Name: controlled cortical impact model of mouse brain injury with therapeutic transplantation of human induced pluripotent stem cell-derived neural cells
Uploaded: 2019-07-10T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Controlled Cortical Impact Model of Mouse Brain Injury with Therapeutic Transplantation of Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Neural Cells at JoVE.co

Detta arbete stöddes av ett bidrag från centrum för neurovetenskap och regenerativ medicin (CNRM, Grant Number G170244014). Vi uppskattar hjälp av Mahima Dewan och Clara Selbrede i självhäftande avlägsnande pilotstudier. Kryslaine Radomski utförde preliminära hjärnskador och celltransplantation operationer. Amanda Fu och Laura Tucker av USU CNRM prekliniska studier Core Laboratory gav värdefulla råd om djur operationer och beteende testning, respektive.

Alla experiment som beskrivs i detta protokoll granskades och godkändes av den uniformerade Services-universitetets djur vårds-och användnings kommitté.
1. kraniektomi och kontrollerad kortikal påverkan
<ol><li>Beredning av den kontrollerade kortikala Slaganordningen och kirurgiska material.<ol>
<li>Ladda en 1 mL slip-Tip spruta med 0,5 mL steril saltlösning för sår bevattning. Fäst en 25 G nål på sprutan för att kontrollera bevattning.</li>
		<li>Bered en utspädd lösning av Cs...

