerad.

Denna rapport utgör en förlängning av tidigare forskning om blod prov tagning genom subclavia ven punktering hos råttor11. Eftersom musen är den mest använda forsknings djuret, skulle det vara värdefullt att se om denna teknik kan också tillämpas på möss. Utmaningen kommer från den relativt mindre diametern av den subclavia venen.
I den nuvarande forskningen fann vi att subclavia punktering hos möss är ett genomförbart och tillförlitligt sätt att samla blod. Jämfört med konventionella metoder såsom svans ven skärning eller orbital blod insamling, det finns inga etiska frågor av den nuvarande metoden. Alla djur överlevde efter detta förfarande utan flytande kost tillskott efter cirka 200 μL av blod utvinning, och djur skulle kunna användas för ytterligare experimentella studier. Teoretiskt sett kunde den totala prov volymens extraktion inte uppgå till mer än 10% av den totala cirkulerande blod volymen varje gång och den totala volymen av ett vuxet djur är 55 till 70 mL/kg kropps vikt5. För möss som används i denna forskning (21,6-28,3 g), bör den maximala volymen extraktion vara runt 200 μL. Vi ställer därför in blod provs beloppet runt 200 μL för varje mus. Oförmågan att mäta blod tryck, hjärt frekvens, och andra stress parametrar är de viktigaste begränsningarna i denna rapport.
Tillräcklig generell anestesi är en annan viktig fråga för att garantera framgången för punkteringen. Mössen bör förbli tysta under punkteringsprocessen för att undvika risken för att skada kärlet genom nålen. Vi fann att pentobarbital natrium vid 60 mg/kg för generell anestesi kunde tillfredsställa ideal djup anestesi. En nackdel med denna agent är den relativt långa återhämtnings tiden (i genomsnitt ca 30 minuter). I vissa institut används isofluran inandning för den korta återhämtnings tiden och bör tas i beaktande som ett alternativt anestesi val15.
Placeringen av subclavia ven visas i figur 4. På grund av den tunna väggen och lågt tryck i venen, den främre och bakre väggen i subclavia ven skulle fästa vid varandra under trycket av en nål medan nålen rör sig framåt (figur 5a). Medan dra tillbaka kolven långsamt bakåt, kommer de bifogade väggarna separera spontant, och spetsen av nålen kan komma in i den sanna kaviteten av kärlet och blod kan rinna in i sprutan under ihållande negativt tryck (Figur 5b). Användning av ett vakuum blod insamlings system16 kan också gynna blod samlingen. På grund av den relativt lilla diametern hos mössen subclavia ven, det kan finnas misslyckanden även för en erfaren operatör. För en nybörjare, vi rekommenderar subclavia ven punktering hos råttor som rapporterades11. Efter flera lyckade punkteringsförsök hos råttor kunde framgångs graden av subclavia venpunktering hos möss förbättras avsevärt. Se till att den exakta punkteringsstället är bara stjärtfenan till mitten av nyckelbenet ben. Nålen rör sig uppåt och kranial till den överlägsna Sternal fossa är andra viktiga punkter för att garantera en lyckad punktering.
Sammanfattnings vis, subclavia ven punktering är en säker och effektiv metod för blod insamling hos möss. Förutom svans ven skärning och retro-orbital plexus blod insamling, denna metod är genomförbar, säker, och lämplig för observationella undersökningar vid flera tidpunkter i möss.

