Name: controlled cortical impact model of mouse brain injury with therapeutic transplantation of human induced pluripotent stem cell-derived neural cells
Uploaded: 2019-07-10T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Controlled Cortical Impact Model of Mouse Brain Injury with Therapeutic Transplantation of Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Neural Cells at JoVE.co

Dette arbejde blev støttet af et tilskud fra Center for Neuroscience og regenerativ medicin (CNRM, Grant Number G170244014). Vi sætter pris på hjælp fra Mahima Dewan og Clara Selbrede i klæbe fjernelses pilotundersøgelser. Kryslaine Radomski udførte indledende hjerneskade og celletransplantation kirurgi. Amanda Fu og Laura Tucker fra USU CNRM prækliniske studier har givet værdifuld rådgivning om dyre operationer og adfærds testning.

Alle eksperimenter, der er beskrevet i denne protokol, er blevet gennemgået og godkendt af det uniformerede service Universitets udvalg for dyrepasning og-brug.
1. craniektomi og kontrolleret kortikal virkning
<ol><li>Forberedelse af den kontrollerede kortikale effekt enhed og kirurgiske forsyninger.<ol>
<li>Ilæg en 1 mL glide spids sprøjte med 0,5 mL steril saltvand til sårvanding. Fastgør en 25 G nål til sprøjten for at kontrollere kunstvanding.</li>
		<li>Klargør en fortyndet opl?...