<ol>
	<li>Maas, A. I. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traumatic+brain+injury:+integrated+approaches+to+improve+prevention,+clinical+care,+and+research.">Traumatic brain injury: integrated approaches to improve prevention, clinical care, and research.</a> The Lancet Neurology. 16, 987-1048 (2017).</li><li>Murray, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disability-adjusted+life+years+(DALYs)+for+291+diseases+and+injuries+in+21+regions,+1990-2010:+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2010.">Disability-adjusted life years (DALYs) for 291 diseases and injuries in 21 regions, 1990-2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2010.</a> The Lancet. 380, 2197-2223 (2012).</li><li>Taylor, C. A., Bell, J. M., Breiding, M. J., Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traumatic+Brain+Injury-Related+Emergency+Department+Visits,+Hospitalizations,+and+Deaths+-+United+States,+2007+and+2013.">Traumatic Brain Injury-Related Emergency Department Visits, Hospitalizations, and Deaths - United States, 2007 and 2013.</a> Morbidity and mortality weekly report: Surveillance summaries. 66, 1-16 (2017).</li><li>Fehily, B., Fitzgerald, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repeated+Mild+Traumatic+Brain+Injury:+Potential+Mechanisms+of+Damage.">Repeated Mild Traumatic Brain Injury: Potential Mechanisms of Damage.</a> Cell Transplantation. 26, 1131-1155 (2017).</li><li>Kulbe, J. R., Hall, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+traumatic+encephalopathy-integration+of+canonical+traumatic+brain+injury+secondary+injury+mechanisms+with+tau+pathology.">Chronic traumatic encephalopathy-integration of canonical traumatic brain injury secondary injury mechanisms with tau pathology.</a> Progress in Neurobiology. 158, 15-44 (2017).</li><li>Romine, J., Gao, X., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+cortical+impact+model+for+traumatic+brain+injury.">Controlled cortical impact model for traumatic brain injury.</a> Journal of Visualized Experiments. , e51781 (2014).</li><li>Schallert, T., Fleming, S. M., Leasure, J. L., Tillerson, J. L., Bland, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CNS+plasticity+and+assessment+of+forelimb+sensorimotor+outcome+in+unilateral+rat+models+of+stroke,+cortical+ablation,+parkinsonism+and+spinal+cord+injury.">CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury.</a> Neuropharmacology. 39, 777-787 (2000).</li><li>Mishra, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+resting+functional+connectivity+after+traumatic+brain+injury+in+the+rat.">Decreased resting functional connectivity after traumatic brain injury in the rat.</a> PloS ONE. 9, 95280 (2014).</li><li>Sours, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Default+mode+network+interference+in+mild+traumatic+brain+injury+-+a+pilot+resting+state+study.">Default mode network interference in mild traumatic brain injury - a pilot resting state study.</a> Brain Research. 1537, 201-215 (2013).</li><li>Radomski, K. L., Zhou, Q., Yi, K. J., Doughty, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+contusion+injury+disrupts+olfactory+bulb+neurogenesis+in+adult+mice.">Cortical contusion injury disrupts olfactory bulb neurogenesis in adult mice.</a> BMC Neuroscience. 14, 142 (2013).</li><li>Wang, X., Gao, X., Michalski, S., Zhao, S., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traumatic+Brain+Injury+Severity+Affects+Neurogenesis+in+Adult+Mouse+Hippocampus.">Traumatic Brain Injury Severity Affects Neurogenesis in Adult Mouse Hippocampus.</a> Journal of Neurotrauma. 33, 721-733 (2016).</li><li>Aertker, B. M., Bedi, S., Cox, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+for+CNS+repair+following+TBI.">Strategies for CNS repair following TBI.</a> Experimental Neurology. 275 (3), 411-426 (2016).</li><li>Kikuchi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+iPS+cell-derived+dopaminergic+neurons+function+in+a+primate+Parkinson's+disease+model.">Human iPS cell-derived dopaminergic neurons function in a primate Parkinson's disease model.</a> Nature. 548, 592-596 (2017).</li><li>Kondo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+transplantation+of+human+iPSC-derived+glial-rich+neural+progenitors+improves+lifespan+of+ALS+mice.">Focal transplantation of human iPSC-derived glial-rich neural progenitors improves lifespan of ALS mice.</a> Stem Cell Reports. 3, 242-249 (2014).</li><li>Tong, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibitory+interneuron+progenitor+transplantation+restores+normal+learning+and+memory+in+ApoE4+knock-in+mice+without+or+with+Abeta+accumulation.">Inhibitory interneuron progenitor transplantation restores normal learning and memory in ApoE4 knock-in mice without or with Abeta accumulation.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 34, 9506-9515 (2014).</li><li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+adult+human+fibroblasts+by+defined+factors.">Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors.</a> Cell. 131, 861-872 (2007).</li><li>Lischka, F. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+mouse+cortical+but+not+isogenic+human+astrocyte+feeder+layers+enhance+the+functional+maturation+of+induced+pluripotent+stem+cell-derived+neurons+in+culture.">Neonatal mouse cortical but not isogenic human astrocyte feeder layers enhance the functional maturation of induced pluripotent stem cell-derived neurons in culture.</a> Glia. 66, 725-748 (2018).</li><li>Bouet, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adhesive+removal+test:+a+sensitive+method+to+assess+sensorimotor+deficits+in+mice.">The adhesive removal test: a sensitive method to assess sensorimotor deficits in mice.</a> Nature Protocols. 4, 1560-1564 (2009).</li><li>Fleming, S. M., Ekhator, O. R., Ghisays, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+sensorimotor+function+in+mouse+models+of+Parkinson's+disease.">Assessment of sensorimotor function in mouse models of Parkinson's disease.</a> Journal of Visualized Experiments. , e50303 (2013).