Name: isolation and purification of murine cardiac pericytes
Uploaded: 2019-08-16T12:30:00
Duration: 10 min 49 s
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लेखकों fluorophore पैनल डिजाइन, समस्या निवारण, और सेल छँटाई के साथ उनकी मदद के लिए Amgen प्रवाह Cytometry कोर शुक्रिया अदा करना चाहते हैं.

<ol>
	<li>Armulik, A., Abramsson, A., Betsholtz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial/pericyte+interactions.">Endothelial/pericyte interactions.</a> Circulation Research. 97 (6), 512-523 (2005).</li><li>Armulik, A., Genove, G., Betsholtz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericytes:+developmental,+physiological,+and+pathological+perspectives,+problems,+and+promises.">Pericytes: developmental, physiological, and pathological perspectives, problems, and promises.</a> Developmental Cell. 21 (2), 193-215 (2011).</li><li>Sengillo, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficiency+in+mural+vascular+cells+coincides+with+blood-brain+barrier+disruption+in+Alzheimer's+disease.">Deficiency in mural vascular cells coincides with blood-brain barrier disruption in Alzheimer's disease.</a> Brain Pathology. 23 (3), 303-310 (2013).</li><li>Avolio, E., Madeddu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovering+cardiac+pericyte+biology:+From+physiopathological+mechanisms+to+potential+therapeutic+applications+in+ischemic+heart+disease.">Discovering cardiac pericyte biology: From physiopathological mechanisms to potential therapeutic applications in ischemic heart disease.</a> Vascular Pharmacology. 86, 53-63 (2016).</li><li>Dore-Duffy, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+cerebral+microvascular+pericytes.">Isolation and characterization of cerebral microvascular pericytes.</a> Methods in Molecular Medicine. 89, 375-382 (2003).</li><li>Bryan, B. A., D'Amore, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericyte+isolation+and+use+in+endothelial/pericyte+coculture+models.">Pericyte isolation and use in endothelial/pericyte coculture models.</a> Methods in Enzymology. 443, 315-331 (2008).</li><li>Maier, C. L., Shepherd, B. R., Yi, T., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Explant+outgrowth,+propagation+and+characterization+of+human+pericytes.">Explant outgrowth, propagation and characterization of human pericytes.</a> Microcirculation. 17 (5), 367-380 (2010).</li><li>Crisan, M., Corselli, M., Chen, W. C., Peault, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+cells+for+regenerative+medicine.">Perivascular cells for regenerative medicine.</a> Journal of Cellular Molecular Medicine. 16 (12), 2851-2860 (2012).</li><li>Crisan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+and+long-term+culture+of+multipotent+progenitor+cells+affiliated+with+the+walls+of+human+blood+vessels:+myoendothelial+cells+and+pericytes.">Purification and long-term culture of multipotent progenitor cells affiliated with the walls of human blood vessels: myoendothelial cells and pericytes.</a> Methods in Cellular Biology. 86, 295-309 (2008).</li><li>Nees, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+bulk+cultivation,+and+characterization+of+coronary+microvascular+pericytes:+the+second+most+frequent+myocardial+cell+type+in+vitro.">Isolation, bulk cultivation, and characterization of coronary microvascular pericytes: the second most frequent myocardial cell type in vitro.</a> American Journal of Physiology Heart Circulatory Physiology. 302 (1), H69-H84 (2012).</li><li>Avolio, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+and+characterization+of+neonatal+cardiac+pericytes+provides+a+novel+cellular+option+for+tissue+engineering+in+congenital+heart+disease.">Expansion and characterization of neonatal cardiac pericytes provides a novel cellular option for tissue engineering in congenital heart disease.</a> Journal of the American Heart Association. 4 (6), e002043 (2015).</li><li>Chen, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+myocardial+pericytes:+multipotent+mesodermal+precursors+exhibiting+cardiac+specificity.">Human myocardial pericytes: multipotent mesodermal precursors exhibiting cardiac specificity.</a> Stem Cells. 33 (2), 557-573 (2015).</li><li>Baily, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Perivascular+Multipotent+Precursor+Cell+Populations+from+Human+Cardiac+Tissue.">Isolation of Perivascular Multipotent Precursor Cell Populations from Human Cardiac Tissue.</a> Journal of Visualized Experiments. (116), e54252 (2016).</li><li>Murray, I. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+and+cardiac+muscle+pericytes:+Functions+and+therapeutic+potential.">Skeletal and cardiac muscle pericytes: Functions and therapeutic potential.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 171, 65-74 (2017).</li><li>Birbrair, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+pericytes+in+skeletal+muscle+regeneration+and+fat+accumulation.">Role of pericytes in skeletal muscle regeneration and fat accumulation.</a> Stem Cells Development. 22 (16), 2298-2314 (2013).</li><li>Birbrair, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+muscle+pericyte+subtypes+differ+in+their+differentiation+potential.">Skeletal muscle pericyte subtypes differ in their differentiation potential.</a> Stem Cell Research. 10 (1), 67-84 (2013).</li></ol>

लेखकों को खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.

