Name: rabies necropsy techniques in large and small animals
Uploaded: 2019-07-30T13:00:00
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Estamos gratos ao departamento de estado de saúde de Nova Iorque Wadsworth Center para apoiar este projeto. Nós também gostaríamos de reconhecer o apoio de Amy Willsey e Frank Blaisdell do departamento de saúde Wadsworth Center, e LL Ranch, Altamont, NY.

Todos os métodos descritos foram aprovados pelo Comitê institucional de cuidado e uso de animais do centro Wadsworth (IACUC).
1. preparação
<ol><li>Don PPE, com proteção ocular mínima (óculos ou escudo facial), máscara cirúrgica ou N-95 e luvas sem látex.</li>
	<li>Prepare a área de trabalho, idealmente um gabinete de biossegurança (BSC), com uma cobertura de superfície de trabalho descartável (por exemplo, papel kraft ou almofadas absorventes) e instrumentos de necropsia limp...

<ol>
	<li>Centers for Disease Control and Prevention (CDC). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=West+Nile+virus+activity+-+United+States,+2009.">West Nile virus activity - United States, 2009.</a> MMWR Morbidity and Mortality Weekly Report. 59 (25), 769-772 (2010).</li><li>McDaniel, C. J., Cardwell, D. M., Moeller, R. B., Gray, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humans+and+cattle:+A+review+of+bovine+zoonoses.">Humans and cattle: A review of bovine zoonoses.</a> Vector Borne and Zoonotic Diseases. 14 (1), 1-19 (2014).</li><li>Zoonotic diseases. Merck Veterinary Manual Available from: <a target="_blank" href="https://www.merckvetmanual.com/public-health/zoonoses/zoonotic-diseases">https://www.merckvetmanual.com/public-health/zoonoses/zoonotic-diseases</a> (2019)</li><li>Wenner, L., Pauli, U., Summermatter, K., Gantenbein, H., Vidondo, B., Posthaus, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aerosol+generation+during+bone-sawing+procedures+in+veterinary+autopsies.">Aerosol generation during bone-sawing procedures in veterinary autopsies.</a> Veterinary Pathology. 54 (3), 425-436 (2017).</li><li>Green, F. H. Y., Yoshida, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+aerosols+generated+during+autopsy+procedures+and+their+potential+role+as+carriers+of+infectious+agents.">Characteristics of aerosols generated during autopsy procedures and their potential role as carriers of infectious agents.</a> Applied Occupational and Environmental Hygiene. 5 (12), 853-858 (1990).</li><li>Barrat, J., Meslin, F. X., Kaplan, M. M., Koprowski, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+technique+for+the+collection+and+shipment+of+brain+specimens+for+rabies+diagnosis.">Simple technique for the collection and shipment of brain specimens for rabies diagnosis.</a> Laboratory techniques in Rabies 4th Edition. , 425-427 (1996).</li><li>Ness, S. L., Bain, F. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+to+perform+an+equine+field+necropsy.">How to perform an equine field necropsy.</a> American Association of Equine Practitioners. 55, 313-316 (2009).</li><li>. Sample requirements for TSE testing and confirmation &#8211; EURL guidance Available from: <a target="_blank" href="https://science.vla.gov.uk/tse-lab-net/documents/tse-oie-rl-samp.pdf">https://science.vla.gov.uk/tse-lab-net/documents/tse-oie-rl-samp.pdf</a> (2019)</li><li>. Rabies reports Available from: <a target="_blank" href="https://www.wadsworth.org/programs/id/rabies/reports">https://www.wadsworth.org/programs/id/rabies/reports</a> (2019)</li><li>. Protocol for postmortem diagnosis of rabies in animals by direct fluorescent antibody testing: A minimum standard for rabies diagnosis in the United States Available from: <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf">https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf</a> (2019)</li><li>Miller, L. D., Davis, A. J., Jenny, A. L., Fekadu, M., Whitfield, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surveillance+for+lesions+of+bovine+spongiform+encephalopathy+in+U.S.+cattle.">Surveillance for lesions of bovine spongiform encephalopathy in U.S. cattle.</a> Developments in Biological Standardizations. 80, 119-121 (1993).</li><li>Andrews, C., Gerdin, J., Patterson, J., Buckles, E. L., Fitzgerald, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eastern+equine+encephalitis+in+puppies+in+Michigan+and+New+York+states.">Eastern equine encephalitis in puppies in Michigan and New York states.</a> Journal of Veterinary Diagnostic Investigation. 30 (4), 633-636 (2018).</li><li>Appler, K., Brunt, S., Jarvis, J. A., Davis, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clarifying+indeterminate+results+on+the+rabies+direct+fluorescent+antibody+test+using+real-time+reverse+transcriptase+polymerase+chain+reaction.">Clarifying indeterminate results on the rabies direct fluorescent antibody test using real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction.</a> Public Health Reports. 134 (1), 57-62 (2019).</li><li>Rupprecht, C. E., Fooks, A. R., Abela-Ridder, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+7.+Brain+removal.">Chapter 7. Brain removal.</a> Laboratory techniques in Rabies 5th Edition. , 67-72 (2018).</li></ol>