</li><li>Paxinos, G., Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The mouse brain in stereotaxic coordinates. Compact 2nd edn. , (2004).</li><li>Jacobs, G. H., Williams, G. A., Cahill, H., Nathans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emergence+of+novel+color+vision+in+mice+engineered+to+express+a+human+cone+photopigment.">Emergence of novel color vision in mice engineered to express a human cone photopigment.</a> Science. 315, 1723-1725 (2007).</li><li>Lundell, T. G., Zhou, Q., Doughty, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenin1+expression+in+cell+lineages+of+the+cerebellar+cortex+in+embryonic+and+postnatal+mice.">Neurogenin1 expression in cell lineages of the cerebellar cortex in embryonic and postnatal mice.</a> Developmental Dynamics: An Official Publication of the American Association of Anatomists. 238, 3310-3325 (2009).</li><li>Kempermann, G., Kuhn, H. G., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=More+hippocampal+neurons+in+adult+mice+living+in+an+enriched+environment.">More hippocampal neurons in adult mice living in an enriched environment.</a> Nature. 386, 493-495 (1997).</li><li>Piltti, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+dose+alters+the+dynamics+of+human+neural+stem+cell+engraftment,+proliferation+and+migration+after+spinal+cord+injury.">Transplantation dose alters the dynamics of human neural stem cell engraftment, proliferation and migration after spinal cord injury.</a> Stem Cell Research. 15, 341-353 (2015).</li><li>Yu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severity+of+controlled+cortical+impact+traumatic+brain+injury+in+rats+and+mice+dictates+degree+of+behavioral+deficits.">Severity of controlled cortical impact traumatic brain injury in rats and mice dictates degree of behavioral deficits.</a> Brain Research. 1287, 157-163 (2009).</li><li>Kabadi, S. V., Hilton, G. D., Stoica, B. A., Zapple, D. N., Faden, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluid-percussion-induced+traumatic+brain+injury+model+in+rats.">Fluid-percussion-induced traumatic brain injury model in rats.</a> Nature Protocols. 5, 1552-1563 (2010).</li><li>Namjoshi, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+biomechanical+and+biological+threshold+of+murine+mild+traumatic+brain+injury+using+CHIMERA+(Closed+Head+Impact+Model+of+Engineered+Rotational+Acceleration).">Defining the biomechanical and biological threshold of murine mild traumatic brain injury using CHIMERA (Closed Head Impact Model of Engineered Rotational Acceleration).</a> Experimental Neurology. 292, 80-91 (2017).</li><li>Shetty, A. K., Mishra, V., Kodali, M., Hattiangady, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+brain+barrier+dysfunction+and+delayed+neurological+deficits+in+mild+traumatic+brain+injury+induced+by+blast+shock+waves.">Blood brain barrier dysfunction and delayed neurological deficits in mild traumatic brain injury induced by blast shock waves.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 8, 232 (2014).</li><li>Petraglia, A. L., Dashnaw, M. L., Turner, R. C., Bailes, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+mild+traumatic+brain+injury:+translation+of+physiological+and+anatomic+injury.">Models of mild traumatic brain injury: translation of physiological and anatomic injury.</a> Neurosurgery. 75, 34-49 (2014).</li><li>Siebold, L., Obenaus, A., Goyal, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Criteria+to+define+mild,+moderate,+and+severe+traumatic+brain+injury+in+the+mouse+controlled+cortical+impact+model.">Criteria to define mild, moderate, and severe traumatic brain injury in the mouse controlled cortical impact model.</a> Experimental Neurology. 310, 48-57 (2018).</li><li>Tucker, L. B., Fu, A. H., McCabe, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+of+Male+and+Female+C57BL/6J+Mice+on+Motor+and+Cognitive+Tasks+Commonly+Used+in+Pre-Clinical+Traumatic+Brain+Injury+Research.">Performance of Male and Female C57BL/6J Mice on Motor and Cognitive Tasks Commonly Used in Pre-Clinical Traumatic Brain Injury Research.</a> Journal of Neurotrauma. 33, 880-894 (2016).</li><li>Rose, S. C., Fischer, A. N., Heyer, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+long+is+too+long?+The+lack+of+consensus+regarding+the+post-concussion+syndrome+diagnosis.">How long is too long? The lack of consensus regarding the post-concussion syndrome diagnosis.</a> Brain Injury. 29, 798-803 (2015).</li><li>Hurst, J. L., West, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taming+anxiety+in+laboratory+mice.">Taming anxiety in laboratory mice.</a> Nature Methods. 7, 825-826 (2010).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+behavioral+testing+after+focal+ischemia+in+the+mouse:+functional+recovery+and+the+effects+of+gender.">Chronic behavioral testing after focal ischemia in the mouse: functional recovery and the effects of gender.</a> Experimental Neurology. 187, 94-104 (2004).</li><li>Andersen, A. B., Finger, S., Andersen, C. S., Hoagland, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensorimotor+cortical+lesion+effects+and+treatment+with+nimodipine.">Sensorimotor cortical lesion effects and treatment with nimodipine.</a> Physiology &amp; Behavior. 47, 1045-1052 (1990).</li><li>Al-Ali, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mTOR+Substrate+S6+Kinase+1+(S6K1)+Is+a+Negative+Regulator+of+Axon+Regeneration+and+a+Potential+Drug+Target+for+Central+Nervous+System+Injury.">The mTOR Substrate S6 Kinase 1 (S6K1) Is a Negative Regulator of Axon Regeneration and a Potential Drug Target for Central Nervous System Injury.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 37, 7079-7095 (2017).</li><li>Pleasant, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rate+of+neurodegeneration+in+the+mouse+controlled+cortical+impact+model+is+influenced+by+impactor+tip+shape:+implications+for+mechanistic+and+therapeutic+studies.">Rate of neurodegeneration in the mouse controlled cortical impact model is influenced by impactor tip shape: implications for mechanistic and therapeutic studies.</a> Journal of Neurotrauma. 28, 2245-2262 (2011).</li></ol>