<ol>
	<li>Maas, A. I. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traumatic+brain+injury:+integrated+approaches+to+improve+prevention,+clinical+care,+and+research.">Traumatic brain injury: integrated approaches to improve prevention, clinical care, and research.</a> The Lancet Neurology. 16, 987-1048 (2017).</li><li>Murray, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disability-adjusted+life+years+(DALYs)+for+291+diseases+and+injuries+in+21+regions,+1990-2010:+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2010.">Disability-adjusted life years (DALYs) for 291 diseases and injuries in 21 regions, 1990-2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2010.</a> The Lancet. 380, 2197-2223 (2012).</li><li>Taylor, C. A., Bell, J. M., Breiding, M. J., Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traumatic+Brain+Injury-Related+Emergency+Department+Visits,+Hospitalizations,+and+Deaths+-+United+States,+2007+and+2013.">Traumatic Brain Injury-Related Emergency Department Visits, Hospitalizations, and Deaths - United States, 2007 and 2013.</a> Morbidity and mortality weekly report: Surveillance summaries. 66, 1-16 (2017).</li><li>Fehily, B., Fitzgerald, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repeated+Mild+Traumatic+Brain+Injury:+Potential+Mechanisms+of+Damage.">Repeated Mild Traumatic Brain Injury: Potential Mechanisms of Damage.</a> Cell Transplantation. 26, 1131-1155 (2017).</li><li>Kulbe, J. R., Hall, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+traumatic+encephalopathy-integration+of+canonical+traumatic+brain+injury+secondary+injury+mechanisms+with+tau+pathology.">Chronic traumatic encephalopathy-integration of canonical traumatic brain injury secondary injury mechanisms with tau pathology.</a> Progress in Neurobiology. 158, 15-44 (2017).</li><li>Romine, J., Gao, X., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+cortical+impact+model+for+traumatic+brain+injury.">Controlled cortical impact model for traumatic brain injury.</a> Journal of Visualized Experiments. , e51781 (2014).</li><li>Schallert, T., Fleming, S. M., Leasure, J. L., Tillerson, J. L., Bland, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CNS+plasticity+and+assessment+of+forelimb+sensorimotor+outcome+in+unilateral+rat+models+of+stroke,+cortical+ablation,+parkinsonism+and+spinal+cord+injury.">CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury.</a> Neuropharmacology. 39, 777-787 (2000).</li><li>Mishra, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+resting+functional+connectivity+after+traumatic+brain+injury+in+the+rat.">Decreased resting functional connectivity after traumatic brain injury in the rat.</a> PloS ONE. 9, 95280 (2014).</li><li>Sours, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Default+mode+network+interference+in+mild+traumatic+brain+injury+-+a+pilot+resting+state+study.">Default mode network interference in mild traumatic brain injury - a pilot resting state study.</a> Brain Research. 1537, 201-215 (2013).</li><li>Radomski, K. L., Zhou, Q., Yi, K. J., Doughty, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+contusion+injury+disrupts+olfactory+bulb+neurogenesis+in+adult+mice.">Cortical contusion injury disrupts olfactory bulb neurogenesis in adult mice.</a> BMC Neuroscience. 14, 142 (2013).</li><li>Wang, X., Gao, X., Michalski, S., Zhao, S., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traumatic+Brain+Injury+Severity+Affects+Neurogenesis+in+Adult+Mouse+Hippocampus.">Traumatic Brain Injury Severity Affects Neurogenesis in Adult Mouse Hippocampus.</a> Journal of Neurotrauma. 33, 721-733 (2016).</li><li>Aertker, B. M., Bedi, S., Cox, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+for+CNS+repair+following+TBI.">Strategies for CNS repair following TBI.</a> Experimental Neurology. 275 (3), 411-426 (2016).</li><li>Kikuchi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+iPS+cell-derived+dopaminergic+neurons+function+in+a+primate+Parkinson's+disease+model.">Human iPS cell-derived dopaminergic neurons function in a primate Parkinson's disease model.</a> Nature. 548, 592-596 (2017).</li><li>Kondo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+transplantation+of+human+iPSC-derived+glial-rich+neural+progenitors+improves+lifespan+of+ALS+mice.">Focal transplantation of human iPSC-derived glial-rich neural progenitors improves lifespan of ALS mice.</a> Stem Cell Reports. 3, 242-249 (2014).</li><li>Tong, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibitory+interneuron+progenitor+transplantation+restores+normal+learning+and+memory+in+ApoE4+knock-in+mice+without+or+with+Abeta+accumulation.">Inhibitory interneuron progenitor transplantation restores normal learning and memory in ApoE4 knock-in mice without or with Abeta accumulation.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 34, 9506-9515 (2014).</li><li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+adult+human+fibroblasts+by+defined+factors.">Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors.</a> Cell. 131, 861-872 (2007).</li><li>Lischka, F. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+mouse+cortical+but+not+isogenic+human+astrocyte+feeder+layers+enhance+the+functional+maturation+of+induced+pluripotent+stem+cell-derived+neurons+in+culture.">Neonatal mouse cortical but not isogenic human astrocyte feeder layers enhance the functional maturation of induced pluripotent stem cell-derived neurons in culture.</a> Glia. 66, 725-748 (2018).</li><li>Bouet, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adhesive+removal+test:+a+sensitive+method+to+assess+sensorimotor+deficits+in+mice.">The adhesive removal test: a sensitive method to assess sensorimotor deficits in mice.</a> Nature Protocols. 4, 1560-1564 (2009).</li><li>Fleming, S. M., Ekhator, O. R., Ghisays, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+sensorimotor+function+in+mouse+models+of+Parkinson's+disease.">Assessment of sensorimotor function in mouse models of Parkinson's disease.</a> Journal of Visualized Experiments. , e50303 (2013).