Blod prov insamling från möss är viktigt i de flesta forsknings laboratorier. Konventionella metoder för blod insamling hos möss är svans skärning när mindre än 100 μL av provet behövs1. Men, om mer än 100 μL blod krävs vid en nonterminal tid punkt, retroorbital, submandibular blödning eller submental blod insamling är de mest allmänt anses tekniker2. I vissa fall, den jugular ven kateterisering genom ett kirurgiskt snitt antogs som en alternativ metod3.
Trots ovanstående metoder är skadliga för möss. Såvitt vi vet är retroorbital-metoden inte allmänt accepterad på grund av den potentiella risken för komplikationer4,5. Operation relaterade trauma inte bara sker i det synliga området6,7, men också djupt inne i omlopps bana6. Dessutom är submandibular blod insamling stressigt8 och kan associeras med överdriven blödning2,9. Baserat på vår tidigare forskning10,11, här introducerar vi en ny strategi för blod insamling från subclavia ven hos möss. Säkerheten, genomförbarheten, och erhållna blod volym med denna teknik presenteras och diskuteras.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1143px;" width="1144">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:374px;">1.0 mL syringe</td>
			<td style="width:576px;">Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd (Weihai, Shandong Province, China)</td>
			<td style="width:130px;">20163151593</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">75% ethanol</td>
			<td>Department of Pharmacy, The Second Xiangya Hospital of Central South University</td>
			<td colspan="2">made in Department of Pharmacy,The Second Xiangya Hospital of Central South Univesity</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">adhesive tape</td>
			<td>3M Deutschland GmbH (Kamen, Germany)</td>
			<td>1534-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">canvas gloves</td>
			<td>for anesthesia</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">electronic scale</td>
			<td>Dongguan Shengheng Electronics Co. Ltd (Dongguan, Guangdong Province, China)</td>
			<td>KP-3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">epilating agent</td>
			<td>France Yi Sha Cosmetics Co. Ltd (Guangzhou, Guangdong Province, China)</td>
			<td>8281744</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">heparin (used concentration 10 U/mL, 2 mL, 12500 IU)</td>
			<td>Nanjing Xinbai Pharmaceutical Co. Limited (Nanjing, Jiangsu Province, China)</td>
			<td>H32025851</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">mice</td>
			<td>Hunan SJA Laboratory Animal Co. Ltd (Changsha, Hunan Province, China)&#160;</td>
			<td>Kunming spcies</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">needle, 26G, 0.45 mm x 16 mm</td>
			<td>Shandong Weigao Group Medical Polymer Co. Ltd (Weihai, Shandong Province, China)</td>
			<td>20163151593</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">pentobarbital sodium (used solution 1%)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>P-010-1ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">physiological saline, 100 mL</td>
			<td>Hunan Kelun Pharmaceutical Co. Ltd (Yueyang, Hunan Province,China)</td>
			<td>H43020454</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">stastical software</td>
			<td>International Business Machines</td>
			<td>SPSS Statistics 25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">tube, 2 mL</td>
			<td>Hubei Jinxing Technology &#38; Development Co. Ltd (Wuhan Hubei Province, China)</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

blood collection through subclavian vein puncture in mice

Musen är den främsta däggdjurs modellen för att studera sjukdomar hos människor och människors hälsa. Blod provs insamling från möss är dock utmanande i forsknings arbetet. Svans blod insamling är en populär metod när en liten mängd blod prov behövs. Orbital artär kan övervägas om en stor mängd blod behövs men denna blod insamlings metod har etiska frågor. Tidigare visade vi genomförbarheten och säkerheten av blod prov insamling genom subclavia ven punktering hos råttor, och här undersöker vi om denna metod kan användas i möss. Vi rapporterar att denna metod är säker och praktisk för blod insamling hos möss. Blod insamling genom subclavia ven punktering hos möss kan vara en bekväm metod i dagliga forsknings arbeten.