Mild CCI som modellsystem för testning av experimentell regenerativ behandling CCI-modellen är ett värdefullt verktyg för att undersöka mekanismer för vävnads dysfunktion efter mekanisk skada på cortex. Den inställnings av skadan parametrarna är ett attraktivt inslag i denna modell. Ändra Z djupet av påverkan, hastighet, eller uppehållstid kan öka eller minska svårighetsgraden av skadan som önskas av prövaren10,25. Den milda C...

Traumatisk hjärnskada (TBI) är en allmän term för den förvärvade skadan till hjärnan på grund av antingen indirekta mekaniska krafter (rotations acceleration/retardation eller Contra-Coup) från slag till huvudet eller direkt skada från föremål eller blast vågor. TBI har uppskattats vara orsaken till ungefär 9% av de globala dödsfallen och observerats i uppskattningsvis 50 000 000 fall per år1,2. En 2017 rapport från centra för sjukdomskontroll och förebyggande uppskattas att i 2013, det fanns totalt 2 800 000 sjukhus besök och dödsfall på grund av TBI i USA3. Många mildare TBIs gå orapporterat varje år. Allvarlig TBI kan leda till livslång försämring av kognition, motorisk funktion och övergripande livskvalitet. Konsekvenserna av mild TBI, särskilt repetitiva idrottsrelaterade TBI, har bara nyligen uppskattat för sina försåtliga hälsoeffekter4,5.
Preklinisk modellering är en viktig del i att utveckla nya mekanistiska insikter och potentiell reparativ terapi för TBI. Den kontrollerade kortikala Impact (CCI) modellen av TBI är en öppen modell av mekanisk kontusion skada på cortex. Effektparametrarna kan modifieras för att producera CCI-skador som sträcker sig från mild till svår6. CCI-skador är fokala snarare än diffusa, vilket ses med andra slutna huvudmodeller av TBI. CCI kan utföras för att framkalla en ensidig skada, så att kontralaterala cortex kan fungera som en intern komparator. Detta protokoll visar egenskaperna hos en mild CCI till en del av cortex som omfattar primära somatosensoriska och motoriska regioner. Detta kortikala område valdes för sitt engagemang i Sensorimotoriska beteenden för vilka många beteende tester kan upptäcka skada-inducerad underskott7. Beteende förbättringar på grund av terapeutiska interventioner för TBI kan upptäckas, samt.
Ett kännetecken för TBI är utbredd neurala dysfunktion i den skadade regionen. Skadade nervceller genomgår celldöd, och neuronala nätverksanslutning störs8,9. TBI avbryter rekryteringen av endogena stamceller, vilket leder till ytterligare underordnade beteende underskott10,11.  Transplantation av neurala stamceller och stamceller-härledda celler har undersökts som en möjlighet att återställa funktionen i den skadade hjärnan. Förutom potentialen att återställa skadade neurala kretsar, transplanterade celler utövar parakrin effekter som främjar neuronala överlevnad och funktionell återhämtning från TBI12. En mängd olika celltyper har transplanterats precliniskt att utvärdera deras reparativ potential i modeller av neurologiska störningar13,14,15. Den senaste Populariseringen av inducerad pluripotenta stamcellsteknik16 har underlättat utvecklingen av många mänskliga stamcellslinjer för experimentell användning. Prekliniska tester med hiPSC-härledda celler är ett viktigt första steg för att karakterisera en given cellinjer potentiell terapeutisk effekt mot mänskliga sjukdomar. Detta laboratorium har utvecklat protokoll för att differentiera hiPSCs till neurala fenotyper17 i jakten på transplanterbara celler för att hjälpa återhämtning från traumatisk hjärnskada.
Experiment i detta protokoll använder en ensidig CCI för att inducera TBI till vänster somatosensoriska och motoriska cortex av vuxna möss. En mild CCI skada resulterar i en ihållande funktionella underskott i rätt framtassen som används för att spåra effekterna av hipsc-derived neural cell engraftion på funktionell återhämtning. Framtass sensorimotorik testning i detta protokoll har anpassats från den metod som inrättats av BOUET och kollegor18 och demonstrerades tidigare av Fleming och kollegor19.  Detta protokoll beskriver ett komplett arbetsflöde för att utföra en experimentell hjärnskada, terapeutisk transplantation av höfter celler, och beteendemässiga och histologisk analys av experimentella resultatåtgärder.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:774px;" width="773">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">1 ml syringes</td>
			<td style="width:201px;">Becton Dickinson (BD)</td>
			<td style="width:123px;">&#160;309659</td>
			<td style="width:212px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">1.7 ml flip top test tubes</td>
			<td>Denville</td>
			<td style="width:123px;">C2170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">10 microliter syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td style="width:123px;">7635-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">25G Precision Glide syringe needles</td>
			<td>Becton Dickinson (BD)</td>
			<td style="width:123px;">&#160;305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">70% ethanol</td>
			<td></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>Product of choice; varies by region</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">acetaminophen oral suspension</td>
			<td>Tylenol (Children&#39;s)</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>Dilute to 1 mg/ml in water</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">anesthetic vaporizer</td>
			<td>Vetland</td>
			<td style="width:123px;">521-11-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">animal handling cloth</td>
			<td></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>Purchase from department store</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">Betadine</td>
			<td>Purdue Products</td>
			<td style="width:123px;">NDC-67618-151-32</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">compressed oxygen</td>
			<td></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>Product of choice; varies by region</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">cyclosporine A</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">30024-100mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">DAB staining kit</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td style="width:123px;">SK-4100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">D8418-500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">DMEM</td>
			<td>Invitrogen (ThermoFisher)</td>
			<td style="width:123px;">A14430-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">donkey anti-mouse IgG antibody, HRP conjugated</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td style="width:123px;">715-035-151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">electrical tape</td>
			<td>3M Corporation</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>Purchase from department store</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">fine tweezers</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td style="width:123px;">11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td style="width:123px;">91106-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">glass capillary pipettes, 1 mm OD, 0.58 mm ID</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td style="width:123px;">1B100F-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">High Speed Rotary Micromotor Kit</td>
			<td>Foredom Electric Co.&#160;</td>
			<td style="width:123px;">K.1070 - K.107018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">Ideal Micro Drill Burr Set Of 5</td>
			<td>Cell Point Scientific&#160;</td>
			<td style="width:123px;">60-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">Impact One Stereotaxic Impactor for CCI&#160;</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td style="width:123px;">39463920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td style="width:123px;">NDC-10019-360-60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">lab bench timers</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">14-649-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Micropipette puller</td>
			<td>MicroData Instruments, Inc.</td>
			<td style="width:123px;">PMP-102</td>
			<td>Any puller will suffice</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">Microscope cover slips</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td style="width:123px;">12-545-E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">Microscope slide mounting medium</td>
			<td></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:212px;">Product of choice</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">mirror</td>
			<td></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>Purchase from department store</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">mouse anti-human nuclear antigen antibody</td>
			<td>Millipore</td>
			<td style="width:123px;">MAB1281</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">Mouse on Mouse blocking kit</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td style="width:123px;">BMK-2202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">needle holder hemostat</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td style="width:123px;">12002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">ophthalmic ointment</td>
			<td>Falcon Pharmaceuticals</td>
			<td style="width:123px;">NDC-61314-631-36</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">ophthalmic spring scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td style="width:123px;">15018-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">plastic box</td>
			<td></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>Purchase from department store</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">plastic cylinder</td>
			<td></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>Purchase from department store</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">QSI motorized syringe pump</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td style="width:123px;">53311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">Removable needle compression fitting</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td style="width:123px;">55750-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">small rodent stereotaxic frame</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td style="width:123px;">51925</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">small scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td style="width:123px;">14060-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">StemPro Accutase</td>
			<td>Invitrogen (ThermoFisher)</td>
			<td style="width:123px;">A1110501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">Sterile alcohol prep pads</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td style="width:123px;">06-669-62</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">sterile cotton swabs/Kendall Q-tips</td>
			<td>Tyco Healthcare</td>
			<td style="width:123px;">540500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">Sterile saline</td>
			<td>Hospira</td>
			<td style="width:123px;">NDC-0409-1966-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">Stopwatches (2)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">06-662-56</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">Superfrost Plus Gold microscope slides</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td style="width:123px;">15-188-48</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:238px;">sutures - 5.0 silk with curved needle</td>
			<td>Oasis</td>
			<td style="width:123px;">MV-682</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