</li><li>Paxinos, G., Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The mouse brain in stereotaxic coordinates. Compact 2nd edn. , (2004).</li><li>Jacobs, G. H., Williams, G. A., Cahill, H., Nathans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emergence+of+novel+color+vision+in+mice+engineered+to+express+a+human+cone+photopigment.">Emergence of novel color vision in mice engineered to express a human cone photopigment.</a> Science. 315, 1723-1725 (2007).</li><li>Lundell, T. G., Zhou, Q., Doughty, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenin1+expression+in+cell+lineages+of+the+cerebellar+cortex+in+embryonic+and+postnatal+mice.">Neurogenin1 expression in cell lineages of the cerebellar cortex in embryonic and postnatal mice.</a> Developmental Dynamics: An Official Publication of the American Association of Anatomists. 238, 3310-3325 (2009).</li><li>Kempermann, G., Kuhn, H. G., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=More+hippocampal+neurons+in+adult+mice+living+in+an+enriched+environment.">More hippocampal neurons in adult mice living in an enriched environment.</a> Nature. 386, 493-495 (1997).</li><li>Piltti, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+dose+alters+the+dynamics+of+human+neural+stem+cell+engraftment,+proliferation+and+migration+after+spinal+cord+injury.">Transplantation dose alters the dynamics of human neural stem cell engraftment, proliferation and migration after spinal cord injury.</a> Stem Cell Research. 15, 341-353 (2015).</li><li>Yu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severity+of+controlled+cortical+impact+traumatic+brain+injury+in+rats+and+mice+dictates+degree+of+behavioral+deficits.">Severity of controlled cortical impact traumatic brain injury in rats and mice dictates degree of behavioral deficits.</a> Brain Research. 1287, 157-163 (2009).</li><li>Kabadi, S. V., Hilton, G. D., Stoica, B. A., Zapple, D. N., Faden, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluid-percussion-induced+traumatic+brain+injury+model+in+rats.">Fluid-percussion-induced traumatic brain injury model in rats.</a> Nature Protocols. 5, 1552-1563 (2010).</li><li>Namjoshi, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+biomechanical+and+biological+threshold+of+murine+mild+traumatic+brain+injury+using+CHIMERA+(Closed+Head+Impact+Model+of+Engineered+Rotational+Acceleration).">Defining the biomechanical and biological threshold of murine mild traumatic brain injury using CHIMERA (Closed Head Impact Model of Engineered Rotational Acceleration).</a> Experimental Neurology. 292, 80-91 (2017).</li><li>Shetty, A. K., Mishra, V., Kodali, M., Hattiangady, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+brain+barrier+dysfunction+and+delayed+neurological+deficits+in+mild+traumatic+brain+injury+induced+by+blast+shock+waves.">Blood brain barrier dysfunction and delayed neurological deficits in mild traumatic brain injury induced by blast shock waves.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 8, 232 (2014).</li><li>Petraglia, A. L., Dashnaw, M. L., Turner, R. C., Bailes, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+mild+traumatic+brain+injury:+translation+of+physiological+and+anatomic+injury.">Models of mild traumatic brain injury: translation of physiological and anatomic injury.</a> Neurosurgery. 75, 34-49 (2014).</li><li>Siebold, L., Obenaus, A., Goyal, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Criteria+to+define+mild,+moderate,+and+severe+traumatic+brain+injury+in+the+mouse+controlled+cortical+impact+model.">Criteria to define mild, moderate, and severe traumatic brain injury in the mouse controlled cortical impact model.</a> Experimental Neurology. 310, 48-57 (2018).</li><li>Tucker, L. B., Fu, A. H., McCabe, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+of+Male+and+Female+C57BL/6J+Mice+on+Motor+and+Cognitive+Tasks+Commonly+Used+in+Pre-Clinical+Traumatic+Brain+Injury+Research.">Performance of Male and Female C57BL/6J Mice on Motor and Cognitive Tasks Commonly Used in Pre-Clinical Traumatic Brain Injury Research.</a> Journal of Neurotrauma. 33, 880-894 (2016).</li><li>Rose, S. C., Fischer, A. N., Heyer, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+long+is+too+long?+The+lack+of+consensus+regarding+the+post-concussion+syndrome+diagnosis.">How long is too long? The lack of consensus regarding the post-concussion syndrome diagnosis.</a> Brain Injury. 29, 798-803 (2015).</li><li>Hurst, J. L., West, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taming+anxiety+in+laboratory+mice.">Taming anxiety in laboratory mice.</a> Nature Methods. 7, 825-826 (2010).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+behavioral+testing+after+focal+ischemia+in+the+mouse:+functional+recovery+and+the+effects+of+gender.">Chronic behavioral testing after focal ischemia in the mouse: functional recovery and the effects of gender.</a> Experimental Neurology. 187, 94-104 (2004).</li><li>Andersen, A. B., Finger, S., Andersen, C. S., Hoagland, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensorimotor+cortical+lesion+effects+and+treatment+with+nimodipine.">Sensorimotor cortical lesion effects and treatment with nimodipine.</a> Physiology &amp; Behavior. 47, 1045-1052 (1990).</li><li>Al-Ali, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mTOR+Substrate+S6+Kinase+1+(S6K1)+Is+a+Negative+Regulator+of+Axon+Regeneration+and+a+Potential+Drug+Target+for+Central+Nervous+System+Injury.">The mTOR Substrate S6 Kinase 1 (S6K1) Is a Negative Regulator of Axon Regeneration and a Potential Drug Target for Central Nervous System Injury.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 37, 7079-7095 (2017).</li><li>Pleasant, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rate+of+neurodegeneration+in+the+mouse+controlled+cortical+impact+model+is+influenced+by+impactor+tip+shape:+implications+for+mechanistic+and+therapeutic+studies.">Rate of neurodegeneration in the mouse controlled cortical impact model is influenced by impactor tip shape: implications for mechanistic and therapeutic studies.</a> Journal of Neurotrauma. 28, 2245-2262 (2011).</li></ol>

