Name: a precise pathogen delivery and recovery system for murine models of secondary bacterial pneumonia
Uploaded: 2019-09-21T13:00:00
Duration: 13 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Precise Pathogen Delivery and Recovery System for Murine Models of Secondary Bacterial Pneumonia at JoVE.com

Авторы хотели бы поблагодарить Николь Мейсснер, доктор медицинских наук / Ph.D., Университет штата Монтана, за ее помощь в создании метода внутрипеченого зависания. Эта работа была поддержана Национальными институтами здравоохранения США (Гранты NIH-1R56AI135039-01A1, GM110732, R21AI128295, U54GM1115371), а также средства от Монтана университетской системы исследовательской инициативы (51040-MUSRI2015-03 университета) Сельскохозяйственная экспериментальная станция.

<ol>
	<li>Xu, J., Murphy, S. L., Kochanek, K. D., Bastian, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=National+Vital+Statistics+Reports+Deaths:+Final+Data+for+2013.">National Vital Statistics Reports Deaths: Final Data for 2013.</a> National Center for Health Statistics. 64 (2), 1 (2013).</li><li>Morris, D. E., Cleary, D. W., Clarke, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secondary+Bacterial+Infections+Associated+with+Influenza+Pandemics.">Secondary Bacterial Infections Associated with Influenza Pandemics.</a> Frontiers in Microbiology. 8, 1041 (2017).</li><li>Lee, M., Arrecubieta, C., Martin, F. J., Prince, A., Borczuk, A. C., Lowy, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Postinfluenza+Model+of+Staphylococcus+aureus+Pneumonia.">A Postinfluenza Model of Staphylococcus aureus Pneumonia.</a> The Journal of Infectious Diseases. 201 (4), 508-515 (2010).</li><li>Shepardson, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+Type+I+Interferon+Signaling+Is+a+Master+Regulator+of+Susceptibility+to+Postinfluenza+Bacterial+Superinfection.">Differential Type I Interferon Signaling Is a Master Regulator of Susceptibility to Postinfluenza Bacterial Superinfection.</a> mBio. , (2016).</li><li>Miller, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+Murine+Intranasal+Dosing+Efficiency+Using+Luminescent+Francisella+tularensis:+Effect+of+Instillation+Volume+and+Form+of+Anesthesia.">Visualization of Murine Intranasal Dosing Efficiency Using Luminescent Francisella tularensis: Effect of Instillation Volume and Form of Anesthesia.</a> PLOS ONE. 7 (2), 31359 (2012).</li><li>Robinson, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influenza+a+virus+exacerbates+staphylococcus+aureus+pneumonia+in+mice+by+attenuating+antimicrobial+peptide+production.">Influenza a virus exacerbates staphylococcus aureus pneumonia in mice by attenuating antimicrobial peptide production.</a> Journal of Infectious Diseases. 209 (6), 865-875 (2014).</li><li>Reddinger, R. M., Luke-Marshall, N. R., Hakansson, A. P., Campagnari, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+physiologic+changes+induced+by+influenza+a+virus+lead+to+Staphylococcus+aureus+biofilm+dispersion+and+transition+from+asymptomatic+colonization+to+invasive+disease.">Host physiologic changes induced by influenza a virus lead to Staphylococcus aureus biofilm dispersion and transition from asymptomatic colonization to invasive disease.