Espécimes submetidos à necropsia da raiva muitas vezes têm uma história de sinais clínicos compatíveis com uma doença neurológica. A presença de doença clínica pode estar associada a uma variedade de distúrbios, incluindo doenças zoonóticas, aumentando o risco para a equipe de um laboratório de infecção adquirida. Para reduzir esses riscos, foram implementadas técnicas que diminuem o manuseio e a manipulação de espécimes.
Os métodos demonstrados representam um evento de n...

Trabalhar no assoalho do necropsia de um laboratório da raiva é inerentemente perigoso. Às vezes, os espécimes chegam com os Quills incorporados do porco-espinho, objetos extrangeiros que incluem setas/balas/pelotas ou fragmentos de osso expor que podem penetrar o envoltório protetor do transporte. O empacotamento impróprio pode conduzir ao escapamento, pondo em perigo indivíduos que desempacotam espécimes. Além do que ferimento físico, os técnicos do necropsia arriscam a exposição aos agentes infecciosos zoonóticos desconhecidos do CNS e dos líquidos de corpo dos espécimes. Adicionalmente, os ectoparasitas transportados pelo espécime podem transmitir outras doenças zoonóticas, pois as pulgas e carrapatos são comumente observadas em animais submetidos. Dependendo da localização geográfica e das espécies envolvidas, as doenças expostas variam. Arbovírus, como o vírus da encefalite eqüina Oriental (EEEV) ou o vírus do Nilo Ocidental (WNV), doenças transmitidas por carrapatos, incluindo doença de Lyme ou tularemia, bactérias que causam febre Q ou tuberculose, e os priões infecciosos nomeam um pequeno número dos possíveis perigos1 , 2. º , a 3.
O objetivo destes métodos é demonstrar técnicas de necropsia seguras e eficientes usando instrumentos que minimizam o potencial de aerosolização ao contrário de ferramentas elétricas ou serras4,5. Comumente, a necropsia de pequenos animais no laboratório de raiva requer o corte dos músculos cranianos e o uso de martelo e cinzel para abrir a porção dorsal caudal do calvarium6. Remover esta área do calvarium expõe o cérebro traseiro, incluindo o cerebelo inteiro e a haste de cérebro craniana. Técnicas de necropsia modificadas podem ser realizadas na parte ventral do crânio, evitando os grandes músculos cranianos e regiões mais grossas do crânio. Entretanto, estas técnicas modificadas do necropsia são somente possíveis quando o espécime é sem vértebras cervicais.
Da mesma forma, o tecido cerebral em grandes animais pode ser removido separando os músculos cranianos e abrindo a porção dorsal caudal do crânio7. Um esforço considerável é exigido para expor o cerebelo e o tronco de cérebro porque os crânios de animais maiores são geralmente mais grossos. Para evitar penetrar no crânio, a cabeça de um animal grande é posicionada para que a porção ventro-caudal do crânio esteja voltada para o técnico. Usando instrumentos modificados, o cerebelo e o tronco encefálico são removidos através do forame Magnum. Isto é semelhante ao método de aquisição da amostra recomendado pelo laboratório de referência da União Europeia TSE para investigações de encefalopatia espongiforme transmissível (TSE)8. As vértebras cranianas devem ser removidas de antemão para fornecer acesso ao forame Magnum.
A aplicação destas técnicas é benéfica para técnicos adequadamente treinados em laboratórios de raiva. Enquanto o laboratório da raiva recebe amostras de vários tamanhos, dos bastões juvenis aos cavalos de esboço adultos9, o técnico tem diversos métodos a escolher de baseado na circunstância individual. O método demonstrado para um grande animal também é apropriado para os veterinários que realizam necropsias no campo, uma vez que o transporte de uma cabeça grande animal inteiro para o teste de raiva é complicado e caro. A implementação de qualquer uma dessas técnicas irá melhorar a segurança, diminuindo o potencial de produção de aerossóis, reduzir o manuseio da amostra e economizar tempo de processamento. No entanto, como o campo não tem as mesmas vantagens que um laboratório criado específico para o teste de raiva, é essencial que quaisquer modificações feitas nesses procedimentos se concentrem na segurança, especialmente no uso de equipamentos de proteção individual (EPI).