Mild CCI som model system til test af eksperimentel regenerativ behandling CCI-modellen er et værdifuldt værktøj til undersøgelse af mekanismer til vævs dysfunktion efter mekanisk skade på cortex. Den tunbarhed af skaden parametre er et attraktivt træk ved denne model. Ændring af Z-dybden af virkningen, hastigheden eller opholdstid kan øge eller mindske sværhedsgraden af skaden som ønsket af investigator10,25. Den milde CCI model af...

Traumatisk hjerneskade (TBI) er en generel betegnelse for den erhvervede skade på hjernen på grund af enten indirekte mekaniske kræfter (rotations acceleration/deceleration eller kontra kup) fra slag til hovedet eller direkte skader fra genstande eller blast bølger. TBI er blevet anslået til at være årsag til omkring 9% af verdensomspændende dødsfald og observeret i en anslået 50.000.000 tilfælde pr. år1,2. En 2017 rapport fra centre for Disease Control og forebyggelse anslås, at i 2013, der var i alt 2.800.000 hospitalsbesøg og dødsfald på grund af TBI i USA3. Mange mildere TBIs gå urapporteret hvert år. Alvorlig TBI kan føre til livslang svækkelse af kognition, motorisk funktion, og generelle livskvalitet. Konsekvenserne af mild TBI, især gentagne sport-relaterede TBI, har været først for nylig værdsat for deres snigende sundhedsmæssige effekter4,5.
Præklinisk modellering er en vital komponent i udviklingen af ny mekanistisk indsigt og potentiel genoprettende terapi for TBI. Den kontrollerede kortikale effekt (CCI) model af TBI er en Open-Head model af mekanisk kontusion skade på cortex. Effektparametrene kan ændres til at producere CCI-skader, der spænder fra mild til svær6. CCI skader er fokale snarere end diffuse, som det ses med andre lukkede hovedmodeller af TBI. CCI kan udføres for at fremkalde en ensidig skade, således at den kontralaterale cortex kan tjene som en intern Komparator. Denne protokol viser egenskaberne ved en mild CCI til en del af cortex, der omfatter primære somatosensoriske og motoriske regioner. Dette kortikale område blev valgt for sit engagement i sensorimotor adfærd, som mange adfærd tests kan afsløre skade-induceret underskud7. Adfærdsmæssige forbedringer på grund af terapeutiske interventioner for TBI kan påvises, samt.
Et kendetegn for TBI er udbredt neurale dysfunktion i den skadede region. Sårede neuroner undergår celledød, og neuronal netværksforbindelse afbrydes8,9. TBI forstyrrer rekruttering af endogene stamceller, hvilket fører til yderligere downstream adfærd underskud10,11.  Transplantation af neurale stamceller og stamcelle-afledte celler er blevet udforsket som en mulighed for at genoprette funktionen i den skadede hjerne. Ud over potentialet til at genoprette beskadigede neurale kredsløb, transplanterede celler udøve paracrine effekter, der fremmer neuronal overlevelse og funktionelle opsving fra TBI12. En række forskellige celletyper er blevet transplanteret præklinisk at evaluere deres genoprettende potentiale i modeller af neurologiske lidelser13,14,15. Den nylige popularisering af inducerede pluripotente stamcelleteknologi16 har lettet udviklingen af talrige humane stamcellelinjer til eksperimentel brug. Prækliniske test med hiPSC-afledte celler er et vigtigt første skridt til at karakterisere en given celle linjens potentielle terapeutiske virkning mod sygdomme hos mennesker. Dette laboratorium har udviklet protokoller for at differentiere hipscs til neurale fænotyper17 i forfølgelsen af planteres celler til støtte opsving fra traumatisk hjerneskade.
Eksperimenter i denne protokol bruger en ensidig CCI til at inducere TBI til venstre somatosensorisk og motorisk cortex af voksne mus. En mild CCI skade resulterer i en vedvarende funktionelle underskud i højre brystben, der bruges til at spore virkningerne af hipsc-afledte neurale celle engraftment på funktionelle opsving. Forepaw sensorimotor test i denne protokol blev tilpasset fra den metode, der blev fastlagt af Bouet og kolleger18 og demonstreret tidligere af Fleming og kolleger19.  Denne protokol skitserer en komplet workflow for at udføre en eksperimentel hjerneskade, terapeutisk transplantation af hofter celler, og adfærdsmæssige og histologisk analyse af eksperimentelle udfald foranstaltninger.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:774px;" width="773">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">1 ml syringes</td>
			<td style="width:201px;">Becton Dickinson (BD)</td>
			<td style="width:123px;">&#160;309659</td>
			<td style="width:212px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">1.7 ml flip top test tubes</td>
			<td>Denville</td>
			<td style="width:123px;">C2170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">10 microliter syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td style="width:123px;">7635-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">25G Precision Glide syringe needles</td>
			<td>Becton Dickinson (BD)</td>
			<td style="width:123px;">&#160;305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">70% ethanol</td>
			<td></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>Product of choice; varies by region</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">acetaminophen oral suspension</td>
			<td>Tylenol (Children&#39;s)</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>Dilute to 1 mg/ml in water</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">anesthetic vaporizer</td>
			<td>Vetland</td>
			<td style="width:123px;">521-11-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">animal handling cloth</td>
			<td></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>Purchase from department store</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">Betadine</td>
			<td>Purdue Products</td>
			<td style="width:123px;">NDC-67618-151-32</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">compressed oxygen</td>
			<td></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>Product of choice; varies by region</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">cyclosporine A</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">30024-100mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">DAB staining kit</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td style="width:123px;">SK-4100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">D8418-500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">DMEM</td>
			<td>Invitrogen (ThermoFisher)</td>
			<td style="width:123px;">A14430-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">donkey anti-mouse IgG antibody, HRP conjugated</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td style="width:123px;">715-035-151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">electrical tape</td>
			<td>3M Corporation</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>Purchase from department store</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">fine tweezers</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td style="width:123px;">11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td style="width:123px;">91106-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">glass capillary pipettes, 1 mm OD, 0.58 mm ID</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td style="width:123px;">1B100F-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">High Speed Rotary Micromotor Kit</td>
			<td>Foredom Electric Co.&#160;</td>
			<td style="width:123px;">K.1070 - K.107018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">Ideal Micro Drill Burr Set Of 5</td>
			<td>Cell Point Scientific&#160;</td>
			<td style="width:123px;">60-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">Impact One Stereotaxic Impactor for CCI&#160;</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td style="width:123px;">39463920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td style="width:123px;">NDC-10019-360-60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">lab bench timers</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">14-649-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Micropipette puller</td>
			<td>MicroData Instruments, Inc.</td>
			<td style="width:123px;">PMP-102</td>
			<td>Any puller will suffice</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">Microscope cover slips</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td style="width:123px;">12-545-E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">Microscope slide mounting medium</td>
			<td></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:212px;">Product of choice</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">mirror</td>
			<td></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>Purchase from department store</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">mouse anti-human nuclear antigen antibody</td>
			<td>Millipore</td>
			<td style="width:123px;">MAB1281</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">Mouse on Mouse blocking kit</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td style="width:123px;">BMK-2202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">needle holder hemostat</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td style="width:123px;">12002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">ophthalmic ointment</td>
			<td>Falcon Pharmaceuticals</td>
			<td style="width:123px;">NDC-61314-631-36</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">ophthalmic spring scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td style="width:123px;">15018-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">plastic box</td>
			<td></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>Purchase from department store</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">plastic cylinder</td>
			<td></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>Purchase from department store</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">QSI motorized syringe pump</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td style="width:123px;">53311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">Removable needle compression fitting</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td style="width:123px;">55750-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">small rodent stereotaxic frame</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td style="width:123px;">51925</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">small scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td style="width:123px;">14060-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">StemPro Accutase</td>
			<td>Invitrogen (ThermoFisher)</td>
			<td style="width:123px;">A1110501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">Sterile alcohol prep pads</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td style="width:123px;">06-669-62</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">sterile cotton swabs/Kendall Q-tips</td>
			<td>Tyco Healthcare</td>
			<td style="width:123px;">540500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">Sterile saline</td>
			<td>Hospira</td>
			<td style="width:123px;">NDC-0409-1966-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">Stopwatches (2)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">06-662-56</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">Superfrost Plus Gold microscope slides</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td style="width:123px;">15-188-48</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">sutures - 5.0 silk with curved needle</td>
			<td>Oasis</td>
			<td style="width:123px;">MV-682</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