</a> mBio. 7 (4), (2016).</li><li>Borgogna, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secondary+Bacterial+Pneumonia+by+Staphylococcus+aureus+Following+Influenza+A+Infection+Is+SaeR/S+Dependent.">Secondary Bacterial Pneumonia by Staphylococcus aureus Following Influenza A Infection Is SaeR/S Dependent.</a> The Journal of Infectious Diseases. 218 (5), 809-813 (2018).</li><li>Shahangian, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type+I+IFNs+mediate+development+of+postinfluenza+bacterial+pneumonia+in+mice.">Type I IFNs mediate development of postinfluenza bacterial pneumonia in mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 119 (7), 1910-1920 (2009).</li><li>McAuley, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+the+1918+Influenza+A+Virus+PB1-F2+Enhances+the+Pathogenesis+of+Viral+and+Secondary+Bacterial+Pneumonia.">Expression of the 1918 Influenza A Virus PB1-F2 Enhances the Pathogenesis of Viral and Secondary Bacterial Pneumonia.</a> Cell Host and Microbe. 2 (4), 240-249 (2007).</li><li>Hamacher, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopic+wire+guide-based+orotracheal+mouse+intubation:+Description,+evaluation+and+comparison+with+transillumination.">Microscopic wire guide-based orotracheal mouse intubation: Description, evaluation and comparison with transillumination.</a> Laboratory Animals. 42 (2), 222-230 (2008).</li><li>Lawrenz, M. B., Fodah, R. A., Gutierrez, M. G., Warawa, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intubation-mediated+Intratracheal+(IMIT)+Instillation:+A+Noninvasive,+Lung-specific+Delivery+System.">Intubation-mediated Intratracheal (IMIT) Instillation: A Noninvasive, Lung-specific Delivery System.</a> Journal of Visualized Experiments. (93), e52261 (2014).</li><li>Cai, Y., Kimura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+Intratracheal+Intubation+to+Study+the+Pathology+and+Physiology+of+Mouse+Lung.">Noninvasive Intratracheal Intubation to Study the Pathology and Physiology of Mouse Lung.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50601 (2013).</li><li>Voyich, J. M., Sturdevant, D. E., DeLeo, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+Staphylococcus+aureus+gene+expression+during+PMN+phagocytosis.">Analysis of Staphylococcus aureus gene expression during PMN phagocytosis.</a> Methods in molecular biology. 431, 109-122 (2008).</li><li>Dyer, K., Rosenberg, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+RNase+a+superfamily:+Generation+of+diversity+and+innate+host+defense.">The RNase a superfamily: Generation of diversity and innate host defense.</a> Molecular Diversity. 10 (4), 585-597 (2006).</li><li>Van Hoecke, L., Job, E. R., Saelens, X., Roose, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bronchoalveolar+Lavage+of+Murine+Lungs+to+Analyze+Inflammatory+Cell+Infiltration.">Bronchoalveolar Lavage of Murine Lungs to Analyze Inflammatory Cell Infiltration.</a> Journal of Visualized Experiments. (123), e55398 (2017).</li></ol>

