Name: rabies necropsy techniques in large and small animals
Uploaded: 2019-07-30T13:00:00
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このプロジェクトを支援してくださったニューヨーク州保健省のワズワース・センターに感謝しています。また、エイミー・ウィルシーとフランク・ブレイズデル保健省ワズワース・センター、およびニューヨーク州アルタモントのLLランチからの支援を認めしたいと思います。

記載されたすべての方法は、ワズワースセンター機関動物ケアおよび使用委員会(IACUC)によって承認されました。
1. 準備
<ol><li>ドンPPEは、少なくとも目の保護(眼鏡またはフェイスシールド)、外科またはN-95マスク、および非ラテックス手袋。</li>
	<li>作業領域、理想的にはバイオセーフティキャビネット(BSC)を、使い捨て作業面カバー(例えば、クラフト紙または吸収パッ...

<ol>
	<li>Centers for Disease Control and Prevention (CDC). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=West+Nile+virus+activity+-+United+States,+2009.">West Nile virus activity - United States, 2009.</a> MMWR Morbidity and Mortality Weekly Report. 59 (25), 769-772 (2010).</li><li>McDaniel, C. J., Cardwell, D. M., Moeller, R. B., Gray, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humans+and+cattle:+A+review+of+bovine+zoonoses.">Humans and cattle: A review of bovine zoonoses.</a> Vector Borne and Zoonotic Diseases. 14 (1), 1-19 (2014).</li><li>Zoonotic diseases. Merck Veterinary Manual Available from: <a target="_blank" href="https://www.merckvetmanual.com/public-health/zoonoses/zoonotic-diseases">https://www.merckvetmanual.com/public-health/zoonoses/zoonotic-diseases</a> (2019)</li><li>Wenner, L., Pauli, U., Summermatter, K., Gantenbein, H., Vidondo, B., Posthaus, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aerosol+generation+during+bone-sawing+procedures+in+veterinary+autopsies.">Aerosol generation during bone-sawing procedures in veterinary autopsies.</a> Veterinary Pathology. 54 (3), 425-436 (2017).</li><li>Green, F. H. Y., Yoshida, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+aerosols+generated+during+autopsy+procedures+and+their+potential+role+as+carriers+of+infectious+agents.">Characteristics of aerosols generated during autopsy procedures and their potential role as carriers of infectious agents.</a> Applied Occupational and Environmental Hygiene. 5 (12), 853-858 (1990).</li><li>Barrat, J., Meslin, F. X., Kaplan, M. M., Koprowski, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+technique+for+the+collection+and+shipment+of+brain+specimens+for+rabies+diagnosis.">Simple technique for the collection and shipment of brain specimens for rabies diagnosis.</a> Laboratory techniques in Rabies 4th Edition. , 425-427 (1996).</li><li>Ness, S. L., Bain, F. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+to+perform+an+equine+field+necropsy.">How to perform an equine field necropsy.</a> American Association of Equine Practitioners. 55, 313-316 (2009).</li><li>. Sample requirements for TSE testing and confirmation &#8211; EURL guidance Available from: <a target="_blank" href="https://science.vla.gov.uk/tse-lab-net/documents/tse-oie-rl-samp.pdf">https://science.vla.gov.uk/tse-lab-net/documents/tse-oie-rl-samp.pdf</a> (2019)</li><li>. Rabies reports Available from: <a target="_blank" href="https://www.wadsworth.org/programs/id/rabies/reports">https://www.wadsworth.org/programs/id/rabies/reports</a> (2019)</li><li>. Protocol for postmortem diagnosis of rabies in animals by direct fluorescent antibody testing: A minimum standard for rabies diagnosis in the United States Available from: <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf">https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf</a> (2019)</li><li>Miller, L. D., Davis, A. J., Jenny, A. L., Fekadu, M., Whitfield, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surveillance+for+lesions+of+bovine+spongiform+encephalopathy+in+U.S.+cattle.">Surveillance for lesions of bovine spongiform encephalopathy in U.S. cattle.</a> Developments in Biological Standardizations. 80, 119-121 (1993).</li><li>Andrews, C., Gerdin, J., Patterson, J., Buckles, E. L., Fitzgerald, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eastern+equine+encephalitis+in+puppies+in+Michigan+and+New+York+states.">Eastern equine encephalitis in puppies in Michigan and New York states.</a> Journal of Veterinary Diagnostic Investigation. 30 (4), 633-636 (2018).</li><li>Appler, K., Brunt, S., Jarvis, J. A., Davis, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clarifying+indeterminate+results+on+the+rabies+direct+fluorescent+antibody+test+using+real-time+reverse+transcriptase+polymerase+chain+reaction.">Clarifying indeterminate results on the rabies direct fluorescent antibody test using real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction.</a> Public Health Reports. 134 (1), 57-62 (2019).</li><li>Rupprecht, C. E., Fooks, A. R., Abela-Ridder, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+7.+Brain+removal.">Chapter 7. Brain removal.</a> Laboratory techniques in Rabies 5th Edition. , 67-72 (2018).</li></ol>