controlled cortical impact model of mouse brain injury with therapeutic transplantation of human induced pluripotent stem cell-derived neural cells

Traumatisk hjerneskade (TBI) er en førende årsag til sygelighed og dødelighed på verdensplan. Sygdoms patologi på grund af TBI skrider frem fra den primære mekaniske fornærmelse mod sekundære skade processer, herunder apoptose og inflammation. Dyre modellering har været værdifuld i søgningen til at afdække skade mekanismer og evaluere potentielle neuroprotektive terapier. Denne protokol beskriver den kontrollerede kortikale virkning (CCI) model af fokal, Open-Head TBI. Specifikt er parametre for fremstilling af en mild ensidig kortikal skade beskrevet. Adfærdsmæssige konsekvenser af CCI analyseres ved hjælp af tape fjernelse test af bilateral sensorimotor integration. Med hensyn til eksperimentel behandling for TBI-patologi illustrerer denne protokol også en proces til transplantation af dyrkede celler i hjernen. Neurale cellekulturer afledt af menneskeskabte pluripotente stamceller (hiPSCs) blev valgt for deres potentiale til at vise overlegen funktionel restaurering hos humane TBI-patienter. Kronisk overlevelse af hiPSCs i værten mus hjernevæv detekteres ved hjælp af en modificeret DAB immunohistokemiske proces.