Авторам нечего раскрывать.

Использование этой модели обеспечивает высокоэффективный и воспроизводимый метод для изучения вторичных бактериальных инфекций. Способность жестко контролировать доставку патогена инокулум позволяет более точно наблюдать индивидуальные и комбинаторные эффекты каждого патогена. Неэффективность в более распространенном маршруте интраназального зависания, вероятно, способствовала расхождениям в объемах доз и концентрациях, присутствующих в литературе. Разумно, что отсутствие точной системы мурина для изучения вторичной бактериальной пневмонии задержало выводы выявления бактериальных специфических реакций, которые способствуют тяжести легочных коинфекций. Разработка воспроизводимой модели для изучения экспрессии вирулентности во время вторичных бактериальных инфекций может привести к выявлению вакцин или лекарств для улучшения этих инфекций.
Шаг внутрижелудочного зависания имеет решающее значение для успешного установления инфекции нижних дыхательных путей и любого анализа патогенных микроорганизмов. При изучении этого метода, это может быть полезно на практике с использованием красителя (как описано в методах) до введения инфекционного материала. Использование красителя позволяет напрямую визуализировать инокулум в дыхательные пути. Распространенной ошибкой, которая может произойти, является вставка тупой иглы в пищевод, а не трахеи. Это приведет к доставке инокулума в желудок, а не в легкие. Чтобы исправить эту ошибку, угол иглы дальше от тела и передать его вниз в трахею. После освоения эта процедура очень эффективна и может быть использована для проведения экспериментов с большим количеством мышей. Работая партиями для обезболивания мышей, внутрипеченевая закачка может быть завершена примерно за 30 секунд на мышь. Кроме того, иссечение легких может быть завершено в 2 до 3 минут на мышь.
Восстановление жизнеспособной и чистобактериальной РНК из инфицированных тканей имеет решающее значение для анализа стенограммы. RNases являются вездесущими и может быстро разрушить эксперимент15. Некоторые методы включают использование ингибиторов RNase; тем не менее, мы обнаружили, что замораживание образца при -80 градусов по Цельсию в RLT-й-меркаптоэтанол или немедленно обработка образца для изоляции РНК с использованием всех RNase свободных труб и реагентов являются эффективными в снижении загрязнения RNase. Кроме того, мы рекомендуем очистить не более шести образцов одновременно. Включение более шести образцов может привести к длительным просркантам между этапами протокола, которые могут привести к деградации РНК. После очищения следует также принимать меры по уходу, чтобы избежать ненужных циклов замораживания-оттепели. Таким образом, если на одном образце будет проведено несколько анализов, рекомендуется процитировать очищенную РНК для хранения при -80 градусов по Цельсию.
В дополнение к методам, рассмотренным в настоящем случае, этот метод может быть дополнен выполнением бронхиальной альвеолярной лавации до иссечения и гомогенации легких16. Это может быть достигнуто путем промывки всего нижних дыхательных путей или с помощью шовной нити, чтобы ограничить одну ветвяющуюся руку бронхиального дерева, за которой следует промывание через оставшуюся ветвь. Часто это приводит к снижению в восстановлении патогенной нагрузки, но предоставляет образец, после чего информация, такая как активность лактата дигидрогеназы, клеточная популяция, и цитокин профили могут быть получены16. Вместе эти данные могут сформировать более полное понимание взаимодействия хозяина-патогена, происходящих во время вторичной бактериальной пневмонии.
Хотя обсуждаемые методы были в контексте вторичной бактериальной пневмонии, они подходят для того, чтобы распространить их на любую модель мурин инфекции нижних дыхательных путей; в частности, те, которые выиграют от жестко госконтроля доставки и восстановления установленного инокулума. Кроме того, как и многие другие маршруты инфекции, внутрипеченевого зависания могут быть использованы в неинфекционных приложений, таких как введение терапевтических и экологических соединений12.