controlled cortical impact model of mouse brain injury with therapeutic transplantation of human induced pluripotent stem cell-derived neural cells

Traumatisk hjärnskada (TBI) är en ledande orsak till sjuklighet och dödlighet över hela världen. Sjukdoms patologi på grund av TBI fortskrider från den primära mekaniska förolämpningen mot sekundära skador processer, inklusive apoptos och inflammation. Djur modellering har varit värdefullt i sökandet att riva upp skademekanismer och utvärdera potentiella neuroprotektiva terapier. Detta protokoll beskriver den kontrollerade kortikala effekten (CCI) modell av Focal, öppen huvudet TBI. Närmare bestämt beskrivs parametrar för att framställa en mild ensidig kortikal skada. Beteendemässiga konsekvenser av CCI analyseras med hjälp av tejp avlägsnande test av bilaterala sensomotoriska integration. När det gäller experimentell terapi för TBI patologi illustrerar detta protokoll också en process för transplantation av odlade celler i hjärnan. Neurala cellkulturer som härrör från humana inducerade pluripotenta stamceller (hiPSCs) valdes för sin potential att Visa överlägsen funktionell restaurering hos humana TBI patienter. Kronisk överlevnad av hiPSCs i värd mus hjärnvävnad upptäcks med hjälp av en modifierad DAB immunohistokemisk process.