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chemistry spoon</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved, sharp-blunt mayo scissors</td>
			<td>Sklar</td>
			<td>14-2055</td>
			<td>Sklar Operating Scissors 5-1/2 Inch Premium OR Grade Stainless Steel Finger Ring Handle Curved Sharp/Blunt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large sharp restaurant-quality carving knife</td>
			<td>Dexter</td>
			<td>P94848</td>
			<td>8&#34; Scalloped Utility Knife, white handle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Locking tumor-tenacula</td>
			<td>Diamond Scientific and Surgicals</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Czerny Tenaculum Forcep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified stiletto knife (6.5 inch long blade carving knife ground to 0.5 inch wide)</td>
			<td>Dexter</td>
			<td>P94848</td>
			<td>Modified 8&#34; Scalloped Utility Knife, white handle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orthopedic mallet-hammer</td>
			<td>Mortech</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Postmortem hammer with hook</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp councilman orthopedic bone chisel</td>
			<td>Shandon</td>
			<td>60-5</td>
			<td>Councilman&#39;s Chisel Blade: 2 in x 2.25 in standard 7 in</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharpened tablespoon or other long handled spoon</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Smooth-tipped tissue dressing forceps without teeth</td>
			<td>Shandon</td>
			<td>63-03</td>
			<td>Shandon Broad Point Dressing Thumb Forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Powder-free non-latex gloves</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safety glasses, goggles, or faceshield</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgery or N-95 mask</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kraft paper, butcher paper, absorbent pad, etc</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rabies necropsy techniques in large and small animals

O laboratório de raiva do departamento de saúde de Nova York (NYSDOH) recebe entre 6.000 a 9.000 espécimes anualmente e realiza testes de raiva para todo o estado, com exceção da cidade de Nova York. Os necropsias do laboratório da raiva uma variedade de animais que variam no tamanho dos bastões aos bovids. A maioria destes espécimes são animais exibindo sinais neurológicos, no entanto, menos de 10% realmente teste positivo para a raiva; implicando trauma, lesões ou outros agentes infecciosos como a causa destes sintomas. Devido ao risco de aerosolizar agentes infecciosos não diagnosticados, o laboratório da raiva não utiliza ferramentas elétricas ou serras. Três técnicas de necropsia serão apresentadas para animais cujos crânios são impenetráveis com tesouras. O laboratório implementou essas técnicas para diminuir a exposição potencial a agentes infecciosos, eliminar a manipulação desnecessária da amostra e reduzir o tempo de processamento. As vantagens de uma técnica preferida oposto a outra estão sujeitas ao indivíduo treinado que processa o espécime.

Todas as amostras terrestres submetidas com crânios entre 31 de janeiro de 2019 e 28 de fevereiro de 2019 tiveram informações sobre a presença de um pescoço e o método de necropsia coletado. Durante esse tempo, 170 cabeças foram necropsiadas com 18 espécies representadas. 52% (89/170) foram Decapitated corretamente. O restante teve pelo menos uma vértebra unida que inclui três espécimes inteiros do corpo. Utilizou-se o método ventral 75% (128/170) do tempo, dos quais os pesco?...

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Rabies Necropsy Techniques in Large and Small Animals

O objetivo deste protocolo é demonstrar técnicas de necropsia seguras em animais pequenos e grandes para obter amostras de tecido satisfatórias para o teste de raiva.

Técnicas de necropsia da raiva em animais grandes e pequenos

The New York State Department of Health (NYSDOH) Rabies Laboratory receives between 6,000 to 9,000 specimens annually and performs rabies testing for the ...