Craniektomi kirurgi letter eksperimentel hjerneskade og terapeutisk celletransplantation: den kontrollerede kortikale indvirkning model af hjerneskade og efterfølgende celletransplantation terapi kræver omhyggelig fjernelse af overliggende kraniet. Kraniektomi kan udføres på enhver dorsale overflade af kranie at tillade manipulationer til hjernen region af interesse. Diagrammet i figur 1 viser en 5 mm diameter craniectomy skematisk for at afdække primære somatosensoris...

Watch this Scientific Journal Video about Controlled Cortical Impact Model of Mouse Brain Injury with Therapeutic Transplantation of Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Neural Cells at JoVE.co

Controlled Cortical Impact Model of Mouse Brain Injury with Therapeutic Transplantation of Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Neural Cells

Denne protokol demonstrerer metoder til en musemodel af åben-kraniet traumatisk hjerneskade og transplantation af dyrkede menneskeskabte pluripotente stamcelle-afledte celler i skadestedet. Adfærdsmæssige og histologiske tests af resultaterne fra disse procedurer er også beskrevet i korte træk.

Kontrolleret kortikal indvirkning model af mus hjerneskade med terapeutisk transplantation af menneskeskabte pluripotente stamcelle-afledte neurale celler

Traumatic brain injury (TBI) is a leading cause of morbidity and mortality worldwide. Disease pathology due to TBI progresses from the primary mechanical ...