Vi upprepade detta förfarande i 10 Kunming möss (hane n = 5, hona n = 5, vikt 25,4 ± 2,0 g). Nio förfaranden lyckades på höger sida. Ett fall misslyckades inom 3 försök på höger sida och blod insamling lyckades på vänster sida. Tids förloppet (från punktering till erhållande av erforderlig blod volym) varierade mellan 35-126 sekunder (i genomsnitt 68,4 ± 26,4 s). Blod uppsamlings volymen sattes till cirka 200 μL (i genomsnitt 203 ± 11,6 μL). Blod samling lyckades inom 1 till 4 försök. Blod provs tagningen lyckades på det första försöket på två möss och efter 4 försök med en mus; provtagningen tog 2-3 försök i de andra mössen. Alla data illustrerades i tabell 1. Alla djur överlevde och tillfrisknat inom 30 minuter efter blod provs tagningen. Det fanns ingen signifikant skillnad mellan könen för alla observerade parametrar (tabell 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59556/59556fig1.jpg"> Figur 1 : Generell anestesi genom intraperitoneal injektion <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59556/59556fig1large.jpg" target="_blank">Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59556/59556fig2.jpg"> Figur 2 : Den liggande positionen av musen. Notera avståndet mellan marginal och mus är 2-4 cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59556/59556fig2large.jpg" target="_blank">vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59556/59556fig3.jpg"> Figur 3 : Punkteringsstället och hållning av operatörens händer. Observera att ring fingret på höger hand rör sig bakåt för att bilda ett negativt tryck. Den vänstra handen är placerad i sidled till punkteringsstället att fixa huden och subkutana vävnader. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59556/59556fig3large.jpg" target="_blank">Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59556/59556fig4.jpg"> Figur 4 : Placeringen av subclavia ven, nyckelbenet ben och överlägsen Sternal fossa. Den subclavia ven kurser under nyckelbenet ben och rinner ut i den överlägsna Vena Cava under den överlägsna Sternal fossa. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59556/59556fig4large.jpg" target="_blank">Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59556/59556fig5.jpg"> Figur 5 : Förhållandet mellan kärl väggen och nålen under ingreppet. (A) väggarna i subclavia ven fäster varandra som nålen rör sig framåt, så inget blod kan dras ut. (B) samtidigt dra tillbaka nålen bakåt, väggarna åtskilda från varandra och blodet kunde dras ut. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59556/59556fig5large.jpg" target="_blank">Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Variabel</td>
			<td>Totalt (n = 10)</td>
			<td>Hane (n = 5)</td>
			<td>Hona (n = 5)</td>
			<td>P-värde</td>
		</tr>
<tr>
<td>Kropps vikt (g)</td>
			<td>25,3 ± 2,2</td>
			<td>25,3 ± 3,0</td>
			<td>25,4 ± 1,3</td>
			<td>0,926</td>
		</tr>
<tr>
<td>Blod volym (μL)</td>
			<td>203,0 ± 11,6</td>
			<td>208 ± 13,0</td>
			<td>198 ± 8,4</td>
			<td>0,187</td>
		</tr>
<tr>
<td>Tid kurs (er)</td>
			<td>68,4 ± 26,4</td>
			<td>70,6 ± 35,1</td>
			<td>66,2 ± 18,0</td>
			<td>0,809</td>
		</tr>
<tr>
<td>Uttag</td>
			<td>2,3 ± 0,9</td>
			<td>2,4 ± 1,1</td>
			<td>2,2 ± 0,8</td>
			<td>0,760</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="4">Det fanns inga signifikanta köns skillnader för alla observerade parametrar, P-värde > 0,05.</td>
			<td></td>
		</tr>
</tbody></table>Tabell 1: observerade parametrar mellan könen

Watch this Scientific Journal Video about Blood Collection Through Subclavian Vein Puncture in Mice at JoVE.com

Blood Collection Through Subclavian Vein Puncture in Mice

Blod insamling genom subclavia vein punktering hos möss

Här presenterar vi ett protokoll för att ta blodprover från den subclavia venen av möss.

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in ...