狂犬病壊死のために提出された標本は、しばしば神経疾患と互換性のある臨床徴候の歴史を有する。臨床疾患の存在は、人獣共通疾患を含む様々な疾患に関連し得る。これらのリスクを低減するために、試料の取り扱いや操作を減少させる技術が実装されています。
実証された方法は、単一の動物からのみ所望の組織を除去する壊死事象を表す。より一般的に複数の標?...

狂犬病実験室の壊死床に取り組むことは本質的に危険です。時には、標本は埋め込まれたポークパインクイル、矢印/弾丸/ペレットまたは保護出荷ラップを貫通する可能性のある露出した骨の破片を含む異物で到着します。不適切な包装は漏出をもたらし、標本を解凍する個人を危険にさらす可能性があります。身体的損傷に加えて、壊死した技術者は、CNSおよび標本の体液から未知の動物性感染因子への暴露を危険にさらす。さらに、検体によって運ばれるエトパラサイトは、ノミやダニが提出された動物に一般的に見られるように、他の人獣病を伝染させる可能性があります。地理的な場所や種に応じて、暴露された疾患はさまざまです。東部ウマ脳炎ウイルス(EEEV)や西ナイルウイルス(WNV)などのアルボウイルス、ライム病や結核を含むダニ媒介性疾患、Q発熱や結核を引き起こす細菌、感染性プリオンなど、少数の危険が考えられる1,2,3.
これらの方法の目的は、電動工具や鋸4、5とは異なり、エアロゾル化の可能性を最小限に抑える器具を使用して、安全で効率的な壊死技術を実証することです。一般的に、狂犬病実験室の小動物の壊死は、頭蓋の筋肉を切り取り、ハンマーとノミを使用してカルバリウム6の後部を開く必要があります。カルバリウムのこの領域を削除すると、小脳全体と頭蓋脳幹を含む後頭脳が露出します。改変された壊死技術は、頭蓋骨の大きな頭蓋筋および頭蓋骨の厚い領域を避け、頭蓋骨の腹部部で行われる。しかし、これらの改変された壊死技術は、検体が頸椎を持たない場合にのみ可能である。
同様に、大型動物の脳組織は、頭蓋筋を分離し、頭蓋骨7の口腔後部を開くことによって除去することができる。大きな動物の頭蓋骨は一般的に厚いので、小脳と脳幹を露出させるには相当な努力が必要です。頭蓋骨の貫通を避けるために、大きな動物の頭部は、頭蓋骨のベントロカドーマル部分が技術者に直面するように配置されます。修飾された器具を使用して、小脳と脳幹は、前頭マグナムを介して除去されます。これは、透過性海綿状脳症(TSE)調査8のTSE欧州連合リファレンスラボが推奨するサンプル取得方法に類似しています。頭蓋椎は、前頭骨マグナムへのアクセスを提供するために、事前に除去する必要があります。
これらの技術の適用は狂犬病の実験室で適切に訓練された技術者に有益である。狂犬病の実験室は、若年性コウモリから成人ドラフト馬9まで、様々なサイズのサンプルを受け取るように、技術者は、個々の状況に基づいてから選択するいくつかの方法を持っています。大型動物に対して実証された方法は、狂犬病検査のために大型動物の頭部全体を出荷することは面倒で高価であるため、現場で壊死を行う獣医師にも適しています。これらの技術のいずれかを実装すると、エアロゾル生産の可能性を減少させることによって安全性を向上させ、試料の取り扱いを減らし、処理時間を節約します。しかし、狂犬病検査専用の実験室と同じ利点を持たないため、これらの手順に加え、特に個人用保護具(PPE)の使用に焦点を当てることは不可欠です。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chemistry spoon</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved, sharp-blunt mayo scissors</td>
			<td>Sklar</td>
			<td>14-2055</td>
			<td>Sklar Operating Scissors 5-1/2 Inch Premium OR Grade Stainless Steel Finger Ring Handle Curved Sharp/Blunt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large sharp restaurant-quality carving knife</td>
			<td>Dexter</td>
			<td>P94848</td>
			<td>8&#34; Scalloped Utility Knife, white handle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Locking tumor-tenacula</td>
			<td>Diamond Scientific and Surgicals</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Czerny Tenaculum Forcep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified stiletto knife (6.5 inch long blade carving knife ground to 0.5 inch wide)</td>
			<td>Dexter</td>
			<td>P94848</td>
			<td>Modified 8&#34; Scalloped Utility Knife, white handle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orthopedic mallet-hammer</td>
			<td>Mortech</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Postmortem hammer with hook</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp councilman orthopedic bone chisel</td>
			<td>Shandon</td>
			<td>60-5</td>
			<td>Councilman&#39;s Chisel Blade: 2 in x 2.25 in standard 7 in</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharpened tablespoon or other long handled spoon</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Smooth-tipped tissue dressing forceps without teeth</td>
			<td>Shandon</td>
			<td>63-03</td>
			<td>Shandon Broad Point Dressing Thumb Forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Powder-free non-latex gloves</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safety glasses, goggles, or faceshield</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgery or N-95 mask</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kraft paper, butcher paper, absorbent pad, etc</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rabies necropsy techniques in large and small animals