A coleta de tecidos para testes de raiva tem perigos óbvios e não aparentes. O técnico deve utilizar os métodos mais seguros disponíveis e usar equipamentos de proteção individual adequados. Esses protocolos fornecem técnicas seguras de necropsia sem o uso de ferramentas elétricas ou serras, minimizando a produção de aerossóis.O protocolo animal de grande porte também pode ser realizado no campo. O uso do método de recuperação de amostras de animais de grande porte no campo elimina o desafio de transportar uma cabeça de animal pesando mais de 45 quilos para o laboratório. O método animal de grande porte é semelhante ao protocolo europeu para recuperação de amostras de encefalopatia espongiforme transmissível e pode ser usado para qualquer investigação usando o tronco cerebral e o cerebelo.Para recuperar o cerebelo e o tronco cerebral pelo método ventral, posicione o lado ventral da amostra para cima com o nariz direcionado distally para a parte de trás do armário de biossegurança. Segurando um martelo ortopédico na mão dominante e um cinzel de vereador na outra mão, posicione o cinzel em um ângulo de 45 graus com o ponto de canto para o cinzel na abertura em forma de V entre o lado direito dos ossos temporais e occipital. Atinja o topo do cinzel com o martelo até que os dois ossos se separem.E faça um corte adjacente ao osso basefenóide. Separe os ossos temporais e occipitais do lado esquerdo do espécime como apenas demonstrado. E use o cinzel para dobrar a região V do crânio para baixo para expor toda a área de rombenceon do cérebro.Em seguida, use tesouras e fórceps para colher o tronco cerebral e o cerebelo, removendo quaisquer pedaços de tecido restantes do crânio, conforme necessário. Se a amostra não permitir a posição de recuperação ventral a amostra dorsalmente, com o nariz direcionado distally para a parte de trás do armário de biossegurança. E use um tumor tenacula para agarrar o músculo temporal esquerdo com os dentes do tenacula.Aperte a alça para travar os dentes ao redor do tecido e use uma faca de escultura afiada para cortar o músculo temporal até o osso. Gire o espécime 180 graus com o tenacula e a faca e repita a incisão no músculo temporal oposto para expor o crânio. Retorne a cabeça à sua orientação original e coloque o cinzel em um ângulo de 45 graus com o ponto de canto para o cinzel no centro do crânio na conjuntura dos ossos parietal e intraparietal.E golpeie o topo do cinzel com o martelo até que uma abertura horizontal seja feita na metade superior do crânio no osso parietal. Gire o espécime 180 graus e faça uma abertura no lado oposto do crânio como apenas demonstrado. Posicione a cabeça conforme necessário para inserir o ponto do cinzel no final do primeiro corte em um ângulo de 90 graus até a abertura horizontal e golpee o cinzel até que a abertura atinja o osso occipital.Enrole o espécime para fazer uma abertura no osso occipital oposto da mesma maneira. As aberturas no crânio devem se assemelhar a um U.Insira os dentes do tenacula no crânio na parte inferior do você e puxe o osso para trás para expor a extremidade caudal do cerebrum e do cerebelo. Em seguida, use uma tesoura como uma colher para arrancar todo o cerebelo de dentro da cavidade.E use fórceps de tecido para provocar o tronco cerebral do forame. Para a recuperação do cerebelo e do tronco cerebral, posicione a amostra para que a parte dorsal do crânio esteja em contato com a superfície da necropsia. Com a parte caudal do crânio e foie magnum de frente para a frente do armário de biossegurança.Segure o tronco cerebral com fórceps. Insira uma faca de estilete modificada no foie magnum entre a medula espinhal e as meninges espinhais o mais longe possível e vasculhe ao redor da medula espinhal para separar o cerebelo e o tronco cerebral das meninges espinhais. Então, puxe a haste para fora do forame com fórceps.Quando a faca tiver sido inserida através do foie magnum, gire suavemente a lâmina para seguir ao longo do crânio o máximo possível e insira uma espátula de metal ou faca com uma alça longa o suficiente para alcançar sob o cérebro no espaço entre o tecido neural e as meninges espinhais. Sonda ao redor do cerebelo para garantir que as conexões com as meninges espinhais tenham sido cortadas. Quando as meninges tiverem sido completamente cortadas, avancem a espátula rostrally e dorsal para colher o cerebelo.Em seguida, colher o cerebelo com a espátula. Todas as amostras terrestres submetidas com crânios entre 31 de janeiro de 2019 e 28 de fevereiro de 2019 tiveram informações sobre a presença de um pescoço e o método de necropsia coletados. Durante esse período, 170 cabeças foram necropsiadas com 18 espécies representadas.52% foram devidamente decapitados. O restante tinha pelo menos uma vértebra anexada, incluindo três espécimes do corpo inteiro. Utilizou-se o método ventral em 75% das vezes.Desses, os pescoços estavam presentes em 49. Três animais de grande porte foram submetidos e, em dois casos, foi utilizado o protocolo animal de grande porte. Um esquilo foi submetido com um crânio esmagado e simplesmente cortar a pele expôs o tecido cerebral para que nenhum dos métodos demonstrados fosse usado.Os tecidos utilizados para fazer slides de microscopia e ou extraídos de métodos moleculares ao processar vários animais evitam contaminação cruzada usando novos instrumentos de luvas e uma área de trabalho limpa. Tenha cuidado ao realizar esses protocolos, pois os espécimes podem estar infectados com vírus da raiva ou outras doenças zoonóticas. Observe que objetos pontiagudos também podem estar presentes dentro dos espécimes.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Electrode Fabrication and Implantation in Aplysia californica for Multi-channel Neural and Muscular Recordings in Intact, Freely Behaving Animals