Vores protokol viser en omfattende præklinisk arbejdsgang til test af den terapeutiske effekt af human-inducerede pluripotente stamceller efter hjerneskade. Denne model af traumatisk hjerneskade giver en høj grad af alsidighed og reproducerbarhed ved stramt at kontrollere parametrene for den mekaniske kraft og dermed give en veldefineret skade. Disse procedurer kan bruges til at studere skade og nyttiggørelse processer i andre hjerneregioner og transplantation metode er modtagelige at bruge med mange celletyper.Cranial boring er udfordrende, da teknikken kræver manuel fingerfærdighed at mestre det relevante tryk, hastighed, dybde og glatte bevægelser. Dokumenter alle de begivenheder og praksis i udstrakt grad. For at udføre en ensidig kraniectomy, bekræfte en manglende reaktion på tå knivspids i bedøvet mus og sikre musen i en stereotaxic ramme.Påfør antibiotisk oftalmisk salve i øjnene med en steril vatpind og jod-baseret opløsning på det barberede hovedbundsområde. Fjern jod med 70% ethanol og dække dyret med en fenestrated kirurgisk drapere. Lav en 1,5 til to centimeter midterlinjen snit på hovedbunden og bruge sterile vatpinde til at rense såret og til at rydde fascia til venstre for midterlinjen på bregma.Brug en slagmesonde til at identificere kraniectomy-stedet, og sæt x lig med nul, y er lig med nul stereotaxisk referencepunkt til bregma. Juster sonden side om side til to millimeter til venstre for midterlinjen. Brug en finspids kirurgisk sikker markør til at lande en fem millimeter diameter cirkel omkring det formodede anslagsområde.Hæv og drej slagforetager ud af position og fuldfør den fem millimeter cirkel. Sæt kort slagkraften i position for at kontrollere nøjagtigheden af 5 millimetercirklen. Derefter hæve og rotere slaghuggeren ud af position og bruge en high-speed roterende mikromotor kit hånd værktøj udstyret med en rund spids 0,6 eller 0,8 millimeter burr borebitt at lave et åbent hul i kraniet ved 70 til 80% maksimal hastighed.Påfør let tryk på kraniet, mens boring langs de fem millimeter omkreds omrids inden for denne grænse og bruge tang til at løfte den resulterende knogle flap. Boring gennem suturlinjer kan give yderligere problemer, da knoglen afbrydes og kræver yderligere tryk. Blodkarrene kan være i tæt sammenhæng, og derfor blødning begivenheder er sandsynlige.For at fremkalde en mild kontrolleret kortikal slagskade skal slaghuggersonen rengøres med en steril alkoholpude, og slaghuggersonen flyttes tilbage på plads over den eksponerede cortex. Sænk sonden, indtil den rører dura mater overfladen og markere denne position som z er lig med nul. Træk stemplet og flyt til z lig med minus en millimeter og aflad stemplet for at påvirke cortex.Løft straks stemplet og flyt armen ud af position og overrisle cortex med en generøs mængde saltvand og bruge enkle afbrudte sting og 5-0 silke sutur at lukke hovedbunden indsnit. Derefter levere 10 milligram pr kg Cyclosporine A ved subkutan injektion i scruff og placere musen i en ren pre-opvarmet post-operative bur med overvågning, indtil fuld helbredelse. Ca. 24 timer efter craniectomy, placere musen tilbage i stereotaxic ramme.Dæk musen med fenestrated kirurgisk drapere. Lav indsnitsstedet med sterilt saltvand for at rengøre stedet og løsne suturerne. Brug en 70% ethanol gennemblødt vatpind til forsigtigt at sterilisere indsnit stedet og bruge fine pincet og oftalmologiske saks til at fjerne suturer.Derefter overrisle kirurgi og kraniectomy site med rigelige sterile saltvand. I en cellekultur biosikkerhed hætte, forsigtigt hvirvle eller trykke på tuben af celler for at sikre en homogen celle suspension. Brug en mikropipette til at indlæse ca. 7,5 mikroliter celler i en Hamilton-sprøjte gennem stemplets ende.Hold sprøjten i en vinkel på 120 grader med stemplets ende nedad, og sæt stemplet i, og pas på ikke at indføre en luftboble mellem affjedringen og stempelspidsen. Fastgør pakningssamlingen til pipetålen og fastgør nålen til sprøjten. Skub stemplet for at flytte cellesuspensionen ind i pipettenålen og fastgør sprøjten til den stereoaxe sprøjtepumpe.Fremfør stemplet for at sikre, at sprøjtepumpen fungerer korrekt, og flyt nålen ind i koordinaterne til injektion. Juster nålespidsen til bregma og indstil x- og y-koordinaterne til nul. Flyt nålespidsen over kraniectomien til to millimeter lateral og minus en millimeter posterior til bregma og rør nålespidsen til dura mater overfladen.Løft nålen en smule derefter foretage et lille snit i dura mater på det sted, hvor nålen fik kontakt. Indstil stereotaxiske koordinat til z er lig nul og tryk stemplet for at bekræfte, at celleaffjedringen flyder tilstrækkeligt, før du indfører nålen ind i hjernen. Indfør nålen i hjernen til en dybde af z svarer til minus 1,4 millimeter for at placere transplantatet på den grå stof / hvid stof grænse af den dybe cortex.Start sprøjtepumpen for at indgyde celleaffjedringen over en periode på 15 minutter. Brug et langt arbejderafstandsmikroskop til at overvåge cellesuspensionsudstrømningsudvanding på operationsstedet med sterilt saltvand under injektionen for at opretholde vævshydrering. Når alle cellerne er leveret, langsomt trække transplantationnålen og overrisle kirurgisstedet med ekstra saltvand, før du lukker snittet med nye suturer.Derefter levere postoperativ pleje som påvist. For en tape fjernelse test, først bruge en lille barberkniv til at skære gule og røde stykker af elektrisk tape i tre med fem millimeter strimler på en glat glasoverflade. Bring musene ind i adfærd test rummet i mindst 30 minutter før testen og bruge en håndtering klud til at fastholde musen ved scruff af halsen og tilbage, således at musen holder forepaws væk fra sin krop og hoved.Brug pincet til at placere en klæbebånd på plantar overfladen af hver forsepaw og bruge delikat og konsekvent finger tryk for at sikre strimler til poterne. Hurtigt placere musen i en plastik cylinder og starte to stopure, når musen har alle fire poter på plast testboks. Brug derefter de to stopure til at registrere latencies for venstre pote varsel, venstre pote fjernelse, højre pote varsel og højre pote fjernelse.I dette pilotforsøg blev forelimb-funktionen sammenlignet med craniectomy alene, kontrolleret kortikal kollisionsskade og naive mus. Mus, der gennemgik kirurgi udstillet forbigående øget ventetider at lægge mærke til klæbende stimuli i en til tre dage umiddelbart efter operationen og forbigående post-operative underskud i lim fjernelse fra ipsilateral forepaw. Mus, der gennemgik kontrolleret kortikal virkning, udviste imidlertid betydelige underskud i motorens ydeevne i forepawen kontralateral til skaden sammenlignet med naive mus ud af postoperativ dag 28.Immunstaining af mus hjerne sektioner for humant nukleart antigen afslører, at humane celletransplantater kan tydeligt skelnes fra vært væv i SHAM skade og kontrolleret kortikal indvirkning hjerner. Du skal overholde standardsikkerhedsprocedurer i laboratoriet ved håndtering af dyrkede humane celler, og når du håndterer sprøjtenåle, der kommer i kontakt med gnavere eller immunsuppressive lægemidler. Hjernevæv sektioner kan analyseres for udtryk for neuroinflammatoriske markører, da det er værdifuldt at vide, hvordan transplantatet påvirker værten væv skade svar og vice versa.Vi var overraskede over at finde subtile kønsforskelle i post-skade adfærd resultater. Vi undersøger nu, om sex spiller en rolle i neuroimmune reaktion på hjerneskade. Stabile hænder, tålmodighed og praksis er afgørende for at udvikle en god kraniectomy teknik.Følgeskader fra en forkert kraniectomy kan kompromittere det område, du ønsker at målrette for celletransplantation.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Culturing Human Pluripotent and Neural Stem Cells in an Enclosed Cell Culture System for Basic and Preclinical Research