Вторичная бактериальная пневмония после инфекции гриппа является основной причиной смерти в Соединенных Штатах и активной областью исследований1,2. Несмотря на многочисленные исследования с использованием моринмоделе вторичных бактериальных пневмоний, несоответствия в отношении зависания патогенов и допроса остаются3,4,5. Кроме того, в то время как многие предыдущие усилия были сосредоточены на иммуномодуляторных эффектов гриппа, которые приводят к повышенной восприимчивой к вторичной бактериальной инфекции, более поздние данные показывают, что регулирование вирулентности бактериального патогена является равным вклад в установление заболевания6,7,8,9. Эти новые данные требуют более точного метода для изучения вторичной бактериальной пневмонии в моделях мочеиспускания, которые облегчают изучение реакции патогена.
Уникальные для моделей коинфекции гриппа, организмы-хозяина намеренно ослаблены иммунитетом в результате первичной инфекции гриппа до введения вторичного бактериального агента. Для того, чтобы наилучшим образом воспроизвести болезни патогенеза наблюдается в человеческих хозяев, крайне важно, чтобы патогенная нагрузка как первичных, так и вторичных агентов контролироваться, с тем чтобы наблюдать индивидуальные и комбинаторные эффекты каждого инфекционного агента. Чаще всего, респираторные инфекции у мышей были установлены через интраназальное введение3,4,5,6,10. Поскольку этот маршрут известен как технически простой и может быть уместным в некоторых однополых инфекций приложений, это не подходит для совместной инфекции моделей, как процедуры зависания, объемы дозы, и эффективность весьма изменчивы в пределах опубликованная литература3,4,5,6.
Чтобы получить более полное понимание вторичного бактериального патогенеза пневмонии, вклад как хозяина и патогена должны быть рассмотрены. С этой целью мы разработали простой и воспроизводимый подход к восстановлению жизнеспособных бактерий и патогенной РНК из инфицированных легких. Этот метод использует упрощенную, неинвазивную процедуру интрахиальной застойной инфекции с последующей изоляцией бактериальной РНК. Описанная в настоящем году процедура внутричехальной завистывания похожа на описанные ранее методы и не ограничивается патогенной доставкой11,12,13. Использование этой конкретной процедуры выгодно для того, чтобы быть недорогим и не требует использования специализированного оборудования, такого как канюли, провода направляющих или волоконно-оптических кабелей; кроме того, поскольку эта процедура является неинвазивной она обеспечивает минимальную нагрузку на мурин субъектов, сводит к минимуму воспалительные реакции от прививочной механики, и обеспечивает эффективный маршрут доставки для заражения нескольких субъектов. Вкратце, изофлюраны анестезируемые мыши подвешены к резям. Силы используются, чтобы мягко хватать язык, а затем вставки предварительно загружены согнуты, тупой наконечником, 21-калибровочных иглы в трахею и доставки патогенной нагрузки. Проверка этой процедуры подтверждается визуальным подтверждением равномерного распределения красителя в легочной отсеке и восстановления бактериальной нагрузки. Затем мы демонстрируем, как восстановить жизнеспособный золотистый стафилококк (S. aureus) из инфицированных легких и описать воспроизводимый метод изоляции высококачественной патогенной РНК.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Lysing Matrix B</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>6911100</td>
			<td>Referred to in text as &#34;0.1 mm silica beads&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>21-gauge blunt needle</td>
			<td>SAI</td>
			<td>B21-150</td>
			<td>1.5&#34; is recommended.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNase-Free DNase Set</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79254</td>
			<td>DNase used in the accompanying text.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FastPrep-24 Classic Instrument</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>116004500</td>
			<td>FastPrep FP120 is no longer available. Referred to in text as &#34;Bead Beater&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan AIV-Matrix Reagents</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>4405543</td>
			<td>Influenza A M-segment qRT-PCR kit.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intubation Stand</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>ETI-MES-01</td>
			<td>Referred to in text as &#34;intubation platform.&#34; Intubation platform used in the accompanying video was made in house.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy Mini Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74106</td>
			<td>RNA purification kit; contains RNeasy columns, Buffer RLT, Buffer RW1, and Buffer RPE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAamp Viral RNA Mini Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>52904</td>
			<td>Viral RNA purification kit.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Grinders</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>02-542-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol (&#946;-Mercaptoethanol)</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>UN2966</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a precise pathogen delivery and recovery system for murine models of secondary bacterial pneumonia

Вторичные бактериальные пневмонии после инфекций гриппа последовательно ранга в десятку ведущих причин смерти в Соединенных Штатах. На сегодняшний день моринмодели коинфекции были основным инструментом, разработанным для изучения патологий как первичных, так и вторичных инфекций. Несмотря на распространенность этой модели, значительные расхождения в отношении процедур зависания, объемов доз и эффективности преобладают среди исследований. Кроме того, эти усилия были в значительной степени неполными в решении вопроса о том, каким образом возбудитель может непосредственно влиять на прогрессирование заболевания после инфицирования. В этом мы предоставляем точный метод доставки патогена, восстановления и анализа, который будет использоваться в моделях мурин вторичной бактериальной пневмонии. Мы демонстрируем, что внутрипеченевая загонация обеспечивает эффективную и точную доставку контролируемых объемов непосредственно и равномерно в нижние дыхательные пути. Легкие могут быть вырезаны для восстановления и количественной оценки бремени патогенов. После иссечения инфицированных легких, мы описываем метод извлечения высококачественной патогенной РНК для последующего транскрипционного анализа. Эта процедура выигрывает от того, чтобы быть нехирургическим методом доставки без использования специализированного лабораторного оборудования и обеспечивает воспроизводимую стратегию для исследования патогенных вкладов во вторичную бактериальную пневмонию.