Kraniektomi kirurgi underlättar experimentell hjärnskada och terapeutisk celltransplantation: den kontrollerade kortikala effekten modell av hjärnskada och efterföljande celltransplantation behandling kräver noggrann borttagning av den överliggande skalle. Kraniektomi kan utföras på någon dorsala yta av skallen för att tillåta manipulationer till hjärnan regionen av intresse. Diagrammet i figur 1 visar en kraniektomi Schematisk 5 mm diameter för att avslöja pri...

Watch this Scientific Journal Video about Controlled Cortical Impact Model of Mouse Brain Injury with Therapeutic Transplantation of Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Neural Cells at JoVE.co

Controlled Cortical Impact Model of Mouse Brain Injury with Therapeutic Transplantation of Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Neural Cells

Detta protokoll visar metoder för en musmodell av öppen skalle traumatisk hjärnskada och transplantation av odlade humana inducerad pluripotenta stamceller-härledda celler till skada platsen. Beteendemässiga och histologiska tester av utfall från dessa procedurer beskrivs också i korthet.

Kontrollerad kortikal effekt modell av mus hjärnskada med terapeutisk transplantation av humana inducerade pluripotenta stamceller-härledda neurala celler

Traumatic brain injury (TBI) is a leading cause of morbidity and mortality worldwide. Disease pathology due to TBI progresses from the primary mechanical ...