के रूप में हृदय pericytes पर अध्ययन अपेक्षाकृत नए हैं, हृदय शरीर क्रिया विज्ञान और pathophysiology में pericytes की भूमिका अभी तक परिभाषित किया जाना है. अन्य अंगों में, उन्हें पोत गृहस्थी और परफ्यूजन1,2में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हुए दिखाया गया है। मस्तिष्क जैसे अन्य अंगों से pericytes के साहित्य की तुलना में, वहाँ हृदय pericytes पर काफी कम प्रकाशन कर रहे हैं. कार्डियक पेरिसाइट्स का अलगाव उनके कार्यात्मक विशेषताओं और संकेतन तंत्र की समझ के लिए महत्वपूर्ण है। इसलिए, इस प्रोटोकॉल एक और अधिक आसानी से उपलब्ध ऊतक स्रोत से कार्डियक pericytes का उपयोग और उनके जीव विज्ञान पर अध्ययन को बढ़ावा देने के लिए एक आसान तरीका के साथ जांचकर्ताओं प्रदान करेगा. यह कैसे हृदय pericytes हृदय homeostasis और pathophysiology के लिए योगदान के रूप में अच्छी तरह से उनकी चिकित्सीय क्षमता की जांच पर सवालों के जवाब में मदद मिलेगी.
pericyte आबादी murine दिल से अलग और CD31 द्वारा विशेषता-CD34-CD45-CD140b+NG2+CD146+ कई बार पारित किया गया है (P12 तक और अभी भी मजबूत जा रहा था), जो नहीं करता है व्यवहार्यता में कमी और शीघ्रता से प्रचारित हो जाता है (अनुपूरक चित्र 2)। कोशिकाओं को भी cryofrozen किया गया है और कम से कम 95% व्यवहार्यता के साथ बरामद. हालांकि, हम अपने प्रयोगों के लिए कोशिकाओं P7 या छोटे का उपयोग करना पसंद करते हैं. मानव मस्तिष्क pericytes के साथ हमारे pericytes के उज्ज्वल क्षेत्र छवियों की तुलना, दो सेल लाइनों तुलनीय कोशिका आकृति विज्ञान है (चित्र 4A) जबकि वे चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं से आकारिकी में अलग (चित्र 4A) . हमारे P7 कोशिकाओं pericyte मार्करों के लिए इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री द्वारा विशेषता थी, हमारे FACS पैनल से कुछ (NG2 और CD140b), और कुछ पैनल में नहीं (vimentin, desmin, $SMA) और हमने पाया कि कोशिकाओं को समरूप रूप से pericyte मार्करों व्यक्त (चित्र 4B). इसके अतिरिक्त, हमारे P7 कोशिकाओं प्रवाह cytometry द्वारा फिर से एक ही मार्कर पैनल के साथ विश्लेषण किया गया passaging के कारण मार्कर अभिव्यक्ति में परिवर्तन के लिए आकलन करने के लिए और हमने पाया कि वहाँ कोई परिवर्तन नहीं थे (चित्र 4C). इसलिए, दोनों phenoआमरूपी और रूपात्मक रूपात्मक, हमारी कोशिकाओं pericytes हैं.
Nees et al.10, Avolio et al.11, चेन एट अल12, और बेली एट अल13 द्वारा किए गए अध्ययनों से सफल कार्डियक पेरिसाइट अलगाव दिखाया गया है. हालांकि, एक घर में कस्टम निर्मित उपकरणों का उपयोग Nees एट अल द्वारा microicys से pericytes अलग करने के लिए10 पंप है कि perfused प्रोटीज़ समाधान के साथ आगे और पीछे एक जाल शुद्ध ढेर के माध्यम से दो कक्षों शामिल है, जो के रूप में वे दोहराने के लिए मुश्किल था उपकरण की एक योजनाबद्ध और/या तस्वीर प्रदान नहीं की और यह कैसे बनाया गया था. हालांकि Nees एट अल10 सफलतापूर्वक कई प्रजातियों से हृदय pericytes अलग, हम उनकी विधि को पुन: पेश करने में सक्षम नहीं थे. हमारे प्रोटोकॉल में हमारे pericyte टुकड़ी कदम बस एक कक्षीय शेकर का उपयोग करता है (सभी कोशिकाओं को अलग करने के लिए) जो सबसे में उपलब्ध है, नहीं तो सभी प्रयोगशालाओं, एक शंकु ट्यूब में ऊतक और एंजाइम समाधान के साथ एक यांत्रिक वियोजन कदम के बाद. कोई कस्टम उपकरण की आवश्यकता है। दूसरे, शेष प्रोटोकॉल मानव ऊतकों का उपयोग शामिल है और इस प्रकार मानव ऊतक की खरीद जांचकर्ताओं के लिए सीमित है. हमारे प्रोटोकॉल एक संशोधन और वर्तमान प्रोटोकॉल के अनुकूलन9,12 माउस मॉडल का उपयोग कर (जंगली प्रकार, आनुवंशिक रूप से संशोधित, रोगग्रस्त) और सामग्री है कि सभी जांचकर्ताओं के लिए आसानी से उपलब्ध हैं.