Рисунок 1 использует 0,1% вес / объем Coomassie блестящий синий раствор, чтобы продемонстрировать, что внутрипеченевая загонание обеспечивает инокулум непосредственно и равномерно в нижней части дыхательных путей. На рисунке 2 показано, что бактерии(S. aureus) CFUs, извлеченные непосредственно из гомогенизированной легочной ткани. Рисунок 3 демонстрирует использование этой системы для точной доставки и восстановления инокулума в нижних дыхательных путях путем построения входных и восстановительных CFUs от отдельных мышей. На рисунке 4 показана кривая усиления qRT-PCR бактериального гена домашнего хозяйства gyrB, чтобы продемонстрировать, что бактериальная РНК может быть извлечена непосредственно из инфицированной ткани легких с минимальным загрязнением ДНК. На рисунке 5 показано построение стандартной кривой с использованием qRT-PCR усиления вируса Гриппа М-сегмента для демонстрации вирусной РНК может быть извлечена непосредственно из инфицированной ткани легких.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59566/59566fig01.jpg"> Рисунок 1: Интрахельное засываение позволяет равномерно распределить в нижних дыхательных путях. (A, B) Неинфицированные легкие были вырезаны из здоровой мыши после внутрипечевого зависания стерильных PBS и сфотографированы с (A) дорсальные и (B) вентральные перспективы. (C, D) 50 зЛ из 0,1% Coomassie блестящий синий раствор вводили под анестезирующую мышь через внутрипатчевую администрацию. (C) Дорсал. (D) Вентрал. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59566/59566fig01large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59566/59566fig02.jpg"> Рисунок 2: Представитель восстановления бактериальных CFUs от инфицированных гоменат легких. Легкие были вырезаны в один прекрасный день после вызова с S. aureus. После гомогенации, 100 л л. ллэйса был последовательно разбавлен через 10-6. Чтобы перечислить CFUs восстановлены, 10 капель Л были покрыты от 10-5 и 10-6 разбавления на триптическое соевый агар (TSA) и инкубировали при температуре 37 градусов с 5% C02 ночь. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59566/59566fig02large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59566/59566fig03.jpg"> Рисунок 3: Точные поставки и восстановление патогена инокулум после внутришейного введения. Мыши были разделены на две группы, содержащие три мышей в группе. Мыши подвергались внутричечному заготворению S. aureus в 1 х 108 (низкий) и 2 х 108 (высокий) CFU/mL. Один час после инфекции, мышей усыпили и легкие были вырезаны, чтобы продемонстрировать точность зависания и восстановления. Бактериальный инокулум и бактерии, извлеченные из гомената легких, были покрыты TSA (триптическим соевым агаром). Не было зарегистрировано каких-либо существенных различий между бактериальным и восстановительным ввоза. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59566/59566fig03large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59566/59566fig04.jpg"> Рисунок 4: Репрезентативное восстановление и чистота бактериальной РНК. Шесть часов после внутрихехиального зависания с 1 х 10 CFU/50 ЗЛ S. aureus, мышей были усыплены. Легкие были вырезаны и гомогенизированы с последующим повторной блокировкой легочной суспензии в буфере RLT-'mercaptoethanol. РНК была очищена, как описано в шаге 3.914. qRT-PCR был использован для обнаружения стенограмм бактериального гена домашнего хозяйства gyrB. Контроль, содержащий реверсную транскриптазу (nRT), был включен, чтобы продемонстрировать чистоту восстановленной РНК. При пороге 0,1 транскрипты gyrB были обнаружены при среднем цикле 21,1, 20,3 и 20,5. Элементы управления nRT не были обнаружены до тех пор, пока цикл не составил в среднем 35,9, 35,5 и 35,0. n 3 биологические репликации, содержащие 3 технических репликации/биологические реплицы. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59566/59566fig04large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59566/59566fig05.jpg"> Рисунок 5: Представитель вирусного восстановления РНК. Через шесть дней после внутрипечевого зависания с 100 PFU/50 ЗЛ гриппа A/PR/8/1934 (H1N1), мышей усыпили. Легкие были вырезаны и однородны, и 200 л гомогенизированной суспензии был собран и прошел через 70 мкм клеточной ситечко до вирусной очистки РНК. Очищенная РНК была последовательно разбавлена (10-1-10-4),затем усиление гриппа М-сегмента. (A) Усиление участка гриппа РНК оправился от инфицированного легких и разбавленной 10-1-10-4. (B) Стандартная кривая гриппа М-сегмента. Порог 0,2, R2 и 0,994, склон -3,46. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59566/59566fig05large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>