ニューヨーク州保健省(NYSDOH)狂犬病研究所は、毎年6,000~9,000検体を受け取り、ニューヨーク市を除き、州全体で狂犬病検査を行っています。狂犬病の実験室は、コウモリからボビッドに至るまで、様々な動物を壊作します。これらの標本のほとんどは神経学的徴候を示す動物ですが、狂犬病の陽性を実際にテストする10%未満です。これらの症状の原因として外傷、病変または他の感染因子を暗示する。診断されていない感染剤をエアロゾル化するリスクがあるため、狂犬病研究所は電動工具や鋸を使用していません。頭蓋骨がはさみで不可解な動物のために3つの壊死の技術が提示されます。実験室は、感染剤への潜在的な暴露を減らし、標本の不必要な操作を排除し、処理時間を短縮するためにこれらの技術を実装しています。他とは対照的に好ましい技術の利点は、試料を処理する訓練を受けた個々の処理に従う。

2019年1月31日から2019年2月28日の間に頭蓋骨で提出されたすべての地上サンプルには、首の存在と壊死の方法に関する情報が含まれていました。その間、170頭が18種を表して壊死させた。52%(89/170)が適切に切断された。残りの骨は、3つの全身標本を含む少なくとも1つの椎骨を取り付けていた。腹部法は、当時の75%(128/170)を用いたもので、そのうち、首は49に存在していた...

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Rabies Necropsy Techniques in Large and Small Animals

このプロトコルの目的は、狂犬病検査のための満足のいく組織サンプルを得るために、小動物および大型動物における安全な壊死技術を実証することである。

大小動物における狂犬病壊死技術

The New York State Department of Health (NYSDOH) Rabies Laboratory receives between 6,000 to 9,000 specimens annually and performs rabies testing for the ...