क्योंकि सामान्य में perivascular कोशिकाओं संवेदनशील हैं, कोशिकाओं की व्यवहार्यता एक अच्छी उपज प्राप्त करने के लिए महत्वपूर्ण है. हृदय ऊतक की खरीद और कोशिकाओं के दाग के दौरान, ऊतक/कोशिकाओं को बर्फ ठंडा रखने की आवश्यकता होती है। दूसरे, ऊतक के एंजाइमी पाचन एक व्यक्ति के आधार पर अनुकूलन की आवश्यकता हो सकती है. एंजाइमों की एक शीशियों पर गतिविधि की इकाइयों पर निर्भर करता है, एकाग्रता और पाचन समय अनुकूलित करने की आवश्यकता हो सकती है. सुनिश्चित करें कि एंजाइमी समाधान हर बार ताजा तैयार किया जाता है अन्यथा उपज कम हो जाएगी। तीसरे, कच्चे तेल के मिश्रण कोशिकाओं का एक बहुत कुछ होता है, कुछ मर चुका है और / या मर रहा है, यह सबसे अच्छा है 5% से 2% तक धुंधला बफर में FBS की एकाग्रता को कम करने के लिए. यदि आप सॉर्ट के दौरान नोजल clogging कोशिकाओं के साथ परेशानी हो रही है, एक मृत सेल हटाने किट का उपयोग करके पहले कोशिकाओं को समृद्ध. आप सेल क्लंपिंग को रोकने के लिए सेल प्री-सॉर्ट में EDTA/HEPES बफ़र या DNase उपचार भी जोड़ सकते हैं। अंत में, क्योंकि एंटीबॉडी के हमारे पैनल बल्कि बड़ी है और कई fluorophores का उपयोग करता है, सुनिश्चित करें कि आपके FMO नियंत्रण और मुआवजा नियंत्रण सही ढंग से किया जाता है.
इस विधि के लिए एक सीमा हृदय pericytes कि प्रति दिल प्राप्त किया जा सकता है की मात्रा है. हमारे मामले में, एक माउस दिल से हमारे कच्चे तेल के मिश्रण का केवल 1.1% pericytes जो मानव दिल अलगाव में प्रतिशत के बराबर है थे, लेकिन कोशिकाओं की संख्या दिल के ऊतकों की मात्रा के कारण काफी कम है एक माउस प्रदान करता है. क्योंकि कोशिकाओं की प्रारंभिक संख्या FACS के बाद बहुत कम है, यह एक बार में कई दिल से अलग करने के लिए बेहतर होगा. हालांकि, उस के साथ समस्या कोशिकाओं की सरासर संख्या है कि आप के माध्यम से एक दिन में सॉर्ट करने की आवश्यकता है. यदि आपके पास 30 मिलियन से अधिक कोशिकाएं हैं, तो कोशिकाओं की व्यवहार्यता को प्रभावित किए बिना इस प्रकार से प्राप्त करना कठिन होगा। यदि अन्वेषक कई सेल sorters था, एक दिन में कई दिलों से अलग करना करने योग्य होगा. एक और सीमा यह है कि क्योंकि हम नहीं जानते कि अगर वहाँ के दिल में pericytes के subpopulations की तरह वहाँ कंकाल की मांसपेशी15,16है, हम नहीं जानते कि अगर हम अपने gating रणनीति में एक उपप्रकार को नष्ट कर रहे हैं. हम अपने हृदय pericytes की विशेषता की प्रक्रिया में हैं और इस तरह अब तक हमारे अप्रकाशित डेटा में, वे कार्यात्मक साहित्य में अन्य pericytes की तरह हैं.
हमारे प्रोटोकॉल जांचकर्ताओं हृदय pericyte गुण, विशेषताओं, कार्यक्षमता, और अन्य पहलुओं है कि हृदय homeostasis और hemodynamics के लिए उनके योगदान को परिभाषित करने में मदद मिलेगी पर सवालों के जवाब देने के लिए सक्षम हो जाएगा. इन कोशिकाओं हृदय रोग के लिए चिकित्सीय क्षमता हो सकता है एक बार उनके जीव विज्ञान बेहतर समझ है.