Watch this Scientific Journal Video about A Precise Pathogen Delivery and Recovery System for Murine Models of Secondary Bacterial Pneumonia at JoVE.com

A Precise Pathogen Delivery and Recovery System for Murine Models of Secondary Bacterial Pneumonia

Здесь мы представляем методы для улучшения вторичных исследований бактериальной пневмонии путем предоставления неинвазивного маршрута зависания в нижних дыхательных путей с последующим восстановлением патогена и анализом стенограммы. Эти процедуры воспроизводимы и могут быть выполнены без специального оборудования, такого как канюли, провода направляющих или волоконно-оптических кабелей.

Точная система доставки патогенов и восстановления для мориновых моделей вторичной бактериальной пневмонии

Secondary bacterial pneumonias following influenza infections consistently rank within the top ten leading causes of death in the United States. To date, ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Development of a Negative Selectable Marker for Entamoeba histolytica

Development of a Negative Selectable Marker for Entamoeba histolytica

Развитие Отрицательные Маркер для выбора Entamoeba histolytica</em

Entamoeba histolytica is the causative agent of amebiasis and infects up to 10% of the world's population. The molecular techniques that have enabled the ...

Invasion of Human Cells by a Bacterial Pathogen

Вторжение клеток человека от бактериальных патогенов

Here we will describe how we study the invasion of human endothelial cells by bacterial pathogen Staphylococcus aureus . The general protocol can be ...

One-day Workflow Scheme for Bacterial Pathogen Detection and Antimicrobial Resistance Testing from Blood Cultures

Однодневный рабочий процесс Схема бактериальных патогенов обнаружения и антимикробной сопротивления из крови культур

Bloodstream infections are associated with high mortality rates because of the probable manifestation of sepsis, severe sepsis and septic shock1. ...

Use of the EpiAirway Model for Characterizing Long-term Host-pathogen Interactions

Использование EpiAirway модель Характеризуя Долгосрочные хост-возбудителя Взаимодействия

Nontypeable Haemophilus influenzae  (NTHi) are human-adapted Gram-negative bacteria that can cause recurrent and chronic infections of the respiratory ...

Reverse Genetics Mediated Recovery of Infectious Murine Norovirus

Обратной генетики опосредованного восстановления инфекционных мышей норовирус

Human noroviruses are responsible for most cases of human gastroenteritis (GE) worldwide and are recurrent problem in environments where close ...

Measurement of Tactile Allodynia in a Murine Model of Bacterial Prostatitis

Измерение Тактильная аллодиния в мышиной модели бактериальный простатит

Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are pathogens that play an important role in urinary tract infections and bacterial prostatitis1. We have recently ...

Automated Separation of C. elegans Variably Colonized by a Bacterial Pathogen

Automated Separation of C. elegans Variably Colonized by a Bacterial Pathogen

Автоматизированная Разделение<em&gt; С. Элеганс</em&gt; Переменно колонизирована бактериальным патогеном

The wormsorter is an instrument analogous to a FACS machine that is used in studies of Caenorhabditis elegans, typically to sort worms based on expression ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

Мышь Модель для патогенных микроорганизмов, вызванной хроническим воспалением на локальном и системном сайтов

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Implementation of a Permeable Membrane Insert-based Infection System to Study the Effects of Secreted Bacterial Toxins on Mammalian Host Cells

Внедрение системы инфекционного проницаемой мембраны Вставка на основе для изучения влияния секретируемых бактериальными токсинами на млекопитающих клеток-хозяев

Many bacterial pathogens secrete potent toxins to aid in the destruction of host tissue, to initiate signaling changes in host cells or to manipulate ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

Неинвазивным и технически неинтенсивное метод индукции и Фенотипирование экспериментальной бактериальной пневмонии у мышей

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...