Vårt protokoll visar ett omfattande preklinisk arbetsflöde för testning av terapeutiska effekten av mänskliga-inducerad pluripotenta stamceller efter hjärnan skada. Denna modell av traumatisk hjärnskada ger en hög grad av mångsidighet och reproducerbarhet genom att tätt kontrollera parametrarna för den mekaniska kraften och därför ger en väldefinierad skada. Dessa förfaranden kan användas för att studera skador och återhämtningsprocesser i andra hjärnregioner och transplantationsmetoden är mottaglig för användning med många celltyper.Kranial borrning är utmanande eftersom tekniken kräver manuell fingerfärdighet för att behärska lämpliga tryck, hastighet, djup och mjuka rörelser. Dokumentera alla händelser och praxis i stor utsträckning. För att utföra en ensidig craniectomy, bekräfta en brist på svar på tå nypa i den sövda musen och säkra musen i en stereotaxic ram.Applicera antibiotikum oftalmisk salva på ögonen med en steril bomullspinne och jodbaserad lösning på det rakade hårbottenområdet. Ta bort jod med 70%etanol och täck djuret med en fenestrated kirurgisk drapera. Gör en 1,5 till två centimeter mittlinjen snitt i hårbotten och använda steril bomullspinner för att rengöra såret och för att rensa fascia vänster om mittlinjen vid bregma.Använd en slagmaskin sond för att identifiera kraniectomy webbplats och ställa in x är lika med noll, y är lika med noll stereotaxic referenspunkt till bregma. Justera sonden i ett laterellt till två millimeter kvar av mittlinjen. Använd en finspets kirurgiskt säker markör till landmärke en fem millimeter diameter cirkel runt presumtiva islagsområdet.Höj och rotera slagmaskinen ur position och slutför fem millimeters cirkel. Kort sätt tillbaka slagmaskinen i position för att verifiera riktigheten av fem millimetercirkeln. Höj sedan och rotera slagbilen ur läge och använd ett höghastighets roterande micro motor kit handverktyg utrustad med en rund spets 0,6 eller 0,8 millimeters burr borrkrona för att göra ett öppet hål i skallen vid 70 till 80%maximal hastighet.Applicera lätt tryck på skallen medan du borrar längs fem millimeters omkretskonsposition inom denna gräns och använd forceps för att lyfta den resulterande benklaffen. Borrning genom suturledningar kan innebära ytterligare svårigheter eftersom benet avbryts och kräver ytterligare tryck. Blodkärl kan vara i nära samband och därför blödning händelser är sannolikt.För att inducera en mild kontrollerad kortikal påverkansskada, rengör slagmaskinssonden med en steril alkohol prep pad och flytta slagmaskinssonden tillbaka på plats över den exponerade cortex. Sänk sonden tills den vidrör dura materytan och markera denna position som z lika med noll. Dra tillbaka kolven och flytta till z är lika med minus en millimeter och urladdning kolven för att påverka cortex.Omedelbart höja kolven och flytta armen ur position och bevattna cortex med en generös volym av saltlösning och använda enkla avbrutna stygn och 5-0 siden sutur för att stänga hårbotten snitt. Sedan leverera 10 milligram per kilo Cyclosporine A genom subkutan injektion i scruff och placera musen i en ren förvuppvade postoperativ bur med övervakning tills full återhämtning. Ungefär 24 timmar efter craniectomy, placera musen tillbaka i stereotaxic ram.Täck musen med den fenestrated kirurgiska drapera. Lavage snittet plats med steril koksaltlösning för att rengöra platsen och att lossa suturer. Använd en 70%etanolindränkt bomullspinne för att försiktigt sterilisera snittstället och använd fin pincett och oftalmisk sax för att ta bort suturerna.Sedan bevattna kirurgi och craniectomy webbplats med riklig steril saltlösning. I en cellkultur biosäkerhet huva, försiktigt snurra eller peka på röret av celler för att säkerställa en homogen cell suspension. Använd en mikropipette för att lasta in cirka 7,5 mikroliter celler i en Hamilton-spruta genom kolvänden.Håll sprutan i 120 graders vinkel med kolvänden vänd nedåt, sätt in kolven var noga med att inte införa en luftbubbla mellan fjädring och kolvspets. Fäst packningsenheten på pipettnålen och sätt fast nålen på sprutan. Tryck på kolven för att flytta cellupphängningen i pipettens nål och fäst sprutan på stereotaxisk sprutapump.För fram kolven för att se till att sprutpumpens montering fungerar som den ska och för in nålen i koordinaterna för injektion. Rikta nålspetsen till bregma och ställ in x- och y-koordinaterna på noll. Flytta nålspetsen över kraniektomi till två millimeter lateral och minus en millimeter bakre till bregma och röra nålspetsen till dura mater ytan.Höj nålen något sedan göra ett litet snitt i dura mater på den plats där nålen fått kontakt. Ställ in stereotaxisk koordinaten till z är lika med noll och tryck kolven för att bekräfta att cellupphängningen flyter tillräckligt innan nålen införs i hjärnan. Introducera nålen i hjärnan till ett djup av z motsvarar minus 1,4 millimeter för att placera transplantatet vid den grå substansen / vit materia gränsen för den djupa cortex.Starta sprutpumpen för att ingjuta cellupphängningen under en 15-minutersperiod. Använd ett långt arbetsavståndmikroskop för att övervaka cellupphängningsutflöde som bevattnar operationsstället med steril koksaltlösning under injektionen för att bibehålla vävnadshydratiseringen. När alla celler har levererats, dra långsamt tillbaka transplantationsnålen och bevattna operationsplatsen med ytterligare saltlösning innan snittet stängs med nya suturer.Leverera sedan postoperativ vård som visas. För ett självhäftande test bandborttagning, använd först en liten rakkniv för att skära gula och röda bitar av eltejp i tre och fem millimeter remsor på en slät glasyta. Ta med mössen i beteendetestrummet i minst 30 minuter före testningen och använd en hanteringsduk för att hålla fast musen genom att dra fast halsen och ryggen så att musen håller framtärarna borta från sin kropp och sitt huvud.Använd pincett för att placera en självhäftande remsa på plantar ytan av varje förpsemsor och använda känsliga och konsekventa fingertryck för att säkra remsorna till tassarna. Placera snabbt musen i en plastcylinder och starta två stoppur när musen har alla fyra tassarna på plasttestboxen. Använd sedan de två stoppuren för att spela in latenserna för vänster tass varsel, vänster tass borttagning, höger tass meddelande och höger tass borttagning.I detta pilotexperiment jämfördes forelimb-funktionen enbart i craniectomy, kontrollerad när påverkansskada och naiva möss. Möss som genomgick kirurgi uppvisade transienta ökade latenser att märka självhäftande stimuli för en till tre dagar omedelbart efter operationen och transienta postoperativa underskott i självhäftande borttagning från ipsilateral forepaw. Möss som genomgick kontrollerad kortikal påverkan uppvisade dock betydande underskott i motoriska prestanda i framutförande kontralateral mot skadan jämfört med naiva möss av postoperativa dag 28.Immunfärgning av mushjärna sektioner för mänskliga nukleära antigen avslöjar att mänskliga celltransplantat tydligt kan skiljas från värdvävnader i SHAM skada och kontrollerade när påverkan hjärnor. Du måste iaktta standardsäkerhetsrutiner för laboratoriet vid hantering av odlade mänskliga celler och vid hantering av sprutnålar som kommer i kontakt med gnagare eller immunsuppressiva läkemedel. Hjärnvävnad sektioner kan analyseras för uttryck av neuroinflammatory markörer som det är värdefullt att veta hur transplantatet påverkar värdvävnaden skada svar och vice versa.Vi blev förvånade över att hitta subtila könsskillnader i efter skada beteende resultat. Vi undersöker nu om sex spelar en roll i neuroimmune svar på hjärnskada. Stadiga händer, tålamod, och praxis är avgörande för att utveckla en bra craniectomy teknik.Indirekta skador från en felaktig craniectomy kan äventyra det område som du vill rikta för celltransplantation.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Culturing Human Pluripotent and Neural Stem Cells in an Enclosed Cell Culture System for Basic and Preclinical Research