पेरिवास्कुलर कोशिकाएं जिन्हें पेरिसाइट्स के रूप में जाना जाता है , संवहनी वृक्ष1,2के माइक्रोवेअर्स और केशिकाओं को घेरे हुए हैं . शारीरिक रूप से, वे एंजियोजेनेसिस में एक भूमिका निभाने के लिए जाने जाते हैं, एंडोथेलियल कोशिकाओं के साथ अपने घनिष्ठ संबंध के कारण बाधा अखंडता को बढ़ाते हैं और साथ ही स्थिर और परिपक्व वाहिकाओं1,2। इसके अलावा, इन कोशिकाओं के रोग और/या हानि अल्जाइमर रोग2,3 और विभिन्न हृदय रोगों4जैसे रोगों में फंसाया गया है . इन कोशिकाओं को पूरे शरीर में पाए जाते हैं, लेकिन सेल संख्या ऊतक पर निर्भर हैं. रक्त मस्तिष्क अवरोध1,2के उच्च संवहनी के कारण मस्तिष्क में पेरिसाइट्स का सबसे विशेष अध्ययन किया गया है . हालांकि, दिल में, pericytes के जीव विज्ञान understudied है.
हाल ही में, वहाँ हृदय pericytes के लिए क्षेत्र में रुचिमें वृद्धि हुई है, लेकिन वर्तमान में कोई सुव्यवस्थित प्रोटोकॉल जीव विज्ञान में सबसे अधिक इस्तेमाल किया उपकरणों में से एक से उनके अलगाव के लिए उपलब्ध है - माउस. मस्तिष्क से पेरिसाइट्स को अलग करने पर साहित्य में प्रोटोकॉल हैं5, रेटिना6, प्लेसेंटा7, और कंकाल की मांसपेशी8,9; हालांकि, कुछ प्रोटोकॉल दिल से pericytes अलग पर हैं. वहाँ कई समूहों है कि अलग हृदय pericytes है. Nees एट अल माउस सहित कई प्रजातियों से कार्डियक pericytes की एक प्रचुर मात्रा को अलग करने में सक्षम थे; हालांकि, उनके तरीकों विशिष्ट घर में निर्मित उपकरण है जो reproducibility10कम हो जाती है इस्तेमाल किया. Avolio एट अल11, चेन एट अल12, और बेली एट अल13 भी सफलतापूर्वक मानव हृदय ऊतक से हृदय pericytes अलग है, लेकिन मानव ऊतकों हमेशा उपलब्ध नहीं हैं और कुछ जांचकर्ताओं के लिए प्राप्त करने के लिए मुश्किल. यहाँ, हम जांचकर्ताओं के लिए माउस मॉडल से कार्डियक pericytes प्राप्त करने के लिए एक अलगाव विधि विकसित की है आगे आसानी से उपलब्ध सामग्री के साथ उनके जीव विज्ञान का अध्ययन.
एंजाइमी पाचन और फ्लोरोसेंट सक्रिय सेल छँटाई (FACS) ज्ञात कुंजी pericyte मार्करों14के साथ का उपयोग करना, हमारे प्रोटोकॉल हमें अलग करने और pericytes कि CD31 की विशेषता है की एक आबादी को शुद्ध करने की अनुमति देता है-CD34 - CD45-CD45- CD140b+NG2+CD146+| मार्करों के हमारे पैनल दोनों शामिल किए जाने और बहिष्करण मार्कर होते हैं. CD45 हेमेटोपोएटिक कोशिकाओं को बाहर करने के लिए एक मार्कर के रूप में प्रयोग किया जाता है। CD31 endothelial कोशिकाओं को बाहर करने के लिए एक मार्कर के रूप में प्रयोग किया जाता है. CD34 एक मार्कर के रूप में प्रयोग किया जाता है दोनों hematopoietic और endothelial जनक कोशिकाओं को बाहर करने के लिए. CD146 perivascular कोशिकाओं के लिए एक मार्कर है. अंत में, NG2 और CD140b (भी प्लेटलेट व्युत्पन्न वृद्धि कारक रिसेप्टर बीटा के रूप में जाना जाता है [ PDGF] ) दोनों pericytes के लिए मार्कर स्वीकार किए जाते हैं14. प्राप्त प्राथमिक संस्कृति सुसंस्कृत और आकृति विज्ञान या मार्कर अभिव्यक्ति में कोई परिवर्तन के साथ कई बार पारित किया जा सकता है. इसके अलावा, इन कोशिकाओं को एक दूसरे के साथ उनकी बातचीत और crosstalk का अध्ययन करने के लिए endothelial कोशिकाओं के साथ सह-संस्कृत किया जा सकता है। इस सेल अलगाव विधि जांचकर्ताओं जीव विज्ञान और जंगली प्रकार से हृदय pericytes के pathophysiology अध्ययन करने की अनुमति देगा, रोग, और आनुवंशिक रूप से संस्करण माउस मॉडल.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:988px;" width="986">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">0.25% Trypsin-EDTA</td>
			<td style="width:106px;">Corning</td>
			<td style="width:155px;">25-053-Cl</td>
			<td style="width:506px;">dilute with 1x DPBS to get 0.1%</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">100 &#956;M Cell strainer</td>
			<td style="width:106px;">FisherSci</td>
			<td style="width:155px;">22363549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">15 mL Falcon conical tubes</td>
			<td style="width:106px;">BD</td>
			<td style="width:155px;">352096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">24-well plate</td>
			<td style="width:106px;">Corning</td>
			<td style="width:155px;">CLS3527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">25 gauge butterfly needle</td>
			<td style="width:106px;">FisherSci</td>
			<td style="width:155px;">22-253-146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">31 gauge needle syringe</td>
			<td style="width:106px;">FisherSci</td>
			<td style="width:155px;">B328446</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">50 mL Falcon conical tubes</td>
			<td style="width:106px;">BD</td>
			<td style="width:155px;">352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">6-well plate</td>
			<td style="width:106px;">Corning</td>
			<td style="width:155px;">CLS3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">anti-alpha smooth muscle actin rabbit mAb</td>
			<td style="width:106px;">abcam</td>
			<td style="width:155px;">ab32575</td>