Blodinsamling genom subclavian ven punktering i möss. Blodprovsinsamling från möss är viktigt i de flesta forskningslaboratorier. De konventionella metoderna för blodinsamling hos möss är svansskärning, när mindre än 100 mikroliterprov behövs.Men om mer än 100 mikroliter blod krävs vid en icke-terminal tidpunkt, retro-orbital, submandibular blödning, eller submental blodinsamling, är de vanligaste anses tekniker. På vissa platser den halsvenen snitt eller kateterisering antogs som alternativa metoder. Ändå är ovanstående metoder sårande för möss.På grundval av våra formella forskningar introducerar vi här en ny ekonomisk och skonsam strategi för blodinsamling från subclavian vein hos möss. Säkerheten och genomförbarheten, och erhållna blodvolym med denna teknik, presenteras och diskuteras. Efter narkos, ligga musen i ryggläge.Rengör det infraklicular utrymmet med 75%etanol. Bekräfta nyckelbenet och suprasternal fossae före punktering. Identifiera punkteringsstället mitt i nyckelbenet.Flytta nålarna överlägsen och uppåt mot suprasternal fossae, bara bakre till nyckelbenet. Efter att ha flyttat tre till fyra millimeter framåt, hålla negativt tryck i sprutan, och långsamt dra tillbaka nålen. Blod kommer att rinna ut i sprutan under tillbakadragandet.Efter blodinsamling, tryck på punkteringsstället mjukt i en till två minuter för att stoppa blödningen. Förbered erforderliga material, inklusive 75%etanol, tejp, epileringsmedel, rör, 1,0 milliliter spruta ansluten med nål, elektronisk skala, heparin, och saltlösning. Efter tillfredsställande narkos, placera musen på operationsbordet i ryggläge, och två till fyra centimeter bort från kanten av bordet för att underlätta venpunktion.Fixera lemmarna i bekvämt läge, som visas i figur 2. Ingen intubation eller mekanisk ventilation behövdes i hela förfarandet. Applicera epileringsmedel runt infraclavicular utrymmet med bomullspinne.Tre minuter senare, tvätta epileringsmedel med våt bomullspinne, för att ta bort pälsen och eventuell synlig smuts. Sterilisera det infraklavicular utrymmet med 75%etanol, och torka sedan med ren gasbinda. Identifiera placeringen av nyckelbenet ben och suprasternal fossae med ett finger.Lokalisera punktionsplatsen, nära mitten av nyckelbenet ben, och fångas på den. Sätt vänster pekfinger lateral till punkteringsstället för att fixera huden och subkutan vävnad. Flytta nålen uppåt i en kranial låg mot suprasternal fossae.När nålen kommer in i den subkutana vävnaden måste ringfingret på höger hand röra sig bakåt för att bilda undertryck. Gå framåt sprutan i tre till fyra millimeter, men sluta om det inte finns blodavlopp i sprutan. Sedan långsamt dra tillbaka sprutan, och hålla undertryck i den.I de flesta tillfällen blodet kommer in i sprutan vid loppet av att dra tillbaka. När blodet kommer in i sprutan, fixera sprutan, och hålla undertryck, tills krävs volym blod som samlats i sprutan. Efter blodinsamling, dra tillbaka punkteringsnålen och tryck på punkteringsstället med bomullspinne något i en till två minuter för att stoppa blödningen och skicka sedan möss tillbaka till burar.Överför blodprovet till vårt heparinrör. Vi upprepade detta förfarande i 10 Quimi möss. Nio förfaranden lyckades på höger sida.Ett fall misslyckades inom tre försök i den högra sidan, och blodinsamling lyckades på vänster sida. Tidskursen varierade mellan 35 till 126 sekunder. Blodinsamlingsvolymen sattes till cirka 200 mikroliter.Blodinsamling lyckades med ett till fyra försök. Blodprovstagning lyckades vid det första försöket i två möss, och vid fyra försök i en mus, vid två till tre försök i andra möss. Alla uppgifter illustrerades i tabell 1.Alla djur överlevde, och återhämtade sig inom 30 minuter efter blodprovstagningen. Det fanns ingen signifikant skillnad mellan kön för alla observerade parametrar. Sammanfattningsvis är subclavian vein punktering en säker och effektiv metod för blodinsamling hos möss.Förutom svans ven skära och retro-orbital plexus blodinsamling, denna metod är genomförbar och lämplig för observationsforskningar vid flera tidpunkter i möss.

Research

JoVE Journal

Medicine

Dried Blood Spot Collection of Health Biomarkers to Maximize Participation in Population Studies

Torkat blod Spot Insamling av hälso Biomarkörer för att maximera Deltagande i befolkningsstudier

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease, health, exposures, or other biological information. In population and social sciences, ...

Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Upprepade blodinsamling från svans åder av icke-sövda råttor med ett System för insamling av vakuum blod

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Subclavia ven punktering som en alternativ metod för blod provtagning hos råttor

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

Quantitative Analysis of Cellular Composition in Advanced Atherosclerotic Lesions of Smooth Muscle Cell Lineage-Tracing Mice

Kvantitativ analys av cellulära sammansättningen i avancerade aterosklerotiska lesioner av glatt muskulatur Cell härstamning-Tracing möss

Atherosclerosis remains the leading cause of death worldwide and, despite countless preclinical studies describing promising therapeutic targets, novel ...

Simultaneous Flow Cytometric Characterization of Multiple Cell Types Retrieved from Mouse Brain/Spinal Cord Through Different Homogenization Methods

Samtidig flödescytometrisk karakterisering av flera cell typer Hämtad från mushjärna/ryggmärg genom olika Homogeniseringsmetoder

Recent advances in viral vector and nanomaterial sciences have opened the way for new cutting-edge approaches to investigate or manipulate the central ...

Minimizing Post-Infusion Portal Vein Bleeding during Intrahepatic Islet Transplantation in Mice

Minimera post-infusion portal ven blödning under intrahepatic holme transplantation hos möss

Although the liver is currently accepted as the primary transplantation site for human islets in clinical settings, islets are transplanted under the ...

Repetitive Blood Sampling from the Subclavian Vein of Conscious Rat

Repetitiv blodprovtagning från den subklaviska venen hos medveten råtta

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to ...

Comparative Study of Blood Collection Techniques in Rats

Modified Tail Vein and Penile Vein Puncture for Blood Sampling in the Rat Model

Context Dependent Blood Collection Methods in Rats (Video) | JoVE

Modifierad svansven- och penisvenpunktion för blodprovtagning i råttmodellen

Blood samples are required in most experimental animal designs to assess various hematological parameters. This paper presents two procedures for blood ...