狂犬病検査のための組織コレクションは、明らかな危険性と明らかな危険性の両方を持っています。技術者は、利用可能な最も安全な方法を使用し、適切な個人用保護具を着用する必要があります。これらのプロトコルは、電動工具やのこぎりを使用せずに安全な壊死技術を提供し、エアロゾルの生産を最小限に抑えます。大きな動物のプロトコルはまた、フィールドで行うことができます。大きな動物のサンプルの検索方法を使用して、実験室に45キロ以上の重量を量る動物の頭部を輸送する挑戦を排除する。大きな動物法は、透過性海綿状脳症サンプル検索のためのヨーロッパのプロトコルに似ており、脳幹および小脳を使用して任意の調査に使用することができます。腹側法によって小脳と脳幹を取り出すために、検体腹側を、バイオセーフティキャビネットの背面に向かって鼻を遠く向けて上に置く。支配的な手に整形外科のマレットを持ち、一方で議員のノミを持ち、側頭骨と後頭部の右側と後頭部の間のV字型開口部のノミに角を合わせ、45度の角度でノミを配置する。2つの骨が分離するまで、マレットでノミの上部を打ちます。そして、基礎フェノイド骨に隣接してカットを行います。ちょうど実証したように、標本の左側の側頭骨と後頭部骨を分離する。そして、頭蓋のV領域を下に曲げ、脳の菱形領域全体を露出させるためにチゼルを使用します。その後、はさみと鉗子を使用して脳幹と小脳をすくい取り、必要に応じて頭蓋骨から残りの組織片を取り除きます。検体が腹側の検索を許可しない場合は、鼻がバイオセーフティキャビネットの背面に向かって遠位に向けられたサンプルを背側に取り出す。そして、腫瘍テナキュラを使用して、テナキュラの歯で左側頭筋を把握する。ハンドルを絞って組織の周りの歯をロックし、鋭利な彫刻ナイフを使用して側頭筋を骨まで切り下ろします。テナキュラとナイフで標本を180度回転させ、反対側の側頭筋の切開を繰り返して頭蓋骨を露出させる。頭を元の方向に戻し、頭頂骨と直腸骨の分岐点で頭蓋骨の中心にあるノミを角をポイントした45度の角度でノミを配置します。そして、頭頂骨の頭蓋骨の上半分に水平開口部が作られるまで、マレットでノミの上部を打ちます。標本を180度回転させ、ちょうど示したように頭蓋骨の反対側に開口部を作ります。必要に応じて頭を位置に、最初のカットの端に90度の角度でノミを挿入し、開口部が後頭部の骨に到達するまで、チゼルを打ちます。同じように、試料を転がして反対側の後頭骨に開口部を作ります。頭蓋骨の開口部は逆さまのU.逆さまに似ているはずです。テナキュラの歯をあなたの底の頭蓋骨に挿入し、骨を後ろ向きに引っ張って大脳と小脳の尾端を露出させます。その後、空洞内から小脳全体を詮索するためにスクープとしてはさみを使用してください。そして、組織鉗子を使用して、前衛から脳幹をいじめます。大きな動物小脳および脳幹の検索のために、頭蓋骨の後ろ側部分が壊死表面に接触するように標本を配置する。頭蓋骨と前門マグナムの尾部は、バイオセーフティキャビネットの前面に面しています。鉗子で脳幹をつかみます。脊髄と脊髄の間の奥頭に修正されたスティレットナイフを挿入し、脊髄の周りを精査して小脳と脳幹を脊髄髄から分離する。次に、鉗子で前衛から茎を引き出します。ナイフが孔マグナムを通して挿入されたら、可能な限り頭蓋骨に沿って従うように刃を穏やかに角度付けし、神経組織と脊髄の髄の間の空間に脳の下に到達するのに十分な長いハンドルを持つ金属へらを挿入します。小脳の周りをプローブし、脊髄髄との接続が切断されていることを確認します。髄が完全に切断されると、小脳をすくい上げるために、ヘラ・ロストリーとドールを進める。その後、へらで小脳をすくい取ります。2019年1月31日から2月28日の間に頭蓋骨で提出されたすべての陸上サンプルは、首の存在と壊死の方法に関する情報を収集しました。その間、170頭が18種を代表して壊死した。52%が適切に首を切られた。残りは、3つの全身標本を含む少なくとも1つの椎骨が付着していた。腹側法は75%の時間を用いた。そのうち、首は49に存在していた。3つの大きな動物が提出され、2つのケースでは、大きな動物のプロトコルが使用されました。1匹のリスが破砕された頭蓋骨で提出され、単に皮膚を切り取って脳組織を露出させたので、実証された方法はいずれも使用されませんでした。顕微鏡スライドを作るために使用される組織や、複数の動物を処理する際に分子法から抽出された組織は、新しい手袋器具とクリーンな作業領域を使用して交差汚染を回避します。これらのプロトコルを実施する際には、狂犬病ウイルスや他の人獣共通感染症に感染する場合があるため、注意が必要です。また、試料内に鋭利な物体が存在する場合があることに注意してください。