			<td style="width:506px;">Antibody used in ICC 1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">anti-CD140b rabbit mAb</td>
			<td style="width:106px;">Cell Signaling</td>
			<td style="width:155px;">28E1</td>
			<td style="width:506px;">Antibody used in ICC 1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">anti-CD31 rabbit pAb</td>
			<td style="width:106px;">abcam</td>
			<td style="width:155px;">ab28364</td>
			<td style="width:506px;">Antibody used in ICC 1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">anti-desmin rabbit pAb</td>
			<td style="width:106px;">abcam</td>
			<td style="width:155px;">ab8592</td>
			<td style="width:506px;">Antibody used in ICC 1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">anti-NG2 conjugated to AF488</td>
			<td style="width:106px;">Millipore</td>
			<td style="width:155px;">MAB5384A4</td>
			<td style="width:506px;">Antibody used in ICC 1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">anti-vimentin rabbit mAb</td>
			<td style="width:106px;">abcam</td>
			<td style="width:155px;">ab92547</td>
			<td style="width:506px;">Antibody used in ICC 1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">ArC Amine Reactive Compensation bead kit</td>
			<td style="width:106px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:155px;">A10346</td>
			<td>compensation beads for Live/Dead Near IR dye</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Brightfield Microscope</td>
			<td style="width:106px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td>camera attached</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">CD140b-PE (clone APB5)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td style="width:155px;">12-1402-81</td>
			<td>Antibody used in FACS 1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">CD146-BV605 (clone ME-9F1)</td>
			<td style="width:106px;">BD</td>
			<td style="width:155px;">740434</td>
			<td>Antibody used in FACS 1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">CD31-APC (clone MEC 13.3)</td>
			<td style="width:106px;">BD</td>
			<td style="width:155px;">551262</td>
			<td>Antibody used in FACS 1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">CD34-BV421 (clone RAM 34)</td>
			<td style="width:106px;">BD</td>
			<td style="width:155px;">56268</td>
			<td>Antibody used in FACS 1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">CD45-PE-Cy7 (clone 30-F11)</td>
			<td style="width:106px;">BD</td>
			<td style="width:155px;">552848</td>
			<td>Antibody used in FACS 1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:106px;">eppendorf</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Collagenase B</td>
			<td style="width:106px;">Roche</td>
			<td style="width:155px;">11088815001</td>
			<td>0.226 U/mg lyo.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Confocal Microscope</td>
			<td style="width:106px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">DAPI</td>
			<td style="width:106px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:155px;">D1306</td>
			<td>nuclear stain</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">DMEM with 4.5 g/L glucose, L-glutamine &#38; sodium pyruvate</td>
			<td style="width:106px;">Corning</td>
			<td style="width:155px;">10-013-CV</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Dowell scissors</td>
			<td style="width:106px;">FST</td>
			<td style="width:155px;">15040-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Saline (DPBS)</td>
			<td style="width:106px;">Corning</td>
			<td style="width:155px;">21-030-CV</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:62px;width:223px;">Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Saline without Ca and Mg (CMF-DPBS)</td>
			<td style="width:106px;">Corning</td>
			<td style="width:155px;">21-031-CV</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Dumont #5 Fine Forceps</td>
			<td style="width:106px;">FST</td>
			<td style="width:155px;">11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">FACSAria cell sorter</td>
			<td style="width:106px;">BD</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td>Lasers: 405 nm 50 mW, 488 nm 100 mW, 561 nm 50mW, 633 nm 11 mW</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">FACSAria software</td>
			<td style="width:106px;">BD</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Falcon tube round-bottom polypropylene, 5 mL</td>
			<td style="width:106px;">BD</td>
			<td style="width:155px;">38057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Falcon tube with cell strainer cap, 5 mL</td>