Odling av humana pluripotenta och neurala stamceller i en sluten cellodlingssystem för Basic och preklinisk forskning

This paper describes how to use a custom manufactured, commercially available enclosed cell culture system for basic and preclinical research. Biosafety ...

Rapid Neuronal Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells for Measuring Network Activity on Micro-electrode Arrays

Snabb neuronal differentiering av inducerade pluripotenta stamceller för att mäta nätverksaktivitet på Micro-elektrod arrayer

Neurons derived from human induced Pluripotent Stem Cells (hiPSCs) provide a promising new tool for studying neurological disorders. In the past decade, ...

Pluripotent Stem Cell Derived Cardiac Cells for Myocardial Repair

Pluripotenta stamceller Derived hjärtceller för Myocardial Repair

Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) must be fully differentiated into specific cell types before administration, but conventional protocols for ...

Differentiating Chondrocytes from Peripheral Blood-derived Human Induced Pluripotent Stem Cells

Differentierande kondrocyter från perifert blod härledda humana inducerade plöripotenta stamceller

In this study, we used peripheral blood cells (PBCs) as seed cells to produce chondrocytes via induced pluripotent stem cells (iPSCs) in an ...

Generation of Standardized and Reproducible Forebrain-type Cerebral Organoids from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Generation av standardiserade och reproducerbara framhjärnan-typ Cerebral Organoids från mänskliga inducerade pluripotenta stamceller

The human cortex is highly expanded and exhibits a complex structure with specific functional areas, providing higher brain function, such as cognition. ...

Using Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Hepatocyte-like Cells for Drug Discovery

Använder mänskliga inducerade pluripotenta stamceller-derived Hepatocyte-liknande celler för läkemedelsutveckling

The ability to differentiate human induced pluripotent stem cells (iPSCs) into hepatocyte-like cells (HLCs) provides new opportunities to study inborn ...

A Familial Hypercholesterolemia Human Liver Chimeric Mouse Model Using Induced Pluripotent Stem Cell-derived Hepatocytes

En familjär hyperkolesterolemi mänskliga levern chimär musmodell med inducerade pluripotenta stamceller-derived hepatocyter

Familial hypercholesterolemia (FH) is mostly caused by low-density lipoprotein receptor (LDLR) mutations and results in an increased risk of early-onset ...

Microfluidic Assay for the Assessment of Leukocyte Adhesion to Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Endothelial Cells (hiPSC-ECs)

Microfluidic Assay for the Assessment of Leukocyte Adhesion to Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Endothelial Cells hiPSC-ECs

Mikroflödessystem test för bedömning av leukocyt vidhäftning till mänskliga inducerade pluripotenta stamceller-derived endotelceller (hiPSC-ECs)

Endothelial cells (ECs) are essential for the regulation of inflammatory responses by either limiting or facilitating leukocyte recruitment into affected ...

Generation of 3D Skin Organoid from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Generation av 3D hud Organoid från sladd blod-derived inducerade pluripotenta stamceller

The skin is the body&#8217;s largest organ and has many functions. The skin acts as a physical barrier and protector of the body and regulates bodily ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

I Vitro Generation av Somite derivat från mänskliga inducerade stamceller pluripotenta

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...