Dyrkning Menneskelig pluripotente og neurale stamceller i en Lukket Cell Culture System for Basic og Prækliniske Research

This paper describes how to use a custom manufactured, commercially available enclosed cell culture system for basic and preclinical research. Biosafety ...

Rapid Neuronal Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells for Measuring Network Activity on Micro-electrode Arrays

Hurtig neuronal differentiering af induceret pluripotente stamceller til måling Network Aktivitet på Micro-elektrode Arrays

Neurons derived from human induced Pluripotent Stem Cells (hiPSCs) provide a promising new tool for studying neurological disorders. In the past decade, ...

Pluripotent Stem Cell Derived Cardiac Cells for Myocardial Repair

Pluripotente Stem Cell Afledt hjerteceller til Myokardie Repair

Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) must be fully differentiated into specific cell types before administration, but conventional protocols for ...

Differentiating Chondrocytes from Peripheral Blood-derived Human Induced Pluripotent Stem Cells

Differentierende chondrocytter fra perifert blodafledte humane inducerede pluripotente stamceller

In this study, we used peripheral blood cells (PBCs) as seed cells to produce chondrocytes via induced pluripotent stem cells (iPSCs) in an ...

Generation of Standardized and Reproducible Forebrain-type Cerebral Organoids from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Generation af standardiserede og reproducerbare forhjernen-type Cerebral Organoids fra menneskelige induceret pluripotente stamceller

The human cortex is highly expanded and exhibits a complex structure with specific functional areas, providing higher brain function, such as cognition. ...

Using Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Hepatocyte-like Cells for Drug Discovery

Ved hjælp af menneskelige induceret pluripotente stamceller-afledt hepatocyt-lignende celler for Drug Discovery

The ability to differentiate human induced pluripotent stem cells (iPSCs) into hepatocyte-like cells (HLCs) provides new opportunities to study inborn ...

A Familial Hypercholesterolemia Human Liver Chimeric Mouse Model Using Induced Pluripotent Stem Cell-derived Hepatocytes

En familiær hyperkolesterolæmi menneskelige lever kimære musen Model ved hjælp af induceret pluripotente stamceller-afledt hepatocytter

Familial hypercholesterolemia (FH) is mostly caused by low-density lipoprotein receptor (LDLR) mutations and results in an increased risk of early-onset ...

Microfluidic Assay for the Assessment of Leukocyte Adhesion to Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Endothelial Cells (hiPSC-ECs)

Microfluidic Assay for the Assessment of Leukocyte Adhesion to Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Endothelial Cells hiPSC-ECs

Mikrofluid analyse til vurdering af leukocyt adhæsion til menneskelige induceret pluripotente stamceller-afledt endotelceller (hiPSC-ECs)

Endothelial cells (ECs) are essential for the regulation of inflammatory responses by either limiting or facilitating leukocyte recruitment into affected ...

Generation of 3D Skin Organoid from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Generation af 3D hud Organoid fra ledningen blod-afledte induceret pluripotente stamceller

The skin is the body&#8217;s largest organ and has many functions. The skin acts as a physical barrier and protector of the body and regulates bodily ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

I Vitro Generation af Somite derivater fra menneskelige induceret celler pluripotente stamceller

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...