			<td style="width:106px;">BD</td>
			<td style="width:155px;">08-771-23</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:106px;">Corning</td>
			<td style="width:155px;">35-015-CV</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Fine scissors</td>
			<td style="width:106px;">FST</td>
			<td style="width:155px;">14060-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">FlowJo software</td>
			<td style="width:106px;">FlowJo LLC</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Fortessa LSR flow cytometer</td>
			<td style="width:106px;">BD</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td>Lasers: 405 nm 50 mW, 488 nm 100 mW, 561 nm 50mW, 633 nm 11 mW</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Gelatin-based coating</td>
			<td style="width:106px;">Cell Biologics</td>
			<td style="width:155px;">6950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:62px;width:223px;">Goat anti-rabbit IgG (H+L) Cross-Absorbed Secondary antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td style="width:106px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:155px;">A-11008</td>
			<td style="width:506px;">Antibody used in ICC 1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Graefe Forceps</td>
			<td style="width:106px;">FST</td>
			<td style="width:155px;">11049-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Heparin sodium solution</td>
			<td style="width:106px;">Hospira</td>
			<td style="width:155px;">NDC 0409-2720-02</td>
			<td style="width:506px;">10,000 USP units/10 mL; from porcine intestines</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Incubator</td>
			<td style="width:106px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td>set at 37 &#176;C, 5% CO2, 95% O2&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Live/Dead-Near IR</td>
			<td style="width:106px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:155px;">L10119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Microscope slides</td>
			<td style="width:106px;">FisherSci</td>
			<td style="width:155px;">12-550-343</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">NG2-FITC</td>
			<td style="width:106px;">Millipore</td>
			<td style="width:155px;">AB5320A4</td>
			<td>Antibody used in FACS 1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Oribital shaker</td>
			<td style="width:106px;">VWR</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td>Inside 37 &#176;C incubator or room</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:106px;">FisherSci</td>
			<td style="width:155px;">50-980-487</td>
			<td>dilute with 1x DPBS to get 4%</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:106px;">Corning</td>
			<td style="width:155px;">30-002-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">&#160;Petri dish</td>
			<td style="width:106px;">FisherSci</td>
			<td style="width:155px;">FB0875714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Pipette and tips</td>
			<td style="width:106px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">ProLong Diamond</td>
			<td style="width:106px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:155px;">P36965</td>
			<td>mounting media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Propidum Iodide</td>
			<td style="width:106px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td>cell viability dye for supplemental figure 2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Rabbit IgG FITC</td>
			<td style="width:106px;">eBiosciences</td>
			<td style="width:155px;">11-4614-80</td>
			<td style="width:506px;">Isotype control antibody - FITC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Rat IgG2a APC</td>
			<td style="width:106px;">Biolegend</td>
			<td style="width:155px;">400512</td>
			<td style="width:506px;">Isotype control antibody - APC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Rat IgG2a BV421</td>
			<td style="width:106px;">Biolegend</td>
			<td style="width:155px;">400536</td>
			<td style="width:506px;">Isotype control antibody - BV421</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Rat IgG2a BV605</td>
			<td style="width:106px;">BD</td>
			<td style="width:155px;">563144</td>
			<td style="width:506px;">Isotype control antibody - BV605</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Rat IgG2a PE</td>
			<td style="width:106px;">Biolegend</td>
			<td style="width:155px;">400308</td>