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Electrode Fabrication and Implantation in Aplysia californica for Multi-channel Neural and Muscular Recordings in Intact, Freely Behaving Animals

Electrode Fabrication and Implantation in Aplysia californica for Multi-channel Neural and Muscular Recordings in Intact, Freely Behaving Animals

の電極の作製と注入アメフラシカリフォルニ無傷、自由に振る舞う動物における多チャンネル神経と筋肉の録音のための

Recording from key nerves and muscles of Aplysia during feeding behavior allows us to study the patterns of neural control in an intact animal.  ...

Efficient Derivation of Human Neuronal Progenitors and Neurons from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

小分子の誘導と多能性ヒト胚性幹細胞からヒト神経前駆細胞と神経細胞の効率的な導出

There is a large unfulfilled need for a clinically-suitable human neuronal cell source for repair or regeneration of the damaged central nervous system ...

Large-scale Recording of Neurons by Movable Silicon Probes in Behaving Rodents

動作げっ歯類の可動シリコンプローブによるニューロンの大規模なレコーディング

A major challenge in neuroscience is linking behavior to the collective activity of neural assemblies. Understanding of input-output relationships of ...

Design and Assembly of an Ultra-light Motorized Microdrive for Chronic Neural Recordings in Small Animals

小動物の慢性神経録音用超軽量電動マイクロドライブの設計およびアセンブリ

The ability to chronically record from populations of neurons in freely behaving animals has proven an invaluable tool for dissecting the function of ...

Assessing Spatial Learning and Memory in Small Squamate Reptiles

小さなうろこに覆われた爬虫類の空間学習と記憶を評価します

Clinical research has leveraged a variety of paradigms to assess cognitive decline, commonly targeting spatial learning and memory abilities. However, ...

High-Resolution 3D Imaging of Rabies Virus Infection in Solvent-Cleared Brain Tissue

溶媒クリア脳組織における狂犬病ウイルス感染の高解像度3Dイメージング

The visualization of infection processes in tissues and organs by immunolabeling is a key method in modern infection biology. The ability to observe and ...

Multi-Fiber Photometry to Record Neural Activity in Freely-Moving Animals

自由に動く動物の神経活動を記録するマルチファイバー光メトリー

Recording the activity of a group of neurons in a freely-moving animal is a challenging undertaking. Moreover, as the brain is dissected into smaller and ...

Generation of Oligodendrocytes and Oligodendrocyte-Conditioned Medium for Co-Culture Experiments

共同培養実験のためのオリゴデンドロサイト及びオリゴデンドロサイト条件培地の生成

In the central nervous system, oligodendrocytes are well-known for their role in axon myelination, that accelerates the propagation of action potentials ...

Real-Time fMRI Brain Mapping in Animals

動物におけるリアルタイムfMRI脳マッピング

Dynamic fMRI responses vary largely according to the physiological conditions of animals either under anesthesia or in awake states. We developed a ...

Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Tissue in a Feline Large Animal Model

ネコ大型動物モデルにおけるヒト胚性幹細胞由来網膜組織の網膜下移植

Retinal degenerative (RD) conditions associated with photoreceptor loss such as age-related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa (RP) and ...