Electrode Fabrication and Implantation in Aplysia californica for Multi-channel Neural and Muscular Recordings in Intact, Freely Behaving Animals

Fabricação de eletrodos e Implantação de Aplysia californica Para gravações multi-canal neural e muscular na Intact, Animais Livremente Behaving

Recording from key nerves and muscles of Aplysia during feeding behavior allows us to study the patterns of neural control in an intact animal.  ...

Neurociência

Efficient Derivation of Human Neuronal Progenitors and Neurons from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

Derivação eficiente dos recursos humanos Progenitores Neuronal e Neurônios de pluripotentes células estaminais embrionárias humanas com a indução de moléculas pequenas

There is a large unfulfilled need for a clinically-suitable human neuronal cell source for repair or regeneration of the damaged central nervous system ...

Large-scale Recording of Neurons by Movable Silicon Probes in Behaving Rodents

Em larga escala de gravação de Neurônios por sondas de silicone móveis em Comportando Roedores

A major challenge in neuroscience is linking behavior to the collective activity of neural assemblies. Understanding of input-output relationships of ...

Design and Assembly of an Ultra-light Motorized Microdrive for Chronic Neural Recordings in Small Animals

Concepção e montagem de um Microdrive Ultra-leve motorizada para doenças crônicas Recordings Neurais em Pequenos Animais

The ability to chronically record from populations of neurons in freely behaving animals has proven an invaluable tool for dissecting the function of ...

Assessing Spatial Learning and Memory in Small Squamate Reptiles

Avaliando a aprendizagem espacial e memória em pequenas Squamata Répteis

Clinical research has leveraged a variety of paradigms to assess cognitive decline, commonly targeting spatial learning and memory abilities. However, ...

High-Resolution 3D Imaging of Rabies Virus Infection in Solvent-Cleared Brain Tissue

Imagem latente 3D de alta resolução da infecção do vírus da raiva no tecido solvente-cancelado do cérebro

The visualization of infection processes in tissues and organs by immunolabeling is a key method in modern infection biology. The ability to observe and ...

Multi-Fiber Photometry to Record Neural Activity in Freely-Moving Animals

Fotometria de múltiplas fibras para gravar atividade neural em animais em movimento livre

Recording the activity of a group of neurons in a freely-moving animal is a challenging undertaking. Moreover, as the brain is dissected into smaller and ...

Generation of Oligodendrocytes and Oligodendrocyte-Conditioned Medium for Co-Culture Experiments

Geração de Oligodendrocytes e Oligodendrocyte-Conditioned Medium para Experimentos de Cocultura

In the central nervous system, oligodendrocytes are well-known for their role in axon myelination, that accelerates the propagation of action potentials ...

Real-Time fMRI Brain Mapping in Animals

Mapeamento cerebral por fMRI em tempo real em animais

Dynamic fMRI responses vary largely according to the physiological conditions of animals either under anesthesia or in awake states. We developed a ...

Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Tissue in a Feline Large Animal Model

Transplante Sub-Retiniano de Tecido Retiniano Derivado de Células-Tronco Embrionárias Humanas em Modelo Animal de Grande Porte Felino

Retinal degenerative (RD) conditions associated with photoreceptor loss such as age-related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa (RP) and ...