			<td style="width:506px;">Isotype control antibody - PE</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Rat IgG2b PE-Cy7</td>
			<td style="width:106px;">Biolegend</td>
			<td style="width:155px;">400617</td>
			<td style="width:506px;">Isotype control antibody - PE-Cy7</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">SuperBlock</td>
			<td style="width:106px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:155px;">37515</td>
			<td>blocking buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">T75</td>
			<td style="width:106px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:155px;">156499</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:106px;">Sigma</td>
			<td style="width:155px;">X100</td>
			<td>detergent, dilute with x DPBS to get 0.1%</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">UltraComp beads</td>
			<td style="width:106px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:155px;">01-2222-42</td>
			<td>compensation beads</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Variable-Flow Peristaltic Pump</td>
			<td style="width:106px;">FisherSci</td>
			<td style="width:155px;">13-876-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">ViCell Cell counter</td>
			<td style="width:106px;">Beckman</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Wash buffer</td>
			<td style="width:106px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td>1:10 dilution of Superblock in 1x DPBS</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation and purification of murine cardiac pericytes

पेरिसाइट्स, माइक्रोवेअर्स और केशिकाओं की पेरिवास्कुलर कोशिकाओं, एंजियोजेनेसिस, पोत स्थिरीकरण, और एंडोथेलियल बाधा अखंडता में एक भूमिका निभाने के लिए जाना जाता है। हालांकि, दिल में उनके ऊतक-विशिष्ट कार्य ों को अच्छी तरह से समझ में नहीं आ रहा है। इसके अलावा, वर्तमान में हृदय मूल के pericytes को अलग और शुद्ध करने के लिए आसानी से सुलभ सामग्री का उपयोग कोई प्रोटोकॉल है. हमारे प्रोटोकॉल व्यापक रूप से इस्तेमाल किया स्तनधारी मॉडल का उपयोग करने पर केंद्रित है, माउस, कोशिकाओं के हमारे स्रोत के रूप में. हृदय ऊतक के एंजाइमी पाचन और यांत्रिक वियोजन का उपयोग करके, हमने एक कच्चे सेल मिश्रण को प्राप्त किया जो कि मार्कर ों की एक बहुतायत द्वारा सेल छँटाई (FACS) को सक्रिय करने वाले फ्लोरोसेंट द्वारा और अधिक शुद्ध किया गया था। क्योंकि pericytes के लिए कोई एकल स्पष्ट मार्कर है, हम कोशिकाओं है कि CD31 थे के लिए gated-CD34-CD45-CD140b+NG2+CD146+. शुद्धि के बाद, इन प्राथमिक कोशिकाओं को सुसंस्कृत और आकृति विज्ञान और मार्कर अभिव्यक्ति में किसी भी परिवर्तन के बिना कई बार पारित किया गया. नियमित रूप से हमारे प्रोटोकॉल का उपयोग प्राथमिक murine हृदय pericytes प्राप्त करने की क्षमता के साथ, हम आगे हृदय शरीर क्रिया विज्ञान और उनकी चिकित्सीय क्षमता में pericytes की भूमिका को समझने की उम्मीद है.

पूरे हृदय के वियोजन और कोशिकाओं के एफएसीएस शुद्धिकरण से पहले, कोशिकाओं में एक कच्चा मिश्रण होता है जिसमें हृदय से अनेक प्रकार के कोशिकाएं होती हैं (चित्र 1क)। FACS शुद्धि और culturing के बाद, कोशिकाओं समरूप हैं. वे एक नाभिक, काफी सपाट होते हैं और विशिष्ट परिकोशिका समचतुर्भुज आकृति विज्ञान (चित्र 1ख)होते हैं।
FACS का उपयोग करना, कोशिकाओं homogeny के लिए शुद्ध कर रहे हैं. बिना दाग वाले नियंत्रण कक्ष नमूने का प्रयोग गेटिंग रणनीति दिखाने के लिए किया जाता है (चित्र 2) । सबसे पहले, आगे और साइड स्कैटर वितरण के आधार पर मलबे और डबल्स को गेट आउट किया गया। फिर मृत कोशिकाओं को डाई जो एक संकेत अधिक से अधिक और जीने की कोशिकाओं की तुलना में अधिक तीव्र पैदा करता है के साथ उनके amine प्रतिक्रिया के कारण बाहर gated थे. जीवित कोशिकाओं में से, हेमेटोपोएटिक कोशिकाओं को सीडी 45+होने से बाहर द्वार किया गया था। हेमाटोपोइटिक और एंडोथेलियल कोशिकाओं को दूर करने के लिए, CD34+ और CD31+ कोशिकाओं को बाहर गेट किया गया था। अंत में, NG2+ और CD140b+/CD146+ कोशिकाओं विशिष्ट pericyte मार्करों की अभिव्यक्ति के साथ perivascular कोशिकाओं होने के लिए चुना गया (चित्र 3). मार्कर पैनल भी एक नियंत्रण के रूप में माउस कोरोनरी endothelial कोशिकाओं पर परीक्षण किया गया था (पूरक चित्र 1). केवल कच्चे सेल मिश्रण के बारे में 1% छँटाई के बाद pericytes शामिल थे.
यह सत्यापित करने के लिए कि कोशिकाओं को वास्तव में pericytes थे, हम आगे की विशेषता के लिए कोशिकाओं को पारित कर दिया. जब वे टी-75 फ्लास्क में पी 3 तक पहुँच गए तो कोशिकाएं तेजी से बढ़ी क्योंकि वे बड़े हो गए थे (पूरक चित्र 2)। जब मानव मस्तिष्क pericytes के साथ तुलना में, कोशिकाओं को एक समान आकृति विज्ञान था (चित्र 4A). जब माउस और मानव चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं के साथ तुलना में, कोशिकाओं को एक अलग आकृति विज्ञान था (चित्र 4A). P7 पर आकारिकी या मार्कर अभिव्यक्ति में कोई भी परिवर्तन नहीं किया गया जब प्रतिरक्षा या प्रवाह साइटोमेट्री विश्लेषण द्वारा पासिंग के बाद (चित्र 4बी,ब्) .
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59571/59571fig1.jpg"> चित्र 1 : शुद्ध कोशिकाओं बनाम क्रूड सेल. (ए) कच्चे सेल मिश्रण की उज्ज्वल छवि पूरे दिल एंजाइमी पाचन और वियोजन के बाद जो 14 दिनों के लिए एक T25 फ्लास्क में सुसंस्कृत किया गया है। (ख) 14 दिनों के बाद कार्डियक पेरिसाइट्स पोस्ट-सॉर्टिंग और culturing की समरूप आबादी की उज्ज्वल क्षेत्र छवि। स्केल बार ] 100 डिग्री मी. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59571/59571fig1large.jpg" target="_blank">कृपया इस आकृति का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59571/59571fig2v2.jpg"> चित्र 2 : बेदाग कोशिकाओं के FACS विश्लेषण के प्रतिनिधि छवियों. कच्चे सेल मिश्रण को शुद्ध करने के लिए उपयोग की जाने वाली गैटिंग रणनीति का योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व। उन कोशिकाओं के लिए गेट जो एकल, लाइव, CD45-, CD31-, CD34-, NG2+, CD146+और CD140b+हैं . <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59571/59571fig2v2large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59571/59571fig3.jpg"> चित्र 3 : कच्चे कोशिकाओं के FACS विश्लेषण के प्रतिनिधि छवियों| हृदय पेरिसाइट्स की समरूप जनसंख्या प्राप्त करने के लिए प्रत्यांचल का योजनाबद्ध निरूपण. कच्चे तेल की कोशिकाओं का लगभग 1% CD31-CD34-CD45-CD140b+NG2+CD146+हैं. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59571/59571fig3large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59571/59571fig4.jpg"> चित्र 4 : प्राथमिक अलग हृदय pericytes की विशेषता (ए) मानव मस्तिष्क (एचपीसी) और माउस दिल (एमपीसी) से सुसंस्कृत कोशिकाओं के ब्राइटफील्ड छवियों को इसी तरह की पेरिसाइट सेल आकारिकी लेकिन मानव चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं एचएसएमसी से अलग आकृति विज्ञान ( माउस चिकनी मांसपेशी कोशिकाओं) और माउस चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं (mSMC) दिखाते हैं। स्केल बार - 100 डिग्री मी. (बी) फेनोटाइपिक लक्षणानुसार पी 7 में कोशिकाओं का पेरिसाइट मार्कर के लिए इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री द्वारा लक्षणीकरण। स्केल बार ] 100 डिग्री मी. (ग) P7 पर pericytes के प्रवाह cytometry द्वारा विश्लेषण जहां वे नकारात्मक मार्करों CD31, CD34, CD45 और सकारात्मक मार्करों NG2, CD140b, और CD146 के लिए gated थे. जनसंख्या समरूप बनी हुई है। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59571/59571fig4large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
पूरक चित्रा 1: मार्कर पैनल का उपयोग कर endothelial कोशिकाओं के प्रवाह साइटोमेट्री विश्लेषण के प्रतिनिधि छवियों. एक माउस कोरोनरी endothelial सेल लाइन मार्करों के लिए बाध्यकारी विशिष्टता के लिए नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया गया था. एक ही gating रणनीति है कि एक नकारात्मक गेट के बजाय CD31 के लिए एक सकारात्मक गेट के लिए छोड़कर सॉर्ट में इस्तेमाल किया गया था का उपयोग करना, endothelial कोशिकाओं CD45, CD34, NG2, CD140b, और CD146 के लिए नकारात्मक थे, लेकिन सीडी 31 के लिए सकारात्मक के रूप में उम्मीद है. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59571/JOVE_Suppl_Figure_1.tif" target="_blank">कृपया यहाँ क्लिक करें इस आंकड़े को डाउनलोड करने के लिए.</a>
पूरक चित्र 2: एमपीसी के विभिन्न अंशों के प्रवाह साइटोमेट्री विश्लेषण के प्रतिनिधि छवियों। प्राथमिक पृथक हृदय pericytes सुसंस्कृत और 12 पारित करने के लिए पारित किया गया. कोशिकाओं को प्रोपिडियम आयोडाइड से दागा गया और प्रवाह साइटोमीटर पर विश्लेषण किया गया। नियंत्रण जनसंख्या मृत कोशिकाओं और जीवित कोशिकाओं का एक मिश्रण है. मार्ग के बीच व्यवहार्य कोशिकाओं की संख्या में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं थे. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59571/JOVE_Suppl_Figure_2.tif" target="_blank">कृपया यहाँ क्लिक करें इस आंकड़े को डाउनलोड करने के लिए.</a>

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Isolation and Purification of Murine Cardiac Pericytes

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